狗牙根SRAP_PCR反应体系优化及引物筛选_王志勇

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【国家自然科学基金】_相关序列扩增多态性(srap)_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731

科研热词推荐指数 srap 3 金钗石斛 2 遗传多样性 2 正交设计 2 优化 2 遗传连锁图谱 1 遗传分化 1 简单重复序列 1 石蒜 1 相关序列扩增多态性(srap) 1 相关序列扩增多态性 1 白灵菇 1 柑橘 1 坛紫菜 1 内转录间隔区(its) 1 体细胞杂种 1 ssr 1 srap标记 1 pleurotus nebrodensis 1 fcm 1 dh作图群体 1 caps 1
2011年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32
2011年科研热词推荐指数 srap 3 遗传多样性 2 分子标记 2 青霉属 1 随机扩增多态性dna(rapd) 1 野牛草 1 连锁图谱 1 苹果树腐烂病菌 1 致病力 1 经济林学 1 简单序列重复区间(issr) 1 相关序列扩增多态性(srap) 1 相关序列扩增多态性 1 瓯江彩鲤 1 氨氮 1 杏 1 杂合位点 1 抗逆性状 1 应用 1 山核桃 1 分群分析法 1 分离类型 1 内生真菌 1 兰科植物 1 中国明对虾 1 srap标记 1 scar标记 1 ph 1 issr 1 dna多态性 1 "粉玉" 1 "全红" 1
2013年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
科研热词推荐指数遗传距离 1 相关序列扩增多态性 1 条斑紫菜 1 指纹图谱 1 引物筛选 1 序列相关扩增多态性分子标记 1 分子标记 1 体系优化 1 东方百合 1
2014年序号 1 2 3 4 5 6 7
2014年科研热词推荐指数黄麻 1 羽衣甘蓝 1 种质资源 1 相关序列扩增多态性(srap) 1 体系优化 1 srap标记 1 dna指纹图谱 1

中国兰ISSR—PCR反应体系优化及引物筛选

中国兰ISSR—PCR反应体系优化及引物筛选作者：黄晓慧巫伟峰陈春张毅智汪长水徐建球陈发兴陈孝丑来源：《南方农业学报》2018年第07期摘要：【目的】优化中国兰的ISSR-PCR反应体系，并筛选适用于中国兰ISSR分析的候选引物，为ISSR分子标记在中国兰的辅助育种及亲缘关系和遗传多样性分析等提供技术参考。

【方法】以6个中国兰品种为材料，采集其叶片样品，分别用研钵法和研磨仪法进行破碎研磨，比较两种方法提取DNA的效果，利用L25（53）正交试验和单因素试验对DNA模板量、引物浓度、2×Taq Master Mix添加量、循环数和退火温度进行优化，建立最佳ISSR-PCR 反应体系，并从ISSR分子标记通用引物中筛选适用于中国兰的ISSR分析候选引物。

【结果】研磨仪法提取的DNA浓度明显高于研钵研磨法，但二者提取的DNA质量均较好（OD260/OD280为1.7～2.0）。

对ISSR-PCR反应体系扩增结果的影响程度排序为DNA模板量>引物浓度>2×Taq Master Mix添加量。

综合考虑成本和DNA模板量，最佳ISSR-PCR反应体系（20.0 μL）：DNA模板10.0 ng、引物0.8 μmol/L和2×Taq Master Mix 9.0 μL。

最佳循环数为35，最佳退火温度为49.6 ℃。

基于上述优化结果，从100条引物中共筛选出42条适用于中国兰的ISSR候选引物。

【结论】研磨仪法可有效提高中国兰基因组DNA的提取率和质量，且利用优化后的ISSR-PCR反应体系和扩增程序及筛选出的引物，扩增获得的条带清晰、稳定，多样性好，可用于中国兰的遗传多样性和亲缘关系等分析研究。

关键词：中国兰；ISSR；分子标记；反应；引物筛选中图分类号： S682.310.36 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2018）07-1282-070 引言【研究意义】中国兰又称国兰，是中国传统兰花的统称，为兰科（Orchidaceae）兰属（Cymbidium）植物，其味幽香，花色淡雅，素有花中君子和天下第一香之美称，且具有独特的内涵和意境，观赏和经济价值很高（陈心启，2011）。

狗牙根黑穗病病原菌的鉴定及其培养特性

狗牙根黑穗病病原菌的鉴定及其培养特性作者：罗海澜王飞马旭园李新伟刘少娟来源：《湖北农业科学》2014年第03期摘要：狗牙根（Cynodon dactylon）是耕地、果园及其他草种草坪常见的恶性杂草，为探索其生物防治方法，试验从患黑穗病狗牙根穗部分离到一株真菌LHL1，对其进行分子鉴定及生物学特性研究。

