刘驰原

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2004年度大禹水利科学技术奖获奖项目

新疆水利厅、新疆水利水电科学研究院、新疆塔里木河流域管理局、新疆农业大学、清华大学、河海大学
邓铭江李兰奇祝向民张江辉董新光张胜江李霞雷志栋唐德善束龙仓
8
二等奖
200m级高混凝土面板堆石坝的应用基础研究
中国水利水电科学研究院、大连理工大学
蒋国澄贾金生孔宪京杨德福丁留谦栾茂田郝巨涛马锋玲杜振坤杨凯虹
9
三等奖
气垫式调压室理论及应用研究
河海大学、青海省格尔木河水电综合开发公司、青海省水利水电勘测设计研究院
索丽生刘德有张健李斌尹常宝
16
三等奖
三峡船闸高边坡工程关键技术研究
长江水利委员会长江勘测规划设计研究院、长江水利委员会长江科学院、中国长江三峡工程开发总公司
徐麟祥曹广晶薛果夫宋维邦杨启贵
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ17
三等奖
TSD型杆式水平位移计研制
一等奖
多级孔板消能泄洪洞的研究与工程实践
黄河勘测规划设计有限公司（原水利部黄河水利委员会勘测规划设计研究院）、黄河水利科学研究院、小浪底水利枢纽建设管理局、中国水利水电科学研究院、南京水利科学研究院、清华大学、大连理工大学
林秀山沈凤生罗义生潘家铨向桐王咸儒曹征齐殷保合刘宗仁刘庆亮于立新史海英李国选李振连牛富敏
黄河勘测规划设计有限公司（原名：水利部黄河水利委员会勘测规划设计研究院）黄河水利委员会黄河水利科学研究院
石春先刘继祥安新代安催花余欣李世滢张俊华张厚军张红武胡一三
6
二等奖
水轮机泥沙磨损性能预估技术
中国水利水电科学研究院
陆力高忠信周先进李铁友唐澍张世雄吴培豪余江成王海安姚启鹏
7
二等奖
塔里木河下游应急输水与生态改善监测评估研究
张治国张根锁刘志刚茹克悌卫三平

泳池谋杀案

泳池谋杀案
佚名
【期刊名称】《电影评介》
【年(卷),期】2004(0)2
【摘要】导演:弗朗索瓦·奥宗(Francois Ozon)演员:夏洛特·兰普林(Charlotte Rampling)、露德温·塞尼耶(Ludivine Sagnier)发行:Focus/环球公司国别:法国/英国DVD格式:D9图像比例:可变宽银幕1.85:1音频:英语/法语(杜比5.1/DTS)【总页数】1页(P43-43)
【关键词】泳池;谋杀案;图像比例;价值体系;迥异性;虚实结合;女性内心;欲望;预告片;转换点
【正文语种】中文
【中图分类】J97
【相关文献】
1.“推销游泳池”是游泳池开放经营的需要——游泳池开放经营探讨之一 [J], 陈承耀
2.点睛之笔--《游泳池谋杀案》 [J],
3.游泳池文/郭涛图/陈粤琪独立日20 2018/8农历七月初十星期一●妈妈引导宝宝思考,明明的身高和哪个小动物的身高相似,要是下水,该去深水区还是浅水区。

妈妈扫描二维码,和宝宝一起听深水区和浅水区的区别。

●暑假期间,爸爸妈妈可以带宝宝去游泳馆体验一下。

妈妈扫描二维码,和宝宝一起观看视频《游泳姿势大全》。

●游泳的时候有哪些注意事项呢?妈妈扫描二维码,和宝宝一起观看视频《游泳注意事项》。

加点料唠叨鹿妈游泳池安全大作战 [J], 郭涛;陈粤琪(图);;
4.游泳跳水馆泳池防水及泳池砖施工技术 [J], 刘富;郑晨;削晓磊;刘宣兵;周晓春
5.中国泳池、温泉系统工程服务的引领者——访陕西富锐泳池环境科技有限公司董事长李德斌 [J], 琴韵
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李建华、彭海军、江西易创电力发展有限公司等建设工程施工合同纠纷二审民事判决书

李建华、彭海军、江西易创电力发展有限公司等建设工程施工合同纠纷二审民事判决书【案由】民事合同、无因管理、不当得利纠纷合同纠纷劳务合同纠纷【审理法院】福建省三明市中级人民法院【审理法院】福建省三明市中级人民法院【审结日期】2020.09.30【案件字号】(2020)闽04民终1365号【审理程序】二审【审理法官】吴朝生孙斌叶景远【审理法官】吴朝生孙斌叶景远【文书类型】判决书【当事人】李建华;彭海军;江西易创电力发展有限公司;国网福建省电力有限公司尤溪县供电公司【当事人】李建华彭海军江西易创电力发展有限公司国网福建省电力有限公司尤溪县供电公司【当事人-个人】李建华彭海军【当事人-公司】江西易创电力发展有限公司国网福建省电力有限公司尤溪县供电公司【代理律师/律所】刘京湖南娄星律师事务所;赖水娟福建仰高律师事务所;纪盛才福建仰高律师事务所;余川福建沈诚律师事务所;李彩仙福建竞成律师事务所【代理律师/律所】刘京湖南娄星律师事务所赖水娟福建仰高律师事务所纪盛才福建仰高律师事务所余川福建沈诚律师事务所李彩仙福建竞成律师事务所【代理律师】刘京赖水娟纪盛才余川李彩仙【代理律所】湖南娄星律师事务所福建仰高律师事务所福建沈诚律师事务所福建竞成律师事务所【法院级别】中级人民法院【字号名称】民终字【原告】李建华;国网福建省电力有限公司尤溪县供电公司【被告】彭海军;江西易创电力发展有限公司【本院观点】对于李建华与彭海军之间的关系，2018年5月29日原一审法院庭审中李建华陈述“你（李建华）帮我（彭海军）做事，我（彭海军）不会让你（李建华）吃亏"；彭海军陈述“就是叫他（李建华）来做工，因为是同学，所以让他（李建华）做管理"；彭海军在二审答辩状中认为“由李建华代为对本案项目进行管理"，并且在本次二审庭审中彭海军亦陈述“彭海军与李建华是同学，是雇佣李建华来帮忙管理工程"。

如前所述，李建华与彭海军之间为劳务雇佣关系，李建华有权要求彭海军支付其在受雇管理项目工程期间的劳务工资以及为管理工程需要而代彭海军垫付的工人工资和其他款项。

中国中化集团公司2013年度拟接收毕业生情况公示

本科
北京外国语大学
89
中化国际招标有限责任公司崔俊雄男
本科
首都经济贸易大学
90
中化国际招标有限责任公司杨春毓男硕士研究生
清华大学
91
中化国际招标有限责任公司郭晓钊男硕士研究生
北京大学
92
中化国际招标有限责任公司王政媛女
本科
中央财经大学
93
中化国际招标有限责任公司
陈罡男硕士研究生
北京化工大学
94
中化国际招标有限责任公司俞家骅男硕士研究生
北方工业大学
95
中化国际招标有限责任公司
康宁男
本科
延边大学
96
北京凯晨置业有限公司
何佳女
本科
北京建筑大学
97
北京凯晨置业有限公司
关庆飞男硕士研究生
首都师范大学
98
北京凯晨置业有限公司
李凡女硕士研究生
北京交通大学
99
北京凯晨置业有限公司
城市规划
131
北京凯晨置业有限公司
李腾男硕士研究生中国矿业大学（北京）
安全工程
132
北京凯晨置业有限公司
王恂男硕士研究生
北京大学
地理学
133
北京凯晨置业有限公司
罗磊男硕士研究生
南开大学
管理科学与工程
134
北京凯晨置业有限公司
年超男硕士研究生
北京林业大学
行政管理
135 北京怡生园国际会议中心有限公司王天骄女硕士研究生中国地质大学（北京）
厦门大学中国人民大学
社会学经济学类其他专业
中国中化股份有限公司

基于生态需水的黄河中游水平衡分析--以沁河流域为例

基于生态需水的黄河中游水平衡分析--以沁河流域为例刘义;史佩东;刘淼;许凯然;张宁;姜鹏【期刊名称】《水文地质工程地质》【年(卷),期】2024(51)1【摘要】为推动黄河流域生态保护及高质量发展,解决地表水资源供需矛盾,亟需开展水平衡分析,建立水平衡模型,为水资源合理分配提供参考依据。

作为黄河的重要支流,沁河流域位于黄河中游末端,由于近年来上游调水政策的施行以及流域内生活、生产用水的增加,用水矛盾突出,出现了河道断流、入黄水量偏枯等问题。

为保障河流生态环境健康,优化引沁入汾跨流域提水工程实施后的流域水资源供需平衡,以2021年为现状年,在“自然-人工”二元水循环研究理论的指导下,运用水平衡分析理论与方法,以河道内生态需水为保障基础,对沁河流域水资源需求、供水能力与供需平衡进行了分析与讨论。

结果表明:(1)沁河流域水资源供给和需求在空间分布上具有分异性,上游山西省境内各河段河道内均能够保障适宜的生态需水量,下游河南省境内,仅可满足最小生态需水量;(2)沁河流域可供给水资源总量为10.04×10^(8)m^(3),河道外生产、生活及生态用水总量为8.89×10^(8)m^(3),剩余河道内水量仅为1.15×10^(8)m^(3),仅可满足河流最小生态需水;(3)推算至2030年,流域内工业生产及生活取用地表水量将达到6.98×10^(8)m^(3),河道外用水总量将达到9.81×10^(8)m^(3),剩余水量无法满足最小生态需水。

