(精选医学)沉淀反应
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22
Fahey曲线
Fahey曲线： 小分子抗原 扩散时间24h 常数K＝logC∕d 半对数坐标纸曲线
C为抗原浓度， d为沉淀环直径
t1 为 16 ～ 24h ； t2 为 24 ～ 48h ； t3 为 48h 以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
23
标准品抗原浓度测定
不同病人抗原浓度测定
24
62
63
火箭免疫电泳
技术要点
1.2%巴比妥琼脂糖约55℃，加入适量抗血 清，混匀后制板，打孔，孔内加待测样品， 样品孔放负极侧， 6h后观察琼脂板上沉 淀峰，绘制标准曲线，求出待测样品浓度。
64
火箭免疫电泳
影响因素
1.琼脂（无电渗或电渗很小的）影响火箭形状不规则。 2.电泳终点时间的确定。 3.标本数量多时应先通电后加样,防止宽底峰形. 4.IgG定量时，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰 化），抵消了电渗作用。
l:支持场的长度 (有效长度)
48
• 影响泳动率u的因素 内因：1.净电荷 2.质点大小 3.质点形状
49
外因： 1.电场强度V ( U/L)电场强度越大，带电质点
泳动速度越快。 2.缓冲液的pH (pH恒定)：溶液的pH值决定了带
电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷 的多少。 3.离子强度[I]溶液的离子强度越高，颗粒泳动 速度越慢，反之越快。 最适:0.02-0.07 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动. 由于琼脂中含有SO42-，带负电荷，造成静电 感应致使附近的水带正电荷，而向负极移动
53
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白
54
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白
• 电泳仪器
架膜
加盖
接导线，开机
55
免疫电泳技术
电泳分析 ＋ 沉淀反应
优点： 1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。 3.增加了分辨率。
抗原抗体反应 的高度特异性
电泳技术的高 分辨率、快速、 微量
56
免疫电泳包括:
对流免疫电泳 火箭电泳 免疫电泳 免疫固定电泳 免疫印迹等
3. 方阵滴定法
抗原和抗体同时稀释，亦称棋盘(checkerboard) 滴定法，是前二法的结合，可一次完成抗原和抗 体的滴定并找出抗原、抗体的最适比。
10
表6-1 最适比方阵测定法
抗原稀释度
抗体 稀释度 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 对照
1/5
+
++ +++ +++ ++
18
单 向 琼 脂 扩 散 试 验
Ag
Ab
试管法
19
一、单向扩散试验 （平板法） (single diffusion test)
定量试验
原理：抗体与待测的抗原, 在两者比例合适的部位结 合形成沉淀环。
环的大小与抗原的浓度成正 相关。
技术要点：将抗体混入0.9%琼 脂糖内（50℃），未凝固前倾 注成平板，凝固后打孔（直径 3～5mm ），孔中加入抗原溶 液和不同浓度的标准品，置湿 盒内37℃,24～48h 观察孔周 围是否出现沉淀环。
强并使用R型抗体 3.抗原抗体反应液的最适PH为6.5～8.5 4.使用增浊剂
15
免疫浊度测定
分类 1.透射免疫比浊法 2.散射免疫比浊法 3.免疫胶乳比浊法
16
第三节 凝胶内沉淀试验 （gel phase precipitation）
17
原理
可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度 梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置 形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。 常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰 胺凝胶。
57
一、对流免疫电泳 (counter immunoeletrophoresis,CIEP)
原理：双向扩散 + 电泳
比双向扩散试验灵 敏度提高8－16倍
技术要点：制备1.2%巴比妥 琼脂凝胶板，在其上成对打 孔，孔径3mm，孔距6 mm， 于阴极侧孔内加待测血清， 阳性侧孔加抗血清，电泳条 件3～4mA/cm，30min～1h。
61
二、火箭免疫电泳 (rocket immunoeletrophoresis,RIE)
原理
单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术
电泳时凝胶中抗体不移动，样品孔中的 抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减 少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原 抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄， 形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉 淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗 原量呈正相关。