液体发酵培养确定其最佳碳源和氮源及最适pH；苯胺蓝染色、光学显微镜镜检法观察感病狗牙根各部位菌丝和孢子分布情况。

结果表明，菌株LHL1为担子菌亚门（Basidiomycotina）黑粉菌目（Ustilaginales）黑粉菌属（Ustilago）；该菌的最佳碳源和氮源分别为甘油和水解乳蛋白，最佳pH为5；镜检结果显示在感病植株的叶鞘内表皮有大量菌丝及孢子分布，茎、叶及分蘖芽鞘表面均有孢子存在。

关键词：狗牙根（Cynodon dactylon）；菌株LHL1；生物防治中图分类号：S543+.9；S435.121.5 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）03-0575-05狗牙根（Cynodon dactylon）又名百慕达，为禾本科多年生草本植物，匍匐茎发达，蔓延力强[1，2]，根状茎具有解热利尿、舒筋活血的作用，叶提取物具降低血糖、抗氧化的作用[3]。

狗牙根目前作为草坪草种广受欢迎，但因其侵占性和再生性强，是耕地、果园及其他草坪草种的危害性杂草。

黑穗病是一种由幼苗期进行系统性侵染从而引发全株发病的病害，苗期侵染花期发病，花期穗上具充满孢子堆的病瘿[4]，感病花不能正常开花结子。

狗牙根黑穗病的高发期在每年的7～9月，主要依靠孢子传播。

狗牙根黑穗病致病菌通过来自种皮或土壤的越冬孢子产生菌丝侵染发芽种子的胚芽鞘，并扩散至整个植物组织；狗牙根黑穗病致病菌对狗牙根的种子萌发、出苗无影响，但对匍匐枝的生长、干物质总量的积累、竞争力都有明显的降低作用[5]。

在中国有关狗牙根黑穗病致病菌的研究鲜有报道；在其他国家，早在20世纪70年代对狗牙根黑穗病致病菌有相关报道，但主要集中在不同碳源及抗生素对菌落形态的影响，以及氯霉素对狗牙根黑穗病致病菌呼吸链电子传递的影响等[6，7]。

狗牙根耐旱基因的表达谱分析

狗牙根耐旱基因的表达谱分析吕爱敏;王生银;张菁;黄炳茹;安渊;周鹏【摘要】为了提高草坪草对干旱环境的适应能力,了解植物对干旱的响应特征,研究从已建立的草坪草狗牙根‘Tifway’(耐旱)和‘C299’(干旱敏感)干旱5和10 d应答SSH(suppression subtractive hybridization)4个文库中挑选出38个耐旱、干旱响应基因.采用半定量RT-PCR方法检测干旱胁迫下这些基因在‘Tifway’和‘C299’中的表达变化,比较它们在两品种间的表达差异.发现叶表面蜡质合成基因(CER1蛋白基因、固醇脱氢酶基因)、与耐旱相关的基因(脱水素基因)、与抗氧化相关基因(超氧化物歧化酶、脱氢抗坏血酸还原酶和2-半胱氨酸过氧化物酶基因)、和转录调控因子(EREBP-4 like蛋白和WRKY)在‘Tifway’中的表达量显著高于‘C299’.这些结果说明了‘Tifway’比‘C299’更加耐旱的分子机制.【期刊名称】《上海交通大学学报（农业科学版）》【年(卷),期】2015(033)003【总页数】7页(P14-20)【关键词】狗牙根;干旱胁迫;耐旱基因【作者】吕爱敏;王生银;张菁;黄炳茹;安渊;周鹏【作者单位】上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240;上海交通大学农业与生物学院,上海200240【正文语种】中文【中图分类】S688.4干旱是限制植物生长的重要环境因子之一。

在干旱的环境中,植物受到伤害的同时会产生胁迫响应,对这些胁迫响应的研究有助于了解植物对干旱胁迫响应的机理,为进一步改良植物、提高植物的抗旱能力提供基础。

目前有关干旱胁迫的研究多集中在生理水平、细胞水平及基因的表达调控水平,可以通过克隆干旱表达基因寻找植物的干旱应答机制[1-4]。

橡胶树 SRAP 体系优化及其 PCR 引物组合的筛选

橡胶树 SRAP 体系优化及其 PCR 引物组合的筛选王惠君;王文泉;卢诚;王海燕;陈新【摘要】为橡胶树遗传多样性分析及遗传图谱的构建奠定基础，分析引物浓度、Mg2＋浓度、dNTPs 浓度、模板 DNA 用量、Taq 酶用量等因素对 SRAP-PCR扩增反应的影响。