建议采用降低工业用水量、提高农田灌溉用水利用率、推广使用高效节水技术,进一步增强水资源的有效利用,改善流域生态环境。

研究结果可为合理规划沁河流域水资源调度提供参考,也可为黄河中游水平衡分析提供范例。

【总页数】11页(P30-40)【作者】刘义;史佩东;刘淼;许凯然;张宁;姜鹏【作者单位】中国地质调查局廊坊自然资源综合调查中心;河北省高校生态环境地质应用技术研发中心;中国地质大学(北京)工程技术学院;中国地质调查局自然资源综合调查指挥中心【正文语种】中文【中图分类】P641.8【相关文献】1.基于水质、水量和生态需水量的水资源联合评价——以挠力河干流域为例2.基于层次分析法的干旱内陆河流域生态环境需水评价——以新疆台兰河流域为例3.基于GIS的黄河中游河龙区间流域──重力侵蚀相对强度空间分布4.黄河中游沁河流域环境敏感性分析评价5.地貌格局与流域侵蚀产沙过程关系定量分析——以黄河中游河龙区间为例因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

非标准姿势的上装原型设计

确地测量．它不仅能用来研究静态时皮肤的形变，提供了一种了解曲线形变和三维人体体型变化的方还
法．
石膏法创造了一种新的研究方法．过它，通服装某一部位的放松量被从其他部分分离出来，于上装对而言，主要注意肩部，因为它很容易滑动．通过石膏法对一定数量姿态的不同动作程度的分析，可以得到在不同姿势下，袖子连接处适体的服装原型．这将会引起以结构测量和人体上肢运动为基础的结构设计系统的发展．另外，种方法，过调查研究之后，这经也适合于不同姿势下的其他部位的运动．通过使用这种方法，
（．安工程大学服装与艺术设计学院，西西安１西陕７０４；２曼彻斯特大学材料学院纺织系，彻斯特，国）１０８．曼英
摘要：服装运动功能性和适体性主要取决于加入服装中的放松量，由普通梭织面料做出的服装即与人体之间的空隙量．了研究上装中对不同运动需求的放松量设计，文采用石膏法测量在标为本
第２卷第１（８１期总３期）
文章编号：６１８０２０）１０３ —６１７～５Ｘ（０７０ —０７０
２００７年２月
Ｖｏ．１Ｎｏ１Ｓｍ．３１２，．（ｕＮｏ８）
非标准姿势的上装原型设计
刘驰ＫｅｎｎＲｃａｄ，苗凤香，ｎｏｉｈｒ

中南大学校长在2022年毕业典礼上励志演讲稿

中南大学校长在2022年毕业典礼上励志演讲稿亲爱的同学们：今天，我们在这里隆重举行毕业典礼，庆祝2022届12350名本科生、硕士生和博士生学成毕业。

你们将要在人生的大舞台上演出更加精美和壮阔的续集，开始你们更加绚丽多姿的五彩人生。

我代表学校向你们致以最热烈的祝贺!向所有的教职员工和家长表示最诚挚的感谢!同学们，你们马上就要离开了，但我真的是非常舍不得你们，非常非常地爱你们。

言语有尽，我对你们的爱无尽。

今天的主题，我起了个名字叫“在一起〞，就是不管你们走到国内还是国外、飞到天涯还是海角，不管你们是有个性还是有脾气、帅气还是不帅气、美丽还是不美丽、年轻还是不年轻，我虽然不能和你们一起慢慢变老，但学校永远和你们在一起，我的心永远和你们在一起，中南大学“志存高远、敢为人先、向善求真、唯美有容〞的精神永远和你们在一起!同学们，读书不觉爱己深，一寸光阴一份情。

你们在中南大学的几年，是中南大学快速开展的几年。

2022年的11月，我从伯云老校长手里接过了校长的接力棒。

虽然我一直尽全力向伯云校长学习，想为你们的成长做出更多的努力、创造更好的条件、建设更好的环境。

但是，由于我的水平和能力所限，还是让你们吃了不少苦，受了不少罪!让你们有过挫折，有过彷徨，甚至可能有过失望!你们哭过、笑过、爱过、痛过。

你们对中南大学可能不仅仅有爱，而且也有不满，还有期望。

例如，尽管长沙的夏天酷热、冬天奇寒，但是学校直到今年5月，一直没有给你们装上空调。

你们在酷热的深夜，一起光着膀子，躺在宿舍楼顶对抗长沙火一般高温的照片，你们的董小姐版“张校长，装空调〞的呼唤，不仅让我热泪盈眶，也让我无比汗颜!在中南的几年时间里，你们的宿舍屡次搬迁，不仅不方便，而且有些宿舍还管理不善，经常有小偷光临，给你们的平安和财产带来了不必要的隐患和损失。

即使是学校花了大力气整治的食堂，无论是铁道校区还是湘雅，你们对品种、质量和把戏还是有不少的微辞和抱怨……所有这些，都是我和我的同事们应该向你们表示歉意，说声“对不起〞和需要继续努力改良的。

黑龙江各市书记市长

199804牡丹江市长鹤岗市长鹤岗市委书记绥化市委书记哈尔滨市长鸡西市长佳木斯市长鹤岗市委书记哈尔滨市委书记大庆市委书记黑河市长黑河市委书记黑河市长鹤岗市长黑河市委书记鹤岗市长鹤岗市长鹤岗市委书记双鸭山市长牡丹江市委书记哈尔滨市长黑河市长七台河市委书记鸡西市委书记七台河市委书记牡丹江市长牡丹江市委书记佳木斯市委书记哈尔滨市委书记牡丹江市长七台河市长黑河市长黑河市长牡丹江市长牡丹江市长牡丹江市委书记大庆市长大庆市委书记黑河市长黑河市长哈尔滨市长双鸭山市长伊春市长七台河市长七台河市委书记哈尔滨市委书记哈尔滨市长双鸭山市长双鸭山市委书记黑河市委书记齐齐哈尔市委书记黑河市委书记黑河市委书记绥化市长绥化市长双鸭山市委书记哈尔滨市委书记大庆市长齐齐哈尔市长齐齐哈尔市长齐齐哈尔市委书记大兴安岭专员大兴安岭地委书记伊春市委书记牡丹江市委书记牡丹江市长齐齐哈尔市委书记大兴安岭专员伊春市长伊春市委书记鸡西市委书记七台河市长鹤岗市委书记牡丹江市长牡丹江市委书记黑河市长七台河市委书记佳木斯市委书记绥化市长绥化市长大兴安岭地委书记大庆市长大庆市长双鸭山市长伊春市长伊春市委书记鸡西市长哈尔滨市长哈尔滨市委书记哈尔滨市长鸡西市长佳木斯市长哈尔滨市委书记哈尔滨市长大兴安岭专员大兴安岭地委书记大庆市长双鸭山市长大庆市委书记鸡西市长鸡西市长鸡西市委书记佳木斯市委书记哈尔滨市长双鸭山市委书记大庆市委书记牡丹江市委书记哈尔滨市长大庆市长黑河市委书记齐齐哈尔市委书记绥化市长哈尔滨市长伊春市长伊春市委书记绥化市长绥化市长哈尔滨市长黑河市委书记佳木斯市长佳木斯市委书记七台河市长七台河市长伊春市委书记七台河市长伊春市长伊春市长伊春市委书记黑河市委书记哈尔滨市委书记哈尔滨市长牡丹江市委书记哈尔滨市委书记伊春市长伊春市委书记双鸭山市长双鸭山市委书记齐齐哈尔市长哈尔滨市长哈尔滨市委书记佳木斯市长佳木斯市长鸡西市长鸡西市委书记七台河市长佳木斯市长佳木斯市委书记牡丹江市委书记黑河市长七台河市委书记大兴安岭专员大兴安岭地委书记牡丹江市长哈尔滨市长牡丹江市长牡丹江市委书记牡丹江市委书记哈尔滨市长哈尔滨市委书记哈尔滨市长七台河市长七台河市长鸡西市委书记大兴安岭专员鹤岗市长大庆市长鸡西市委书记双鸭山市委书记牡丹江市长牡丹江市长牡丹江市委书记绥化市委书记哈尔滨市长七台河市长七台河市委书记牡丹江市长牡丹江市长黑河市委书记黑河市委书记鸡西市委书记齐齐哈尔市长佳木斯市长齐齐哈尔市长大庆

