液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解

液相色谱法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的
疑难详解
1、苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-2021，糖精钠的检测参照GB/T5009.28-2021，即可开展试验。

苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个精确牢靠的结果，也存在肯定的难度，很多新手常消失因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。

笔者依据自己多年该方面工作的实际阅历动身，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的推断等几个易出问题的方面，进行了具体的阐述。

2、样品前处理的留意事项
GB/T5009.28-2021和GB/T5009.29-2021在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只叙述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。

食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不洁净也会污染色谱柱，影响检测工作。

这类样品处理的关键在于如
何找到一种较抱负的沉淀剂，尽量排解待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。

GB/T5009.29-2021使用5%硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不抱负。

如用10%钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10%亚铁氰化钾溶液和20%醋酸锌溶液则效果更抱负(这是笔者目前用过最抱负的沉淀剂)。

详细操作步骤如下：
取肯定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡匀称，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)1.0ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液，9.50mL20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物,初滤液过0.45m微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。

用这种方法简洁易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满足；缺点是肯定要用液相色谱法检测，有肯定局限。

3、检测仪器的选择
虽然液相色谱仪操作起来比气相色谱仪要简单，但笔者建议如条件许可仍尽量用液相色谱法检测。

缘由如下：
3.1 液相色谱法所用的样品处理方法远比气相色谱法简洁，且不需使用有机试剂。

尤其对于高油脂样品(如月饼)若采纳碱化-排油-酸化-提取-挥干-溶解等步骤，再上气相色谱仪检测，工作量大，试剂毒性也大，且结果由于处理步骤太多而难以保证精确。

3.2 用液相色谱法还可同时完成糖精钠项目的检测，而气相色谱法只能做苯甲酸、山梨酸的检测。

3.3 液相色谱仪所用的紫外检测器比气相色谱仪的氢火焰检测器灵敏，可进行更低含量的检测。

如用二极管阵列检测器，还可帮助定性，这更是气相色谱氢火焰检测器不行比拟的。

4、选用气相色谱仪时的留意事项
GB/T5009.29所用的气相色谱柱为5%DEGS＋1%磷酸固定液的60-80目ChromosorbWAW，。

这种柱有性能稳定、重复性好、保留时间稳定的优点，但同时也有稳定时间较长的缺点。

该柱的适用的样品提取溶剂为石油醚或乙醚，假如用甲醇或乙醇，
则溶剂峰拖尾效应较大，对山梨酸的测定有影响。

如用毛细管柱，能取得更好的峰形和灵敏度，但其稳定性及特异性不如填充柱。

一般可用非极性毛细管柱，0.530mm内径，10-15m长度。

色谱条件可能需用程序升温。

在气相色谱仪上的出峰次序为先出山梨酸，后出苯甲酸。

糖精钠不能直接用气相色谱进行检测，必需衍生化后才能汽化进样。