结果表明，橡胶树 SRAP-PCR 的适宜扩增反应体系（20μL）为：引物0．2μmol／L，Mg2＋2．0 mmol／L，dNTPs 0．20 mmol／L，模板DNA50 ng， Taq 酶0．5 U。

利用该体系从400对引物组合中初筛出28组多态性好的引物组合，获得250条清晰带，多态性比率为62．8％。

%To lay the foundation for evaluation of genetic diversity analysis and genetic linkage map in H.brasiliensis,factors influencing SRAP-PCR amplification system were analyzed,including primer concentration,Mg2+ concentration,dNTPs concentration,DNA template dosage and Taq polymerase. Results:A suitable SRAP-PCR analysis reaction system for H.brasiliensis was obtained.The reaction mixture (20 μL)contained primer 0.2 μmol/L,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,50 ng of genomic DNA template,0.5 U of Taq polymerase.Conclusion:using optimized SRAP-PCR system,28 pairs of primers were screened out of 400 pairs of primers. 250 clear bands were gained and the polymorphism rate was 62.8%.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】6页(P29-34)【关键词】橡胶树;SRAP;体系优化;引物组合筛选【作者】王惠君;王文泉;卢诚;王海燕;陈新【作者单位】琼州学院，海南三亚 572022;中国热带农业科学院 /热带生物技术研究所，海南海口 571101;中国热带农业科学院 /热带生物技术研究所，海南海口 571101;中国热带农业科学院 /热带生物技术研究所，海南海口 571101;中国热带农业科学院 /热带生物技术研究所，海南海口 571101【正文语种】中文【中图分类】S722.3橡胶树(Hevea brasiliensis)为大戟科橡胶树属植物[1]，原产于巴西亚马逊河流域马拉岳西部地区。

西南五省区及非洲野生狗牙根种质基于SRAP标记的遗传多样性分析

西南五省区及非洲野生狗牙根种质基于SRAP标记的遗传多样性分析凌瑶;张新全;齐晓芳;周莹洁;刘伟;马啸;陈仕勇【期刊名称】《草业学报》【年(卷),期】2010(019)002【摘要】利用SRAP分子标记技术,对采自中国西南5省区的44份野生狗牙根及8份非洲狗牙根材料进行遗传多样性研究.结果表明,18对引物组合共得到扩增总条带236条,多态性条带数206条,平均每对引物扩增出11.4条带,多态性位点百分率为87.29%,材料间的遗传相似系数范围为0.569～0.929,平均GS值为0.723.聚类分析结果表明,52份材料可聚为5类;基于Shannon多样性指数估算了8个狗牙根生态地理类群内和类群间的遗传分化,类群内的遗传变异占总变异的63.81%,类群间的遗传变异占总变异的36.19%,表明这些抗源材料遗传差异较大,各生态地理类群间的遗传分化与其所处的生态地理环境具有一定的相关性.【总页数】8页(P196-203)【作者】凌瑶;张新全;齐晓芳;周莹洁;刘伟;马啸;陈仕勇【作者单位】四川农业大学动物医学院,四川,雅安,652014;四川农业大学草业科学系,四川,雅安,625014;四川农业大学草业科学系,四川,雅安,625014;四川农业大学草业科学系,四川,雅安,625014;四川农业大学草业科学系,四川,雅安,625014;四川农业大学草业科学系,四川,雅安,625014;四川农业大学草业科学系,四川,雅安,625014;四川农业大学草业科学系,四川,雅安,625014【正文语种】中文【中图分类】S543~+.903.2;Q943【相关文献】1.基于表型性状和SRAP标记的西南区野生扁穗牛鞭草遗传多样性分析 [J], 陈永霞;张新全;谢文刚;马啸2.野生狗牙根种质资源的AFLP遗传多样性分析 [J], 齐晓芳;张新全;凌瑶;陈仕勇;刘伟3.西南地区野生狗牙根种质资源的SSR 与 AFLP 联合分析 [J], 凌瑶;杨树萍;张新全;陈仕勇4.中国西南部野生狗牙根种质耐寒性初步鉴定 [J], 袁小情; 严国强; 黄思怡; 王芮嘉; 李鸣曦; 杨丹; 张新全; 刘伟5.基于表型性状和SRAP标记的观赏用辣椒种质资源遗传多样性分析 [J], 赫卫;张慧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

