临床PCR实验室基本设置要求
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• 灵敏度高 • 快捷 • 简便 • 对样品纯度要求低 • 可以相对定量
二、PCR实验室布局设置
生物安全二级实验室
目的
保护操作人员
保护环境
保护样品
临床PCR实验室工作流程
试剂储存和准备
标本制备区
扩增区 产物分析区
PCR实验室平面设计
○在入口处设缓冲间○缓冲间比专用走廊更有意义。
有问题！
建筑结构
分区 器材选配 PCR① 试剂区 PCR② 制备区 PCR③ 扩增区 PCR④ 分析区
PCR仪器
生物安全柜 加热模块、离心机 产物分析仪
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冰箱、混匀器
移液器 可移动紫外车 办公用品、耗材
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仪器设备及管理
• • • • • • 加样器：维护、校准 扩增仪：维护、校准 恒温干浴仪或水浴箱：维护、校准 离原理与特点
1. PCR反应体系: DNA 聚合酶 DNA 靶序列 两端引物 脱氧核苷酸dNTPs 2+ Mg 缓冲液 dCTP
Taq DNA聚合酶
2. DNA的合成方向 5’ 3’ 3. Taq DNA聚合酶的作用 4. PCR循环： 变性 退火 延伸
dGTP dTTP dATP Primer
pcrpcr主要内容pcrpcr的原理及特点的原理及特点pcrpcr实验室布局设置实验室布局设置pcrpcr实验室仪器设备实验室仪器设备pcrpcrpcrpcr技术的原理技术的原理在微量离心管中在微量离心管中加入适量的缓加入适量的缓冲液微量的模板微量的模板dnadna四种四种dntptaqdntptaq一对引物一对引物通过高温变性低温退通过高温变性低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环火和中温延伸三个阶段为一个循环每次循环使特异区段的核酸拷贝数放每次循环使特异区段的核酸拷贝数放大一倍大一倍经过经过3030次循环次循环最终使基因放最终使基因放大数百万倍大数百万倍pcr原理与特点pcr反应体系
PCR循环 第二步 － 退火 （３７～６５℃）
PCR循环
PCR循环 第三步 － 延伸 （７０～７５℃）
PCR循环
第一个 PCR 循环 － 靶序列完成复制
PCR循环
PCR循环次数与DNA产量关系 循环次数 DNA的链数 1 2 2 22 PCR特点：高效扩增、 4 忠实复制 3 23 21
PCR反应的特点
临床PCR原理及实验室基本设 置要求
主要内容
• PCR的原理及特点 • PCR实验室布局设置 • PCR实验室仪器设备
一、PCR原理及特点
PCR技术的原理
在微量离心管中,加入适量的缓 冲液,微量的模板DNA,四种dNTP,Taq 酶,一对引物,通过高温变性、低温退 火和中温延伸三个阶段为一个循环, 每次循环使特异区段的核酸拷贝数放 大一倍,经过30次循环,最终使基因放 大数百万倍
加热
变 性
加热或强酸、碱性作用 可以使DNA双螺旋的氢键 断裂,双链解离,形成单 链DNA,这称为DNA变性
解除变性的条件后,变性 的单链可以重新结合起 来,形成双链,这称DNA复 性,也叫退火。
复 温
复 性
DNA的变性和复性
PCR循环
PCR 循环 第一步 － 变性 （９３～９８℃）
PCR循环
阴角 均采用
圆弧线条密封
洗手池
三、实验室设施、仪器设备
• 临床基因扩增检验实验室应有充分合理 的分区、空间、良好的照明和空调设备 • 实验室仪器设备应保养良好，实验用品 要达到相应的要求。加样器的校准？带 滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循 环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？
PCR实验室各区的设备配置表
二、PCR实验室布局设置
生物安全二级实验室
目的
保护操作人员
保护环境
保护样品
临床PCR实验室工作流程
试剂储存和准备
标本制备区
扩增区 产物分析区
PCR实验室平面设计
○在入口处设缓冲间○缓冲间比专用走廊更有意义。
有问题！
建筑结构
分区 器材选配 PCR① 试剂区 PCR② 制备区 PCR③ 扩增区 PCR④ 分析区
PCR仪器
生物安全柜 加热模块、离心机 产物分析仪
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冰箱、混匀器
移液器 可移动紫外车 办公用品、耗材
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仪器设备及管理
• • • • • • 加样器：维护、校准 扩增仪：维护、校准 恒温干浴仪或水浴箱：维护、校准 离原理与特点
1. PCR反应体系: DNA 聚合酶 DNA 靶序列 两端引物 脱氧核苷酸dNTPs 2+ Mg 缓冲液 dCTP
Taq DNA聚合酶
2. DNA的合成方向 5’ 3’ 3. Taq DNA聚合酶的作用 4. PCR循环： 变性 退火 延伸
dGTP dTTP dATP Primer
pcrpcr主要内容pcrpcr的原理及特点的原理及特点pcrpcr实验室布局设置实验室布局设置pcrpcr实验室仪器设备实验室仪器设备pcrpcrpcrpcr技术的原理技术的原理在微量离心管中在微量离心管中加入适量的缓加入适量的缓冲液微量的模板微量的模板dnadna四种四种dntptaqdntptaq一对引物一对引物通过高温变性低温退通过高温变性低温退火和中温延伸三个阶段为一个循环火和中温延伸三个阶段为一个循环每次循环使特异区段的核酸拷贝数放每次循环使特异区段的核酸拷贝数放大一倍大一倍经过经过3030次循环次循环最终使基因放最终使基因放大数百万倍大数百万倍pcr原理与特点pcr反应体系
PCR循环 第二步 － 退火 （３７～６５℃）
PCR循环
PCR循环 第三步 － 延伸 （７０～７５℃）
PCR循环
第一个 PCR 循环 － 靶序列完成复制
PCR循环
PCR循环次数与DNA产量关系 循环次数 DNA的链数 1 2 2 22 PCR特点：高效扩增、 4 忠实复制 3 23 21
PCR反应的特点
临床PCR原理及实验室基本设 置要求
主要内容
• PCR的原理及特点 • PCR实验室布局设置 • PCR实验室仪器设备
一、PCR原理及特点
PCR技术的原理
在微量离心管中,加入适量的缓 冲液,微量的模板DNA,四种dNTP,Taq 酶,一对引物,通过高温变性、低温退 火和中温延伸三个阶段为一个循环, 每次循环使特异区段的核酸拷贝数放 大一倍,经过30次循环,最终使基因放 大数百万倍
加热
变 性
加热或强酸、碱性作用 可以使DNA双螺旋的氢键 断裂,双链解离,形成单 链DNA,这称为DNA变性
解除变性的条件后,变性 的单链可以重新结合起 来,形成双链,这称DNA复 性,也叫退火。
复 温
复 性
DNA的变性和复性
PCR循环
PCR 循环 第一步 － 变性 （９３～９８℃）
PCR循环
阴角 均采用
圆弧线条密封
洗手池
三、实验室设施、仪器设备
• 临床基因扩增检验实验室应有充分合理 的分区、空间、良好的照明和空调设备 • 实验室仪器设备应保养良好，实验用品 要达到相应的要求。加样器的校准？带 滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循 环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？
PCR实验室各区的设备配置表