复方大黄净化液提取工艺研究

复方大黄净化液提取工艺研究
目的优选复方大黄净化液提取工艺。

方法基于复方大黄净化液组方原则，兼顾大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄素、大黄酚主要指标成分含量和干浸膏收率，以加水倍数、浸泡时间、提取时间和提取次数为考察因素，采用正交试验优选复方大黄净化液提取工艺条件。

结果制剂最佳提取工艺为加水量为10倍量，浸泡30 min，提取时间1 h，提取次数3次。

结论该方法有效的优选出复方大黄净化液提取工艺，工艺合理稳定，操作易行。

Abstract：Objective To optimize extracting techniques of compound Dahuangjinghua liquid. Methods Based on compound Dahuangjinghua liquid formula principle ，take the aloe-emodin，rhein，emodin，methyl ether，emodin，rhubarb phenol main index component content and water-soluble total Fried，with multiple water，soaking time，extracting time and extracting times to examine factors，optimizing compound rhubarb purification liquid extraction process by orthogonal experiment.Results The best condition is soaking 30 minutes，extracting 1 hour，extracting for 3 times，to add ten times of water. Conclusion The method is effective optimized compound Dahuangjinghua liquid extraction process，reasonable process stability，and easy to operate.
Key words：Compound Dahuangjinghua liquid；Orthogonal experiment；Extraction technology
慢性肾功能衰竭常常因为肾脏疾病而发展导致，一般现慢性进行性肾实质损害，后来会演变成为尿毒症，肾衰竭病情严重，病死率非常高，临床上的治有相当大的困难。

人工肾及肾移植技术由于科学技术的不断发展显现出比较好的疗效，但花费昂贵、存在技术难度大，不能很好普及。

开发运用中医药方法来治疗慢性肾功能衰竭是热门的研究方向，中医药治疗方法具有良好发展趋势。

复方大黄净化液（大黄、附子、桂枝等七味药材）是继承广西壮族自治区中医医院肾内科老专家丰富临床经验，遵循”补肾与泻浊”、”养血填精与活血化瘀”相结合的辨证治疗思路，经由多年大量临床实践探究而研发出的方剂，其运用”泻浊” 原则来指导并通过结肠透析来进行慢性肾功能衰竭治疗。

本研究釆用正交试验设计，以干浸膏收率、大黄五种游离蒽醌含量作为评价指标对提取时间、加水量、提取次数和浸泡时间四个因素进行了优化，确定了制剂提取工艺，为规范其提取制备工艺，发挥其最大临床疗效，提供试验依据。

1资料与方法
1.1仪器LC-20AT高效液相色谱仪；GH-252电子分析天平；HH-W420数显三用恒温水箱；KQ3200DE型数控超声波清洗器；CD-UPT-II-10L超纯水机；电炉。

1.2试药大黄、附子、桂枝等七味药材均符合《中国药典》2010年版一部各品种项下标准。

大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、大黄素、大黄酚对照品（购自中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

1.3方法
1.3.1正交实验设计选取浸泡时间、加水量、煎煮时间和煎煮次数作为正交试验的考察因素，各取三水平，以大黄五种蒽醌总含量和干浸膏收率为评价指标，所选因素水平，见表1。

1.3.2样品的制备试验方法：分别按处方比例称取全方药材九份，按正交设计表L9（34）项下实验条件进行实验，药液分别浓缩定容至1000 mL，备用。

1.3.3蒽醌含量测定[2] 分别制备供试品溶液和对照品溶液，确立色谱条件：流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（85∶15）；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm；进样量：20 μL。

理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000。

精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，采用外标法分别计算大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、芦荟大黄素、大黄酸等大黄蒽醌含量。

1.3.4干浸膏收率测定精密吸取各正交试验样品液20 mL，水浴蒸干后迅速精密称定重量，计算干浸膏收率。

1.3.5评分标准将测定大黄五种蒽醌含量作为主要确定提取效率的总体优化指标；另增加干浸膏收率作为一个工艺优化的总体指标。

以两项指标的综合评分，规定综合评分满分为1，总蒽醌含量综合评分权重系数分别定为0.7，以总蒽醌含量最高为定为0.7；干浸膏收率综合评分权重系数分别定为0.3，以最高者定为0.3。

2结果
2.1提取工艺正交试验结果试验结果见表1，方差分析见表2。

2.2影响因素数据表明极差中C>B>A>D，说明因素C提取次数为主要因素，因素B提取时间其次，因素A加水倍数量影响比较小，因素D浸泡时间对本实验的影响最小。

即总蒽醌含量和干浸膏收率受煎煮次数影响最大，煎煮时间其次，受加水量影响较小，而受浸泡时间影响最小。

2.3各列水平情况第一列因素A加水倍数量K3>K2>K1；第二列因素B提取时间K3>K2>K1；第三列因素C提取次数K3>K2>K1；第四列因素D浸泡时间K1>K2>K3。

所以，煎煮提取条件优选各因素水平为A3B3C3D1，即加水10倍量，浸泡30 min，煎煮90 min，提取3次。

2.4方差分析C因素煎煮次数具有显著性，A因素加水量、B因素煎煮时间、D因素浸泡时间等因素不具显著性。

因此，为节约水、电和工时，降低成本，确定水煎煮提工艺方案为A3B2C3D1，即加10倍量水，浸泡30 min，提取3次，60 min/次，见表3。

2.5验证试验为了验证正交实验结果的准确性，以保证复方大黄净化液的煎煮提取工艺的合理可靠，按照正交试验优化的提取工艺条件进行重复验证试验。

结果表明采用优选的工艺条件进行水煎煮提取，这三份药材的提取效率均达到了较高水平，且工艺稳定，适用于大生产，见表4。

3讨论
正交设计是一种高效、快速的多因素试验设计方法，可用最少的试验次数筛选出最佳试验条件。

本实验采用三水平四因素的正交实验，以大黄五个蒽醌总量和干浸膏收率为评价指标对制备工艺进行优化。

在单因素实验结果中表明浸泡时间为30 min时提取率最高，加水量为8倍量时提取率最高，提取时间为60 min 时提取率最高，提取次数为4次时提取率最高，这与优化提取工艺条件加10倍量水，浸泡30 min，提取3次，60 min/次大体相一致，结合最佳工艺验证试验实验以及中试产品生产实验表明，正交实验优选煎煮提取工艺条件合理、稳定，工艺条件较易控制，具有良好的连续性、稳定性，可操作性强，应用设备为普通常用生产设备，符合复方大黄净化液大生产实际需要。

参考文献：
[1]郭志伟，刘琳娜.大黄及其有效成分的药理研究概况[J].中国药房，2006，17（22）：1741.
[2]伍小燕，黄权芳，陈朝.正交试验法优选复方大黄灌肠液的提取工艺[J].时珍国医国药，2013，24（7）：1639-1641.。