长叶猕猴桃初始无菌组培体系建立

培养基 中；将消毒 叶柄 的陈旧伤 口切割后接种至相 行为期 ３ ０ ｄ的双 因子重复试验结果表明 ： ￣２ ｏ １ ２ 年 关 培养 基 中 。 ３月 ２ ５日及 ２ ０ １ ３年 ３月 ２ ５日选取 的叶块 在 ２年 ３月 ２ ５日、 ２ ０ １ ２年 个培 养 基 中 ，相 比在 Ａ 培养 基 中 即 ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ ０ ． ５ ０
水 洗 １次 一 用 ０ ． １ ％升 汞 消 毒 ７ ｍ ｉ ｎ 一 无 菌 水 洗 ２ ５日及 ２ ０ １ ３年 ３月 ２ ５ 日所 取 带 芽茎 段 的 试 验 结
７ 次。
果（ 表２ 、 图１ ） 。
１ ． ２ ． １ ． ３ 外植 体 的分 割 与 接种 。将 经 过 消毒 处 理 后 ２ ． ２ 新 叶小 块重 复 对 比试 验 结果
２ 结 果 与分析
１ ． ２ ． １ ． １ 外植体 的预处理 。①将半木质化或 已半木 ２ ． １ 带 芽茎 段重 复对 比试 验结 果 质 化 的新 梢 剪 成 ２ ． ５ ～ ３ ． ０（ ３ ｍ 长 带 芽 茎 段 置 于 烧 杯 ２ ０ １ ２年 ３月 ２ ５ 日、 １ ０月 １ ２ 日及 ２ ０ １ ３年 ３月 中， 在 自来水 中冲洗 ３ ０ ａ ｒ ｉ ｎ 。 ②将展开 的新叶剪成 ２ ５ 日分 别利 用 长 叶猕 猴 桃 的带 芽茎 段 作 处 植 体 进
ＮＡＡ０． １ ０ ｍｇ ／ Ｌ： Ｃ． ＭＳ＋６一ＢＡ１ ． ５ ０ ａｇ ｒ ／ Ｌ＋ＮＡＡ０． １ ０ ｍｇ ／ Ｌ； Ｄ． ＭＳ ＋
２ ５ Ｅ ｔ 分别利用长叶猕 猴桃 的叶柄作外植 体进行为 期３ ０ ｄ的双 因子 重 复 试验 结 果表 明 ： 叶柄 在 三次 双
１ Ｏ月 １ ２日、 ２ ０ １ ３年 ３月 ２ ５日分别 以长 叶猕猴 桃 的 ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ有 最好 表现 。② 暗培 养 １ ０ ｄ后
芽带茎段 、 叶片 、 叶柄作外植体展开了三次双因子重复 至初 始培 养 ３ ０ ｄ ， 此 时的 叶块 膨大 ， 叶块 面积 明显 大 试验 。长 叶猕猴桃 Ｎ Ａ Ａ、 ６ ＿ Ｂ Ａ的双因子试验见表 １ 。 于接 种 时的 叶面 积 ；叶块 边缘 出现 了明显 的愈伤 组 织。 ￣２ ｏ １ ２ 年 ｌ ０ 月 １ ２日所选取的新叶小块在 Ａ培 表 １ 长 叶 猕 猴 桃ＮＡＡ与６ 一 Ｂ Ａ的 双 因 子试 验
的茎段 切 成 １ ． ０ １ ． ５ ｅ ｍ长 的 带芽 茎段 ，接 种 至相 关
２ ０ １ ２年 ３月 ２ ５日、 １ ０月 １ ２日及 ２ ０ １ ３年 ３月
培养 基 中 ； 将 叶片 分 割成 １ ． ０ ｅ ｌ Ｔ ｌ ２ 大小 ， 接 种 至 相 关 ２ ５日分 别 利 用 长 叶 猕 猴 桃 的 新 叶 小 块 作 外 植 体 进
４ ～ ９ ｅ ｍ 的离 体 小 块 置 于烧 杯 中 ， 在 自来 水 中冲 洗 行 为期 ３ ０ ｄ的双 因子 重复 试验 结 果表 明 ： ￣２ ｏ １ ２年
