南昌县2007年~2009年艾滋病筛查实验室能力验证结果及分析

南昌县2007年~2009年艾滋病筛查实验室能力验证结果及分析
根据《全国艾滋病检测技术规范》[1] 和《全国艾滋病检测工作管理办法》[2] 规定，艾滋病筛查实验室每年必须参加省级以上实验室组织的能力验证考核：包括盲样血清和职能问卷调查表。

按规定时间统一检测并上报结果及相关材料，由省疾控中心专家组统一进行评定，合格的实验室获得相应证书，同时取得艾滋病筛查实验室检测能力资格。

南昌县艾滋病筛查实验室自2007年1月正式开展HIV抗体筛查以来，连续3年保持了能力验证结果全优（盲样检测符合率100%）的好成绩。

笔者认为这是和实验室进行全程的质量控制密不可分的。

具体如下：
1.实验前的质量控制
1.1检测人员：南昌县艾滋病筛查实验室安排了4位专业技术人员，均具备中级卫生技术职称，从事病毒血清学检测工作至少2年以上，有的长达20年；均接受过省级艾滋病检测技术培训并成绩合格。

并且其中有3名是党员，对待检测工作有高度的责任感和敬业精神。

1.2实验室分区和环境：实验室分三区，共有面积48㎡(清洁区15㎡、半污染区11㎡、污染区22㎡)，三区分布合理并有明显的标识。

有防蝇防虫设施、空调、感应式水笼头以及数量充足的生物安全防护用品，符合BSL-2级生物安全实验室要求,给检测人员营造了一个安全优良的检测环境。

1.3仪器设备：配备HIV抗体筛查试验所需的设备[2]，包括酶标仪、洗板机、普通冰箱、恒温水浴箱、带盖离心机、微量加样器、高压蒸汽灭菌器、BSL-2生物安全柜。

此外，实验室还配备了干湿球温度计、冲眼器、定时器、振荡器、-20℃低温保存箱。

其中灭菌器压力表、酶标仪、洗板机、微量加样器和干湿球温度计每年经县或省计量院检定并在有效期内使用,冰箱、水浴箱等温控设备每年10月份进行自校。

所有的仪器均定期维护并作好使用及维护记录。

1.4方法和试剂：筛查方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）,其操作简单、灵敏度高、特异性好、经济安全。

试剂是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内并经临床质量评估敏感性和特异性均较高的。

试剂放置普通冰箱冷藏保存备用。

1.5制作标准操作程序（SOP）：根据实验需要制定覆盖主要工作内容的SOP 文件，并在检测过程中根据实际情况以及工作需要每年对其进行修订或增加相应的SOP文件。

至2009年12月，本实验室共制定了19个SOP文件:《HIV抗体检测样品的的采集、接收、登记和处理操作规程》、《HIV抗体检测方法和步骤操作规程》、《HIV筛查实验室仪器设备的使用维护和校准》、《HIV抗体筛查实验中的质量控制规程》、《HIV抗体检测结果解释与报告操作规程》、《HIV筛查实验室保密程序》、《HIV抗体检测数据的记录与保存程序》、《HIV抗体检测追踪和处理程序》、《HIV筛查实验室的清理和消毒操作规程》、《HIV筛查实验室安全防护管
理规定》、《HIV筛查实验室意外和事故处理操作规程》、《HIV筛查实验室职业暴露的预防和处理规程》、《梅毒螺旋体抗体检测方法和步骤操作规程》、《差错与失控的处理规程》、《样本的保存操作规程》、《试剂的保存操作规程》、《纠正措施》、《实验室应急处理操作规程》、《实验室工作人员交接操作规程》。

所有工作人员均要在所从事工作的SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关内容。

1.6建立并完善相应的实验室制度：制度是一种行为规范。

建立相应的实验室制度，可以对实验室检测人员的行为作出规定并起到一定的约束作用，是整个实验过程良好有序运行的重要保证。

三年来，我们制定制度、执行制度并在实际操作中不断地检验和完善制度。

至今本实验室根据需要共制定了5个制度：《安全操作制度》、《实验室质量控制监督制度》、《废弃物消毒处理制度》、《反馈与报告保密制度》、《失控制度》。

2.实验中的质量控制
2.1严格按照SOP：SOP对我们所进行的实验活动进行了一系列的规定，使我们在实验时有据可依、有章可循，检测活动因此而有序进行，避免了检测人员因为疏忽或不同检测人员操作个体差异而影响整个试验过程。