用RAPD标记分析狗牙根遗传多样性

用RAPD标记分析狗牙根遗传多样性
梁慧敏
【期刊名称】《山东林业科技》
【年(卷),期】2009(39)5
【摘要】以收集到的28份狗牙根为材料,用20个随机引物(10nt)共扩增出314个RAPD多态性片段,表明试验材料之间存在复杂的遗传背景,有丰富的遗传多样性.利用NTSYS-PC软件进行的非加权组法(UPGMA)聚类分析,建立了狗牙根居群的分子系统树状图;并将所有居群分为A、B、C 3大类,A类包含12个居群,B类9个居群,C类7个居群,各居群间遗传变异范围很大.
【总页数】3页(P33-35)
【作者】梁慧敏
【作者单位】江苏农林职业技术学院,江苏,句容,212400
【正文语种】中文
【中图分类】S688.4
【相关文献】
1.西南五省区及非洲野生狗牙根种质基于SRAP标记的遗传多样性分析 [J], 凌瑶;张新全;齐晓芳;周莹洁;刘伟;马啸;陈仕勇
2.西南区野生狗牙根遗传多样性的ISSR标记与地理来源分析 [J], 刘伟;张新全;李芳;马啸;范彦
3.湖南四种尾矿环境下的狗牙根遗传多样性的RAPD分析 [J], 袁长春;施苏华;赵运林
4.肺形侧耳种质资源拮抗反应及RAPD分子标记遗传多样性分析 [J], 陈躬国;陈剑;吴汉琼;刘新锐;方洪枫;骆志坚
5.基于ISSR与RAPD标记分析内蒙古赤芍的遗传多样性 [J], 杜亚楠;张敏;孙淑英;陈贵林
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新疆野核桃SRAP－PCR反应体系的优化及引物筛选

新疆野核桃SRAP－PCR反应体系的优化及引物筛选张捷;李勤霞;张萍;余甜【摘要】利用正交设计对新疆野核桃序列相关扩增多态性 PCR（SRAP －PCR）反应体系中的5个因素（模板 DNA、Mg2＋、引物、dNTPs、TaqDNA 聚合酶浓度）在5水平上进行优化，对比不同浓度模板 DNA 对扩增结果的影响，建立了新疆野核桃 SRAP 最佳反应体系。

结果表明，优化的新疆野核桃 SRAP －PCR 最佳反应体系为：20μL 的反应体系中，2．5μg／mL 模板 DNA、0．4μmol／L 引物、2 mmol／L Mg2＋、0．2 mmol／L dNTPs、25 U ／mL Taq 酶 U；最佳PCR 扩增程序的退火温度为54℃。

各因素扩增结果表明，Mg2＋浓度对扩增反应结果影响最大，dNTPs 浓度影响最小。

运用该体系对新疆野核桃样本进行了验证，表明该体系扩增稳定可靠。

用该体系对100个 SRAP 引物组合进行筛选，筛选出15个扩增条带清晰且多态性丰富的引物组合，为新疆野核桃种质资源研究奠定了基础。

【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2016(044)003【总页数】3页(P64-66)【关键词】SRAP分子标记;新疆野核桃;正交试验;引物筛选;体系优化【作者】张捷;李勤霞;张萍;余甜【作者单位】新疆农业大学林学与园艺学院/新疆教育厅干旱区林业生态与产业技术重点实验室，新疆乌鲁木齐 830052;新疆农业大学林学与园艺学院/新疆教育厅干旱区林业生态与产业技术重点实验室，新疆乌鲁木齐 830052;新疆农业大学林学与园艺学院/新疆教育厅干旱区林业生态与产业技术重点实验室，新疆乌鲁木齐830052;新疆农业大学林学与园艺学院/新疆教育厅干旱区林业生态与产业技术重点实验室，新疆乌鲁木齐 830052【正文语种】中文【中图分类】S664.103新疆野核桃(Juglans regia L.)是胡桃科胡桃属植物，也是栽培核桃(Uuglms regia L.)的野生种之一[1]，在我国仅分布于新疆伊犁巩留县(后称野核桃沟自然保护区)内，是我国珍贵的天然野生资源[2-4]。

狗牙根SRAP_PCR反应体系优化及引物筛选_王志勇

狗牙根SRAP -PCR 反应体系优化及引物筛选王志勇1,2,袁学军2,刘建秀2＊,郭海林2(1.南京农业大学园艺学院,江苏南京210095;2.江苏省中国科学院植物研究所,江苏南京210014)摘要:利用正交设计,从M g 2+、dN T P 、引物浓度和D NA 聚合酶4种因素3个水平以及不同的模板D NA 浓度来优化狗牙根S RAP -PCR 反应体系,并对引物进行了全面筛选。

狗牙根S RAP -PC R 优化反应体系结果为:2μL 10×buffe r 、40ng 模板DN A 、M g 2+1.25mmol /L 、dN T P 260μmol /L 、引物0.2μmol /L 、T aq D NA 聚合酶1.0U ,总体积20μL 。