从绿色建筑、被动式建筑迈向零碳建筑的思考

2021NO.0引言建筑碳排放量是指二氧化碳排放量袁二氧化碳排放量具体是指二氧化碳当量渊t C O 2e 冤[1]袁是在辐射强度上与某种温室气体质量相当的二氧化碳的量遥二氧化碳排放量包括二氧化碳尧甲烷尧氧化亚氮尧氢氟碳化物尧全氟化碳尧六氟化硫等温室气体的排放量遥为更好地应对气候变化袁聚焦绿色低碳发展袁控制全球二氧化碳排放量是唯一选择遥习近平总书记在第七十五届联合国大会一般性辩论上宣布院中国将提高国家自主贡献力度袁采取更加有力的政策和措施袁二氧化碳排放力争取于2030年前达到峰值袁努力争取2060年前实现碳中和遥2021年中央经济工作会议强调将野碳达峰尧碳中和冶作为本年度的八项重点任务之一[2]遥叶中国建筑节能年度发展研究报告2020曳指出我国建筑碳排放总量整体呈现出持续增长趋势袁其中2019年建筑业狭义碳排放总量占我国建筑碳排放总量的21%袁广义碳排放量占到40%以上遥建筑业是我国野碳达峰尧碳中和冶的主战场遥未来袁建筑业如何实现野碳达峰尧碳中和冶袁是摆在建筑从业者面前的重要课题遥1技术关联性低碳化发展的概念已经逐渐深入各行各业袁建筑业在节能减排的大环境下也开始逐渐探索新的绿色化建造方式遥近十多年来袁节能建筑尧绿色建筑尧装配式建筑尧健康建筑尧被动式建筑尧百年建筑尧低碳建筑尧零碳建筑等新概念尧新技术尧新产品层出不穷尧百花齐放袁逐步扎根生长遥围绕这些建筑理念袁行业内建立了一系列相应的体系遥但是上述建筑概念所对应的技术策略和技术体系存在一定的重叠袁从业人员难以有效分辨节能尧绿色尧低碳尧零碳之间的逻辑关系袁存在较多的困惑遥绿色建筑尧被动式建筑尧零碳建筑作为建筑领域得到较大规模推广应用的建筑野贵族冶袁自诞生以来袁就是相辅相成尧相互补充尧相互促进的关系袁也是不同发展阶段的产物渊图1冤遥中图分类号院TU 201.5文献标识码院A 文章编号院1671-9107渊2021冤10-0019-04引文检索院董恒瑞袁刘军袁秦砚瑶袁等.从绿色建筑尧被动式建筑迈向零碳建筑的思考[J ].重庆建筑袁2021渊10冤院19-22.从绿色建筑尧被动式建筑迈向零碳建筑的思考董恒瑞袁刘军袁秦砚瑶袁吴思睿袁罗干渊中煤科工重庆设计研究院渊集团冤有限公司绿色建筑设计研究院袁重庆400042冤摘要院零碳建筑是建筑领域落实野碳达峰尧碳中和冶目标的重要内容遥该文基于绿色建筑和被动式建筑的项目研发经验袁从绿色建筑尧被动式建筑的理念及技术体系出发袁探究零碳建筑的特征和内在发展逻辑袁为绿色建筑和被动式建筑向零碳建筑发展提供参考遥关键词院绿色建筑曰被动式建筑曰零碳建筑曰建筑节能曰野碳达峰尧碳中和冶曰碳汇收稿日期院2021-06-14作者简介院董恒瑞渊1988要冤袁男袁河南商丘人袁本科袁工程师袁主要研究方向为绿色建筑尧建筑节能尧建筑产业化尧绿色建材的设计咨询与技术研究遥图1从绿色低碳迈向零碳[3]目标过程碳排放强度下降碳排放总量下降零碳理念深入人心碳排放为零碳排放接近于零低碳发展近零碳排放零碳排放doi 院10.3969辕j .i ssn.1671-9107.2021.10.19Thought s on St eps f r om G r een Bui l di ng and Pas si ve Bui l di ng t o Zer o-car bon Bui l di ngsD ong H engr ui ,Li u J un,Q i n Y anyao,W u Si r ui ,Luo G anA bst r act :The z er o-car bon bui l di ng i s one oft he goal s t o i m 鄄pl em ent "car bon peak and car bon neut r al i z at i on"i n t he con 鄄s t r uct i on f i el d.Bas ed on t he pr oj ect r es ear ch and devel op 鄄m ent exper i ence of gr een bui l di ngs and pas s i ve bui l di ngs ,t hi s paper s t ar t ed f r om t he concept s and t echni cal s ys t em s of t he t wo t ype of bui l di ngs,and expl or ed t he char act er i s t i cs and i nt er nal devel opm ent l ogi c of z er o-car bon bui l di ngs ,i n hope of pr ovi di ng r ef er ence f or conver t i ng t hem i nt o z er o -car bon bui l di ngs .K eyw or ds:gr een bui l di ng;pas s i ve bui l di ng;z er o -car bon bui l di ng;bui l di ng ener gy cons er vat i on;"car bon peak,car bon neut r al i z at i on";car bon s i nk第20卷总第期1.1绿色建筑绿色建筑的概念最早是由意大利建筑师鲍罗窑索雷里于1969年提出的袁随着节能生态技术的进步袁并经过不断丰富和完善袁1992年在野联合国环境与发展大会冶上袁第一次正式提出野绿色建筑冶的概念袁绿色建筑内涵得以不断丰富完善袁逐步将环境尧健康尧人文等理念纳入绿色建筑技术体系遥在此基础上袁新型节能形式尧新兴产品技术等野以人为本冶的技术策略不断完善遥绿色建筑的理念被引入我国后袁国家及各省市地方层面相继颁布了若干纲要尧导则和法规袁推动绿色建筑的发展遥经过20余年发展袁我国绿色建筑已经从野浅绿冶走向野深绿冶遥特别是2019年袁我国对绿色建筑进行全新阐释袁在野四节一环保冶基础上强调野健康尧适用尧高效尧和谐尧高质量尧人文冶袁关注建筑本身的绿色性能和建筑运营的健康性能袁强调人们的可感知性遥绿色建筑在一定范围内体现了建筑的低碳化袁如节能设计要求尧绿色设计要求尧健康设计理念等遥1.2被动式建筑被动式建筑又称被动房袁根据能耗指标可将其划分为超低能耗建筑尧近零能耗建筑尧零能耗建筑[4]遥作为舶来品袁受我国国情尧气候条件尧技术标准体系等因素影响袁被动式建筑逐步中国化遥截至2020年6月袁我国共有10个省及自治区和17个城市共出台47项政策袁给出了被动式建筑项目明确的发展目标或激励措施[2]遥从我国相关标准规范可知袁被动式建筑是建筑节能高标准设计的实践袁通过限定建筑围护系统和设备参数袁对建筑本体和建筑设备[5]进行限定式的节能设计袁实现建筑使用过程的低碳化尧零碳化袁或者说建筑运营阶段的野低碳尧零碳冶遥1.3零碳建筑2019年袁我国建筑行业运行碳排放渊含直接碳排放和间接碳排放冤约为21亿吨二氧化碳袁占全国总量的20%左右[6]遥从发达国家的建筑业碳排放量趋势看袁我国建筑业碳排放量在一定时间内仍将保持较快增长袁零碳建筑便是在此背景下提出的遥零碳建筑又称净零碳建筑渊Zer o Car bon B ui l di ngs 袁ZCB 冤袁由世界绿色建筑委员会提出[7]遥从定性上讲袁零碳建筑是在建筑全寿命期内袁通过减少碳排放和增加碳汇实现建筑的零碳排放遥定量上看袁零碳建筑是充分利用建筑本体节能措施和可再生能源资源袁使可再生能源二氧化碳年减碳量大于等于建筑全年二氧化碳排放量的建筑袁其建筑能耗达到现行国家标准叶近零能耗建筑技术标准曳渊G B/T 51350冤有关规定的水准遥零碳建筑的主要特征院一是强调建筑围护系统的节能指标袁二是强调可再生能源的利用袁三是建造和运营阶段的零碳化袁四是建筑运营阶段碳排放量占建筑全寿命期碳排放总量的80%以上袁这其中既涵盖野物的行为冶袁又包括野人的行为冶袁既体现了绿色建筑的野绿色性能冶袁也体现了被动式建筑的野节能性能冶遥真正的可感知和获得感袁是零碳建筑的核心遥部分学者认为零碳建筑很难实现建筑全寿命期内的零碳排放袁零碳排放控制主要集中于建筑运营阶段遥笔者认为要实现建筑野双碳冶目标袁应从规划设计阶段植入零碳理念袁并贯穿建筑全寿命期袁做到规划统筹袁因此仍需从全寿命期角度综合分析实现建筑零碳的途径遥目前袁我国零碳建筑相关国家标准正在编制中袁其中重庆尧北京尧天津等地已发布实施或正在编制与零碳建筑相关的标准规范袁如重庆市叶低碳建筑评价标准曳渊D BJ 50/T-139要2012冤尧北京市叶低碳社区评价技术导则曳渊D B 11/T 1371要2016冤尧北京市叶低碳小城镇评价技术导则曳渊D B11/T 1426要2017冤尧天津市环境科学学会叶零碳建筑认定和评价指南曳渊T/C A SE00要2021冤尧国家发改委叶低碳社区试点建设指南曳等袁为零碳建筑的发展提供了一定的数据基础和项目经验遥2从绿色建筑到零碳建筑绿色建筑在一定程度上具备零碳建筑的特征袁是零碳建筑的重要载体[8]袁同时袁零碳建筑应该充分汲取绿色建筑中健康尧环保尧舒适等理念遥我国绿色建筑指标准体系由安全耐久尧健康舒适尧生活便利尧资源节约尧环境宜居5类指标组成袁可以分别对应于建筑中的资源系统尧能源系统尧交通系统和运维碳汇渊图2冤遥2.1资源系统之零碳化安全耐久主要为材料尧部品部件的耐久性和耐用性袁从建筑零碳角度分析袁建筑材料的耐用性降低了建筑材料的全寿命期的总用量袁从而在一定程度上降低了建筑的碳排放量遥建筑材料生产和运输过程中的碳排放分别被划为工业部门和交通部门袁单纯生产阶段碳排放量对建筑业而言并不是其核算边界袁故只需关注建造阶段的碳排放量即可遥健康舒适指标中有外围护系统产品渊建筑砌块尧砖尧板材尧保温材料冤性能尧装饰装修材料要求等遥按照建筑物化阶段碳排放量计算方法可知袁上述材料产品的使用袁直接计入建筑碳排放量袁同时产品类型决定了碳排放因子袁并直接影响碳排放量大小遥资源节约中野节能尧节材尧节水冶与建筑碳排放直接相关袁资源野利用量尧利用率冶大小袁代表了建筑碳排放的大小袁涉及建筑结构规则性尧造型要素尧建材运距尧建材等级尧绿色建材使用量尧暖通设备能效指标尧可再生能源利用比例等遥图2绿色建筑指标与零碳建筑各系统对应关系碳汇运维系统能源系统交通系统资源减碳绿色便利生活舒适健康节约资源耐久安全宜居环境2162021NO.图3立体绿色碳汇表1被动式建筑和零碳建筑对比2.2能源系统之零碳化绿色建筑中健康舒适指标包括声尧光尧热尧空气品质以及围护系统热工性能袁其中光环境尧热湿环境尧设施设备的节能性能均与建筑碳排放直接相关袁如采用LE D 照明产品尧供暖空调系统遥2.3交通系统之碳化叶祖达[9]认为袁绿色建筑内涵之一野生活便利冶中的出行类指标属于交通板块碳排放范畴遥从绿色建筑到零碳建筑的指标要求袁除了规定野距离尧无障碍尧服务功能尧绿地冶外袁还需重点根据不同出行方式尧比例尧距离等进行碳排放量计算遥2.4碳汇效应碳汇是在规定的建筑物项目范围内袁绿化植被从空气中吸收并存储的二氧化碳量[10]遥建筑项目周边微型生态系统是碳循环的重要一环袁碳汇效应有助于建筑物全生命周期碳排放量的精准测量袁也是最经济的可持续方法之一遥绿色建筑中环境宜居指标主要体现建筑野以人为本冶和野因地制宜冶袁其中场地生态修复尧绿地率尧低影响开发设施尧项目场地风环境尧屋顶绿化尧立体绿化尧复层绿化渊图3冤等在一定程度上具有碳汇效应袁体现了零碳排放和自然碳汇的理念遥3从被动式建筑到零碳建筑被动式建筑是实现建筑近零能耗目标的一种技术体系袁依靠建筑本体的绿色节能构造设计[11]袁使建筑达到舒适的室内温度袁满足冬暖夏凉的要求袁无需再单独安装供暖设施遥3.1建筑节能的更高表现形式被动式建筑以建筑能耗值为导向[12]进行性能化绿色低碳设计袁其主要技术措施为保温隔热性能更高的围护结构尧保温隔热性能和气密性能更高的外窗尧无热桥的设计与施工遥零碳建筑中的围护系统和设备能耗也应是控制性指标袁除强调建筑低能耗外袁还包括建造过程及运营全过程的零碳化袁如气改电尧拆建变改造等袁因此笔者认为零碳建筑在节能减排上比被动式建筑更胜一筹袁是更广义上的节能遥3.2节流式减碳被动式建筑强调建筑能耗的节流袁即通过被动式节能技术降低建筑使用阶段能耗袁锁住建筑内在环境温度袁减少能量的流失袁从而减轻对气候的负担袁这也是被动式建筑将建筑气密性作为控制性指标的原因之一遥被动式建筑根据建筑用能与可再生能源产能渊绿色电力冤的差值袁可以实现近零能耗尧零能耗甚至提供产能房袁这些均是从节流的角度去评判建筑的耗能量或者碳排放量袁且没有过多地考虑建造环节对资源能源的消耗遥3.3开源式减碳与被动式建筑相比袁零碳建筑强调建筑能耗的开源遥一是在建筑建造阶段袁虽然实现建筑全阶段零碳是比较困难的[13]袁但仍需考虑建材使用和建造过程的碳排放量袁有侧重地选用绿色建材尧低碳建材和低碳设备尧工艺等曰二是在建筑运行阶段袁充分利用可再生能源技术调整建筑用能结构袁降低传统电能消耗占比曰三是对建筑使用寿命尧建材耐久性尧部品更换周期等提出要求曰四是拆除阶段实现低碳化尧利废化尧资源化尧环保化遥3.4人的舒适尧物的减碳从被动式建筑迈向零碳建筑袁除上述理念侧重点不同外袁被动式建筑还特别注重人的舒适性袁被动设计要全面提升室内环境质量和人的健康素养遥零碳建筑则特别注重建材物化阶段的碳排放量尧施工运输阶段的碳排放量袁以及降低建筑使用阶段对电网电力负荷消耗占比袁增加可再生能源等绿色电力负荷消耗占比袁如全球二氧化碳排放量的35%以上来自建筑物在照明尧电力尧供第20卷总第期图4自然通风图5建筑光伏一体化暖和制冷方面所消耗的能源遥4零碳建筑技术策略4.1建筑本体技术渊1冤进行与本地区气候环境相适应的建筑设计袁控制建筑体型系数袁减小建筑外围护面积袁采用建筑自遮阳尧改善空间布局等方式袁提高建筑运营用能效率遥充分利用自然风袁基于烟囱效应尧室内外风压等实现室内外空气循环渊图4冤遥渊2冤提高建筑节能率遥采用高保温性能的材料和门窗型材袁降低建筑外墙尧屋面尧门窗及结构热桥的传热系数袁进行关键节点的节能设计遥渊3冤各专业之间的协同设计遥各专业间集成设计袁保障设备尧管线与建筑本体之间合理接触袁提高建筑空间气密性袁提高资源能源的合理野搭配冶遥4.2建筑微生态技术通过屋面绿化尧墙体绿化尧景观复层绿化等措施袁打造建筑微生态袁提高建筑碳汇袁降低建筑周边环境的热岛效应遥通过低影响开发设施袁提高建筑微生态雨水涵养量和雨水回收量袁提高建筑微生态野自然冶水平遥4.3设施设备技术采用高效节能设备袁提高建筑用电效率遥充分利用太阳能尧地热源尧江水源等可再生能源袁形成微型电网袁实现建筑能源需求的自给自足袁降低煤尧石油等传统化石燃料的消耗渊图5冤遥充分利用智慧化手段袁打造建筑野管家冶控制系统袁合理调节建筑室内温度尧湿度尧亮度袁进一步降低能耗尧节约资源遥5结语零碳建筑是建筑业实现野3060冶目标的重要一环遥我国零碳建筑正处于探索研究和快速发展阶段袁顶层设计尧标准体系尧产业发展等正在加速形成遥基于此行业背景袁本文对绿色建筑尧被动式建筑尧零碳建筑进行对比袁辨析三者之间的相关关系袁以发现其中的逻辑曰结合国内外零碳建筑案例袁总结提炼了零碳建筑的技术策略袁以便后续有的放矢地开展有关工作袁为零碳建筑的推广应用和技术体系建立提供初步理论支撑和实践经验遥零碳建筑在我国尚处于起步阶段袁有关理论研究尧案例尧技术尧产品等较为匮乏遥零碳建筑的发展还需充分融合顶层设计尧生态城区尧低碳城市尧碳核算尧碳足迹尧碳汇尧碳金融尧碳交易等袁进一步厘清零碳建筑的计算边界尧指标要求和体系化发展要求遥参考文献院[1]重庆市建设项目环境影响评价技术指南要要要碳排放评价渊试行冤[Z].2021.[2]周杰.碳中和目标下零碳建筑标准体系研究[J].中国质量与标准导报袁2021渊3冤院21-23.[3]卞世敏袁张春雁袁窦真兰袁等.上海世博某片区零碳社区建设的关键技术探讨[J 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保山河无恙_护家国平安——致敬戍边军人

