血清抗子宫内膜抗体、HMGB1与视黄醇结合蛋白4在子宫内膜异位症中的

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广东医学 2019 年7 月 第40 卷第 14 期 Guangdong Medical Journal Jul. 2019, Vol. 40, No. 14
血清抗子宫内膜抗体.HMGB1与视黄醇结合 蛋白4在子宫内膜异位症中的表达及意义*
张洪江'，金春花'，姜春善'，曾婕S 王雅岩'
*延吉市科学技术局技术项目(编号:2016884963)延边大学附属医院'检验科，2妇科，'呼吸内科(吉林延吉133000)
【摘要】 目的 研究血清抗子宫内膜抗体(anti-Endometrial antibody, EM A b)、高迁移率组蛋白Bl ( high
mobility histone Bl ,HMGB1)与视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)在子宫内膜异位症中的表达
及意义。

方法 选取确诊患有子宫内膜异位症的女性患者55例作为子宫内膜异位症组。

选取同期健康体检 的女性健康志愿者55例为对照组。

分别采集两组研究对象的清晨空腹状态下静脉血5 mL,双抗体夹心法检
测血清EMAb 表达‘Western blot 检测HMGB1、RBP4蛋白表达，并进行不同分期EMAb 、HMGBl 、RBP4联合检 测。

结果子宫内膜异位症组EMAb 、HMGBl 、RBP4阳性表达显著高于对照组，差异有统计学意义(P <
0.05)。

子宫内膜异位症患者EMAb.HMGBl.RBP4阳性表达与年龄、体质指数无关(P>0.05)。

子宫内膜异
位症患者EMAb 、HMGBl 、RBP4阳性表达与分期、异位囊肿直径大小、分化程度有关，HI + IV 期、异位囊肿直 径大小M5 cm 、高分化EMAb 、HMGBl 、RBP4阳性表达较高，差异有统计学意义(P < 0. 05 ) o EMAb 、HMGBl
与RBP4在子宫内膜异位症中的表达呈正相关。

结论 血清抗子宫内膜抗体、HMGB1与RBP4在子宫内膜
异位症患者中均呈现较高表达，三者之间呈正相关，为子宫内膜异位症的临床检测提供了一定的理论依据。

【关键词】 抗子宫内膜抗体；高迁移率组蛋白B1；视黄醇结合蛋白4；子宫内膜异位症
【中图分类号】R711；R446 【文献标志码】A
DOI ：10. 13820/j. cnki. gdyx. 20185170
子宫内膜异位症是一种常见的妇科疾病，常发 病的人群是育龄妇女，主要特点是患者的内膜出现
异常生长,给患者带来较大的危害,近年来患子宫内 膜异位症的人数在逐年上升⑷。

抗子宫内膜抗体
(anti - endometrial antibody , EMAb )是一种生物抗
体，主要是以子宫内膜为靶原，其主要特点是存在技 术依赖性,通过卵巢激素的调节，促进子宫内膜自身
抗体EMAb 的产生⑵。

血清高迁移率组蛋白B1
(high mobility histone Bl , HMGB1)属于一种晚期炎
性介质，视黄醇结合蛋白4( retinol binding protein 4,
RBP4)与炎性标记物有紧密的联系，在子宫内膜异
位症中具有重要的参与作用[3-4]o 但是相关的研究 数据较少。

本文主要研究血清EMAb.HMGBl 与
RBP4在子宫内膜异位症中的表达及意义。

1资料与方法
1. 1 一般资料 选取2017年1月至2018年1月于 我院确诊患有子宫内膜异位症的女性患者55例作为 子宫内膜异位症组，年龄40 ~70岁，平均(56.3 土
5. 8)岁。

所有患者均符合美国生育协会的分期标
准，I 期12例，II 期14例，皿期15例，IV 期13例。

选取同期于我院进行健康体检的女性健康志愿者
55例作为对照组，年龄40 -70岁，平均(55.6 ± 5.9)岁。

两组年龄比较差异无统计学意义(P > 0.05)。

纳入标准:所有研究对象均为育龄期妇女; 均未发现妇科肿瘤以及急性炎症;所有研究对象月
经周期规律，在3个月之前停止服用激素类的药物。

排除标准:具有心脑血管疾病患者;具有精神疾病患
者;哺乳及妊娠期妇女;具有肝、肾等系统性严重的 疾病。

本研究所有研究对象及家属均知情，签署家 属知情通知书，并获得我院伦理委员会批准。

主要试剂：兔抗鼠EMAb (由Hyclone 公司提
供)，兔抗人HMGB1、RBP4抗体(由Invitrogen 公司 提供)，PBS 缓冲液和SDS -PAGE 凝胶(BD 公司提
供)；ELISA 试剂盒(Dako 公司提供)。