３ ０ ａ ｒ ｉ ｎ 。 ③收集叶柄并置于烧杯中， 在 自来水 中冲洗 ３月 ２ ５ 日及 ２ ０ １ ３年 ３月 ２ ５ 日选 取 的带 芽 茎 段 在 ３ ０ ａｉ ｒ ｎ。 上述 ９ 个 培养 基 中 ， 相 比在 Ｂ培 养基 中 即 ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ １ ． ２ ． １ ． ２ 外植体 的消毒处理。将在 自来水下冲洗好 １ ． ０ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ０ ｍ ｇ ／ Ｌ有 最好 表 现 。②茎 上 侧芽 的材料沥干水分 ， 置于超净工作台上 ， 带芽茎段与叶 在诱导培养后 ６ ｄ 即开始萌动 ，至 ３ ０ ｄ 新梢生长健 柄分别 用 ７ ５ ％酒 精 浸 泡 ８ ｓ 一 无 菌 水 洗 １次 一 用 壮 ， 且伤 口处出现大量愈伤组织 。 ￣２ ｏ １ ２ 年 １ ０ 月 １ ２ ０ ． １ ％升汞 消毒 ｌ ０ ｍ ｉ ｎ 一 无 菌水洗 ７次 。 日所 选取 的带 芽茎 段在 Ｂ培养 基 中培养 上述 相应 时 离 体 叶 片 小 块分 别 用 ７ ５ ％酒 精 浸 泡 ４ ｓ 一 无 菌 间 后也 有 较 好 表 现 ，但 整 体 表 现 不 如 ２ ０ １ ２年 ３月
养基 中也 有较 好表 现 ， 但 整体 表现 不 如 ２ ０ １ ２年 ３月
２ ５日及 ２ ０ １ ３年 ３月 ２ ５日的试 验结 果 （ 表２ 、 图２ ） 。 ２ ． ３ 叶柄重 复对 比试 验 结果 ２ ０ １ ２年 ３月 ２ ５日、 １ ０月 １ ２日及 ２ ０ １ ３年 ３月
注 ： Ａ， ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ ０ ． ５ ０ ｍ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． １ ０ ｍｇ ／ Ｌ； Ｂ， ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ１ ． ０ ０ ｍ ｇ ｍ＋
因子 重复试 验 中 ， 培养 期 间动态 变化 不 明显 （ 表２ ） 。
３ 结论 与讨论
６一Ｂ Ａ Ｏ ． ５ ０ ｍｇ ， Ｌ＋ Ｎ ＡＡ ０ ． ５ ０ Ｉ ｎ ｇ ， Ｌ； Ｅ， ＭＳ＋ ６ 一 Ｂ Ａ１ ． ｏ ｏ ｍｇ ／ Ｌ＋ ＮＡ Ａ Ｏ ． ５ Ｏ
ｍｇ ／ Ｌ ； Ｆ， ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ１ ． ５ ０ ｍｇ ， Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． ５ ０ Ｉ ｌ ｌ ｇ ， Ｌ ； Ｇ， ＭＳ ＋ ６ 一 Ｂ Ａ ０ ． ５ ０ ｎ ｌ Ｌ ＋
６期
蔡 冬 元
长 叶猕 猴 桃 初 始 无 菌 组 培体 系建 立
ｌ ３
叶柄 、 刚展 开 的幼嫩 叶片小块 作外 植体 。
１ ． ２方 法
１ ． ２ ． １ 材 料处 理
ｄ暗光培 养 ， 后 逐 渐增 加光 照 时间 与光 照强度 。培 养
室 中温度 为 （ ２ ５ ＊ ＿ ２ ） ℃。