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【CN209617019U】翻转式二级踏步装置【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)实用新型专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201920224818.X(22)申请日 2019.02.22(73)专利权人陕西重型汽车有限公司地址 710200 陕西省西安市经济技术开发区泾渭工业园(72)发明人杨志刚　赵坤　刘建峰　石莉娜　陈泽炎　柳鹏　(74)专利代理机构中国商标专利事务所有限公司 11234代理人宋义兴　吴翔晖(51)Int.Cl.B60R 3/00(2006.01)B60R 19/48(2006.01)(54)实用新型名称翻转式二级踏步装置(57)摘要本实用新型涉及一种翻转式二级踏步装置，其特征在于，包括踏步本体(1)、连接支撑板、保险杠支架(3)和卡合装置，踏步本体(1)具有翻转轴(11)，其中，连接支撑板用于将踏步本体(1)连接于保险杠支架(3)上；踏步本体(1)能够绕翻转轴(11)旋转，从而实现所述踏步本体的展开和关闭，所述踏步本体处于展开状态时形成台阶供踩踏，处于关闭状态时嵌入保险杠空间内；卡合装置用于在所述踏步本体(1)处于关闭状态时对所述踏步本体(1)进行限位并固定。

权利要求书1页说明书3页附图3页CN 209617019 U 2019.11.12C N 209617019U权　利　要　求　书1/1页CN 209617019 U1.一种翻转式二级踏步装置，其特征在于，包括踏步本体(1)、连接支撑板、保险杠支架(3)和卡合装置，踏步本体(1)具有翻转轴(11)，其中，连接支撑板用于将踏步本体(1)连接于保险杠支架(3)上；踏步本体(1)能够绕翻转轴(11)旋转，从而实现所述踏步本体的展开和关闭，所述踏步本体处于展开状态时形成台阶供踩踏，处于关闭状态时嵌入保险杠空间内；卡合装置用于在所述踏步本体(1)处于关闭状态时对所述踏步本体(1)进行限位并固定。