1.2 方法
1.2.1样本采集分别采集两组研究对象的清晨 空腹状态下静脉血5 mL,置入抗凝试管中，使用离
心机以3 000 r/min 的速度进行血清分离,20 min 后 提取样本血清至试管，然后放入-70七的冰箱冷藏
待测。

1.2.2 双抗体夹心法检测血清EMAb 表达 将待
测血清吸附在微量滴定板上的小孔里，进行洗涤1 次;加入待测的抗原，如果两种抗原产生特异反应,
就会产生结合,要把剩余的抗体清洗干净;之后要加
入酶联抗体和待测的抗原之间产生特异反应,形成“夹心”现象;最后加入酶底物，如果产生有颜色的产物，就说明待测血清有对应的抗原，严格按照ELISA试剂盒说明书操作步骤进行，分析血清EM-Ab表达。

1.2.3Western blot检测HMGB1、RBP4蛋白表达
将采集的标本，使用PBS缓冲液对待测标本进行清洗，使用裂解液裂解之后对蛋白浓度进行测定。

取20jig/孔蛋白质，加入蛋白缓冲液之后进行电泳，之后将电转膜置于10%的牛奶之中，之后使其与一抗相结合，在5弋的环境下进行孵育。

次日，使用TBST缓冲液进行清洗，在37咒的环境下使其与二抗相结合,1h后使用TBST缓冲液进行清洗，然后使用显影剂使其显色，操作步骤严格按照显影定影试剂盒操作说明进行，对HMGB1、RBP4蛋白表达进行检测。

1.3统计学方法采用SPSS20.0统计软件进行分析处理。

计量资料采用丘士s描述,多组间比较采用F值检验，两组间实施独立样本t值检验。

P< 0.05为差异有统计学意义。

采用SAS9.4软件对单独检测和联合检测的准确度进行计算分析。

相关性采用Pearson相关分析。

2结果
2.1两组间EMAb、HMGBl、RBP4阳性表达比较子宫内膜异位症组EMAb、HMGBl、RBP4水平显著高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）o见表1。

表1两组间EMAb、HMGBl、RBP4阳性表达比较例（％）项目例数EMAb HMGB1RBP4
对照组554(7.27)3(5.45)5(9.09)
子宫内膜异位症组5540(72.73)38(69.09)42(76.36)
/值49.0947.6350.86
P值<0.05<0.05<0.05
2.2EMAb、HMGBl、RBP4与子宫内膜异位症患者临床病理资料的关系子宫内膜异位症患者己“-Ab、HMGBl、RBP4阳性表达与年龄、体质指数无关（P>0.05）o子宫内膜异位症患者EMAb、HMGBl、RBP4阳性表达与分期、异位囊肿直径大小、分化程度有关+IV期、异位囊肿直径大小M5cm、高分化EMAb、HMGBl、RBP4阳性表达较高，差异有统计学意义（P<0.05）。

见表2。

表23种因子与子宫内膜异位症患者临床病理资料比较例（％）
临床资料
EMAb HMGB1RBP4
阳性表达X2值P值阳性表达X2值P值阳性表达X2值P值
年龄
<45岁18(32.73)0.36>0.0522(40.00)0.99>0.0515(27.27)0.18>0.05 M45岁21(38.18)17(30.90)17(30.90)
分期
I+n12(21.82) 4.26<0.0515(27.27) 4.70<0.0513(23.64) 5.79<0.05皿+N22(40.00)26(47.27)25(45.45)
异位囊肿直径大小
<5cm11(20.00) 4.41<0.0512(21.82) 5.07<0.0510(18.18) 4.58<0.05工5cm21(38.18)23(41.81)20(36.36)
体质指数
<22.5kg/m212(21.82) 1.65>0.0513(23.64)0.19>0.0515(27.27)0.44>0.05
M22.5kg/m218(32.73)15(27.27)12(21.82)
分化程度
低分化8(14.55)<0.058(14.55)<0.055(9.09)<0.05中分化19(34.55)18(32.73)20(36.36)
高分化28(50.90)29(52.73)30(54.55)
2.3EMAb、HMGBl与RBP4的相关性EMAb、相关。

见表3。

HMGB1与RBP4在子宫内膜异位症中的表达呈正
表3EMAb.HMGBl与RBP4的相关性
指标
EMAb HMGBI RBP4
r值P值r值P值r值P值
EMAb--0.9270.000.9180.00 HMGBI0.9270.00--0.9060.00 RBP40.9180.000.9060.00--
3讨论
子宫内膜异位症在妇科疾病中较为常见，其发病率有逐年上升的趋势，研究显示，子宫内膜异位症在形态学上表现良好，但是也具有种植、侵袭、复发的特点，和恶性肿瘤相似，给患者的身心健康带来严
重威胁⑸。

