质谱广泛应用于药物的定性鉴别

原理：依据特有化学结构采用特殊灵敏的
定性反应。适于：证明是哪一种药物
如司可巴比妥鉴别: 1. 丙二酰脲类鉴别试验一般 2. 与碘液反应专属
第三节. 鉴别方法
一. 化学法→反应快, 现象明显, 专属性差. 1. 显色→FeCl3显色(酚羟基),
异羟肟酸铁反应(芳酸及酯), 双缩脲反应(氨基醇), 重氮化-偶合反应(芳伯氨基), 氧化还原反应. 2. 沉淀→与重金属离子反应, 与生物碱沉淀剂反应. 3. 荧光→药物在光照（UV或VIS）下发出荧光; 药物发生反应后光照下发出荧光
NH2
N+2Cl-
+ NaNO2 + 2HCl
R N+2Cl-
+
R
OH +
NaOH
+ NaCl + 2H2O OH
NN
R
R
+ NaCl+ H2O
4.托烷类生物碱→发烟硝酸/KOH(s) →紫色
OH RO
O 托烷类
OH 水解
HOOC
莨菪酸
OH NO2
3HNO3 HOOC O2N
NO2
三硝基衍生物
OH NO2
(1)建立参考谱库, (2)数据预处理, (3)数据 评估, (4)数据库验证.
4.AAS(Atomic Absorption spectrophotometry)
基态原子蒸汽吸收由同一元素作阴极制 成的空心阴极灯发出的特征谱线.
专属性高.
5.NMR(Nuclear Magnetic Resonance)
第二节 鉴别试验的项目
一.性状(Description)
1. 外观: 晶型,色泽,气味等.
2. 溶解度:可反映药品纯度,并作为选择溶剂 的依据.
方法：除另有规定外，称取研成细粉的供 试品或量取液体供试品，于25℃2℃一定容量 的溶剂中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察 30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗 粒或液滴时，即视为完全溶解。
3. 物理常数:
（1）熔点: 定义→固体药品从初熔到全熔的T, 熔融
分解T, 药品从固态到液态的T. 方法→毛细管法, 包括第一法, 第二法
和第三法.
例 雌二醇的熔点为175～180℃；格列本 脲的熔点为170～174℃，熔融时同时分解。
（2）比旋度:
反映手性药物特性及纯度.
定义→一定，T下，偏振光通过长1dm，手 性药物含量为1g/ml的溶液时测得的旋光度。
2.耐用性:是指测定条件发生小的变动时， 测定结果受到的影响程度。
小结
1. 药物鉴别试验的定义. 2. mp, [α], E 3. UV, IR,TLC等的应用. 4. 指纹图谱鉴别
[]20 =100 /l•C(g/100ml)
D
◆（3） 吸收系数：
一定，T和溶剂下，药物在单位浓度及液
层厚度（1cm）时的吸收度。
C=1%(w/v) 时→E1% , C=1mol/L时→ .
1cm
＝E 1% 1cm
×M
/10
二 一般鉴别试验: 一类药物
1.有机氟化物 pH4.样3缓品冲→液氧, 瓶茜燃素烧氟,蓝H/2COe/(NNaOO3H)3→吸蓝收紫(F色-), 配→ 位化合物, λmax=610nm. 2.有机酸盐: ◆水杨酸→酚OH与FeCl3(弱酸性)作用→紫色. ◆酒3石.芳酸伯→氨加基Ag→N重O3氮/N化H-3偶H2合O 反→应银.镜.
KOH HOOC
（C2H5OH） O2N
KOH O N
OH
OH NO2
HOOC O2N 深紫色
O N
OK
5. Na, K, Ca →焰色反应. 67..铵 无盐 机酸：根OH：-/CΔl→-加NAHg3N↑O，3红→色A石gC蕊l↓变蓝。 SO42-加BaCl2 →BaSO4 ↓
三 专属鉴别试验
根据样品指定基团的质子峰的化学位移 和偶合常数来鉴别.
ChP2010附录也列入该方法，在新药的 研制中，如药物结构确证，更是重要的定性 分析方法之一 。
6 MS (Mass Spectrometry)
真空状态下, 将样品离子化(EI, CI, FAB)并 进一步打成碎片, 按正离子的质荷比(m/z)大小 分离而实现结构分析.
(4)样液+结构相近的对照药物后点样, 应显二个 分离的斑点.
分离效能：在对照品与结构相似药物的对
照品制成混合对照溶液的色谱图中，应显示两
个清晰分离的斑点。
Rf=l/l0
2. HPLC (High Pressure Liquid Chromatography)
和GC (Gas Chromatography) .(tR)
第二章 药物的鉴别试验 （Identification ）
通过理化方法判别已知药物真伪.