2.根据权利要求1所述的一种翻转式二级踏步装置，其特征在于，所述踏步本体(1)还包括限位块(12)，该限位块(12)与踏步本体(1)铸为一体，位于踏步本体(1)的后端，踏步本体(1)处于展开状态时，该限位块(12)与保险杠支架(3)的下端面(31)进行平面接触而实现踏步本体(1)处于展开状态时的限位。

水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选

江苏农业学报（ＪｉａｎｇｓｕＪ．ｏｆＡｇｒ．Ｓｃｉ．），２０１９，３５（４）：７５３７６３ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｓｎｙｘｂ．ｃｏｍ邹㊀禹，刘园园，钱宝云，等．水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质的筛选［Ｊ］．江苏农业学报，２０１９，３５（４）：７５３⁃７６３．ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００⁃４４４０．２０１９．０４．００１水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质的筛选邹㊀禹１，㊀刘园园２，㊀钱宝云１，㊀占新春１，㊀郑乐娅１，㊀张㊀炜２，㊀张培江１（１．安徽省农业科学院水稻研究所，安徽合肥２１００３１；２．南京农业大学生命科学学院，江苏南京２１００９５）收稿日期：２０１８⁃１０⁃２９基金项目：国家自然科学基金项目（３１７０１４０９）；安徽省重点研究和开发计划项目（１８０４ａ０７０２０１１１㊁１８０４ｈ０７０２０１５６）；安徽省自然科学基金项目（１４０８０８５ＭＫＬ６３）；安徽省农业科学院院长青年创新基金（１７Ｂ０１０１）作者简介：邹㊀禹（１９８６⁃），男，安徽安庆人，博士，助理研究员，主要从事水稻基因功能解析及分子设计育种研究㊂（Ｔｅｌ）０５５１⁃６２１６０１５１；（Ｅ⁃ｍａｉｌ）ｚｏｕｙｕ０３０８＠１２６．ｃｏｍ㊂刘园园为共同第一作者㊂通讯作者：张培江，（Ｅ⁃ｍａｉｌ）ｐｅｉｊｉａｎｇｚｈａｎｇ＠１２６．ｃｏｍ；张㊀炜，（Ｅ⁃ｍａｉｌ）ｗｚｈａｎｇ＠ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ㊀㊀摘要：㊀为了挖掘水稻ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质，阐明ＯｓＲＰＫ１参与高盐胁迫的分子机制，本研究利用ＳＭＡＲＴ技术，构建水稻高盐胁迫下根尖的酵母双杂交文库㊂ＰＣＲ扩增获得ＯｓＲＰＫ１基因编码胞内区域的碱基序列，构建诱饵表达载体（ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ），检测诱饵表达载体在酵母中的毒性和自激活活性，筛选ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白，进一步分析高盐胁迫下候选基因的表达模式㊂结果表明，构建的ｃＤＮＡ文库库容量为１．１１ˑ１０７ＣＦＵ，文库重组率为９６％，文库插入片段多态性较好㊂成功构建了诱饵表达载体（ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ），经检测诱饵表达载体无毒性，无自激活活性㊂诱饵表达载体与ｃＤＮＡ文库进行双杂交筛选，经测序和比对分析获得了１１个重要的候选基因，检测候选基因在高盐处理下的表达情况，其中８个候选基因受高盐诱导表达，２个候选基因受高盐胁迫抑制表达，１个候选基因受高盐胁迫瞬时诱导表达后表达量又受到显著抑制㊂关键词：㊀水稻；ＯｓＲＰＫ１；高盐胁迫；酵母双杂交ｃＤＮＡ文库中图分类号：㊀Ｑ９４３．２；Ｓ５１１㊀㊀㊀文献标识码：㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号：㊀１０００⁃４４４０（２０１９）０４⁃０７５３⁃１１Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｙｅａｓｔｔｗｏ⁃ｈｙｂｒｉｄｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆｒｉｃｅｕｎｄｅｒｈｉｇｈｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｏｆＯｓＲＰＫ１ＺＯＵＹｕ１，㊀ＬＩＵＹｕａｎ⁃ｙｕａｎ２，㊀ＱＩＡＮＢａｏ⁃ｙｕｎ１，㊀ＺＨＡＮＸｉｎ⁃ｃｈｕｎ１，㊀ＺＨＥＮＧＬｅ⁃ｙａ１，㊀ＺＨＡＮＧＷｅｉ２，㊀ＺＨＡＮＧＰｅｉ⁃ｊｉａｎｇ１（１．ＲｉｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＡｎｈｕｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｆｅｉ２１００３１，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ）㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ：㊀ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｏｆＯｓＲＰＫ１ｉｎｒｉｃｅ，ａｎｄｄｅｓｃｒｉｂｅｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＯｓＲＰＫ１ｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｈｉｇｈ⁃ｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓ，ａｙｅａｓｔｔｗｏ⁃ｈｙｂｒｉｄｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆｒｉｃｅｒｏｏｔｔｉｐｕｎｄｅｒｈｉｇｈ⁃ｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂｙｓｗｉｔｃｈｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍａｔ５ᶄｅｎｄｏｆｔｈｅＲＮＡｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ（ＳＭＡＲＴ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．ＴｈｅｂａｓｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＯｓＲＰＫ１ｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｇｉｏｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｂａｉｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ（ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ）ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅｎｔｈｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｓｅｌｆ⁃ａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤｉｎｙｅａｓｔｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＴｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆＯｓＲＰＫ１ｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔ⁃ｔｅｒｎｓｏｆｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｕｎｄｅｒｈｉｇｈ⁃ｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｔｈｅｃＤＮＡｌｉ⁃ｂｒａｒｙｗａｓ１．１１ˑ１０７ＣＦＵ，ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｒａｔｅｗａｓ９６％，ａｎｄｔｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｏｆｔｈｅｃＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓｗａｓｇｏｏｄ．ＴｈｅｂａｉｔｖｅｃｔｏｒｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｓｕｃ⁃３５７ｃｅｓｓｆｕｌｌｙａｎｄｔｅｓｔｅｄｔｏｂｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｎｏｓｅｌｆ⁃ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＴｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄｂｙｂａｉｔｖｅｃｔｏｒ，ａｎｄ１１ｉｍｐｏｒｔａｎｔｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄｂｙｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄａｌｉｇｎｍｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓ．Ｕｎｄｅｒｈｉｇｈ⁃ｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓ，ｅｉｇｈｔｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｉｎｖｅｒｓｅｌｙ，ｔｗｏｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｗｅｒｅｄｏｗｎ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｏｎｅｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｗａｓｕｐ⁃ｒｅｇｕｌａｔｅｄｔｒａｎｓｉｅｎｔ⁃ｌｙ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：㊀ｒｉｃｅ；ＯｓＲＰＫ１；ｈｉｇｈｓａｌｉｎｉｔｙｓｔｒｅｓｓ；ｙｅａｓｔｔｗｏｈｙｂｒｉｄｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ㊀㊀土壤盐碱化是限制农作物产量的重要逆境因子㊂据联合国粮食及农业组织统计，目前世界上约９．