HPLC-MS-2

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高效液相色谱质谱联用-HPLC-MS-实验-含思考题

高效液相色谱质谱联用-HPLC-MS-实验-含思考题液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索一、实验目的1、了解LC-MS的主要构造和基本原理；2、学习LC-MS的基本操作方法；3、掌握LC-MS的六种操作模式的特点及应用。

二、实验原理1、液质基本原理及模式介绍液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。

但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。

LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。

现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS 已经成为最重要研究方法之一。

质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。

（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。

实例：（Q1 = 100-259m/z）（二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。

主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。

实例：（Q1 = 259m/z）本实验采用三重四极杆质谱仪（Q1：质量分析器；Q2：碰撞活化室；Q3：质量分析器），由于多了Q2、Q3的存在，在分析测试的模式上又多了四种选择：（三）子离子扫描模式（Product Scan）：第一个质量分析器固定扫描电压，选择某一质量离子（母离子）进入碰撞室，发生碰撞解离产生碎片离子，第二个质量分析器进行全扫描，得到的所有碎片离子都是由选定的母离子产生的子离子，没有其它的干扰。

UPLC_MSMS和HPLC_MSMS操作规程

AB SCIEX TRIPLE QUAD TM5500的PPG质量准确度校准操作规程一、前期准备1、PPG稀释溶液的准备，对于5500系列采用的标准溶液：正离子模式：POS PPG 2E-7M；负离子模式：NEG PPG 3E-5M2、离子源的垂直旋钮调至“5”位。

3、用质谱仪上的针泵式进样针吸取适量的PPG校准液，检查管路是否连接好。

二、操作步骤1、双击“Hardware Configuration”，激活“MS Only”。

2、菜单栏切换到“Installation”项目。

3、双击“Manual Turning”，打开手动调谐界面。

4、点击“Open File”，选择相对应的采样方法（Q1 Pos PPGs .dam；Q3 Pos PPGs .dam；Q1 Neg PPGs.dam；Q3 Neg PPGs.dam），先正离子再负离子，先Q1调谐再Q3调谐，扫描速率依次为10、200、1000、2000Da/s，对应MCA分别为10、50、50、100 。

5、点击“Start Syringe Pump”，再点击“Start”开始采集数据。

6、将会在界面上出现采集到的质谱图，右键点击右侧质谱图区域，选择“Open Date”。

7、点击工具栏中的“Calibration From Spectrum”。

8、在弹出的菜单中选择合适的校验标准，在“Standard”中选择对应的校准溶液，点击“Start”开始校准前的计算。

9、第一个图形代表的是此次校准与理论值的质量偏差，各点应位于“±0.1Da”线内。

若某质量点超出了设定的范围，则应点击“Update Mass Calibration”，更新那些偏离的质量点的电场参数，使之落到“±0.1Da”线内。

10、第二个图形代表的是PPG校准峰的半峰高宽度，各点应位于“0.6~0.8”范围内。

若某点质谱峰半峰宽超出标准范围，点击界面上的“Advanced”按钮，调节对应的“Offset”电压，使之合规。

质谱MS-2

6价，28Si为4价等)。奇数质量的元素具有奇数化合价
(如1H、35C1、79Br为1价，31P为3价、5价等)。只有N 反常，质量数是偶数(14)，而化合价是奇数(3价、5价)。由此得出以下规律，称之氮律。 “在有机化合物中，不含氮或含偶数氮的化合物，分
子量一定为偶数(分子离子的质荷比为偶数)，含奇数
38
Question
下列离子源中，哪一种容易产生多电荷离子？
a. EI b. ESI c. FAB
39
Question
多电荷离子可以扩大质谱仪的…
a. 分辨率 b. 灵敏度 c. 分子量测定范围
40
Question
下列哪一种质量分析器的质量范围最广？
a. 四级杆质量分析器 b. 离子阱质量分析器 c. 飞行时间质量分析器
3
质谱中的离子
4
分子离子
分子失去一个电子而得到的离子称为分子离子（molecular ion），表示为M+.。分子离子是质谱中所有离子的起源，它在质谱图中所对应的峰为分子离子峰。有机分子中，最容易失去电子的是杂原子上的孤对电子，其次是电子，再者是电子。所以，对于含O，N， S等杂原子的化合物，总是先在杂原子的孤对电子上失去一个电子，形成分子离子，如
13
♦
分子离子峰的识别
质谱法确定有机化合物相对分子质量的依据是分子离
子峰的m/z值。除同位素峰以外，分子离子峰应该出现在质谱图的最高质量处。化合物分子离子峰的识别，一般可遵循以下几个原则：
（1）分子离子的质量数服从氮律。
14
氮律
组成有机化合物的大多数元素，偶数质量的元素具有偶数化合价(如12C为4价，16O为2价，32S为2价、4价或

