培养基的制备与微生物接种技术(1)

培养基的制备与微生物接种技术（1）
培养基的制备
一、实验目的
1、了解人工培养基的主要成分及一般制备原则。

2、掌握基础培养基的制造方法和过程。

二、实验原理
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖的营养基质。

培养基要具备
以下条件：①要有适宜的营养物质和水分；②具有适宜的PH值；③配
制后应经灭菌呈无菌状态。

培养基按物理状态可分液体培养基、固体培养基、半固体培养基。

常
用琼脂作凝固剂。

培养基制备的基本程序：配料、溶化、测定及矫正PH、过滤、分装、
灭菌、无菌检验
三、仪器设备
试管、刻度吸管、纱布、滤纸、三角瓶、培养皿、量筒、漏斗、棉塞、电炉、天平、包装纸、棉线、ph试纸、玻棒。

试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂条、0.1mol/L和1mol/L氢氧化钠、0.1mol/
L和1mol/L的盐酸溶液、蒸馏水等。

四、相关知识点
一、配制原则和种类
（一）培养基配制原则
1、培养基：培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环
境条件的基质，如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。

制备培养基不
仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子，
还要考虑水与pH环境，同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液
体培养。

因此，可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质，称为培养基。

换言之，培养基必须具备三个条件：含有菌株生长发育
所需要的营养物质；具有菌类生长环境条件；经过灭菌，并保持无菌
状态。

2、培养基的选择：在整菌种制备过程中，从母种到原种、栽培种，各
个阶段的目的要求有所不同，所选用的培养基的配比也应有所区别。

一般母种初生菌丝较嫩弱，分解养分能力差，要求营养丰富、完全，
氮源、维生素的比例应高。

须选用易于被菌丝吸收利用的物质，如葡
萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽
培种所需数量较多，且菌丝分解能力强，可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。

（二）培养基的种类
1、根据营养物质的来源，可以把培养基分炎天然培养基、半合成培养
基和合成培养基。

（1）天然培养基天然培养基是指用化学成分还不清楚或化学成分不
恒定天然有机物配制而成的培养基，如各种农副产品及其下脚料──
小麦、大豆、玉米粉、麸皮、米糠、作物秸秆、木屑、棉籽壳、甘蔗
渣等，以及动植物组织的浸出液──牛肉膏、肉汤、马铃薯汁、麦芽汁、豆芽汁等都可以用来配制天然培养基，这种培养基来源广，成本低，营养丰富，适合于在生产上大规模培养菌类使用，但这些天然有
机物质因产地、品种、生长期的不同，化学成分不能宣。

每批成分也
不稳定，不宜用来做精细的科学实验。

以分离驯化食用菌培养基
（2）半合成培养基为了促进食用菌菌丝的生长发育，常在天然培养
基中添加适量的无机盐类，或在合成培养基中添加适量的某些天然有
机物，就成为半合成培养基。

这类培养基种类繁多，应用广泛，也是
生长菌种和实际栽培最常用的培养基。

（3）合成培养基是指采用化学成分已知的有机物（碳水化合物、含
氮化合物、有机酸类）或无机物配制而成的培养基。

这类培养基组成
和含量明确，价格较贵，一般用于在实验室范围内做有关营养、代谢、菌种鉴定等有关于食用菌的生理生化研究。

2、根据培养基制成后的物理状态，可将培养基分为液体培养基、半固
体培养基和固体培养基。

（1）液体培养基根据食用菌所需的营养物质，扫一定比例配成营养液，叫液体培养基。

液体培养基可进行营养源的筛选实验，以及生理
生化方面如酶活力等研究，应用液体培养基生产的菌种也可在生产中
进行使用。

（2）固化培养基将各种营养成份按比例配制成营养液后，加入适量
固化剂，如琼脂，即可配成固化培养基。

利用这种斜面试管可保藏及
扩大菌种，同时亦可制成各种平皿固化培养基分离菌种。

（3）固体培养基利用各种富含纤维素和木质素的农林废弃物如木屑、棉籽壳、秸秆、玉米蕊等作为主要原料，再加入适量的米糠或麸皮和
无机盐类制成固体培养基。

该培养基可作为二、三、级菌种生产用的
培养基，也可以用它制成发酵草粉保藏菌种用的培养基。

五、实验步骤
（一）制备牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
1、配方：牛肉膏3—5g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20—30g、蒸馏
水1000mL。

PH值7.4—7.6。

2、步骤：
（1）称量：根据用量按比例依次称取各种成分，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水融化后到入烧杯，蛋白胨易
吸湿，称量时要迅速。

（2）溶解：在烧杯中加入少于所需的水量，加热，逐一加入各成分，
使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。

加热时应
注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。

溶好后，补足所需水分。

（3）调pH值：若PH值不适宜，可用1mol/L NaOH或1mol/LHCl把pH值调
至所需范围。

（4）过滤：趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。

（5）分装：按照实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角瓶内，分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。

?液体分装：分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则
根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。

‚固体分装：分装试管时其装入量不超过试管高度的1/5，灭菌后制成
斜面，斜面长度不超过管长的1/2。

分装三角瓶，以不超过容积的1/2
为宜。

ƒ半固体分装：装入量以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

（6）加棉塞：分装完毕后，在试管口或三角瓶口塞上棉花，以阻止外
界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。

（7）包扎：棉塞上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。

（8）灭菌：将上述培养基以0.1Mpa，121℃，高压蒸汽灭菌20min。