养肝解郁颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病肝纤维化的药效学

•1682•中国老年学杂志2019年4月第39卷养肝解郁颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病肝纤维化的药效学
冷炎杨明欧喜燕成光宇蒋惠军陈星宇（长春中医药大学附属医院，吉林长春130021）
〔摘要〕目的探讨养肝解郁颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）肝纤维化的药效学作用。

方法大鼠120只和小鼠60只，分别分为对照组、模型组、阳性组及养肝解郁颗粒高冲、低剂量组。

建立、复制与药物治疗NAFLD肝纤维化作用相关的实验动物模型;从降低血脂、缓解肝细胞损伤、降低肝纤维化程度等方面，对各组进行药效学研究。

结果阳性组及高剂量组胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）含量与模型组比较均明显下降（P<0.01,P<0.05）。

中剂量组TC含量与模型组比较明显下降（P<0.05）。

阳性组及高剂量组与模型组比较HYP、MMP-9含量均明显下降（P<0.01,P<0.001,P<0.05）；对照组、阳性组、高冲剂量组血清HA、P111P、LN含量与模型组比较均明显下降（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,对照组、阳性组及高、中剂量组病理形态评分与模型组比较均明显下降（P<0.05,P<0.01）。

结论养肝解郁颗粒可在一定程度上降低NAFLD肝纤维化模型鼠的血脂，减轻肝细胞损伤程度，对NAFLD肝纤维化有较好的改善治疗效果。

〔关键词〕养肝解郁颗粒;非酒精性脂肪性肝病;肝纤维化
〔中图分类号〕R575.2〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-92U2（2（H9）U7-16824）3;doi：1U.3%9/j.issn.1U05-92U2.2（119.07.05°
非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝损伤⑴，已成为发达国家、中国沿海地区慢性肝病的主要原因。

且发病率随年龄增长而升高⑵。

养肝解郁颗粒为丹梔逍遥散化裁而来，作为院内制剂已经应用于治疗各种慢性肝炎伴有抑郁状态患者，取得了很好的保肝降酶疗效，且临床中发现该制剂对NAFLD肝纤维化的血脂、肝功及肝纤维化程度均具有一定改善作用，本研究主要观察养肝解郁颗粒治疗NAFLD肝纤维化的疗效。

1材料与方法
1.1实验动物及试剂SD大鼠120只，雄性, 220-250g,KM小鼠60只，雄性，18~22g（辽宁长生生物技术有限公司）。

药品与试剂：养肝解郁颗粒（长春中医药大学附属医院制剂中心）；多烯磷脂酰胆碱胶囊（赛诺菲制药有限公司）；中/长链脂肪乳注射液（广州百特侨光医疗用品有限公司）；四氯化碳（CC14,北京化工厂）；注射用盐酸四环素（北京赛弗制药股份有限公司）；胆固醇（TC.北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；氨基甲酸乙酯（国药集团化学试剂有限公司）；甲醛溶液（沈阳力诚试剂厂）；总TC测试试剂盒（COD-PAP法），三酰甘油
基金项目：吉林省科技发展计划重点科技攻关项目（No.20150204043YY）
通信作者:成光宇（1971-）,男，副主任药师，主要从事中药复方制剂、天然药物的作用机制研究。

第一作者:冷炎（1970-）,男，教授，硕士生导师，主要从事中医肝、脾胃病防治研究。

（TG）测试试剂盒（GPO-PAP法），中生北控生物科技股份有限公司产品；轻脯氨酸（HYP）、基质金属蛋白酶（MMP）・9、透明质酸（HA）、111型前胶原蛋白（PI1IP）、层黏蛋白（LN）酶联免疫测试试剂盒，为美国R&D公司产品。

实验仪器：紫外/可见分光光度计（美国Perkin Elmer公司）；Heraeus台式离心机Stratos（德国贺利氏公司）；电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）。

12实验方法
1.2.1NAFLD肝纤维化模型建立大鼠高脂高糖结合CC14复合因素法：足量18%蔗糖溶液自由饮用，同时给予脂肪乳灌胃（10ml/kg）,并于其背部皮下注射40%的CC14花生油溶剂（0.1ml/100g）, 3次/w。

每周称重2次，调整给药剂量。

大鼠高脂结合氧四环素复合因素法：给予复合高脂饲料饮食〔77%基础饲料基础上，加入3%TC J0%猪油和10%蛋黄粉。

投食量：25g/（鼠•d）〕，并按10mg/100g剂量给予氧四环素腹腔注射，每5d给药I次。

小鼠高脂结合CC1。

复合因素法:给予复合高脂饲料饮食，并于第2周末开始腹腔注射5%的CC14花生油溶剂（0.01ml/g）,3次/w。

各组均持续造模8w。

1.2.2实验分组及给药方法动物适应环境7d 后按体重随机分组为对照组、模型组、阳性（多烯磷脂酰胆碱胶囊）组、高、中、低剂量组。

各组于建模后当日起每天灌胃给药1次，阳性组给予多烯磷脂酰胆碱胶囊〔0.25g/（kg•d）〕，高、中、低剂量组分别给予养肝解郁颗粒〔1.728、0.864、0.432g/（kg•d）〕，对照组及模型组给予等剂量蒸
冷炎等养肝解郁颗粒治疗非酒精性脂肪件肝病肝纤维化的药效学第7期•1083■
懈水，连续8w,每周称重2次，以调整给药剂量。

