总黄酮的测定

版本:A/1 日期:2015-05-25
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标题： 总黄酮的测定
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1.0目的
本标准规定了总黄酮的测定方法。

2.0适用范围
本标准适用于本草原料及加多宝凉茶半成品、成品中总黄酮含量的测定。

3.0术语
无
4.0职责
化验室领班：负责监督检验员按照按此方法进行检测。

化验室检验员：负责按此方法对加多宝凉茶半成品、成品中总黄酮的含量进行检测。

5.0工作流程图
无
6.0内容及要求
6.1原理
溶于乙醇的黄酮类化合物在碱性条件下，与显色剂三价铝离子结合生成有色物质，可在510nm波长附近产生最大吸收。

在一定浓度范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比，与标准曲线（芦丁标准品）比较，可定量黄酮类化合物的含量。

6.2仪器
6.2.1蒸煮锅或灭菌锅
6.2.2恒温水浴锅
6.2.3可见分光光度计
6.2.4液体过滤袋（5μm）
6.2.5容量瓶50ml
6.2.6烧杯1000ml
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6.2.7吸管1ml，2ml，5ml，10ml
6.3试剂
除非另有说明，在分析中至少使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

6.3.130%（V/V）乙醇
6.3.25%（M/V）亚硝酸钠
6.3.310%（M/V）硝酸铝
6.3.41mol/l氢氧化钠
6.3.50.2g/l芦丁标准溶液
准确称取于120℃干燥至恒重的无水芦丁20mg，加适量30%乙醇溶解（需水浴），并用30%乙醇定容至100ml，即可得浓度为0.2g/l的芦丁标准溶液。

6.4分析步骤
6.4.1标准曲线绘制
分别吸取0.2g/l芦丁标准溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、
7.00ml、8.00ml于50ml容量瓶中，加30%乙醇20ml，5%亚硝酸钠溶液1.5ml，摇匀，在暗
处放置6分钟，取出加10%硝酸铝溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6分钟，取出加入1mol/l 氢氧化钠溶液10ml，以30%乙醇溶液定容至50ml（V1），暗处放置15min，取溶液于1cm 比色皿中，在波长510nm处比色测量其吸光度，以相应的试剂溶液作为空白进行校正。

以吸光度为纵坐标，相应的总黄酮浓度为横坐标，制作标准曲线或建立回归方程。

6.4.2样品处理：
6.4.2.1本草原料：称取5g（M）样品（金银花、菊花、甘草、布渣叶、夏枯草、蛋花称取
5g，仙草称取20g）于1000ml烧杯或适宜容器中，用工艺水洗净后加1000ml工艺水在99℃，60min条件下进行浸提，待冷却后用5μm过滤袋过滤并还原至1000ml（V3），收集滤液备用。

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6.4.2.2试样制备：吸取一定量样液V2(加多宝凉茶2ml，6.4.2.1中提取液中仙草1ml、蛋花
2ml、夏枯草2ml、金银花2ml、布渣叶5ml、菊花5ml，甘草10ml)于50ml容量瓶中，加30%乙醇20ml，5%亚硝酸钠溶液1.5ml，摇匀，在暗处放置6min，取出加10%硝酸铝溶液
1.5ml，摇匀，在暗处放置6min，取出加入1mol/l氢氧化钠溶液10ml，以30%乙醇溶液定容
至50ml（V1），暗处放置15min，作为备用液，同时做空白试验（不加10%硝酸铝溶液）。

6.4.3试样的测定
吸取上述备用液于1cm比色皿中，在波长510nm处比色，以不加10%硝酸铝溶液的试样液作为空白进行校正，于波长510nm处测定吸光度。

利用标准曲线，求出备用液中总黄酮的含量m1。

6.4.4结果计算
本草原料样品中总黄酮的含量按公式（1）计算：X=m1×V1×V3/(M×V2)………………
(1)
加多宝凉茶中总黄酮的含量按公式（2）计算：X=m1×V1/V2 ……………………………
(2)
式中：
X——样品中总黄酮的含量，mg/100g或mg/100ml；
m1——由标准曲线计算试样液中的总黄酮含量，mg/100ml；
V1——样品定容体积，ml0
V2——样品取样总体积，ml
V3——浸提后茶汁还原的体积，ml
M——称取样品的重量，g
计算结果保留两位小数。

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7.0质量记录
7.1 KJWIF-QA-60 《总黄酮实验方案数据记录表》
7.2 KJWIF-QA-61 《总黄酮测定原始记录表》。