20
单向扩散试验（平板法）
倾注平板 打孔 加样 放置37℃ 24～48h观察沉淀环
21
单向扩散试验 （平板法）
沉淀环的直径与待测标本含量两种计算方法 Mancini曲线
Mancini曲线： 大分子抗原
时间扩散＞48h， 常数K＝C∕d2 普通坐标纸曲线
C为抗原浓度， d为沉淀环直径 T1为16～24h；T2为24～48h；T3为48h以 上,可见T3为直线，T1为反抛物线
8
絮 状 沉 淀 示 意 图 各管抗原倍比稀释
Ag
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128
加入抗血清
各管抗体量不变
Ab
振摇 混匀、37℃孵育
Ag
沉淀量不同
轻摇
出现沉淀量最多的管为最适比例管。
9
2. 抗体稀释法
本法采用抗原量恒定与不同倍比稀释度的抗体反 应，出现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。
该抗体的效价。 3.可进行任意稀释。
37
“1” 为单一抗原抗体系统。 “n” 为多个抗原抗体系统。 *可以用混合抗原鉴定抗体纯度。
*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。
38
小结
沉淀反应定义和特点 沉淀反应的类型 1.液体内沉淀试验 絮状沉淀试验
免疫浊度测定 2.凝胶内沉淀试验 单向扩散试验
双向扩散试验 3.免疫电泳技术
A.Mancini曲线 B.Fahey曲线 C.海德堡曲线 D.直线 E.抛物线
45
第四节 免疫电泳技术 （immunoelectrophoresis technique）
46
电泳技术的基本原理
• 电泳：带电颗粒在电场的作用下向着其 电性相反的电极移动，称为电泳。 （ electrophoresis）
+
±
—
1/10
+
++ ++ ++ +++ ++
+
—
1/20
+
++ ++ ++ +++ ++
+
—
1/40
—
±
+
+
++ +++ ++
—
1/80
—
—
—
—
+
+
+
—
11
4. 方法评价
絮状沉淀试验方法简单，设备要求低， 敏感度较低，受抗原抗体比例影响非常明 显，目前多用以测定抗原抗体反应的最适 比。
12
二、免疫浊度测定 (immunoturbidimetry)
此时介质的pH称为蛋白质的等电点。
51
• 电泳时有两种力，即电泳力和电渗力。 • 如果物质原来带正电荷，向负极移动，则
因电渗作用向负极移动得更快。如果物质 向正极移动，所带电荷少，电泳力抵不过 电渗力，则也向负极移动。
52
• 支撑物 • 一般是采用琼脂或琼脂糖、纤维素膜、滤
纸以及聚丙烯酰胺凝胶等。
絮状沉淀 环状沉淀 免疫浊度沉淀
5
一、 絮状沉淀试验 (flocculation)
•方法受抗原抗体比例的影响非常明显 •应用于测定抗原抗体反应的最适比例 (三种类型)
6
絮状沉淀试验
抗原稀释法：抗原最适比例 抗体稀释法：抗体最适比例 方阵滴定法：抗原抗体最适比例
7
1. 抗原稀释法
(1) 将可溶性抗原作一系列倍比稀释。 (2) 各管加入一定浓度的适量抗血清。 (3) 振摇使抗原、抗体充分混匀，置37℃孵育。 (4) 产生沉淀量随抗原量而不同，以出现沉淀物 最多的管为最适比例管。
58
对流免疫电泳
蛋白质抗原常
带较强的负电
－ 荷，在电场中
向正极移动
通电
抗体球蛋白 带负电荷较少，
籍电渗作用向 ＋
负极泳动
59
60
对流免疫电泳
结果分析：
• 无沉淀线出现则表明无相 应的抗原。
• 沉淀线位于抗原抗体孔中 间，说明两者比例较适合。
• 沉淀线偏向抗原孔一方， 表示抗体浓度＞抗原，反 之，则是抗体浓度＜抗原 浓度。
速率。
形成的复合物
3
沉淀反应可分三类
液体内沉 淀试验
凝胶内沉 淀试验
凝胶免疫 电泳技术
免疫浊度测定 絮状沉淀试验
单向扩散试验 双向扩散试验
对流免疫电泳 火箭免疫电泳
免疫电泳 免疫固定电泳
Hale Waihona Puke 4第二节 液体内沉淀试验
絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合， 在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形 成肉眼可见的絮状沉淀物。 根据沉淀现象的不同，液体内沉淀又可分 为三类：
42
3.单向扩散试验出现双环的沉淀线是因为（） A.两种抗原 B.两种抗体 C.抗体为多克隆抗体 D.抗原为多态性抗原 E.抗原为性质相同的两个组分扩散率不同
43
4.沉淀反应中的钩状效应是因为（） A.pH浓度过高 B.pH浓度过低 C.抗体过量 D.抗原过量 E.以上都不是
44
5.单向扩散试验中大分子抗原和长时间扩散 （48h）的结果处理宜用（）
绘制标准曲线
1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找
相应抗原浓度
25
26
27
影响因素
1.抗血清要求亲和力强、特异性好和效价高，注 意保存。
2.标准曲线必须每次制作。 3.每次必须加质控血清。 4.双环现象，不同扩散率抗原性相同的两个组分 5.Ig测定中，可出现测量值降低：单克隆抗体。 6.假阳性：多克隆抗体。