运用该结果从90对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRA P 引物34对。

优化体系的建立及其引物的筛选为今后利用S RA P 标记技术进行狗牙根遗传分析、图谱构建、基因定位与种质资源鉴定奠定了技术基础。

关键词:狗牙根;SRA P 标记;正交试验;体系优化;引物中图分类号:S543+.902 文献标识码:A 文章编号:1004-5759(2008)03-0079-07　目前,常用的DNA 分子标记有RFLP 、RAPD 、AFLP 和SSR 等,它们各有优缺点[1,2]。

美国加州大学蔬菜作物系Li 和Ouiros[3]于2001年在研究芸薹属(B rassica )作物中开发的一种基于PCR 的新型标记SRAP (se -quence -related amplified polym orphism ),该标记具备RFLP 、RAPD 、SSR 和AFLP 等分子的优点,克服了它们的缺点,并已经在许多植物研究中得到应用,如在构建图谱[4,5]、遗传多样性[6～8]、Q TL 定位[9]、杂种优势的预测[6]以及其他方面[10]的研究。

狗牙根属(Cynodon spp .)属禾本科(G ramineae )画眉草亚科(Eragaostoidee )虎尾草族(Chlo ridoieae )多年生草本植物[11]。

甘草SRAP—PCR正交试验设计优化及引物筛选

甘草SRAP—PCR正交试验设计优化及引物筛选作者：艾鹏飞苏姗靳占忠来源：《河北工业科技》2017年第01期摘要：为了建立甘草SRAP技术，采用四因素（Taq酶，Mg2+，dNTP，引物）四水平的正交试验设计[L16（44）]对甘草进行SRAP-PCR试验，电泳结果采用软件SPSS分析，退火温度和引物筛选采用单因子试验。

结果发现，4种因素对甘草SRAP-PCR的影响依次为dNTP>Taq 酶>Mg2+>引物；优化后的甘草SRAP-PCR体系（20 μL）为1×PCR缓冲液，引物0.6 μmol/L，Mg2+ 2.5 mmol/L，Taq酶 1.5 U，dNTP 0.3 mmol/L，模板DNA 40 ng；最佳的退火温度为50 ℃；81对引物中有22对扩增出明亮、清晰的谱带。

该优化的SRAP-PCR反应体系为进行甘草资源遗传分析提供了技术支持。

关键词：植物遗传学；甘草；SRAP；PCR；正交试验设计；引物筛选中图分类号：Q37 文献标志码：Adoi： 10.7535/hbgykj.2017yx01002Abstract：In order to establish the SRAP-PCR technology for Glycyrrhiza uralensis， an orthogonal design testing is used to optimize the reaction system of SRAP-PCR with 4 factors （Taq polymerase， Mg2+， dNTP and primer） at 4 levels， and the electrophoresis profiles are analyzed by software SPSS. The annealing temperature and SRAP primer combinations are selected using the single factor experiment. The results show that effects of the 4 factors on the SRAP-PCR are dNTP，Taq polymerase， Mg2+ and primer in turn. The optimized SRAP-PCR reaction system （20 μL）for G.uralensis is constructed of 1×PCR buffer，0.6 μmol/L primers， 2.5 mmol/L Mg2+， 1.5 U Taq polymerase， 0.3 mmol/L dNTP and 40 ng DNA template. The optimized annealing temperature is 50 ℃. Using the optimized system， 22 primer combinations are selected among 81 primer combinations， which produced bright and clear bands. The optimized SRAP-PCR system can provide the technique support for the phylogenetic analysis of G. uralensis.Keywords：plant genetics；Glycyrrhiza uralensis Fisch.； SRAP； PCR； orthogonal test design； primer screening相關序列扩增多态性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）是基于PCR的一种显性标记，它通过独特的双引物对基因的ORFs（open reading frames，开放阅读框）特定区域进行扩增（上游引物17 bp，扩增外显子区域；下游引物18 bp，扩增内含子、启动子区域）。