UHPLC-MS法测定黄芪降压方中两种活性成分

海峡药学２０１８年第３０卷第３期
分析，色谱柱为ＡｇｉｌｅｎｔＳＢＣｌ８（２．１ｘ１００ｍｍ，２．７ｍ）柱，流动相采用乙腈一去离子水（６０：４０，ｖ／ｖ），测定黄芪甲苷和柚皮苷，采用ＥＳＩ离子源，检测离子对分别为８２９／７８３和５７９／２７１。结果制备的１０批黄芪降压方中，黄芪甲苷的平均含量为０．１３８２ｍｇ·ｍＬ～，柚皮苷平均含量为０．３３８６ｍｇ ·ｍＬ＿。。结论该方法快速、灵敏、准确，适宜用于对黄芪降压方进行活性导向的多指标质量控制。关键词：黄芪降压方；活性成分；Ｌｃ．Ｍｓ中图分类号：Ｒ９２７文献标识码：Ａ文章编号：１００６－３７６５（２０１８）－０３－１２１６８－００２３－０４
参考文献
［１］国家药典委员会编．中国药典［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，
２０１５版，四部，通则，１１４３．
［２］国家药典委员会编．中国药典［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，
２０１５版，三部，１７８．［３］杨晨曦．细菌内毒素试验凝胶定性法与动态浊度定量法的比较
３讨论
［Ｊ］．临床血液学杂
．
ＵＨＰＬＣ－ＭＳ法测定黄芪降压方中两种活性成分
梁妙莲，谭梅英，詹利之。（１．广东省佛山市中医院三水医院佛山５２８１００；２．广东省第二中医院（广东省中医药工程技术研究院）广州５１００９５；３．广州中医药大学热带医学研究所广州５１０４０５）
证疫苗的质量。与凝胶法相比，动态浊度法从技术上可最大

HPLC-MS-MS中如何提高灵敏度介绍

梯度洗脱问题－－梯度延迟100 80 60 40 20 021三、HPLC条件的优化IV• 柱温对色谱行为的影响 • 依那普利H3C O OHOOCCH3 NN H O COOH22特殊问题疏水崩塌H O H H O H H O HH O H H O HH O HH O HH O HH O HH O H H O HH O HH H O H O HHO23四、质谱条件的优化I• HPLC－MS分析的灵敏度之所以比UV 高就在于质谱的灵敏度很高，而且选择性很好，尤其是MRM方式在生物样品分析中能有效的排除杂质的干扰。

甚至于可以不处理生物样品直接进行分析。

24四、质谱条件的优化II• MS条件的优化主要目的是尽量提高待测物的质谱响应信号。

主要参数有ESI 喷雾电压、APCI的电流、 DP值、碰撞能量，雾化气辅助气的流速，离子源的温度。

• 另外还有质谱的分辨率也会影响信号强度25四、质谱条件的优化II• 质谱的分辨率影响信号强度500 peak height709.5 230.3 490.4 1300.4709.5 710.5 711.5300100 0 0 500 1000 m/z 1500 2000709.5H 0.7amu26½H数据采集速度27数据采集速度28质谱扫描时间的影响500 400 peak height 300 200 100 0 0 2 4 6 8 10 12 time (min) 14 16 18 2029如何提高灵敏度—总结HPLC条件的优化9色谱柱选择 9流动相的选择 ¾流速的影响 ¾洗脱方式 9柱温 9疏水崩塌MS条件的优化9质谱参数优化 9DP CE Gas 9分辨率调整 9采集速度等30。

HPLC-MS法测定药品含量的不确定度评定

世界最新医学信息文摘2019年第19卷第48期 153投稿邮箱：sjzxyx88@HPLC-MS 法测定药品含量的不确定度评定郑文吉（兴安盟食品药品检验检测中心，内蒙古乌兰浩特）摘要：HPLC-MS 法是目前药品检验中测定药品含量的重要方式，其具有十分广泛的应用，但是在实践中发现，该测定法的测定结果并不是完全准确，其仍旧受到多种因素的影响，因此必须对其不确定度进行评定，以保证其检测的准确性，本文就对HPLC-MS 法测定药品含量的不确定度的评定方法进行探讨和分析，希望能够为相关人员提供帮助。