32
1.检测未知抗原或抗体 2.抗原性质分析 3.抗体效价滴定 4.抗原或抗体纯度鉴定
33
A Ag
BCDEF
Ab
A: 浓度Ag、Ab及分子量近似； B：浓度Ag、Ab近似，分子量Ag ＜ Ab ； C：浓度Ag、Ab近似，分子量Ag ＞ Ab ； D：浓度Ag＞Ab，分子量近似；
E：浓度Ag＞Ab，分子量Ag ＜ Ab ； F：浓度Ag＜Ab，分子量Ag ＞ Ab ；
28
29
二、双向扩散试验
（ double immunodiffusion test）
原理：将抗原抗体分别加在琼脂糖不同的对应 孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处 形成白色沉淀线。
30
模拟图
Ag
原理示意图
Ab
1.抗原抗体双向自由扩散 2.24小时出结果 3.呈现沉淀线或弧
染色标本图
31
技术要点：平板玻璃上倾注一层均匀的琼脂 糖薄层，凝固后打孔，孔径为3mm，孔间 距在3～5 mm之间，在相对的孔中加入抗 原或抗体，放置湿盒37℃18～24h 后，观 察孔周围是否出现沉淀环。
50
• NH 3 + |
NH 3 + +OH - |
NH 2 +OH - |
Pr-COOH ====== Pr-COO - ====== Pr-COO -
+H +
+H +
阳离子
两性离子
阴离子
pH<pI
pH=pI
pH>pI
• 蛋白质的等电点 (pI) ：
•
在一定的介质中，某一蛋白质解离成阴、
阳离子的趋势相等，成为两性离子 (净电荷为零),
39
重点
掌握沉淀反应的含义和类型
40
选择题
1.影响絮状沉淀试验的主要因素是（ ） A.抗原的质量 B.抗体的质量 C.抗原抗体的比例 D.反应溶液pH E.抗体特异性强
41
2.双向扩散试验中沉淀环弯向抗原一方是因 为（）
A.抗原分子量大 B.抗体分子量大 C.抗原抗体分子量大致相等 D.抗原含量大 E.抗体含量大
沉淀反应
（precipitation reaction)
1
第一节 沉淀反应的特点 可溶性抗原+相应抗体
肉眼可见的沉淀
2
沉淀反应分两个阶段
第一阶段
第二阶段
抗原抗体特异性结合，快 形成肉眼可见的大的免疫
速但不可见。免疫比浊法 复合物。沉淀线或沉淀环
中的速率法就是利用此阶 的观察以及免疫比浊法中
段测定免疫复合物形成的 的终点法就是测定此阶段
• 电泳迁移率：同一电场条件下，各种带 电粒子在单位时间内移动的距离。
47
电泳技术的基本原理
V:泳动速度cm/秒or分 d:泳动距离cm t:电泳时间 (秒/分) E:电场强度 伏特/cm
u:泳动率or泳动度(cm/伏·秒or分) U:电压 常压(100—500v)
高压(500—10000v)仅需几分钟
原理：当可溶性抗原与相应抗体特异结合， 二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快 速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应 液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊 度进行测定从而检测抗原含量。
13
14
免疫浊度测定
影响因素
1.抗原抗体的比例：反应体系中保持抗体过量 2.抗体的质量 ：特异性强，效价高，亲和力
34
2.抗原性质分析
1表示待检Ag
2表示标准Ag
待检Ag与标准抗原完全吻合
待检Ag中含有与标准Ag相同的 Ag；还有另外的Ag与Ab相对应
待检Ag有与Ab相对应的Ag，但 与标准Ag不同
待检Ag与标准Ag性质相同；但 含量较低；
35
36
1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。 2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为
Fahey曲线
Fahey曲线： 小分子抗原 扩散时间24h 常数K＝logC∕d 半对数坐标纸曲线
C为抗原浓度， d为沉淀环直径
t1 为 16 ～ 24h ； t2 为 24 ～ 48h ； t3 为 48h 以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
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标准品抗原浓度测定
不同病人抗原浓度测定
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火箭免疫电泳
技术要点
1.2%巴比妥琼脂糖约55℃，加入适量抗血 清，混匀后制板，打孔，孔内加待测样品， 样品孔放负极侧， 6h后观察琼脂板上沉 淀峰，绘制标准曲线，求出待测样品浓度。
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火箭免疫电泳
影响因素
1.琼脂（无电渗或电渗很小的）影响火箭形状不规则。 2.电泳终点时间的确定。 3.标本数量多时应先通电后加样,防止宽底峰形. 4.IgG定量时，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰 化），抵消了电渗作用。
l:支持场的长度 (有效长度)
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• 影响泳动率u的因素 内因：1.净电荷 2.质点大小 3.质点形状
