甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠血清CA125、CEA及VEGF表达的影响研究

甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠血清CA125、CEA及VEGF
表达的影响研究
梁敏;王强
【摘要】Objective To study the effect of of osimertinibmesylate on the expression of serum CA 125, CEA and VEGF in NSCLC mice .Methods The SCID mice were randomly divided into 4 groups: the normal group , the model group, and the low and high dose experimental group (imatinib mesylate Oce 0.5, 1.5mg, Kg-1), 30 rats in each group .The human non-small cell lung cancer H 460 SM cells ( EGFR-TKIs resistant ) were inoculated in the model group and the low dose experimental group SCID mice left the lung .After 21 days, the low and high dose groups were injected intraperitoneally .The normal group and the model group were given the same dose of distilled water , and the venous blood of the mice was taken 7 days after the administration .CA125 and CEA were determined by electrochemiluminescence assay , and VEGF was detected by ELISA .Results After administration , the levels of serum CA125, CEA and VEGF were respectively (5.60 ±0.01)U/mL, (2.89 ±1.38)ng/mL, (1.85 ±3.98) pg/mL in the normal group, (7.78 ±0.56) U/mL, (26.79 ±5.56) ng/mL, and (42.05 ±5.56)pg/mL in the model group, (7.35 ±0.53) U· mL, (12.78 ±5.53) ng/mL and (15.35 ±6.53) pg/mL in the low dose experimental group, and (5.86 ±0.75) U/mL, (5.86 ±2.75) ng/mL and (7.86 ±3.75) pg/mL in the high dose experimental group.The levels of serum CA125, CEA and VEGF were lower in the normal group than in the rest three groups (P<0.05 ) ,
followed by the model group , the high dose group and the low dose group ( P<0.05 ) .The average surviv-al time of the model group , the low dose experimental group and the high dose experimental group were ( 31.01 ± 2.91) d, (35.05 ±3.73) d, and (44.72 ±2.95) d respectively, which was the longest in the normal group was the longest , followed by the high dose group , the low-dose group and the model group
( P<0.05 ) .Conclusion Osimer-tinibmesylate can reduce the fractional serum levels of CA 125, CEA and VEGF.It has good application value , so as to improve the effect of NSCLC treatment .%目的研究甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠血清CA125、CEA及VEGF表达及生存时间的影响.方法将SCID小鼠随机分为4组:正常组、模型组及低高2个剂量实验组(甲磺酸奥西替尼
0.5,1.5mg·Kg-1),每组30只,将人非小细胞肺癌H460 SM细胞(EGFR-TKIs耐药)接种于模型组及低高剂量实验组SCID小鼠左肺内.饲养21天后,低高剂量实验组腹腔注射给药;正常组及模型组给予注射同等剂量蒸馏水,给药后第7天,取小鼠静脉血.采用电化学发光分析法测定CA125、CEA;采用ELISA检测法测定VEGF;并观察期生存时间.结果给药后,正常组小鼠血清CA125、CEA、VEGF分别为
(5.60±0.01)U/mL、(2.89±1.38)ng/mL、(1.85±3.98)pg/mL,模型组大鼠血清CA125、CEA、VEGF分别为(7.78±0.56)U/mL、(26.79±5.56)ng/mL、(42.05±5.56)pg/mL,低剂量实验组大鼠血清CA125、CEA、VEGF分别为
(7.35±0.53)U/mL、(12.78±5.53)ng/mL、(15.35±6.53)pg/mL,高剂量实验组大鼠血清CA125、CEA、VEGF分别为(5.86±0.75)U/mL、(5.86±2.75)ng/mL、(7.86±3.75)pg/mL.正常组小鼠血清CA125、CEA、VEGF均低于其他组(P<0.05),而模型组大鼠血清CA125、CEA、VEGF显著高于其他组(P<0.05),高剂量实验组CA125、CEA、VEGF指标显著低于低剂量实验组(P<0.05).模型组、低剂量实验
组、高剂量实验组小鼠的平均生存时间分别为(31.01±2.91)d、(35.05±3.73)d、(44.72±2.95)d,正常组小鼠的平均生存时间最长,低剂量实验组小鼠的平均生存时间明显高于模型组(P<0.05),低于高剂量实验组(P<0.05).结论甲磺酸奥西替尼能够降低小鼠血清CA125、CEA、VEGF水平,具有良好的应用价值,以期应用于临床提高NSCLC治疗效果.
【期刊名称】《临床肺科杂志》
【年(卷),期】2018(023)002
【总页数】4页(P284-287)
【关键词】甲磺酸奥西替尼;糖类抗原125(CA125);癌胚抗原(CEA);血管内皮生长因子(VEGF)
【作者】梁敏;王强
【作者单位】637000 四川南充,川北医学院附属医院胸心外科;637000 四川南充,川北医学院附属医院检验科
【正文语种】中文
甲磺酸奥希替尼是一种激酶抑制剂，当测试被检测到有T790M突变-阳性非小细胞肺癌(NSCLC)，或用EGFR TKI治疗或后已进展患者的治疗，是目前唯一的治疗EGFR T790M突变阳性转移性的NSCLC的药物[1-2]。