第一节 药物鉴别试验的定义与目的
药物的鉴别试验是根据药物的分子结构、 理化性质，采用物理、化学或生物学方法来判 断已知药物的真伪，它是药品质量检验工作中 的首项任务。
ChP2010凡例中对药物鉴别的定义为：鉴 别项下规定的试验方法，仅反映该药品某些物 理、化学或生物学等性质的特征，不完全代表 对该药品化学结构的确证。
认”（accurate recognition）而不是“精
密的计算”（precise calculation）；比较
图谱强调的是相似（similarity）而不是相
同（identity）。在不可能将中药复杂成分
都搞清楚的情况下，指纹图谱的作用主要是
反映复杂成分的中药及其制剂内在质量的均
一性和稳定性。
4. 气体→如NH3, CO2等 5. 氧化还原反应使试剂退色（如VitC）. 6. 测定衍生物mp.
二 光谱法
1. UV-Vis (Ultraviolet and Visible spectrophotometry)
适于含共轭结构的药物.
可供鉴别的参数: max, min, A, E, 经化学处理 后，测定其反应产物的吸收光谱特性, A1/A2,
如: VitB2的鉴别: 其max为267nm, 375nm和 444nm; A375/A267 的比值应为0.31-0.33;
A444/A267 的比值应为0.取本品0.100g用
甲醇溶解并稀释至100ml，取上述溶液10.0ml用
甲醇稀释至100ml。在230～350nm波长范围内测
2dhklsin =n
衍射角2 ,面间距dhkl；hkl为晶面指数，
即晶面与晶轴截距的倒数之比，也叫密勒指
数。
三 色谱法
1. TLC (Thin-layer Chromatography)
(1)一般用同浓度对照品对照法, 比较Rf值 (2)样液+同体积对照液 →应显单一斑点
(3)样液和结构相近的对照药物分别点样, 两者 的Rf值应不同.
第四节. 鉴别试验条件和方法验证
(一)浓度→与方法灵敏度有关,影响所观察的现 象. (二)温度→影响反应速度,药物稳定性. (三)酸碱度→影响药物离解度. (四)时间→改变条件使反应尽快完成.
(五)鉴别方法的验证
1.专属性：在其他成分（其他药物成分、杂 质、降解产物、辅料等）存在的情况下，采用的 鉴别方法能否正确地鉴别出被测物质的特性。
中药色谱指纹图谱是一种综合的、可量化
的色谱鉴定手段。借以鉴定真伪，评价药材和
成品质量均一性和稳定性。基本属性是“整体
性”和“模糊性”。不强调个体的绝对唯一性，
而强调同一药材群体的相似性。相似性是通过
色谱的整体性和模糊性来体现，这是中药色谱
指纹图谱分析的最基本的属性。
分析色谱指纹图谱强调的是“准确的辨
四 显微鉴别法
显微鉴别主要用于中药及其制剂的鉴别， 通常采用显微镜对药材的（饮片）切片、粉末、 解离组织或表面制片，以及含饮片粉末的制剂 中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别
的一种方法。
五 生物学法.
利用微生物或者实验动物进行鉴别.主要用 于抗生素、生化药物以及中药的鉴别。
六、指纹图谱与特征图谱鉴别法
(2)糊法和膜法, (3)溶液法. 原料药鉴别采用标准图谱对照. ChP2010也
收载了制剂的IR鉴别法, 注意辅料的干扰 。
ν ν OH CH
CO
C CH OH
O
炔诺酮
3.NIR(Near-infrared spectrophotometry)
根据被测物质在近红外谱区750～2500nm (12800～4000cm-1)的特征光谱并利用适宜的化 学计量学方法提取相关信息后，对被测物质进 行定性、定量分析的一种技术。具有快速、准 确、对样品无破坏的检测特性，不仅可用于 “离线”供试品的检验，还能直接对“在线” 样品进行检测。
ChP2010、USP32、BP2009均收载了质谱 法。质谱广泛应用于药物的定性鉴别。
解析重点：分子离子，碎片离子，同位素 离子峰，亚稳离子峰，准分子离子峰。
7 X射线粉末衍射
当X射线照射到晶格排列整齐的晶体上时， 在一些方向产生反射→X射线衍射，由布拉格 方程求出晶面间距，并求出键长,键角，最后 画出分子结构
定，溶液显示在275nm和282nm处有最大吸收峰，
其吸收度比值为1.15～1.20。
2. IR(Infrared spectrum): 专属性强, 应用广泛, ChP2010采用标准图
谱对照法，USP32则采用对照品法。
制样方法: (1)压片法, 取供试品约1mg，置 玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉 约200mg，充分研磨混匀, 压片, 测定时扣除用 同法制成的空白