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外因： 1.电场强度V ( U/L)电场强度越大，带电质点
泳动速度越快。 2.缓冲液的pH (pH恒定)：溶液的pH值决定了带
电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷 的多少。 3.离子强度[I]溶液的离子强度越高，颗粒泳动 速度越慢，反之越快。 最适:0.02-0.07 4.电渗：液体对固体支持物的相对移动. 由于琼脂中含有SO42-，带负电荷，造成静电 感应致使附近的水带正电荷，而向负极移动
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醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白
54
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清清蛋白
• 电泳仪器
架膜
加盖
接导线，开机
55
免疫电泳技术
电泳分析 ＋ 沉淀反应
优点： 1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。 3.增加了分辨率。
抗原抗体反应 的高度特异性
电泳技术的高 分辨率、快速、 微量
56
免疫电泳包括:
对流免疫电泳 火箭电泳 免疫电泳 免疫固定电泳 免疫印迹等
3. 方阵滴定法
抗原和抗体同时稀释，亦称棋盘(checkerboard) 滴定法，是前二法的结合，可一次完成抗原和抗 体的滴定并找出抗原、抗体的最适比。
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表6-1 最适比方阵测定法
抗原稀释度
抗体 稀释度 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 对照
1/5
+
++ +++ +++ ++
18
单 向 琼 脂 扩 散 试 验
Ag
Ab
试管法
19
一、单向扩散试验 （平板法） (single diffusion test)
定量试验
原理：抗体与待测的抗原, 在两者比例合适的部位结 合形成沉淀环。
环的大小与抗原的浓度成正 相关。
技术要点：将抗体混入0.9%琼 脂糖内（50℃），未凝固前倾 注成平板，凝固后打孔（直径 3～5mm ），孔中加入抗原溶 液和不同浓度的标准品，置湿 盒内37℃,24～48h 观察孔周 围是否出现沉淀环。
强并使用R型抗体 3.抗原抗体反应液的最适PH为6.5～8.5 4.使用增浊剂
15
免疫浊度测定
分类 1.透射免疫比浊法 2.散射免疫比浊法 3.免疫胶乳比浊法
16
第三节 凝胶内沉淀试验 （gel phase precipitation）
17
原理
可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度 梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置 形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。 常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰 胺凝胶。
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一、对流免疫电泳 (counter immunoeletrophoresis,CIEP)
原理：双向扩散 + 电泳
比双向扩散试验灵 敏度提高8－16倍
技术要点：制备1.2%巴比妥 琼脂凝胶板，在其上成对打 孔，孔径3mm，孔距6 mm， 于阴极侧孔内加待测血清， 阳性侧孔加抗血清，电泳条 件3～4mA/cm，30min～1h。
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二、火箭免疫电泳 (rocket immunoeletrophoresis,RIE)
原理
单向免疫扩散＋电泳,定量检测技术
电泳时凝胶中抗体不移动，样品孔中的 抗原向正极泳动，随着抗原量的逐渐减 少，抗原泳动的基底区越来越窄，抗原 抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄， 形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉 淀峰，抗体浓度固定时，峰的高度与抗 原量呈正相关。
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单向扩散试验（平板法）
倾注平板 打孔 加样 放置37℃ 24～48h观察沉淀环
21
单向扩散试验 （平板法）
沉淀环的直径与待测标本含量两种计算方法 Mancini曲线
Mancini曲线： 大分子抗原
时间扩散＞48h， 常数K＝C∕d2 普通坐标纸曲线
C为抗原浓度， d为沉淀环直径 T1为16～24h；T2为24～48h；T3为48h以 上,可见T3为直线，T1为反抛物线
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絮 状 沉 淀 示 意 图 各管抗原倍比稀释
Ag
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128