关键词：HPLC-MS 法；药品含量；不确定度中图分类号：R927.2 文献标识码：B DOI: 10.19613/ki.1671-3141.2019.48.101本文引用格式：郑文吉.HPLC-MS 法测定药品含量的不确定度评定[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(48):153.0 引言液质联用法（HPLC-MS）是药品检验中一种较为有效的分析方法，在该分析法中不需要在进行分析前进行较为繁琐的前处理，并且能够在分析后得到化合物的质核比等诸多信息，在检验中具有高效、快捷以及灵敏的优势，在含量较少且无紫外吸收的化合物分析中具有较好的效果，因此其目前已经作为药物定性定量分析中的标准检测方法在检验中使用。

但是在实践中我们了解到，由于检测方法、仪器等多方面因素的影响，一般情况测定得到的数据往往并非真值，为了保证检测的准确性，使得检查数据具有价值，我们还需要进行不确定度的测定，通过对不确定度进行计算来进一步了解被测定值所应当处于的范围，为药品检验提供了较为有效的数据支持[1]。

而为了保证HPLC-MS 的有效性，我们必须对其测定药品含量的不确定度进行评定。

1 HPLC-MS 法测定中不确定度的来源检验中导致HPLC-MS 法测定出现不确定度的因素较多，包括被测样品以及测定仪器等，而结合实际的测定过程，大致可以将其不确定度出现的来源归纳到以下几个方面：①进行药品称样时，天平以及取样的随机性而出现的随机误差导致不确定度出现；②标准拟合曲线（样品浓度校准）存在的不确定度导致；③使用容量瓶进行定容读取时体积引入出现的误差而导致的不确定度；④样品测定中提取、浓缩以及转移中所出现的误差；⑤标准物质所存在的；⑥标准溶液的配制过程；⑦仪器自身的重复性以及精密度；⑧仪器校准以及测定过程中由于操作的因素；⑨测定方法的不确定性[2]，详情可见图1。

HPLC_MS_MS法鉴别中药制剂中非法添加的多种解热镇痛类化学药物

72 4
* 通讯作
中南药学 2010 年 10 月第 8 卷第 10 期 C ent ral Sout h Ph armacy. O ct ober 2010, V ol 8 N o 10
ionit ion mode was ESI+ and ESI- . T he mode was mass scan and daug hter scan. We compared the r etention time and spectra o f references in t he librar y set up by ourselv es, and the tar get co mpo unds in the sample w ere screened and i dent ified. Results P redniso ne acetat e and tr iamcino lo ne acetonide acetate w ere detected in 4 samples. Conclusion T he met ho d is accutate, sensitiv e and applicable to identify pr oprietary Chinese medicine and healt hy food. Key words: HP LC M S/ M S; pro pr ietary Chinese medicines; healthy foo d; aspirin; paracetamo l; piro x icam; napro x en; melo xicam; fenbufen; diclofenac so dium; indometacin; ibupro fen; r otundine hydro chlor ide

HPLC-MS法测定盐酸二甲双胍片中毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）的含量

HPLC-MS法测定盐酸二甲双胍片中毒性杂质 N-亚硝基二甲胺（ NDMA）的含量重庆国舒制药有限公司重庆 401338重庆国泰康宁制药有限责任公司重庆 401520摘要：目的建立HPLC-MS法检测盐酸二甲双胍片中毒性杂质N-亚硝基二甲胺的含测定方法。

方法以ACE EXCEL3 C18-AR 4.6mm×100mm，3.0μm为色谱柱，流动相为流动相A：0.1%甲酸溶液流动相B：0.1%甲酸甲醇溶液，柱温40℃，检测波长258nm，流速为0.55ml/min，采用APCI+:MRM扫描模式，定量离子对75.0→43.0 m/z。

结果：该方专属性强，NDMA在0.985ng/ml～98.5ng/ml范围内浓度与峰面积呈良好线性，线性方程为y =8×104 x–1.88×104，相关系数r为0.9999，该方法的回收率在98.58%～101.45%之间，9份溶液平均回收率为99.9%，RSD为0.9%，准确度良好。