５６ˑ１０８ｈｍ２陆地受到盐渍化的影响，占陆地总面积的６０％以上，其中５８０％发生在灌溉农业区，１９５％的灌溉土壤受到盐渍化威胁，而且这个比例还在增加［１］㊂中国约有３００ˑ１０７ｈｍ２以上的土地属于盐碱地，其中８００ˑ１０６ｈｍ２是农田，占全国耕地面积的７０％㊂高盐主要通过引发离子胁迫㊁渗透胁迫和氧化胁迫对植物的生长发育造成损伤，而植物在长期的进化过程中为了适应盐胁迫，建立了耐盐或将盐分排出细胞外的特殊分子机制［２⁃５］㊂随着分子生物学㊁分子遗传学及各种相关研究技术的发展，高等植物的耐盐机制和信号转导途径已成为研究的热点，进一步深入研究植物关于盐胁迫响应的信号传递分子机制，对揭示植物耐盐机理，提高植物耐盐性，科学合理运用闲置盐碱地具有重要意义㊂高盐造成的细胞离子胁迫主要通过盐超敏感（ＳＯＳ）信号途径进行调节，ＳＯＳ信号传导途径由ＳＯＳ１㊁ＳＯＳ２（ＣＩＰＫ２４）㊁ＳＯＳ３（ＣＢＬ４）以及ＳＯＳ２／ＳＯＳ３复合体组成，植物细胞通过此传导途径将细胞质中的Ｎａ＋排出胞外或区隔化至液泡中，减轻高盐毒害［６⁃８］㊂进一步研究发现，ＳＯＳ１在高盐胁迫下也参与磷脂酶（ＰＬＤ）信号传导途径［９］，高盐胁迫下拟南芥磷脂酶α１（ＰＬＤα１）的活性增强，引起脂质第二信使磷脂酸（ＰＡ）的瞬时积累㊂ＰＡ激活丝裂原活化蛋白激酶（ＭＰＫ６），ＭＰＫ６直接磷酸化ＳＯＳ１㊂虽然磷脂酶信号传导途径通过ＳＯＳ１调节离子外排，却与ＳＯＳ２／ＳＯＳ３复合体平行介导盐胁迫途径㊂因此，维持体内离子平衡的机制很复杂，ＳＯＳ３／ＳＣａＢＰ８⁃ＳＯＳ２⁃ＳＯＳ１信号传导途径也不是调控胞内Ｎａ＋外排的唯一途径㊂植物富含亮氨酸重复序列型类受体蛋白激酶（ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ）是一类胞外富含亮氨酸重复片断（ＬＲＲｓ）的受体蛋白激酶［１０］，在植物非生物胁迫中发挥重要作用㊂如，水稻受体类蛋白激酶ＯｓＳＩＫ１的表达量受干旱㊁盐㊁Ｈ２Ｏ２诱导，水稻过表达ＯｓＳＩＫ１能够明显增强其对干旱和高盐的耐受性［１１］㊂拟南芥的受体类蛋白激酶ＲＰＫ１能够被干旱㊁盐胁迫诱导表达［１２］，拟南芥过表达ＲＰＫ１后，根部对脱落酸（ＡＢＡ）敏感，气孔关闭，水分流失减少，而突变体ｒｐｋ１⁃１对ＡＢＡ不敏感，导致水分流失增加［１３］㊂拟南芥受体激酶通过与蛋白磷酸酶间的相互作用，参与ＡＢＡ信号途径，正向调控高盐和渗透胁迫［１４］㊂水稻类受体蛋白激酶ＬＲＫ２表达受干旱胁迫诱导，ＬＲＫ２过表达则水稻侧根发达，耐旱性增强［１５］㊂水稻叶穗特异表达的类受体蛋白激酶ＬＰ２，其表达受干旱和ＡＢＡ抑制，锌指转录因子Ｃ２Ｈ２与其启动子特异序列结合，锌指转录因子ＤＳＴ⁃ＬＰ２途径能促进叶片气孔张开，并减少Ｈ２Ｏ２的积累［１６］㊂南极苔癣ＰＮＬＲＲ⁃ＲＬＫ２能够被非生物胁迫诱导表达，在拟南芥中过表达ＰＮＬＲＲ⁃ＲＬＫ２能提高拟南芥对高盐㊁干旱㊁Ｈ２Ｏ２以及ＡＢＡ的耐受性［１７］㊂以水稻为模式作物，通过插入突变获得１２８个ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ水稻突变体，并在水稻不同发育阶段观察不同非生物胁迫下的生长表型，筛选出３７个具有改善水稻耐受非生物胁迫潜力的ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ［１０］㊂目前为止，ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ参与非生物胁迫响应的抗性机制和调控途径仍未被揭示㊂本课题组前期开展了盐胁迫下水稻质膜蛋白质组分析，鉴定出一个ＬＲＲ型类受体蛋白激酶ＯｓＲＰＫ１，其表达量受高盐诱导表达［１９］㊂体外磷酸化试验结果表明，原核表达ＯｓＲＰＫ１蛋白胞内激酶区依赖于Ｍｎ２＋或Ｍｇ２＋，而且在高盐处理的根部总蛋白质孵育前提下，ＯｓＲＰＫ１蛋白才能发生磷酸化［２０］㊂本研究拟通过构建水稻根尖盐胁迫ｃＤＮＡ文库，采用酵母双杂交技术筛选出与ＯｓＲＰＫ１胞内互作的蛋白质，为从分子水平上揭示ＯｓＲＰＫ１参与高盐胁迫的分子机制及开展其生物学功能研究奠定基础㊂１㊀材料与方法１．１㊀试验材料日本晴水稻于实验室光照培养箱中培养１４ｄ后４５７江苏农业学报㊀２０１９年第３５卷第４期作为试验材料，其中光照度为６００μｍｏｌ／（ｍ２㊃ｓ），白天１４ｈ，黑夜１０ｈ，相对湿度为７５％㊂ＲＮＡ提取试剂ＴＲＩｚｏｌ和ＦａｓｔＴｒａｃｋＭＡＧｍＲＮＡｉｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔ购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，ＬｉｂｒａｒｙＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ＆ＳｃｒｅｅｎｉｎｇＫｉｔｓ购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司㊂１．２　试验方法１．２．１㊀高盐处理后水稻根尖ＲＮＡ的提取及ｍＲＮＡ的分离与纯化㊀用１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ处理生长１４ｄ的日本晴水稻１２ｈ，收集水稻根尖，用液氮研磨１ｇ根尖样品，利用Ｔｒｉｚｏｌ提取总ＲＮＡ，紫外分光光度计检测ＯＤ２６０值及ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值，分析总ＲＮＡ的纯度和质量浓度，并用１５％的琼脂糖凝胶电泳检测总ＲＮＡ的完整度㊂采用ＦａｓｔＴｒａｃｋＭＡＧｍＲＮＡｉｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔ分离获得ｍＲＮＡ，利用紫外分光光度计和１５％琼脂糖凝胶电泳检测分离纯化后ｍＲＮＡ的质量浓度和质量㊂１．２．２㊀双链ｃＤＮＡ的合成及其纯化㊀ＰＣＲ管中分别加入２μｇｍＲＮＡ和１μｍｏｌ／ＬＣＤＳⅢ引物，用ＲＮａｓｅ⁃ｆｒｅｅＨ２Ｏ补至总体积为４μｌ㊂混匀后７２ħ水浴变性３ｍｉｎ，冰上冷却５ｍｉｎ，瞬时离心，加入２μｌ５ˑＦｉｒｓｔ⁃Ｓｔｒａｎｄｂｕｆｆｅｒ㊁１μｌ２０ｍｍｏｌ／Ｌ二硫苏糖醇（ＤＴＴ）㊁１μｌ１０ｍｍｏｌ／Ｌ脱氧核糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰ）和１μｌＰｏｗｅｒＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴ反转录酶，混匀，４２ħ水浴１０ｍｉｎ，加入１μｌＳＭＡＲＴＩＩＩ⁃ｍｏｄｉｆｉｅｄＯｌｉｇｏ⁃ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，混匀后４２ħ水浴１ｈ，然后７２ħ水浴１０ｍｉｎ，终止ｃＤＮＡ第一链的合成㊂室温冷却后，加入１μｌ核糖核酸酶Ｈ，３７ħ水浴２０ｍｉｎ㊂以反转录合成的第一链ｃＤＮＡ为模板进行长距离ＰＣＲ（ＬＤ⁃ＰＣＲ）扩增，循环数为２５，６８ħ延伸５ｍｉｎ，合成双链ｃＤＮＡ，使用ＣＨＲＯＭＡＳＰＩＮＴＭＴＥ⁃４００Ｃｏｌｕｍｎ纯化双链ｃＤＮＡ㊂１．２．３㊀文库的构建㊀纯化后的双链ｃＤＮＡ和线性化的ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ载体同时转化酵母感受态细胞Ｙ１８７，利用ＳＤ／⁃Ｌｅｕ（亮氨酸）缺失培养基进行筛选，每个平板加入１００μｌ悬浮酵母细胞，用涂布棒涂开至无液体流动，３０ħ倒置培养３ｄ后收集菌落，将长出菌落的琼脂板置于４ħ条件下冻存３ｈ㊂每个琼脂板加入５ｍｌ冻存液以及１５个５ｍｍ的玻璃珠，玻璃珠轻轻在琼脂板上滚动分离菌落溶于冻存液中㊂收集所有的菌落冻存液于烧瓶中，利用细胞计数器估计细胞密度㊂１．２．４㊀文库的鉴定㊀取５０μｌ菌落冻存液，分别稀释１０倍㊁１００倍后涂于ＳＤ／⁃Ｌｅｕ平板上，共转化ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ和ＳＶ４０大ＴＰＣＲ片段作为阳性对照，转化空载体ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ作为阴性对照㊂３０ħ倒置培养３ｄ，出现单菌落后统计琼脂板上的菌落数量，计算文库容量和重组率（文库容量＝每皿平均克隆数／涂布体积ˑ稀释倍数ˑ转化体积；文库重组率＝空载体转化的克隆数／共转化检测的克隆总数ˑ１００％）㊂随机挑取２４个单菌落进行培养，使用酵母质粒提取试剂盒提取质粒，用插入片段检测引物（Ｔ７⁃Ｐｒｉｍｅｒ：５ᶄ⁃ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣ⁃３ᶄ；３ᶄＡＤＰｒｉｍｅｒ：５ᶄ⁃ＧＴＧＡＡＣＴＴＧＣＧＧＧＧＴＴＴＴＴＣ⁃３ᶄ）进行ＰＣＲ扩增，检测插入片段的大小㊂１．２．５㊀诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ的构建㊀利用在线软件ＳＭＡＲＴ分析水稻类受体蛋白激酶ＯｓＲＰＫ１（ＮＣＢＩ登录号：ＸＰ＿０１５６４０１８０）的蛋白质结构域，确定胞内区域为第６３１氨基酸至第９６９氨基酸，设计２条引物用于扩增该区域碱基序列：上游引物ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ⁃Ｆ：５ᶄ⁃ＧＣＣＧＡＡＴＴＣＡＴＧＴＴＣＴＣＴＧＡ⁃ＣＡＡＣＣＡＣＧＡＧ⁃３ᶄ，下游引物ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ⁃Ｒ：５ᶄ⁃ＣＡＧＧＴＣＧＡＣＣＴＡＣＴＴＧＧＧＣＴＴＧＡＣＣＴＣＡＡＡＡＴ⁃３ᶄ，分别在上㊁下游引物中插入ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ酶切位点（划线部分），引物由安徽生物通用生物有限公司合成㊂利用高保真ＰｒｉｍｅＳＴＡＲＤＮＡ聚合酶以水稻根尖ｃＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增㊂纯化的ＰＣＲ产物与诱饵载体ｐＧＢＫＴ７同时用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ双酶切，酶切产物回收后用Ｔ４ＤＮＡ连接酶于１６ħ连接４ｈ，连接产物转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞，３７ħ培养过夜后挑取单菌落进行ＰＣＲ扩增㊁酶切和测序验证㊂１．