加入抗血清
各管抗体量不变
Ab
振摇 混匀、37℃孵育
Ag
沉淀量不同
轻摇
出现沉淀量最多的管为最适比例管。
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2. 抗体稀释法
本法采用抗原量恒定与不同倍比稀释度的抗体反 应，出现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。
该抗体的效价。 3.可进行任意稀释。
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“1” 为单一抗原抗体系统。 “n” 为多个抗原抗体系统。 *可以用混合抗原鉴定抗体纯度。
*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。
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小结
沉淀反应定义和特点 沉淀反应的类型 1.液体内沉淀试验 絮状沉淀试验
免疫浊度测定 2.凝胶内沉淀试验 单向扩散试验
双向扩散试验 3.免疫电泳技术
A.Mancini曲线 B.Fahey曲线 C.海德堡曲线 D.直线 E.抛物线
45
第四节 免疫电泳技术 （immunoelectrophoresis technique）
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电泳技术的基本原理
• 电泳：带电颗粒在电场的作用下向着其 电性相反的电极移动，称为电泳。 （ electrophoresis）
+
±
—
1/10
+
++ ++ ++ +++ ++
+
—
1/20
+
++ ++ ++ +++ ++
+
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1/40
—
±
+
+
++ +++ ++
—
1/80
—
—
—
—
+
+
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4. 方法评价
絮状沉淀试验方法简单，设备要求低， 敏感度较低，受抗原抗体比例影响非常明 显，目前多用以测定抗原抗体反应的最适 比。
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二、免疫浊度测定 (immunoturbidimetry)
此时介质的pH称为蛋白质的等电点。
51
• 电泳时有两种力，即电泳力和电渗力。 • 如果物质原来带正电荷，向负极移动，则
因电渗作用向负极移动得更快。如果物质 向正极移动，所带电荷少，电泳力抵不过 电渗力，则也向负极移动。
52
• 支撑物 • 一般是采用琼脂或琼脂糖、纤维素膜、滤
纸以及聚丙烯酰胺凝胶等。
絮状沉淀 环状沉淀 免疫浊度沉淀
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一、 絮状沉淀试验 (flocculation)
•方法受抗原抗体比例的影响非常明显 •应用于测定抗原抗体反应的最适比例 (三种类型)
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絮状沉淀试验
抗原稀释法：抗原最适比例 抗体稀释法：抗体最适比例 方阵滴定法：抗原抗体最适比例
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1. 抗原稀释法
(1) 将可溶性抗原作一系列倍比稀释。 (2) 各管加入一定浓度的适量抗血清。 (3) 振摇使抗原、抗体充分混匀，置37℃孵育。 (4) 产生沉淀量随抗原量而不同，以出现沉淀物 最多的管为最适比例管。
58
对流免疫电泳
蛋白质抗原常
带较强的负电
－ 荷，在电场中
向正极移动
通电
抗体球蛋白 带负电荷较少，
籍电渗作用向 ＋
负极泳动
59
60
对流免疫电泳
结果分析：
• 无沉淀线出现则表明无相 应的抗原。
• 沉淀线位于抗原抗体孔中 间，说明两者比例较适合。
• 沉淀线偏向抗原孔一方， 表示抗体浓度＞抗原，反 之，则是抗体浓度＜抗原 浓度。
速率。
形成的复合物
3
沉淀反应可分三类
液体内沉 淀试验
凝胶内沉 淀试验
凝胶免疫 电泳技术
免疫浊度测定 絮状沉淀试验
单向扩散试验 双向扩散试验
对流免疫电泳 火箭免疫电泳
免疫电泳 免疫固定电泳
Hale Waihona Puke 4第二节 液体内沉淀试验
絮状沉淀试验是将抗原与相应抗体混合， 在电解质存在的条件下，抗原抗体结合形 成肉眼可见的絮状沉淀物。 根据沉淀现象的不同，液体内沉淀又可分 为三类：
42
3.单向扩散试验出现双环的沉淀线是因为（） A.两种抗原 B.两种抗体 C.抗体为多克隆抗体 D.抗原为多态性抗原 E.抗原为性质相同的两个组分扩散率不同
43
4.沉淀反应中的钩状效应是因为（） A.pH浓度过高 B.pH浓度过低 C.抗体过量 D.抗原过量 E.以上都不是
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5.单向扩散试验中大分子抗原和长时间扩散 （48h）的结果处理宜用（）
绘制标准曲线
1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找
相应抗原浓度
25
26
27
影响因素
1.抗血清要求亲和力强、特异性好和效价高，注 意保存。