结论：该HPLC-MS法能准确检出盐酸二甲双胍片中毒性杂质N-亚硝基二甲胺的含量。

关键词：HPLC-MS法；盐酸二甲双胍片；N-亚硝基二甲胺；含量盐酸二甲双胍片在临床上主要用于单纯饮食控制不满意的II型糖尿病病人，尤其是肥胖和伴高胰岛素血症者，用本药不但有降血糖作用，还可能有减轻体重和高胰岛素血症的效果[1]。

国外报道盐酸二甲双胍片中检出NDMA杂质。

目前所知，NDMA杂质可能通过亚硝化机理生成。

即在一定条件下，胺类化合物尤其是仲胺，）或其他亚硝化试剂反应产生亚硝胺类杂质。

盐酸二甲双胍片与亚硝酸钠（NaNO2中NDMA来源分析：（1）原料引入：盐酸二甲双胍合成起始物料分别是二甲胺和双氰胺，原料药二甲胺本身均含有仲胺结果，但整个合成工艺中均未使用或添加）或其他亚硝化试剂（亚硝酰卤化物、亚硝酸酯、三氧化二氮和亚硝酸钠（NaNO2四氧化二氮），也未使用或添加酰胺类溶剂（如N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮等），所以引入亚硝胺类杂质的风险很低。

HPLC-MS

分析检测HPLC-MS/MS测定食糖中4种合成着色剂陈　艳，张　丽，冉艳瑞，黄　立，万　静，马艳红（昆明市食品药品检验所，云南昆明 650000）摘　要：目的：建立高效液相色谱-串联质谱法（High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）测定食糖中4种着色剂的分析方法。

方法：样品经80%甲醇超声提取，再用PWA-2固相萃取柱净化后，经VP-ODS C18柱（2.0 mm×150 mm，5.0 μm）分离，以乙酸铵和甲醇为流动相，梯度洗脱，用HPLC-MS/MS检测。

结果：4种化合物在考察范围内线性良好，相关系数均大于0.999；加标回收率在85.36%～102.30%，RSD为0.42%～2.72%；检出限为2～5 μg·kg-1。

结论：该方法灵敏度高、分辨率高、分析速度快，适用于食糖中合成着色剂的快速筛查和定量分析。

关键词：食糖；高效液相色谱-串联质谱法；合成着色剂；快速测定Determination of 4 Synthetic Colorants in Sugar by HPLC-MS/MS CHEN Yan, ZHANG Li, RAN Yanrui, HUANG Li, WAN Jing, MA Yanhong(Kunming Food and Drug Inspection Institute, Kunming 650000, China) Abstract: Objective: To establish an analytical method for the determination of four colorants in sugar using high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Method: The sample was ultrasonically extracted with 80% methanol, purified with a PWA-2 solid phase extraction column, and then separated on a VP-ODS C18 column (2.0 mm×150 mm, 5.0 μm) with a gradient elution using ammonium acetate and methanol as the mobile phases, and detected by HPLC-MS/MS. Result: The four compounds had good linearity within the investigation range, and the correlation coefficients were all greater than 0.999; the standard recovery rate was 85.36%～102.30%, and the RSD was 0.42%～2.72%; the detection limit was 2～5 μg·kg-1. Conclusion: This method has the characteristics of high sensitivity, resolution and fast analysis speed, and is suitable for rapid screening and quantitative analysis of synthetic colorants in sugar.Keywords: sugar; high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; synthetic colorant; rapid determination.食糖作为人们日常生活中的必需品，其安全问题备受关注。

HPLC—MS同时测定小鼠血浆中青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯的含量

HPLC—MS同时测定小鼠血浆中青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯的含量青蒿素是一种常用的抗疟药，但青蒿中其他组分的药效作用很少被考察。

研究发现，当青蒿中的青蒿乙素、青蒿酸、东莨菪内酯3种组分与青蒿素按照质量比为1∶1∶1∶1的比例在小鼠体内考察药效时，与等剂量青蒿素单用组相比可以起到显著的抗疟增效作用。

建立血浆中同时检测青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯4种组分含量的HPLC-MS方法，有助于这种增效现象在药动学层面研究的进一步开展。