扬子鳄SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选

扬子鳄SRAP-PCR反应体系的优化及引物筛选田明礼;吴孝兵【期刊名称】《安徽师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(31)2【摘要】以扬子鳄总DNA为材料,对影响SRAP-PCR的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物浓度等因素进行了优化,分析了Taq DNA聚合酶、样本浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度以及引物浓度对SRAP-PCR扩增结果的影响.筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物l3对,建立了稳定的、可重复的扬子鳄SRAP-PCR最佳反应体系及PCR扩增参数.研究结果表明:在30μl SRAP-PCR反应体系中,样本最适宜为1μl(30ng/μl),Mg2+的最适为2μl(2.5mmol/L),dNTPs最适为2μl(2.5mmol/L),单引物的最适均为1μl(10pmol/μl);聚合酶在30μl反应体系中宜加入1U.SRAP-PCR引物筛选及其反应体系的建立,为今后利用SRAP标记技术开展扬子鳄种群的分子生物学研究提供了一个标准化程序和强有力的工具.【总页数】5页(P163-167)【作者】田明礼;吴孝兵【作者单位】安徽师范大学,生命科学学院,安徽,芜湖,241000;安徽师范大学,生命科学学院,安徽,芜湖,241000【正文语种】中文【中图分类】Q953【相关文献】1.辣椒SRAP-PCR反应体系优化及杂交群体多态性引物筛选 [J], 张佳琦;吕庆芳;董黎梨;李映志;叶春海2.银胶菊的SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选 [J], 高翔;关亚丽3.新疆野核桃SRAP－PCR反应体系的优化及引物筛选 [J], 张捷;李勤霞;张萍;余甜4.辣椒SRAP-PCR反应体系优化与引物筛选 [J], 徐海强;高贵珍;张兴桃;桑维维;张安文5.国槐SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选 [J], 孙荣喜;宗亦臣;郑勇奇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

本氏针茅SRAP—PCR反应体系的建立及引物筛选

本氏针茅SRAP—PCR反应体系的建立及引物筛选井赵斌;俞靓;魏琳;程积民【期刊名称】《草业科学》【年(卷),期】2012(029)002【摘要】以本氏针茅（Stipa bungeana）幼嫩叶片为材料，建立适合本氏针茅基因组I）NA提取的改良CTAB法，在此基础上采用正交试验设计和单因素分析相结合的方法，对本氏针茅SRAPPCR反应体系中的5个主要因素（DNA、Taq酶、dNTPs、Mg^2＋和引物）进行优化，旨在建立适合本氏针茅SRAP分析的反应体系。

结果表明，在20pL总的反应体系中各组分的加入量分别为：DNA（20ng·μL^-1）3μL、TaqDNA酶（5U·μL^-1）0．2μL、dNTPs（2．5mmol·L^-1）1．4μL、引物（10μmol·L^-1）1．0μL、Mg^2＋（25mmol·L^-1）2．0μL、10×Buffer2．5μL ddH208．9μL。

体系验证和引物筛选试验表明，该体系适于本氏针茅遗传多样性分析，该体系的建立可为本氏针茅种质资源遗传多样性研究和黄土高原植被恢复及生态建设提供理论基础。

【总页数】10页(P219-228)【作者】井赵斌;俞靓;魏琳;程积民【作者单位】西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学资源与环境学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学资源与环境学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌712100／西北农林科技大学资源与环境学院,陕西杨凌712100／中国科学院水利部水土保持研究所,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S543.03;Q945.79【相关文献】1.蓝莓SRAP—PCR反应体系的建立优化及引物筛选 [J], 尹德洁;苏淑钗;刘肖;侯智霞;陈露2.三角梅SRAP-PCR反应体系的建立及引物筛选 [J], 武晓燕;唐源江;曹雯静3.本氏针茅ISSR- PCR反应体系的建立及引物筛选 [J], 俞靓;井赵斌;魏琳;程积民4.云南栘(木衣)SRAP-PCR反应体系的建立及引物筛选 [J], 陈璨;石辰;王大玮;彭劲谕;段安安5.光萼荷属植物SRAP-PCR反应体系建立与引物筛选 [J], 张飞;王炜勇;张智;葛亚英;沈福泉;郁永明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