2.标准曲线必须每次制作。 3.每次必须加质控血清。 4.双环现象，不同扩散率抗原性相同的两个组分 5.Ig测定中，可出现测量值降低：单克隆抗体。 6.假阳性：多克隆抗体。
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1.检测未知抗原或抗体 2.抗原性质分析 3.抗体效价滴定 4.抗原或抗体纯度鉴定
33
A Ag
BCDEF
Ab
A: 浓度Ag、Ab及分子量近似； B：浓度Ag、Ab近似，分子量Ag ＜ Ab ； C：浓度Ag、Ab近似，分子量Ag ＞ Ab ； D：浓度Ag＞Ab，分子量近似；
E：浓度Ag＞Ab，分子量Ag ＜ Ab ； F：浓度Ag＜Ab，分子量Ag ＞ Ab ；
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二、双向扩散试验
（ double immunodiffusion test）
原理：将抗原抗体分别加在琼脂糖不同的对应 孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处 形成白色沉淀线。
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模拟图
Ag
原理示意图
Ab
1.抗原抗体双向自由扩散 2.24小时出结果 3.呈现沉淀线或弧
染色标本图
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技术要点：平板玻璃上倾注一层均匀的琼脂 糖薄层，凝固后打孔，孔径为3mm，孔间 距在3～5 mm之间，在相对的孔中加入抗 原或抗体，放置湿盒37℃18～24h 后，观 察孔周围是否出现沉淀环。
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• NH 3 + |
NH 3 + +OH - |
NH 2 +OH - |
Pr-COOH ====== Pr-COO - ====== Pr-COO -
+H +
+H +
阳离子
两性离子
阴离子
pH<pI
pH=pI
pH>pI
• 蛋白质的等电点 (pI) ：
•
在一定的介质中，某一蛋白质解离成阴、
阳离子的趋势相等，成为两性离子 (净电荷为零),
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重点
掌握沉淀反应的含义和类型
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选择题
1.影响絮状沉淀试验的主要因素是（ ） A.抗原的质量 B.抗体的质量 C.抗原抗体的比例 D.反应溶液pH E.抗体特异性强
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2.双向扩散试验中沉淀环弯向抗原一方是因 为（）
A.抗原分子量大 B.抗体分子量大 C.抗原抗体分子量大致相等 D.抗原含量大 E.抗体含量大
沉淀反应
（precipitation reaction)
1
第一节 沉淀反应的特点 可溶性抗原+相应抗体
肉眼可见的沉淀
2
沉淀反应分两个阶段
第一阶段
第二阶段
抗原抗体特异性结合，快 形成肉眼可见的大的免疫
速但不可见。免疫比浊法 复合物。沉淀线或沉淀环
中的速率法就是利用此阶 的观察以及免疫比浊法中
段测定免疫复合物形成的 的终点法就是测定此阶段
• 电泳迁移率：同一电场条件下，各种带 电粒子在单位时间内移动的距离。
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电泳技术的基本原理
V:泳动速度cm/秒or分 d:泳动距离cm t:电泳时间 (秒/分) E:电场强度 伏特/cm
u:泳动率or泳动度(cm/伏·秒or分) U:电压 常压(100—500v)
高压(500—10000v)仅需几分钟
原理：当可溶性抗原与相应抗体特异结合， 二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快 速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应 液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊 度进行测定从而检测抗原含量。
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免疫浊度测定
影响因素
1.抗原抗体的比例：反应体系中保持抗体过量 2.抗体的质量 ：特异性强，效价高，亲和力
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2.抗原性质分析
1表示待检Ag
2表示标准Ag
待检Ag与标准抗原完全吻合
待检Ag中含有与标准Ag相同的 Ag；还有另外的Ag与Ab相对应
待检Ag有与Ab相对应的Ag，但 与标准Ag不同
待检Ag与标准Ag性质相同；但 含量较低；
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1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。 2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为