本实验通过将人NSCLC H460SM细胞(EGFR-TKIs 耐药)接种于SCID小鼠左肺内，来构建NSCLC小鼠模型，观察血CA125、CEA及VEGF表达情况来了解甲磺酸奥西替尼在NSCLC中的应用，为临床应用做好铺垫。

材料与方法
一、材料
1 动物
SCID小鼠，SPF级，货号：J009，购自于南京君科生物工程有限公司；人NSCLC H460SM细胞(EGFR-TKIs 耐药)，购自于河北医科大学实验室。

2 药品与试剂
甲磺酸奥西替尼(规格：40 mg每片，AstraZenecaAB)；CEA检测试剂盒(天津九鼎医学生物工程有限公司，批号RC601)；CA125检测试剂盒(格诺思博生物科技有限公司)；VEGF检测试剂盒(北京方程生物科技有限公司)。

3 仪器
Bayer全自动化学发光免疫分析仪；美国Bio-Rad公司生产的全自动酶标仪二、分组及给药
将SCID小鼠随机分为4组：正常组、模型组及低高2个剂量实验组(甲磺酸奥西替尼0.5， 1.5 mg/Kg)，每组30只，将人NSCLC H460SM细胞(EGFR-TKIs 耐药)接种于模型组及低高剂量实验组SCID小鼠左肺内。

饲养21天后，低高剂量实验组腹腔注射给药；正常组及模型组给予注射同等剂量蒸馏水。

三、模型制备[3]
将人NSCLC H460SM细胞(EGFR-TKIs 耐药)接种于模型组及低高剂量实验组SCID小鼠左肺内。

正常组只穿刺不接种。

四、检测指标[4]
1 CA125的测定：
采用电化学发光分析法，通过采取小鼠静脉血进行分析，操作步骤均按照试剂盒说明书严格执行。

使用仪器为Bayer全自动化学发光免疫分析仪。

试剂盒购自于上海罗氏公司。

2 CEA的测定：
采用电化学发光分析法，通过采取小鼠静脉血进行分析，CEA的测定严格按照试剂盒说明书操作步骤进行。

使用仪器为Bayer全自动化学发光免疫分析仪测定。

试剂盒购自于上海研卉生物科技有限公司。

3 VEGF的测定：
采用ELISA检测法，抽取小鼠静脉血进行酶联免疫吸附测定，按照试剂盒说明书的操作步骤执行，对小鼠血中VEGF的含量进行检测。

使用仪器为美国自然基因有限公司生产的CELLTRACKS分析仪Ⅱ®和美国Bio-Rad公司生产的全自动酶标仪。

试剂盒购自于上海罗氏公司。

五、统计学方法
采用SPSS19.0统计学软件进行统计学分析，计量资料用(±s)表示，组间差异、组内差异采用P值检验，计数资料比较采用X2值检验，P<0.05时为差异有统计学意义。