患者在临床上的主要表现是痛经、性交痛、盆腔痛,严重时会造成不孕。

一些患者的临床特征不具有典型性，同时缺少特异性，因此对于子宫内膜异位症的早期诊断，较困难⑷。

子宫内膜异位症做到早期诊断和治疗，有助于患者痛苦的减轻,促进生活质量的提高。

目前，子宫内膜异位症的发病机制没有明确指出，研究显示，其发病主要和种植、淋巴及静脉散播、
内分泌、遗传性、免疫机制有关E。

种植:经血逆流种植是指在经期，子宫内膜腺上皮和间质细胞随血液出现逆流现象，通过盆腔后在卵巢和邻近的盆腔腹膜间种植，并且持续生长并且蔓延,产生盆腔内异症⑻。

研究显示⑼，子宫内膜异位症发生的决定性因素是在位内膜出现差异，其决定逆流经血内膜碎片是否可以异地黏附和生长。

淋巴及静脉散播：在远离盆腔的部位发生子宫内膜异位症，主要是由淋巴及静脉散播造成，子宫内膜组织经过静脉以及淋巴管向远处发生转移，且同感光学镜的检测,发现在盆腔静脉、淋巴管以及淋巴结中，有子宫内膜组织［问。

内分泌:子宫内膜异位症发病与异位组织中激素受体水平表达有关，子宫内膜异位症患者月经紊乱是因为异位内膜与在位内膜的发育不一致［⑴o 遗传学:基因数据显示卫］,在1号和7号染色体上,基因发生变异，和子宫内膜异位症的发病有紧密联系。

免疫机制:子宫内膜异位症发病与免疫机制有关，在子宫内膜异位症患者的腹腔液细胞数量出现
异常，活性也发生改变，患者血清中lgG、EMAb水平增加问。

EMAb主要依靠子宫内膜为靶原，属于一种生物抗体,其特点是具有激素依赖性,经过卵巢激素的调节作用，盆腔中会出现异位内膜种植灶，通过巨噬细胞吞噬，子宫内膜中特定抗原会发生识别，激活机体免疫系统，子宫内膜自身抗体EMAb会产生［⑷。

滕辉等指出，子宫内膜异位症是否发病与血清中EMAb水平的高低有关。

EMAb也与不孕症有关。

本研究显示，子宫内膜异位症EMAb.HMGBl与RBP4阳性表达高于对照组（P<0.05）,且随着子宫内膜异位症分期的增加，EMAb阳性表达也逐渐升高。

说明血清EMAb.HMGBl与RBP4和子宫内膜异位症的诊断具有一定联系。

HMGB1属于非组蛋白核蛋白，在各种组织中大量存在,HMGB1参与炎性反应、细胞增殖、分化和迁移「同。

子宫内膜异症的发生与发展,HMGB1起到了关键性的作用。

子宫内膜异症患者的免疫系统出现失控，促进HMGBI 的释放,导致炎症反应,通过多种信号作用对炎症反应进行放大，最后造成子宫内膜异症向分级方向发展。

HMGB1可以激活相关的基因，减少异位内膜细胞的凋亡，形成子宫内膜异位病灶"］。

本研究结果显示,子宫内膜异位症患者HMGB1阳性表达较髙，IV期子宫内膜异位症高于I期，说明子宫内膜异位症发生与HMGB1有关,与其病情的严重程度相关。

EMAb、HMGBl与RBP4阳性表达与异位囊肿直径大小、分化程度有关。

RBP4属于一种球蛋白，与炎症反应相关，结合其受体导致炎症反应的发生。

RBP4诱导炎症反应发生主要是通过促进促炎分子的表达,RBP4参与子宫内膜异位症的发生与发展的途径是通过促进促炎分子和黏附分子的表达，发挥着重要作用［，8-19］o本研究结果显示子宫内膜异位症患者血清中RBP4表达水平较高，W期子宫内膜异位症高于I期。

结果与魏丽㈤］保持一致。

本研究结果显示,EMAb、HMGBl与RBP4之间呈正相关关系，说明EMAb.HMGBl.RBP4三种因子在子宫内膜异位症的发病中具有一定的协同作用。

可能机制:HMGB1与RBP4结合，有助于MAPK信号通路激活，从而诱导大量炎症因子表达，相互作用之后，促进NF-k B激活,调控多种基因,NF_k B会增强黏附分子表达，增加内皮细胞的通透性以及黏附作用，诱导炎症发生。