采用Agilent公司1200-6130液质联用系统，电喷雾电离源，正离子和负离子检测方式，SIM模式；色谱分离采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（2.1 mm×150 mm，5 μm），流动相乙腈-0.5%乙酸水溶液（60∶40），流速0.3 mL·min-1 ，柱温为40.0 ℃，进样量5 μL。

结果显示，4组分血浆浓度在5～3 000 μg·L-1 呈现良好线性关系，方法专属性、准确度、精密度良好，无基质效应。

该方法适用于小鼠血浆中青蒿素、青蒿乙素、青蒿酸和东莨菪内酯的含量测定，可用于开展4组分小鼠体内药物动力学研究。

标签：青蒿素；青蒿乙素；青蒿酸；东莨菪内酯；液质联用世界卫生组织为了延缓疟原虫青蒿素类药物抗药性的产生，自2001年开始推荐使用基于青蒿素类抗疟药的联合治疗方案（artemisinin-based combination therapies，ACTs）。

ACTs目前在全球疟疾治疗中发挥着重要作用[1-2]。

为了更好利用我国的青蒿资源以及发展新型天然ACTs组合药物，我国学者开展了青蒿多组分配伍抗疟研究。

纪晓光等发现以青蒿素、青蒿酸、青蒿乙素和东莨菪内酯1∶1∶1∶1的比例配伍后，青蒿素用量仅为原剂量的1/4，抗疟药效与青蒿素单用组相当[3-4]。

为了进一步明确4组分配伍增效的机制，需要进一步开展药物相互作用研究。

2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷液相检测方法

2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷是一种重要的有机化合物，在化工生产和科研领域具有广泛的应用。

为了准确分析和检测其中的含量，科学家们提出了许多液相检测方法。

本文将就2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷液相检测方法进行深入研究和探讨。

1.方法一：气相色谱-质谱联用法（GC-MS）气相色谱-质谱联用法是目前分析化学领域中一种常用的分析方法，它将气相色谱技术和质谱技术相结合，能够高效地分离和鉴定化合物。

在检测2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷时，首先需要通过气相色谱将混合物中的化合物分离开来，然后再将各个化合物通过质谱进行鉴定和定量。

GC-MS法具有高灵敏度、高分辨率和高选择性的优点，能够对2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷进行准确可靠的检测。

2.方法二：高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是另一种常用的液相分析方法，它具有分离效果好、分析速度快、对待测物质适应性强等优点。

在检测2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷时，可以选择不同的固定相、流动相和检测条件，以实现对化合物的分离和检测。

HPLC法在分析化学领域中应用广泛，对于检测2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷也具有一定的优势。

3.方法三：毛细管电泳法（CE）毛细管电泳法是一种基于电动力学原理的分析方法，它能够高效地分离离子和中性溶质，对待测物质的种类、结构和物理化学性质要求较低。

在检测2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷时，毛细管电泳法能够通过微小的管道和高电场强度实现对化合物的快速分离和检测，具有潜在的应用前景。

总结：从以上分析可得出，针对2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷的液相检测方法有气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、高效液相色谱法（HPLC）和毛细管电泳法（CE）三种。

每种方法均有其独特的优势和适用范围，可以根据具体的实验要求和待测化合物的性质选择合适的检测方法。

希望未来在2,3-二甲基-2,3-二苯基丁烷检测方法的研究中，能够继续完善和发展更加高效、快速、准确的分析技术，推动相关领域的科学研究和应用发展。

HPLC_MS监测麦冬皂苷代谢产物薯蓣皂苷元体内过程研究

( 1. S hanghi U niversity of TCM , S hangha i 201203, China; 2. S hangha i J iaotong U n iversity, S hangha i 200030, Ch ina)
KEY WO RD S: HPLC2M S; solid phase extraction ( SPE) ; diosgenin ABSTRACT: A IM : To determ ine the low content of Ophiopogon japonicus saponin metabolite in vivo. M ETH2 OD S: HPLC2M S m ethod of determ ining rat’s m etabolite diosgenin in vivo was established after single2dose oral Ophiopogon japonicus saponin enteric m icrosphere. RESUL TS: The detection lim it was about 50 ng /mL , L ineari2 ty, p recision of intra and inter2day and rep roducibility of the method were good. CO NCL US IO N: This m ethod ac2 cords w ith the analysis requirement. It can give an effective measure and foundation for studying TCM saponin bio2 ava ilab ility.
1 材料、仪器与试剂 1. 1 材料