结果
一、甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠血清CA125的影响
给药后，正常组小鼠血清CA125含量为(5.60±0.01)U/mL，模型组小鼠血清CA125含量为(7.78±0.56)U/mL，低高剂量实验组小鼠血清CA125含量分别为(7.35±0.53)U/mL，(5.86±0.75)U/mL。

正常组小鼠血清CA125含量均低于其他组(P<0.05)，而模型组大鼠血清CA125显著高于其他组(P<0.05)，高剂量实验组CA125指标显著低于低剂量实验组(P<0.05)。

(见表1)。

表1 各组小鼠血清CA125含量比较(U/mL)组别n给药前给药后正常组305．60±0．025．60±0．01模型组307．96±0．777．78±0．56∗低剂量实验组307．86±0．737．35±0．53∗#高剂量实验组
307．90±0．955．86±0．75∗#△
Note: compared with normal group，*P<0.05；Compared with modeling group，#P<0.05；Compared with low-dose experimental group，△P<0.05二、甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠血清CEA的影响
给药后，正常组小鼠血清CEA含量为(2.89±1.38)n g/mL，模型组小鼠血清CEA 含量为(26.79±5.56)ng/mL，低高剂量实验组小鼠血清CEA含量分别为(12.78±5.53)ng/mL，(5.86±2.75)ng/mL。

正常组小鼠血清CEA含量均低于其他组(P<0.05)，而模型组大鼠血清CEA显著高于其他组(P<0.05)，高剂量实验组CEA指标显著低于低剂量实验组(P<0.05)。

(见表2)。

图1 各组小鼠血清CA125含量均值比较(U/mL)表2 各组小鼠血清CEA含量比较(ng/mL)
组别n给药前给药后正常组302．91±1．412．89±1．38模型组
3024．86±5．6726．79±5．56∗低剂量实验组
3024．77±4．7312．78±5．53∗#高剂量实验组
3024．91±3．955．86±2．75∗#△
Note: compared with normal group，*P<0.05；Compared with modeling group，#P<0.05；Compared with low-dose experimental group，△P<0.05图2 各组小鼠血清CEA含量均值比较(ng/mL)
三、甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠血清VEGF的影响
给药后，正常组小鼠血清VEGF含量为(1.85±3.98)pg/mL，模型组小鼠血清VEGF含量为(42.05±5.56)pg/mL，低高剂量实验组小鼠血清VEGF含量分别为(15.35±6.53)pg/mL，(7.86±3.75)pg/mL。

正常组小鼠血清VEGF含量均低于其他组(P<0.05)，而模型组大鼠血清VEGF显著高于其他组(P<0.05)，高剂量实验组VEGF指标显著低于低剂量实验组(P<0.05)。

(见表3)。

表3 各组小鼠血清VEGF含量比较(pg/mL)组别n给药前给药后正常组
301．87±3．521．85±3．98模型组3041．94±8．2742．05±5．56∗低剂量实验组3042．05±7．7315．35±6．53∗#高剂量实验组
3041．92±7．957．86±3．75∗#△
Note: compared with normal group，*P<0.05；Compared with modeling group，#P<0.05；Compared with low-dose experimental group，△P<0.05图3 各组小鼠血清VEGF含量均值比较(ng/mL)
四、甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠生存时间的影响
模型组最早出现死亡小鼠且全部死亡，与模型组对比，低剂量实验组和高剂量实验组小鼠的平均生存时间都明显延长，差异显著，具有统计学意义(P<0.05)；高剂
量实验组小鼠的平均生存时间也明显长于低剂量实验组，差异显著(P<0.05)。