在检测效能研究中，EMAb、HMGBI、RBP4三项指标联合检测在不同分期中的诊断准确度要高于单项标志物检测，说明在通过标志物对子宫内膜异位症进行诊断时，联合检测的效
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果要更突出。

这一研究结论仍需要大量的研究样本，来确定其可靠性。

综上所述，血清EMAb、HMGBl与RBP4在子宫内膜异位症患者中均呈现较高表达，三者联合检测的诊断效能优于单独检测，为子宫内膜异位症的临床检测提供了一定的理论依据。

参考文献
[1]韩肖彤，郭红燕，孔东丽，等.子宫内膜异位症诊断延迟的
原因及影响因素探讨[J].中华妇产科杂志，2018,53(2)：92-98.
[2]刘洋，散琴，熊莹莹，等.子宫内膜异位症患者血清CA125、
EMAb、ENA-78、EPO、VEGF水平的临床意义[J].中国计划生育学杂志，2017,25(7)：479-481.
[3]戚之琳，齐世美，凌烈锋，等.瑞香素对HMGB1释放及
HMGB1诱发的炎症反应的双重抑制作用[J].南方医科大学学报，2015,35(11)：1519-1523.
[4]张建云.促性腺激素释放激素激动剂联合保守手术对中、重
度子宫内膜异位症患者卵巢储备功能、血清高迁移率蛋白
B1及视黄醇结合蛋白4的影响[J].中国妇幼保健，2018, 33(6):1365-1368.
[5]李雅男，王丹波，陈英汉，等.不同类型子宫内膜异位症临
床特点及意义分析[J].实用妇产科杂志，2015,31(1)：
34-36.
[6]张平，孙亚兵，陈正云，等.腹壁子宫内膜异位症121例临
床研究[J].上海交通大学学报：医学版，2016,36(10)：
1463-1466.
[7]成萍.子宫内膜异位症发病机制的研究进展[J]・中华妇幼临
床医学杂志：电子版，2015,11(1)：117-119.
[8]庄梦斐，杨英，曹阳，等.子宫内膜异位症病理机制相关信
号通路的研究进展[J].生殖与避孕，2016,36(3)：214-
222,244.
[9]Kobayashi H,Higashiura Y,Shigetomi H,et al.Pathogenesis of
endometriosis:the role of initial infection and subsequent sterile inflammation(Review)[J].Mol Med Rep,2014,9(1)：9-
15.
[10]竺天虹，张信美.上皮间充质转化介导子宫内膜异位症发生
发展的研究进展[J].浙江大学学报：医学版，2016,45
(4):439-445.
[11]宁丽，陈萱，庄如锦，等.子宫内膜异位症发病机制的研究
进展[J].现代生物医学进展，2016,16(3)：593-596,
556.
[12]Dubinskaia ED,Gasparov AS,Fedorova TA,et al.Role of the
genetic factors,detoxication systems and oxidative stress in the pathogenesis of endometriosis and infertility(review)[J].Vestn
Ross Akad Med Nauk,2013(8):14-19.
[13]凌丽.子宫内膜异位症免疫机制研究进展[J].国际妇产科学
杂志，2015,42(1)：33-37.
[14]朱晓芳，张海燕，何丽，等.抗心磷脂抗体及抗子宫内膜抗
体与复发性流产的关系探讨[J].重庆医学，2018,47(2)：
249-251.
[15]滕辉，王俊玲，刘昱磊，等.火针对子宫内膜异位症患者CA-
125水平及EMAb的影响[J].上海针灸杂志，2016,35(7)：
844-846.
[16]李娟，段振玲，全政照，等.HMGB1、mPGES-1和TLR4
在卵巢子宫内膜异位症中的表达及临床相关性研究[J].中
国妇幼保健，2016,31(15)：3147-3152.
[17]吴锦杰，梁炎春，姚书忠，等.HMGB1对子宫内膜异位症新
生血管生成的潜在作用[J].国际妇产科学杂志，2016,43
(2):194-19&
[18]王婉.血清HMGB1与RBP4联合检测在诊断子宫内膜异位症
中的应用[J].宁夏医科大学学报，2015,37(3)：309-
311.
[19]王璐，杨文静.腹腔镜手术联合GnRH-«对子宫内膜异位
症患者临床疗效及血清CA199、RBP4、TSGF水平的影响
[J].贵州医药，2017,41(9)：936-937.
[20]魏丽.血清HMGB1与RBP4联合检测在诊断子宫内膜异位症
中的应用[J].实用妇科内分泌电子杂志，2016,3(17)：
26,28.
(收稿日期:2018-09-14编辑:朱绍煜)。