高效液相色谱-串联质谱法

高效液相色谱-串联质谱法高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）是一种现代化分析技术。

它结合了高效液相色谱（HPLC）和串联质谱（MS/MS）两种分析方法，能够快速、准确、灵敏地分析复杂的混合样品中的多种化合物。

HPLC-MS/MS技术的基本原理是将样品通过高效液相色谱进行分离，然后以极高的分辨率将分离后的化合物导入串联质谱分析仪中进行质谱检测和分析。

HPLC部分能够通过改变流速、温度、化合物间隔、载气、反应物、固相分离等方法来分离样品中的成分。

MS/MS 部分则能够通过改变离子源、离子传输、离子选择和离子检测等方式检测化合物。

具体来说，HPLC-MS/MS技术的实现过程如下：需要准备一定量的样品。

样品通常是一种混合物，需要进行分离和净化。

这可以通过一系列的化学方法和生物技术实现。

将样品注入到高效液相色谱仪中进行分离。

高效液相色谱仪通过改变环境条件可以分离出复杂混合物中的单个分量，比如改变洗脱剂的浓度、PH值、离子强度来调整样品中化合物的排列顺序。

高效液相色谱仪具有高速分离和高效洗脱的特点，具有处理大量和复杂样品的能力。

接着，通过HPLC输出的流缓和制备离子源，离子源生成的离子对化合物分子进行离子化。

这个过程利用化合物分子上的R基或者H+来形成游离气态的化合物离子。

然后，将产生的离子通过串接质谱进行分析。

在离子进入串联质谱仪的离子源之前，需要将它们选择性的分离为固定质量和电荷比的离子，这可以通过一系列的电子和电场进行控制来实现。

所得到的离子被送至陷入式离子阱，通过对离子的激发和断裂等过程，形成包含多种离子片段的离子质谱图谱。

这些离子片段遵循一定的质量电荷比的规律，可以通过特征峰和离子质量比等独特的质谱性质来鉴别。

将这些片段的数据输入到质谱数据库中，与已知化合物的质谱数据进行比对。

这样，就能够得到混合物中的每个化合物的特定质谱图谱，从而通过质量分析进行结构确认和鉴定。

HPLC-MS/MS技术的优点是明显的，该技术具有高效和灵敏的特点，能够分析非常低的浓度样品成分。

HPLC-MS-MS的原理【整理】

一级ms是对从hplc中出来的所有物质进行质谱分析也就是包括hplc谱图中的所有峰二级ms是将通过一级ms得到的带电离子进一步击碎这样可以得到更多的分子结构的信息可以对物质进行进一步结构定性
பைடு நூலகம்HPLC-MS-MS的原理【整理】
HPLC-MS是高效液相色谱与质谱的联用，MS/MS代表二级质谱，是将经过第一次质谱检测的离子以某种方式碎裂后再进行质谱检测。
一级MS是对从HPLC中出来的所有物质进行质谱分析，也就是包括HPLC谱图中的所有峰，二级MS是将通过一级MS得到的带电离子进一步击碎，这样可以得到更多的分子结构的信息，可以对物质进行进一步结构定性。
HPLC是初分化合物，一级MS是对HPLC谱图中的各峰进行质谱分析，二级MS是对一级MS中有疑问的峰进行在一个解离分析以确定一级MS的不确定峰的结构。

UPLC-MS_法测定磷酸西格列汀中的2_种磷酸酯杂质的含量

第52卷第11期辽宁化工 Vol.52，No.11 2023年11月 Liaoning Chemical Industry November，2023基金项目：吉林省医药健康产业发展专项引导资金项目（项目编号：YYZX201905）。

收稿日期： 2022-09-27UPLC -MS 法测定磷酸西格列汀中的2种磷酸酯杂质的含量朱红茹1，王广祁1,2*，王健1,3，王芳1，姜斌4（1. 通化东宝药业股份有限公司，吉林通化 134123； 2. 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院，辽宁沈阳 110016；3. 沈阳药科大学制药工程学院，辽宁沈阳 110016；4. 山东汇智药物研究有限公司，山东济南 250101）摘要：建立了UPLC -MS 法测定磷酸西格列汀中2种磷酸酯杂质含量的检测方法。

采用C 18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm ）分离，0.01%甲酸和乙腈为流动相进行梯度洗脱，采用单极四级杆检测器，电喷雾离子源，正离子模式进行监测，外标法定量，分析方法时长13 min。