２．６㊀ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ毒性㊀诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ和空载体ｐＧＢＫＴ７⁃Ｒｅｃ分别转化进入酵母感受态ＡＨ１０９中，挑取单菌落至５０ｍｌＳＤ／⁃Ｔｒｐ（色氨酸）液体培养基中，３０ħ摇床中２５０ｒ／ｍｉｎ振荡培养２４ｈ；６００ｇ室温离心５ｍｉｎ，弃上清液；用５ｍｌＳＤ／⁃Ｔｒｐ液体培养基重悬菌体，用细胞计数板计算细胞密度㊂１．２．７㊀ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ自激活检测㊀诱饵载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ转入ＡＨ１０９（ＭＡＴα）菌株，以转入Ｙ１８７（ＭＡＴα）菌株的ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ作为空载体对照，分别以转入Ｙ２ＨＧｏｌｄ菌株的ｐＧＢＫＴ７⁃５３载体和ｐＧＢＫＴ７⁃Ｌａｍ载体作为阳性对照和阴性对照㊂挑取ＳＤ⁃１平板上生长较好的单菌落，分别挑到１ｍｌ５５７邹㊀禹等：水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质的筛选２ˑＹＰＤＡ液体培养基中，摇至对数生长期，１０００ｇ离心收集菌体，移入１００ｍｌ三角瓶，加入２ｍｌ２ˑＹＰＤＡ液体培养基中，３０ħ，３０ｒ／ｍｉｎ，接合１８ｈ后收集菌体，将收集的菌体分别涂布于ＳＤ／⁃Ｌｅｕ／⁃Ｔｒｐ和ＳＤ／⁃Ａｄｅ（腺嘌呤）／⁃Ｈｉｓ（组氨酸）／⁃Ｌｅｕ／⁃Ｔｒｐ营养缺陷型平板上，３０ħ培养箱中培养２ｄ，观察结果㊂１．２．８㊀酵母双杂交筛选与ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ互作的下游蛋白质㊀在２Ｌ三角瓶中分别加入５ｍｌ含有诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ的ＡＨ１０９菌液㊁冻融的１ｍｌ酵母文库和４５ｍｌ２ˑＹＰＤＡ／Ｋａｎ（５０μｇ／ｍｌ），于３０ħ㊁３０ｒ／ｍｉｎ条件下配对２０２４ｈ㊂配对菌液１０００ｒ／ｍｉｎ室温离心１０ｍｉｎ，弃上清液㊂然后再加入ＹＰＤＡ（２ˑ）清洗酵母细胞，１０００ｇ室温离心１０ｍｉｎ，弃上清液㊂用灭菌水清洗酵母细胞，１０００ｒ／ｍｉｎ室温离心１０ｍｉｎ，弃上清液㊂加入约１０ｍｌ灭菌水重悬酵母细胞，ＳＤ／⁃Ｈｉｓ／⁃Ｌｅｕ／⁃Ｔｒｐ／⁃Ａｄｅ４缺培养基平板涂布１５０μｌ悬浮酵母细胞，３０ħ培养４６ｄ，挑取阳性单菌落㊂选取单菌落至ＹＰＤＡ液体培养基中，菌液摇匀后插入片段进行ＰＣＲ扩增检测（Ｔ７⁃ｐｒｉｍｅｒ⁃Ｆ：５ᶄ⁃ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣ⁃３ᶄ；ＡＤＲ⁃ｐｒｉｍｅｒ⁃Ｒ：５ᶄ⁃ＧＴＧＡＡＣＴＴＧＣＧＧＧＧＴＴＴＴＴＣ⁃３ᶄ）㊂插入片段大于５００ｂｐ的酵母单克隆质粒送至安徽通用生物公司测序，测序结果利用ＮＣＢＩ在线网站比对，并用Ｕｎｉｐｒｏｔ网站预测基因功能㊂１．２．９㊀荧光定量ＰＣＲ分析盐胁迫下ＯｓＲＰＫ１和候选基因的表达模式㊀野生型水稻在培养液中生长１４ｄ，用１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ处理０ｈ㊁０５ｈ㊁３０ｈ㊁１２０ｈ㊁２４０ｈ㊁４８０ｈ后收集根尖组织样品，液氮研磨利用Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司的Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取ＲＮＡ，采用ＴａＫａＲａ公司反转录试剂盒合成ｃＤＮＡ，采用ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰＣＲ试剂盒，以ｃＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ反应㊂ＰＣＲ反应程序：９５ħ１０ｍｉｎ；９５ħ３０ｓ，６０ħ３０ｓ，７２ħ３０ｓ，循环扩增４０次结束扩增㊂利用荧光定量ＰＣＲ在线设计引物网站ＱｕａｎｔＰｒｉｍｅ设计特异性引物（表１），选用ａｃｔｉｎ作为内参基因［２１］，采用２－әәＣｔ相对表达量的计算方法［２２］，比较不同时间下１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ处理的基因表达量㊂２㊀结果与分析２．１㊀高盐处理后水稻根尖总ＲＮＡ提取及ｍＲＮＡ的分离㊀㊀水稻幼苗生长１４ｄ后，１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ处理表１㊀荧光定量ＰＣＲ引物Ｔａｂｌｅ１㊀ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓ引物名称㊀㊀㊀引物序列（５ᶄң３ᶄ）Ｑ⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＦＡＡＡＣＧＣＡＧＣＡＣＴＴＣＣＡＴＴＴＣＡＡＣＱ⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＲＴＴＣＣＴＡＴＣＣＡＡＴＣＧＧＡＧＡＡＣＴＴＣＧＱ⁃２９４３⁃４⁃ＦＴＧＧＣＡＴＣＴＴＧＴＡＧＣＡＣＣＡＧＴＧＡＡＣＱ⁃２９４３⁃４⁃ＲＴＧＣＴＴＧＴＣＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＣＡＴＣＱ⁃２９４３⁃５⁃ＦＧＣＴＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＧＡＴＣＴＡＱ⁃２９４３⁃５⁃ＲＡＣＡＴＧＧＡＴＴＴＣＣＡＧＣＣＡＣＧＡＴＱ⁃２９４３⁃６⁃ＦＡＴＧＡＴＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＧＣＡＡＧＧＧＱ⁃２９４３⁃６⁃ＲＴＧＡＴＡＧＡＧＴＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＴＣＣＴＣＱ⁃２９４３⁃７⁃ＦＡＣＡＴＧＴＣＡＣＧＴＣＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＱ⁃２９４３⁃７⁃ＲＡＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＴＡＴＧＣＡＡＴＧＴＡＣＧＱ⁃２９４３⁃１１⁃ＦＣＴＧＧＧＧＣＡＧＡＴＣＡＡＧＡＡＧＱ⁃２９４３⁃１１⁃ＲＡＴＧＧＡＣＣＡＣＧＴＡＧＧＡＧＡＡＱ⁃２９４３⁃１２⁃ＦＧＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＡＡＣＴＧＱ⁃２９４３⁃１２⁃ＲＧＣＴＡＣＴＣＧＣＧＴＡＴＣＴＧＴＧＴＧＴＧＱ⁃２９４３⁃１４⁃ＦＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＱ⁃２９４３⁃１４⁃ＲＡＣＣＡＡＧＧＴＴＴＣＡＧＴＧＣＣＡＣＡＱ⁃２９４３⁃２７⁃ＦＴＣＡＴＣＣＴＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＱ⁃２９４３⁃２７⁃ＲＣＣＴＣＴＣＡＡＴＣＡＴＧＴＴＧＴＣＱ⁃２９４３⁃３０⁃ＦＴＡＡＧＴＣＴＧＧＣＧＡＣＧＡＧＡＧＧＡＡＧＱ⁃２９４３⁃３０⁃ＲＴＣＴＧＣＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＴＣＣＴＧＡＧＱ⁃２９４３⁃３２⁃ＦＴＧＣＴＧＡＣＡＣＴＡＣＡＣＡＧＣＧＴＴＱ⁃２９４３⁃３２⁃ＲＴＧＧＣＡＴＣＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＣＡＡＱ⁃２９４３⁃３６⁃ＦＴＧＧＡＴＧＣＡＧＡＴＧＣＡＡＧＡＴＧＴＴＣＣＣＱ⁃２９４３⁃３６⁃ＲＡＴＴＣＣＴＣＣＡＧＡＧＣＴＣＧＣＣＴＴＧＴＴＧＱ⁃Ａｃｔｉｎ⁃ＦＧＡＣＴＣＴＧＧＴＧＡＴＧＧＴＧＴＣＡＧＣＱ⁃Ａｃｔｉｎ⁃ＲＧＧＣＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＣＣＴＣＡＧＧ根尖１２ｈ，使用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取总ＲＮＡ，总ＲＮＡ稀释２５倍后用紫外分光光度计检测ＯＤ２６０／ＯＤ２８０值为１．９２，说明提取的ＲＮＡ既没有降解，也没有被其他物质（蛋白质㊁糖类等）污染，并且根据所测的ＯＤ２６０值换算得到实际提取的总ＲＮＡ质量浓度为５５６ｎｇ／μｌ㊂１．５％的琼脂糖凝胶电泳检测总ＲＮＡ结果（图１Ａ）显示，２８Ｓ和１８Ｓ条带清晰明亮，无拖尾，总ＲＮＡ完整性较好，２８Ｓ条带的亮度约为１８Ｓ的２倍，５Ｓ条带的亮度较低，表明总ＲＮＡ降解较少㊂利用试剂盒ＦａｓｔＴｒａｃｋＭＡＧｍＲＮＡｉｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔ分离纯化获得ｍＲＮＡ，１．５％的琼脂糖凝胶电泳结果（图１Ｂ）６５７江苏农业学报㊀２０１９年第３５卷第４期显示，ｍＲＮＡ条带呈弥散状，条带最亮部分在２０ｋｂ附近，说明ｍＲＮＡ未发生降解，可以进行后续试验㊂Ｍ：ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；１３：总ＲＮＡ；４：纯化后的ｍＲＮＡ㊂图１㊀盐胁迫后的水稻根尖总ＲＮＡ（Ａ）及纯化后的ｍＲＮＡ（Ｂ）Ｆｉｇ．１㊀ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｔｏｔａｌＲＮＡ（Ａ）ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｒｉｃｅｒｏｏｔｔｉｐａｆｔｅｒｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ，ａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｍＲＮＡ（Ｂ）２．