(见
表4)。

表4 各组小鼠血清生存时间比较(天)组别n平均生存时间正常组30-模型组3031．01±2．91低剂量实验组3035．05±3．73高剂量实验组
3044．72±2．95
Note: compared with normal group，*P<0.05；Compared with modeling group，#P<0.05；Compared with low-dose experimental group，△P<0.05讨论
非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌的80%，约75%的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低[5-6]。

其包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。

引起NSCLC的主要原因有吸烟，职业、环境接触，电离辐射，既往肺部慢性感染，遗传等因素，大气污染等[7]。

甲
磺酸奥西替尼为最新一代的靶向药物，其为一种激酶抑制剂，主要作用于转移表皮生长因子受体(EGFR)，临床上可用于易瑞沙、特罗凯耐药患者。

有研究显示[9]，
甲磺酸奥西替尼治疗NSCLC取得了较好疗效，延长了患者的生存期，并且提高了
患者的生活质量。

甲磺酸奥西替尼已在国外上市，国内的研究尚在进一步论证当中，目前暂未上市，为进一步为临床研究提供依据，验证其应用疗效，我院将其应用于NSCLC小鼠模型，以期研究为临床提供有效依据。

随着近年来医学检验技术的发展，我们发现了MUC16基因表达产物CA125。

CA125是由胎儿组织体腔上皮衍生，并在胸膜、腹膜、支气管上皮等细胞中正常
表达。

正常情况下，CA125不会进入血液循环，但当机体出现恶性肿瘤或转移时，CA125会随血液循环进入血液，并随病情进展不断升高[8]。

在临床上，CA125
可作为评判NSCLC患者病程的指标之一癌胚抗原(CEA)是在胚胎时胃肠道、肝、
胰腺合成的一种蛋白质。

在胃肠道中也有少量合成，但不进入血液系统而是通过胃肠道排出，因此，在正常血清中只有微量的癌胚抗原[10]。

在机体出现肿瘤时，血清中的癌胚抗原会明显升高。

血管内皮生长因子(VEGF)早期亦称作血管通透因子，是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子，可在体内诱导血管新生[11]。

1990年，美国哈佛大学Folkman博士提出著名的Folkman理论，即肿瘤组织生长，
必须依靠新生血管生成来提供足够的氧气和营养物质来维持。

所以，观察血清中VEGF含量，也能反映肿瘤组织的发生发展进程。

本实验研究发现，甲磺酸奥西替尼能够降低小鼠血清CA125、CEA、VEGF水平，延长了NSCLC小鼠的生存时间，显示了甲磺酸奥西替尼治疗小鼠NSCLC具有良好疗效，能够提高NSCLC的治疗
疗效，分析原因可能与以下有关：甲磺酸奥西替尼能够抑制肿瘤细胞生长或转移，特异性的杀灭肿瘤细胞，可能与其能够抑制VEGF表达或抑制EGFR T790M突变阳性有关。

通过研究甲磺酸奥西替尼对NSCLC小鼠血清CA125、CEA及VEGF
表达的影响，从很多方面得知，甲磺酸奥西替尼降低小鼠血清CA125、CEA、VEGF水平，提高生存时间，可能与抑制EGFR T790M突变阳性或癌细胞扩散有关。

通常动物实验的肿瘤治疗效果描述最直接的方法是处死动物后，取其肿瘤组织进行
称重，但由于实验设计原因，所以未能对肿瘤组织进行称重来评价其治疗效果。

虽然未能将小鼠肿瘤组织取出，对其称重评价治疗效果，但本实验观察了小鼠的生存时间及相关肿瘤标志物，也从一定程度上反映了甲磺酸奥西替尼治疗NSCLC小鼠的疗效，也为临床对NSCLC的治疗以及疾病预后提供理论依据。

综上所述，甲磺酸奥西替尼能够降低小鼠血清CA125、CEA、VEGF水平，延长小鼠生存时间，具有良好的应用价值，以期应用于临床提高NSCLC治疗效果。

参考文献
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