结果表明：该方法的线性关系相关系数r ≥0.995；磷酸西格列汀样品加标回收率为82.05%~105.53%（n =9）；磷酸三甲酯（TMP）检测限为0.007 4 μg·mL -1，磷酸三异丙基酯（TIP）检测限为0.007 8 μg·mL -1。

与常规高效液相方法相比，该方法简单快速，灵敏度高，准确度好，适用于磷酸西格列汀中磷酸三甲酯和磷酸三异丙基酯杂质的检测。

关键词：UPLC -MS；磷酸西格列汀；基因毒性杂质；磷酸三甲酯；磷酸三异丙基酯中图分类号：O657.7 文献标识码： A 文章编号： 1004-0935（2023）11-1702-04药品在生产的过程中，由于工艺条件、环境温度、生产设备的多种影响，往往可能产生杂质，杂质的存在对患者更是“有害无益”。

衍生化HPLC-MS 法测定血浆中超微量炔雌醇

3000 2000 1000 0
2 4 6 min* *MSD1 404, EIC=404:405 (C:\CONTRA\METHOD\EE51500.D) 3000 2000 1000 0 2
2 4 6 min* 404, EIC=404:405 (C:\CONTRA\METHOD\EE51 APCI, Pos, SIM,*MSD1 Frag: 200 200000 150000 100000 50000 0
4.5
炔雌醇标准含药血浆最低定量限 ( LLOQ) 10.43 pg/ml
衍生化后炔雌醇的质谱响应增大了300倍！
炔雌醇标准含药血浆LLOQ为10.43pg/ml
丹酰氯衍生化
炔雌醇
4.6 炔雌醇方法学实验结果
炔雌醇的标准曲线线性范围为： 10.43 pg·ml-1～625.8 pg·ml-1 r=0.99876 ；最低定量限为10.43 pg/ml；高、中、低三种浓度的日间和日内精密度均小于15%；
第一轮第二轮
100
本底浓度（pg/ml）
80 60 40 20 0 -20 0 5 10 受试者A-T 15 20
APCI, Pos , SIM, Frag: 150 *MSD1 530, EIC=530:531
(F:\CONT RA\EE-FIRST \Y0 4.171
EE
4.147
2000 1500 1000 500
EE
2
APCI, Pos , SIM, Frag: 150 *MSD1 404, EIC=404:405
3.5 对羟基联苯(内标)的衍生化方程式：
Cl O S OH O NaHCO3 (pH10.5)
O O S O

HPLC-MS技术

HPLC-MS 技术
学生
一、HPLC-MS 技术概述
二、HPLC-MS 技术优势
三、HPLC-MS 技术应用
一、HPLC-MS技术概述
HPLC-MS技术即高效液相色谱-质谱联用技术，首先高效液相色谱是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换或分子大小不同引起的排阻作用差别使不同溶质进行分离。
质谱法即物质分子的质量谱，
实际是分离和测定分子的质量、强度信息的方法，并由此表示物质的成分与结构。质谱分析可以得到化合物的分子质量、分子式及元素组成。
质谱原理：首先将样品中的分子电离，不同质量电子在电
场或磁场中，将按其质量和所带的电荷比（质荷比）进行分离和排序，根据质荷比的大小和相对强度形成有规则的质谱，从而对物质进行结构鉴定和定量分析。
液质联用仪
岛津LCMS-2020
美国力可公司
Citius HRT
HPLC-MS技术始于20世纪70年代。它主要由高效液相色谱仪、接口系统、质量分析器、真空系统和计算机数据处理系统组成。 HPLC是“高压—液相—分子”体系，而质谱是 “高真空—气相—离子”体系。液质联用是通过一个“接口”来实现的。这个接口就是将质谱仪的进样系统和电离源改进并与液相相连接。在接口处完成溶液的气化和样品分子的电离。
接口基本原理
• 主要采用大气压电离(API)技术，API包括电喷雾电离（ESI）和大气压化学电离(APCI)
• 电喷雾（ESI）:溶液中样品流出毛细管喷口后，在雾化
气(N2)和强电场(3～6kV)作用下，溶液迅速雾化并产生高电荷液滴。随着液滴的挥发，电场增强，离子向液滴表面移动并从表面挥发，产生单电荷或多电荷离子。