正交设计优化狗牙根SSR-PCR反应体系

ＳＲ，ｄｔｅＳＲａｔｎｗａｎｌｐｉｚｄｂｏａｉｇｔｅｅｅｔｆｅｃｎｅｔａｏｓｅｌｔＳａＳｒｃｉｓｆａｌｏｔｎｈｅｏｉｙｍｉｅｙｃｍｐｒｆｃｓｏｔｏｃｎｒｔｎｍｐａｅＤＮＡｎｎｈｈｉｔｏａｐｉａｏ．ｈｅｕｔｓｏｄｔａｅｅａｅｓｇｉｃｔｅｅｔｎｔｅｒｓｌｆＳＲ－ＣＲｎｅｅｄｆｅｅｔｐｌｔｎＴｅｒｓｌｈｗｅｔｔｒｒｉｎｆａｆｃｓｏｅｕｔｏＳＰｃｉｓｈｈｉｎｈｓｕｄｒｔｉｒｎｈｆｃｍｂｎｔｎｆｈｅｖｌｄｆｕｃｏｓａｄｔｅｏｔｉｅＳＰｏｉａｉｓｏｒｅｌｅｓａｒｆｔｒ，ｏｔｅｎｏａｎｐｉｚｄＳＲ－ＣＲａｔｎｓｓｅｓｇｎｒｔｄｆｒＣ一ｈｍｒｃｏｙｔｍｗａｅｅａｅｅｉｏｏｏｐｐａｔｈｔｓ１ｘｕｅ，０ｎｅｏｃｄｎｓ．ｌｔａｗａ＂０ｂｆｒ６ｇｇｎｍｉＤＮＡｔｐａｅ，３ｍｍｏ／Ｍ２０ｐｏ／ＮＴ．．ｌｐｎｍｅｌｔｓ２ｌＬ０．ｌｄＰ０８ｐｍｏ／ｍＬＬｐｉｒ０５Ｕａｒｍｅ，．Ｔｔ／ＤＮＡｏｙｍｓｔｔｌ１ｐｌｍｅｅｗｉｔａ０ｈｏｒａｔｎｖｌｍｅ，ｅｏｔｚｄＳＲ－ＣＲｒｔｃｌｇｔｅｃｏｏｕｓＴｐｉｅＳＰｉｈｍｉｐｏｏｏｈｍｉ

正交设计优化山野豌豆SRAP-PCR反应体系与引物筛选

摘要：用正交试验设计，山野豌豆叶片Ｄ采以ＮＡ为模板，Ｍｇ、ＮＴ、物和ＴｑＤＮ聚合酶４因素３个水从ｄＰ引ａＡ种平，山野豌豆ｓＡＰＰＲ反应体系进行优化，比较了不同浓度模板Ｄ对Ｒ — Ｃ并ＮＡ对扩增效果的影响，立了山野豌建豆的ｓＡＰＰＲ最佳反应体系。结果表明，野豌豆ｓＡＰＰＲ最佳反应体系为：Ｌ１ ×ＰＲｂｆｅ（含Ｒ — Ｃ山Ｒ — Ｃ２０Ｃｕｆ不ｒ
行４因素３平筛选（１。体系优化分别采用３份不同Ｄ水表）ＮＡ进行，每份ＤＮＡ做２次重复，其平均值作为统取
北京灵山的５及内蒙古呼伦贝尔的９号ＤＮＡ。号
１２．试验设计与方法
１２１ＰＲ反应体系设计与引物组合．．Ｃ
采用Ｌ（正交试验设计，Ｍｇ、ＮＴＰ引物、ｑＤＮＡ聚合酶进。３）对ｄ、Ｔａ
遗传学研究奠定了基础。
关键词：野豌豆；ＲＡＰＲ体系优化；交设计；物筛选山ＳＰ；Ｃ正引
中图分类号：４Ｑ９３文献标识码：Ａ文章编号：０４５５（０２０ — ３５０１０ — ７９２１）５０２ — ６
Ｍｇ）３ｇ的模板Ｄ、０ｎＮＡ、物２０／ｌＬ、ｇ。２０ｍｍｏ／ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＴｑＤＮＡ聚合酶１５Ｕ、ＮＴ．引．，／Ｍ．ｍｏ。ｌＬ、ａ．ｄＰ０２ｍｍｏ／总ｌＬ，

SRAP和ISSR分子标记研究进展

SRAP与ISSR分子标记的研究进展摘要：SRAP与ISSR等分子标记技术已广泛应用到科研工作中。

本文简单的介绍SRAP与ISSR的原理、功能、应用以及对使用分子标记技术揭示生物菌的作用机理进行了展望。

DNA分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段，它能直接反映基因组DNA间的差异，是继形态学标记、细胞学标记及生化标记之后，近年来广泛应用的一种新的遗传标记。

近年来,随着DNA 标记技术的研究日渐成熟,其应用也日益广泛。

目前,各种分子遗传标记技术在科研中的应用已深入开展，为种质资源的鉴定、基因的定位与克隆、数量性状位点的遗传分析、遗传多样性评估、物种起源和分子标记辅助育种等遗传研究提供了有价值的工具。

目前常用的分子标记有RFLP、AFLP、RAPD、SSR、ISSR 、SRAP等。

1 SRAP分子标记的发展与应用1.1 SRAP分子标记的发展SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism)即相关序列扩增多态性是一种基于PCR 的新型标记，由美国加州大学作物系Li和Quiros博士提出的序列相关扩增多态性(sequence-related amplifiedpolymorphism, SRAP)。