于8w末，动物禁食不禁水12h,于末次给药60min 后以20%乌来糖溶液麻醉后，腹主动脉取血,4£, 3000r/min,10min,取血清保存备用。

1.2.3检测指标
1.2.3.1血清学指标检测依照试剂盒方法检测大鼠血清中TC、TG含量;HYP、MMP-9含量;小鼠血清中HA、P1HP丄N含量。

1.2.3.2肝病理组织学检查甲醛固定,HE染色,光镜观察。

病变评价参考卫生部《保健食品检测与评价技术规范2003版》中关于对化学性肝损伤有辅助保护作用检验方法。

观察肝细胞变性(脂肪变性、水样变性、胞质凝聚、气球样变)、肝细胞坏死和炎症改变等。

肝脏病变得分=肝细胞变性得分(气球样变得分+脂肪变性得分+胞质凝聚得分+水样变性得分)x1+肝细胞炎症改变得分xl+肝细胞坏死得分x2。

1.3统计学方法应用SPSS17.0软件进行方差分析、LSD-t检验。

2结果
2.1各组血脂水平比较与对照组比较，模型组TC、TG含量均显著升高(P<0.01,P<Q.001)0阳性组及高剂量组TC、TG含量与模型组比较均明显下降(P<0.01,P<0.05)o中剂量组TC含量与模型组比较明显下降(P<0.05),中剂量组TG含量、低剂量组TG、TC含量与模型组比较有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。

见表I。

2.2各血清HYP.MMP-9含量比较与对照组比较,模型组HYP、MMP-9含量显著升高(P<0.05,P< 0.001)。

阳性组及高剂量组与模型组比较HYP、MMP-9含量均明显下降(P<0.01,P<0.001,P< 0.05)；中、低剂量组与模型组比较均有下降趋势,但只有中剂量组HYP含量及高脂高糖结合CCL4复合因素法MMP-9含量、低剂量组高脂高糖结合CCL4复合因素法HYP含量差异有统计学意义(p< 0.05,P<0.01)o见表1。

2.3各组血清HA、P1DP、LN含量比较(高脂结合CC1。

复合因素法)对照组、阳性组、高、中剂量组血清HA、P11IP、LN含量与模型组比较均明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.001)，低剂量组动物血清中HA、P11IP丄N含量与模型组比较有下降趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。

见表2。

2.4各组病理形态评分比较对照组、阳性组及高、中剂量组病理形态评分与模型组比较均明显下降(P<0.05,P<0.01)。

低剂量组动物病理形态评分与模型组比较有降低趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)o见表2。

表1各组血脂、血清HYP、MMP-9含量比较(i±s,»=10)
组别高脂高糖结合CC14复合因素法高脂结合氧四环素复合因素法高脂高糖结合CC14复合因素法高脂结合氧四环素复合因素法TC(mmol/L)l'G(mmoi/L)TC(nimol/L)TG(nmiol/L)HYP(nmol/L)MMP-9(nmol/L)HYP(nmol/L)MMP-9(nmol/L)
对照组 1.67±0.293) 1.22±0.42) 1.94±0.243} 1.24±0.422)132.57±16.94°12.92±1.123)110.83±16.413)12.94±1.143)模型组7.07±l.35 1.80±0.20 6.03±l.10 1.81±0.24154.38±23.0419.62±3.31156.38±23.4117.02±1.59阳性组 5.36±1.64|) 1.61±0.15"* 4.92±0.59Q 1.62±0.071}129.29±12.722)15.38±1.912)120.46±12.233)15.29±1.49,)高剂量组 5.33±1.062) 1.63±0.13n 4.77±0.7()2) 1.61±0.07°117.46±10.003)15.84±1.862)127.29±18.172)15.66±0.82n 中剂量组 5.69±1.04,) 1.66±0.17 4.96±1.12n 1.65±0.08128.83±14.422)16.63士1.53"136.47±11.85°16.86±0.67低剂量组 5.99±1.82 1.71±0.23 5.23±1.27 1.66±0.07134.68±10.34n17.33±1.49139.68±15.6516.26±1.29与模型组比较：1)P<0.05,2)P<0.01.3)P<0.001；下表同
表2各组血清HA、P111P、LN含量(高脂结合CC14复合因素法)及肝脏病理评分比较(x±s,n=10)
组别HA(nmol/L)PllIP(nmul/L)LN(nmol/L)
高脂高糖CC14复合
因素法大鼠模型(分)
高脂氧四环素复合
因素法大鼠模型(分)
高脂结合CC14复合
因素法小鼠模型(分)
对照组166.31±14.443)127.81±13.023)67.05±5.82?)0.2000±0.421643)0.3000±0,483053)0.3000±0.483053)模型组247.14±14.58177.67±i0.8087.45±17.3316.1000土3.66515 5.8000±1.1352918.5000±3.59784阳性组203.21±17.573)157.31±14.172)69.46±7.712)12.8000±2.097621} 4.6000±0.84327,}14.6000±3.68782!)高剂量组199.56±20.493)159.56±12.762)69.00士7.932)12.4000±3.06232!) 4.7000±0.67495°15.0000±2.82843,}中剂量组225.74±18.352)164.47±12.36°73.82±1O.58°13.4()00±1.34990° 4.9000±0.56765!)15.1000±3.10734°低剂量组241.39±15.96172.43±17.6376.47±9.3613.7600±1.94651 5.2000±0.4216415.8000±2.44040
3讨论肝降酶、缓解肝纤维化的作用。

