DNS测糖法

4、实验操作步骤：
（1）葡萄糖标准曲线的绘制：准确吸取0、0ห้องสมุดไป่ตู้2、0.4、0.8、1.2、1.6 mL
1mg/mL无水葡萄糖标准溶液分别置于6只25mL比色管中，并补水至2mL， 加2mL DNS溶液，摇匀。于沸水浴中加热5min，取出，冷却到室温，用水 稀释到25mL，在波长540nm，倒入1cm的玻璃比色皿中，以0号作空白， 测定吸光度，以葡萄糖的毫克数为横座标，吸光度为纵座标，绘制标准曲 线。所用试剂批号不同时应重作标准曲线。
根据糖分的还原性的测定法，叫做还原糖法。此法可用 来测定葡萄糖、果糖、麦芽糖和乳糖等还原糖。蔗糖和淀粉 等许多碳水化合物，须经过水解后再用还原糖法测定。 主要的还原糖测定方法有:
兰-埃农法：将样品滴加到一定量、沸腾着的费林试液中，用甲基兰为指 示剂，滴到它恰好褪色。
姆松-华尔格法：将样品试液与过量的费林试液反应，过滤取得生物Cu2O后 ，用直接称量法测知Cu2O的重量，然后在检索表中查到相当的糖含量 。
仪器：分光光度计、离心机摇床等。 试剂：无水葡萄糖标准溶液1mg/mL：称取于105℃烘 至恒重的无水葡萄糖0.1g，精确到0.0002g，加少量水 溶解，移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀；
DNS试剂：甲液：溶解6.9g重蒸酚于15.2ml 100g/L 的NaOH溶液中，并稀释到70mL，在此溶液中加入 6.9g亚硫酸钠。乙液：称取255g酒石酸钾钠，加到 300mL NaOH溶液中，再加入880mL 10g/L 3，5-二 硝基水杨酸溶液，将甲液与乙液相混合即得黄色试 剂，储存于棕色瓶中，室温下放置7天后使用。
缩合反应法：单糖与强酸加热产生糠醛或糠醛衍生物，然后通过显色剂缩 合成有色络合物，再进行比色定量（包括酚硫酸法、蒽酮法等）。
另外还有碘量，本实验主要DNS法，采用可见吸光光度法测定。
DNS法测定的原理
3，5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的
氨基化合物，用比色法测定。
3、. 实验仪器和材料
（2）样品的测定：
样品的预处理：发酵液要经过离心沉淀后除去悬浮杂质，如有别的蛋白， 多糖等干扰，可用淳沉法除去；
取1mL样品溶液，置于25mL比色管中，并补水至2ml，加入2ml DNS 溶液， 摇匀，于沸水浴中加热5min，取出，冷却到室温，用水稀释到25mL，在波长 540nm，倒入1cm的玻璃比色皿中，以0号作空白，测定吸光度。
分光光度法测 定发酵液中还
原糖含量
实验指导
一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器材料 四、实验操作步骤 五、实验结果 六、实验思考题
1、实验目的
1、理解可见分光光度法测定还原糖的目的和意义；
2、掌握可见分光光度法测定还原糖的原理和方法；
3、掌握几种型号的紫外、可见分光光度计的操作方 法。
2、实验原理
实验注意事项
• 1、仪器的预热和使用； • 2、样品的称量； • 3、食品样品的预处理； • 4、参比溶液的选择； • 5、标准曲线的精度。
5、实验结果和计算
• 1、要求标准曲线要准确，其中R2要在0.99以上。 • 2、要求被测样品的点要落在标准曲线上。 • 3、计算 • 还原糖含量（%）=M*50*1/1000*1/m*100 • 式中 M-由样品液吸光度从葡萄糖标准曲线查得葡萄糖
质量（mg）； • 50-样品液的总体积（mL）； • 1000-mg换算成g； • M-称取试样质量（g）。