SRAP 技术是与RAPD 技术相似的一种标记技术，即SRAP 可用一对引物，但所用的引物是在SSR 的基础上设计的。

SRAP 标记原理是利用基因外显子里G、C 含量丰富，而启动子和内含子里A、T含量丰富的特点设计两套引物，对开放阅读框架进行扩增。

SRAP 技术是一种无需任何序列信息即可直接PCR 扩增的新型分子标记技术。

SRAP分子标记技术具有重复性强、简便、易于分离条带和测序、中等产量高、高共显性、便于克隆测序目标片段等特点,目前SRAP 标记已在植物遗传多样性检测、遗传图谱构建、重要基因定位、品种鉴定和种子纯度检测上得到了广泛应用，而在真菌界的应用相对较少。

葛根SCOT—PCR反应体系优化及引物筛选

葛根SCOT—PCR反应体系优化及引物筛选作者：尚小红严华兵曹升张尚文谢向誉王艳欧昆鹏来源：《南方农业学报》2018年第01期摘要：【目的】优化葛根SCoT-PCR 反应体系，筛选适用于葛根的SCoT 引物，为利用SCoT 分子标记进行葛根种质资源鉴定、遗传多样性分析及分子标记辅助育种提供技术支持。

【方法】采用正交设计对SCoT-PCR 反应体系中的DNA 模板量、dNTPs 浓度、Mg 2+浓度、Taq DNA聚合酶量和引物浓度5个因素进行优化，利用最佳SCoT-PCR反应体系筛选出适用于葛根的SCoT引物，并对该体系进行验证。

【结果】最佳葛根SCOT-PCR反应体系20.00 μL：DNA模板50.00 ng，dNTPs 0.25 mmol/L，Mg2+1.50 mmol/L，引物0.80μmol/L，Taq DNA聚合酶0.50U。

利用该体系从36条SCoT引物中筛选出35条可从葛根中扩增出清晰条带的引物。

使用3条引物对18个葛根材料进行PCR扩增，PCR产物表现出良好的重复性、稳定性和丰富的多态性。

【结论】建立的最佳葛根SCOT-PCR反应体系和筛选获得的35条SCoT引物可适用于葛根种质资种鉴定、遗传多样性分析、相关分子标记开发等研究。

关键词：葛根；SCOOPCR；反应体系优化；引物筛选0引言【研究意义】葛根（Pueraria Dc.）是豆科多年生藤本植物，是我国卫生部首批批准的药食同源两用植物（杨旭东等，2014）。

近年来，随着人们对药食同源食物需求量的日益增涨，葛根种质资源收集和鉴定、遗传多样性分析等相关研究已成热点，主要通过测定田间性状等形态指标进行鉴定分析（罗亚红等，2015；郝建平等，2016；谭燕群等，2016），但易受环境、主观判断等因素的影响。

采用分子标记技术可有效、准确地进行种质资源鉴定分析，其中，目标起始密码子多态性标记（SCoT）是结合了RAPD标记和ISSR标记的优点，具有成本低廉、操作简单、通用性强、多态性丰富等特点（Collard and Mackill，2009；熊发前等，2009）。

狗牙根SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

缺点，已经在许多植物研究中得到应用，在构建图谱引、传多样性并如遗
以及其他方面＿１阳的研究。
、ＱＴＬ定位、种优势的预测杂］
狗牙根属（ｙｏｏｐ．属禾本科（ａｎａ）Ｃｎｄｎｓｐ）Ｇｒｍｉｅｅ画眉草亚科（ｒｇｏｔｉｅ）Ｅａａｓｏｄｅ虎尾草族（ｈｏｉｏｅｅ多年生Ｃｌｒｉ）ｄａ
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
的分子标记Ｅ￣２方面已有研究报道。但有关ＳＡＰ分子标记在草坪草中的应用，在野牛草（ｕｈｏａ — ｅ３等８］Ｒ除Ｂｃｌ￣ｄｃｔｌｉｅ）ｙｏｄｓ中有报道外圳，他类型的草坪草尚未见报道。本研究首次以坪用型狗牙根优良品种（源）材料，其种为利用正交设计对ＳＡＰ反应体系进行优化，获得最佳扩增效果的基础上进行引物的筛选并对狗牙根进行了扩Ｒ在增，为今后Ｓ将ＲＡＰ标记在狗牙根遗传多样性评价、同种源鉴定、传图谱构建、Ｌ定位、不遗ＱＴ比较基因组学、诱变后代的鉴定及亲缘关系分析等方面的研究提供较为可靠的技术支持。
王志勇，学军，袁刘建秀，海林郭
（．京农业大学园艺学院，苏南京２０９；．１南江１０５２江苏省中国科学院植物研究所，苏南京２０１）江１０４