2.2严格按试剂说明书：每一种试剂均有说明书：对阴阳性对照的数量、温育的温度和时间、洗板的次数、洗液量及是否浸泡等均有详细的说明。

我们严格按照试剂说明书操作，任何一个环节的差错都有可能出现试验结果的异常：如洗板次数不够导致洗板不干净、洗液量过多溢出反应孔会交叉污染等均可能出现假阳性,增加洗板次数会造成部分与固相结合的抗原/抗体脱离，从而影响检测的灵敏度，使样本检测的OD值降低；温育时间是影响ELISA法测定HIV抗体结果可靠性的关键因素之一，温育时间不够，会导致弱阳性样本漏检，温育时间过长，液体蒸发，使非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底,温育温度不够，弱阳性标本也难以检出[3]；试剂盒内部的阴阳性对照是实验结果是否成立的直接依据之一。

2.3使用外部对照质控血清：外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清。

本实验室设置一个弱阳性质控，由省确认中心提供或本实验室自行购买。

每年按实验室的实际用量购买、分装、分类、标记、封口、冻存于-20℃冷冻箱内。

每一次实验时均使用外部对照质控血清，计算S/CO值用即刻法进行质量控制，同时计算变异系数（CV）以监测质控物的管间或瓶间变异。

超过20次绘制Levey-Jennings质控图。

使用时避免反复冻融[4]。

2.4严格按照原始记录：原始记录表标明空白对照、阴阳性对照、外部对照质控及待检样品的原始位置，记录实验室环境条件，此外还要注明试剂盒厂家、测定方法、批号、效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期，以保证检测结果的可追溯性。

2.5正确加样，防止样品间交叉污染：操作过程中样本及试剂应垂直加样，
不可太快，若加样过快，容易溅出和产生气泡，难以保证加样量的准确性。

非垂直加样易加在微孔非包被区，致非特异性吸附，加样过程易使样本（试剂）溅出对邻近孔产生污染，产生气泡使液面差异致酶标仪测定出现误差。

加样过程中严格遵守一样一吸嘴。

3.实验后的质量控制
3.1结果的判定及报告：根据阴阳性对照及外部质控结果判定本次试验结果是否成立。

认真核实标本的检测结果。

筛查试验呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告（筛查报告）：由一名检测人员签字，一名具有中级以上技术职称的人员审核签字，主管主任签发并加盖单位公章生效。

报告书编号为“B+年份+00+检验编号”，检验编号为流水号；筛查试验呈阳性反应者，用原有试剂加另一种不同原理或不同厂家的试剂进行复检：如均呈阴性则出具筛查报告，如均呈阳性或一阴一阳则需填写“江西省HIV抗体复检送检单”送确认实验室进行确认。

复检化验单编号为“SJ+年份+0+本年度复检的次数”。

3.2检测后样品和资料的保存：检测后的阴性样品按检验编号顺序放置-20℃冷冻箱内保存至少5年；本筛查实验室不保存阳性样品。

复检后呈阳性反应的样品安全移出实验室，用WHO规定的三级包装系统由专人、专车运送至确认实验室确认，同时填写《艾滋病筛查实验室血清运送记录》。

所有的检测记录资料放入清洁区的资料柜，资料柜由双人双锁保管，资料保存时间为15年。

3.3定期召开质控会议：根据实验室检测的频率每季度召开一次质控会议：由质量负责人主持，所有的HIV抗体检测人员均需参加。

对实验室的所有的记录进行检查并进一步核对，包括试验过程中环境温度是否超出实验规定的范围；试剂是否在有效期内；原始记录、检测报告、复检送检单是否填写规范；检测流程是否正确；是否设置了阴阳性对照及外部质控对照；外部对照是否出现漂移、趋势甚至失控并讨论产生的原因；cut-off的计算是否正确；结果评价是否正确；每次实验是否填写所有的相关记录；进一步巩固质量控制知识并强化质量控制意识；制定检测人员的培训和复训计划、仪器的校准与自校计划、检测设备的更新计划等。

参考文献
[1]中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范[s].2004.
[2]卫生部.全国艾滋病检测工作管理办法[S].2006.
[3] 董崇杰，张伊辉，李变丽.艾滋病患者的健康宣教体会[J]．中国中医药现代远程教育2010，8（16）：120.
[4]纵仁荣.血细胞分析仪检测临床应用[J] ．中国中医药现代远程教育,2010，8（10）：203.。