HPLC测定葡萄糖酸锌口服液中山梨酸钾的含量_1

HPLC测定葡萄糖酸锌口服液中山梨酸钾的含量
发布时间：2021-12-30T08:59:08.640Z 来源：《中国科技人才》2021年第25期作者：张丹丹[导读] 岛津LC-20A型四元低压液相色谱仪及配套色谱工作站、KQ-300DE型数控超声波清洗器、赛多利斯BSA224S型十万分之一电子天平、瑞士梅特勒托利多百万分之一电子天平等。

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摘要：为建立一种HPLC法测定葡萄糖酸锌口服液中山梨酸钾含量的方法。

采用色谱柱为岛津C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-乙腈（75∶25），进样量为20μL，流速为1mL/min，检测波长为262nm，柱温为40℃。

结果表明，山梨酸钾质量浓度在8.136~81.36μg/mL内线性关系良好。

该方法准确灵敏、操作简便稳定，可用于测定葡萄糖酸锌口服液中山梨酸钾的含量。

关键词：高效液相色谱法；葡萄糖酸锌口服液；山梨酸钾
引言
山梨酸钾作为常用的食品添加剂，适量使用可以起到较好的防腐、保鲜效果。

目前，国内外常用的对山梨酸钾的检测方法主要有：高效液相色谱法、超高效液相色谱法、气相色谱法，气-质联用法、液-质联用法、拉曼光谱法。

其中，高效液相色谱法与超高效液相色谱法的灵敏度相对较高，成本相对较低，是目前使用较多的检测方法。

1仪器与试剂
1.1仪器
岛津LC-20A型四元低压液相色谱仪及配套色谱工作站、KQ-300DE型数控超声波清洗器、赛多利斯BSA224S型十万分之一电子天平、瑞士梅特勒托利多百万分之一电子天平等。

1.2试剂
山梨酸钾标准品（批号：101075-201602，含量100.0%），中国食品药品检定研究院提供；随机在市面上购买的葡萄糖酸锌口服液（批号：20180105，18060727，17092531，170601）；乙腈、甲醇，均为色谱纯；水，为超纯水；其他溶液均为分析纯。

2试验方法
2.1色谱条件
色谱柱：岛津C18型柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠溶液∶乙腈（75%∶25%），柱温40℃，进样量20μL，流速1mL/min，检测波长为262nm。

2.2溶液的配制
2.2.1标准品储备液
精密称取山梨酸钾标准品约20mg，置其于100mL容量瓶中，加入一部分水溶解，放入超声波清洗仪中超声溶解，超声完毕冷却到室温后加水稀释至刻度，摇匀，贴上标签，作为标准品储备液。

2.2.2样品溶液
精密量取样品5mL，置于25mL容量瓶中，加入一部分水溶解，放入超声波清洗仪中超声溶解，超声完毕冷却到室温后加水稀释至刻度，摇匀，贴上标签，作为样品溶液。

2.2.3标准品辅助液
精密称取山梨酸钾标准品10mg，置于100mL容量瓶中，加入一部分水溶解，放入超声波清洗仪中超声溶解，超声完毕冷却到室温后加水稀释至刻度，摇匀，贴上标签，作为标准品辅助液。

3结果与分析
3.1色谱条件的优化
主要对流动相的类型与比例、柱温、进样量进行比较筛选，而流速与检测波长不作为条件筛选，流速过大会对液相色谱仪造成压力，1mL/min是最合适的流速；选择波长为262nm。

理论塔板数不低于4000，山梨酸钾与相邻峰分离度符合要求。

3.1.1流动相的选择以A组（甲醇∶乙酸铵溶液=5%∶95%）、B组（乙腈∶水=40%∶60%）、C组（0.02mol/L磷酸二氢钠溶液∶乙腈=80%∶20%）为流动相进行进样。

不同流动相的液相色谱图见图1。

由图1可知，C组流动相组合出峰时间合适，峰形也美观对称，故选择C组：0.02mol/L磷酸二氢钠溶液∶乙腈=80%∶20%作为流动相。

注：A-甲醇∶乙酸铵溶液=5%∶95%；B-乙腈∶水=40%∶60%；C-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液∶乙腈=80%∶20%图1不同流动相的液相色谱图3.1.2流动相比例确定流动相的组成后，用山梨酸钾标准品制成质量浓度为0.04mg/mL的山梨酸钾对照品溶液，在柱温40℃，进样量20μL，流速1mL/min，波长262nm的条件下，以±5%进行流动相比例调整以达到更佳的峰形和更合适的出峰时间，发现75%∶25%已经能够达到比较理想的效果。

不同比例的0.02mol/L磷酸二氢钠溶液与乙腈为流动相时的液相色谱图见图2。

图2不同比例的0.02mol/L磷酸二氢钠溶液与乙腈为流动相时的液相色谱图3.1.3柱温
确定流动相的组成和比例后，用山梨酸钾标准品制成质量浓度为0.04mg/mL的山梨酸钾对照品溶液，波长262nm，流速1mL/min，进样量20μL时，分别在柱温为40，30℃条件下进样。

40℃的峰形更加尖细，出峰时间也相较30℃的更合适。

3.1.4进样量
用山梨酸钾标准品制成质量浓度为0.04mg/mL的山梨酸钾对照品溶液，固定波长262nm，流速1mL/min不变，在进样量为20，10μL的条件下进样，记录色谱图。

20μL的进样量相较10μL的更加合适，峰形也比10μL的美观。

3.2方法学验证3.2.1线性范围
配制质量浓度为0.008，0.016，0.032，0.040，0.048，0.064，0.080mg/mL的梯度溶液，结果说明，山梨酸钾在质量浓度为8.136~81.360μg/mL内线性关系良好。

3.2.2专属性验证
按2.2.1的方法得到标准品储备液，按2.2.2的方法得到样品（批号17092531）溶液和阴性样品（批号20180105）溶液对照，记录出峰时间及峰面积。

结果可知，山梨酸钾峰周围并无杂质峰，出峰时间在误差范围内，证明该方法专属于山梨酸钾峰的检出。

3.2.3精密度验证
按2.2.1的方法得到标准品储备液，连续在液相色谱仪中进样6次，记录峰面积。

精密度要在规定的条件之下，同1份样品多次取样测得结果之间接近程度，经计算得出山梨酸钾峰面积的RSD为0.27%（n=6），表明该液相色谱仪的精密度良好，经该液相色谱仪的试验数据真实、可靠、准确。

3.2.4重复性验证
按2.2.2的方法制备样品（批号17092531）溶液，分别在室温条件下放置0，1，2，4，6，8h后进行测定，记录峰面积。

该结果测得山梨酸钾含量的RSD为0.60%，表明该方法的重复性良好，多次操作结果都在误差范围内，该方法所得出的试验数据真实可信。

4结论
本文研究得出最适合测定葡萄糖酸锌口服液中山梨酸钾含量的高效液相色谱条件为流动相0.02mol/L，磷酸二氢钠溶液∶乙腈（75%∶25%），柱温40℃，进样量20μL，流速1mL/min，检测波长262nm。

该方法灵敏度高、可信度高、操作简便，具有较高的精确度和重现性，适用于山梨酸钾的含量检测。

参考文献
[1]盛丽，苏碧泉.新型食品防腐剂山梨酸[J].化学教育，2004，25（7）：8-10
[2]李玲，程诚，陈乃江.HPLC法测定小儿咳喘灵口服液中山梨酸钾的含量[J].中国药师，2018，21（1）：157-158。