张宁等⑶运用代谢养肝解郁颗粒是丹梔逍遥散加减而来,具有保组学方法探讨逍遥散对大鼠肝纤维化保护作用的机
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理.发现逍遥散具有改善肝功能、调节脂肪酸代谢、 促进氨基酸生成等多方面作用，可能是其治疗肝纤
维化的作用机制o 白芍总昔具有抗急性肝损伤、 NAFI.D 、慢性肝纤维化等多种保肝作用。

丹皮
酚能够缓解肝纤维化过遂.其作用机制可能与降低 氧化应激水平有关⑺。

茯苓皮水提取物对CCJ 诱 导的大鼠肝纤维化具有艮好的改善作用，其机制可
能与抑制机体脂质过氧化有关⑻。

梔子昔能够通
过显著抑制肝组织中转化生长因子(TGF)-pi 和«-
平滑肌肌动蛋白(SMA)的蛋白表达，改善肝纤维 化"
本实验结果提示养肝解郁颗粒具有降低血脂的
作用;能够显著缓解肝纤维化.模型大鼠、小鼠病理
形态可见模型组肝细胞发生气球样变性为主，肝细 胞胞质疏松.肝细胞明显的坏死和汇管区炎细胞浸
润,应用养肝解郁颗粒干预后,肝细胞气球样变的程 度减轻，肝细胞以疏松变性为主，少见肝细胞坏死,
少见炎细胞浸润，有效减轻肝损伤程度。

本实验部分结果无显著性差异，可能因本实验 总体治疗时间较短所致，其中HYP 、HA 差异性较为
显著,考虑该指标反应肝纤维化早期改变较为敏感,
综上，养肝解郁颗粒具有明确的保肝降酶作用，可在
一定程度上缓解肝纤维化程度。

4参考文献
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[2018-03-01 修回〕
(编辑王一涵)
微小RNA-29a 在肺动脉高压模型大鼠肺动脉血管壁组织中的表达及 对肺动脉高压大鼠的影响
高继勇'李福海2 (山东大学1临床医学院，山东济南250012；2齐鲁医院)
〔摘要〕目的探讨微小RNA(miRNA)-29a 在野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺动脉血管壁组织中的表达及对肺 动脉高压大鼠的影响方法选取36只健康大鼠作为研究对象，给予大鼠注射野百合碱，建立肺动脉高压大鼠模型，检测肺 动脉高压模型大鼠中miRNA-29a 的表达"根据不同建模要求进行大鼠造模，分析miRNA-29a 对肺动脉高压大鼠的影响。

结
果 四组miRNA-29a 表达差异较大，第一、二组与对照组比较差异有统计学意义(P<0. 05)；转染miRNA-29a-mimic 后1个月，
第：.组miRNA-29a 表达明显升高，与第一组比较差异有统计学意义(P<0. 05 ) ；miRNA-29a 高表达能够改善肺动脉压水平及肺 动脉血管壁厚度.组间比较差异有统计学意义(P<0. 05 )=结论野百合碱诱导大鼠肺动脉高压后miRNA-29a 表达明显降 低.而miRNA-29a 高表达对肺动脉组织的改善作用明显，阻滞肺组织细胞凋亡。

〔关键词〕miRNA-29a ；野百合碱;肺动脉高压
〔中图分类号〕R56 〔文献标识码〕A 〔文章编号)1005-9202(2019)07-1684Q3;doi ：10.3969/j. issn. 1005-9202.2019.07.051
患者的预后往往不理想，而药物治疗包括前列腺素
等,均能对内皮细胞的舒缩进行调节,能够一定程度
改善肺动脉高压持续升高，但远期患者的存活率相 对较低2)。

微小RNA(miRNA)由约23个核昔酸 单链RNA 分子组成，其主要作用为参与体内基因的
调控，对于细胞有调节作用。

miRNA 表现形式并不 统一，可以使多个miRNA 对相同基因产生调节作
肺动脉高压目前尚无特效疗法,经手术治疗后基金项目：山东省医药卫生科技发展计划项目(No. 2O13WSO22O)
通信作者:李福海(1969-),男•博士，副主任医师，主要从事肺动脉高
压研究。

第•作者：高继勇(1980-),男，在读硕士，主治医师，主要从事肺动脉
高压研究。