２㊀双链ｃＤＮＡ的合成与纯化以ｍＲＮＡ为模板反转录合成第一链ｃＤＮＡ，通过长距离ＰＣＲ（ＬＤ⁃ＰＣＲ）扩增获得双链ｃＤＮＡ，双链ｃＤＮＡ用１．５％琼脂糖凝胶电泳分析㊂结果（图２）显示，条带呈弥散状，条带大小主要分布在１．５５０ｋｂ，表明不同大小和不同丰度的ＲＮＡ被反转录㊂使用ＣＨＲＯＭＡＳＰＩＮＴＭＴＥ⁃４００Ｃｏｌｕｍｎ纯化双链ｃＤＮＡ，此纯化产物可用于酵母体内重组㊂Ｍ：ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；１：ＬＤ⁃ＰＣＲ扩增获得的双链ｃＤＮＡ㊂图２㊀ＬＤ⁃ＰＣＲ扩增获得的双链ｃＤＮＡＦｉｇ．２㊀ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｄｓｃＤＮＡｂｙｌｏｎｇｄｉｓｔａｎｃｅＰＣＲ（ＬＤ⁃ＰＣＲ）２．３㊀酵母双杂交文库的构建及鉴定利用ＳＭＡＲＴ同源重组技术将纯化后的双链ｃＤＮＡ片段与载体ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ共转化酵母Ｙ１８７感受态细胞，经过ＳＤ／⁃Ｌｅｕ缺失培养基筛选，３ｄ左右长出菌落㊂利用冻存液及玻璃珠分离并收集菌落于４００ｍｌ大烧瓶中，吸取１００μｌ菌液，稀释至１ｍｌ，吸取至１６格ˑ２５格的细胞计数板，计算酵母菌的密度，１００小格共计数２１２个酵母菌，细胞密度为１ｍｌ８．４８ˑ１０７个细胞，符合文库构建要求㊂同时共转化ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ和ＳＶ４０大ＴＰＣＲ片段作为阳性对照，转化空载体ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ作为阴性对照，培养３ｄ后收集菌落，配制悬浮酵母细胞，按１ʒ１００进行稀释，再涂到ＳＤ⁃Ｌｅｕ培养基平板上㊂图３显示，ｄｓｃＤ⁃ＮＡ片段与载体ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ共转化后长出的克隆数为３７０个，折算后文库容量为１．１１ˑ１０７ＣＦＵ㊂其中，ＳＶ４０大ＴＰＣＲ和ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ共转化后的克隆数为１４８个，空载体ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ转化后的克隆数为１１个，９７％克隆都包含同源重组后的ｐＧＡＤＴ７质粒㊂为进一步分析文库重组子的情况，从文库中随机挑选２４个克隆，提取酵母质粒，用ｐＧＡＤＴ７载体的通用引物Ｔ７和３ᶄＡＤ进行ＰＣＲ扩增㊂结果（图４）显示，２３个克隆检测到片段，且片段大小差异明显，分布在０．７５２００ｋｂ，主要集中在１００ｋｂ左右，说明文库插入片段多态性较好，信息丰富㊂文库重组率为９６％，满足文库重组率要高于８０％的质量要求㊂说明构建的水稻盐胁迫根尖ｃＤＮＡ酵母文库的库容㊁重组率和插入片段大小达到标准ｃＤＮＡ文库要求，可用于筛选高盐胁迫下的ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质㊂图３㊀酵母双杂交文库库容鉴定Ｆｉｇ．３㊀Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｙｅａｓｔｔｗｏｈｙｂｒｉｄｌｉｂｒａｒｙ２．４㊀诱饵载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ的构建和鉴定㊀㊀基于在线网站ＳＭＡＲＴ分析水稻类受体蛋白激酶ＯｓＲＰＫ１（ＮＣＢＩ登录号：ＸＰ＿０１５６４０１８０）的蛋白质结构域，确定胞内区域（ＣＤ）为第６３１氨基酸到９６９氨基酸位置，设计特异性引物扩增ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ序列，产物经１％琼脂糖凝胶电泳分离后显示大小为１０００ｂｐ左右，与预期值１０２０ｂｐ相符（图５）㊂ＰＣＲ扩增ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ，同时将诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７进行双酶切，Ｔ４连接酶连接后构建重组质粒ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ，重组质粒转化ＤＨ５α菌株，挑取阳性单克隆质粒进行ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ双酶切，７５７邹㊀禹等：水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质的筛选Ｍ：１００ｂｐＤＮＡｌａｄｄｅｒｍａｒｋｅｒ；１２４：插入片段的ＰＣＲ产物㊂图４㊀文库插入片段ＰＣＲ检测Ｆｉｇ．４㊀ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｉｎｓｅｒｔｆｒａｇｍｅｎｔｓｂｙＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ结果（图６）显示，酶切产物大小与预期值相符㊂选取阳性克隆进行ＤＮＡ测序，结果与ＮＣＢＩ数据库中的序列一致，说明ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ诱饵表达载体构建成功㊂Ｍ１：ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；１：ＰＣＲ扩增ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ㊂图５㊀ＰＣＲ扩增ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤＦｉｇ．５㊀ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤＭ２：ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；２：质粒ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ；３：ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ双酶切质粒ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ㊂图６㊀ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ重组质粒双酶切鉴定Ｆｉｇ．６㊀ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤｂｙｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎ２．５㊀诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ的自激活活性和毒性检测㊀㊀将诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ转入ＡＨ１０９（ＭＡＴα）菌株中，ｐＧＡＤＴ７⁃Ｒｅｃ空载体转入Ｙ１８７（ＭＡＴα）菌株中，阳性对照载体（ｐＧＢＫＴ７⁃５３）和阴性对照载体（ｐＧＢＫＴ７⁃Ｌａｍ）转入Ｙ２ＨＧｏｌｄ菌株中㊂结果（图７）显示，阳性对照ｐＧＢＫＴ７⁃５３／ｐＧＡＤＴ７⁃Ｔ在ＳＤ／⁃Ｌｅｕ／⁃Ｔｒｐ和ＳＤ／⁃Ａｄｅ／⁃Ｈｉｓ／⁃Ｌｅｕ／⁃Ｔｒｐ营养缺陷型平板上均能长出白色菌落，并且在ＳＤ／⁃Ａｄｅ／⁃Ｈｉｓ／⁃Ｌｅｕ／⁃Ｔｒｐ／Ｘ⁃Ｇａｌ营养缺陷型平板上长出蓝色菌落㊂阴性对照ｐＧＢＫＴ７⁃Ｌａｍ／ｐＧＡＤＴ７⁃Ｔ只能在ＳＤ／⁃Ｌｅｕ／⁃Ｔｒｐ营养缺陷型平板上生长，ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ／ｐＧＡＤＴ７⁃Ｔ的结果与阴性对照相同，说明ｐＧＢＫＴ７⁃Ｏｓ⁃ＲＰＫ１⁃ＣＤ诱饵载体无自激活活性㊂Ｉ：ｐＧＢＫＴ７⁃５３／ｐＧＡＤＴ７⁃Ｔ；Ⅱ：ｐＧＢＫＴ７⁃Ｌａｍ／ｐＧＡＤＴ７⁃Ｔ；Ⅲ：ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ／ｐＧＡＤＴ７⁃Ｔ㊂图７㊀ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ的自激活验证Ｆｉｇ．７㊀ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤｆｏｒａｕｔｏ⁃ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ㊀㊀挑取含有ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ诱饵表达载体的ＡＨ１０９菌株，单克隆至ＳＤ／⁃Ｔｒｐ液体培养基中，３０ħ培养２４ｈ㊂用１／１０体积的ＳＤ／⁃Ｔｒｐ液体培养基重悬菌体，采用细胞计数板计算细胞密度，１ｍｌ的细胞数不低于１ˑ１０９个，说明ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ无毒性㊂ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ诱饵表达载体可用于后续ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质的筛选工作㊂８５７江苏农业学报㊀２０１９年第３５卷第４期２．６㊀筛选水稻盐胁迫根尖ｃＤＮＡ文库中的ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质㊀㊀含有诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ的酵母菌液与含有ｐＧＡＤＴ７质粒的文库菌液结合后，将产物涂布于ＳＤ／⁃Ｔｒｐ／⁃Ｈｉｓ／⁃Ｌｅｕ／⁃Ａｄｅ培养基平板上，３０ħ培养４ｄ左右，挑取直径１２ｍｍ的菌落，扩增后提取质粒进行ＰＣＲ检测㊂结果（图８）显示，扩增获得的条带大小主要集中在７５０２０００ｂｐ，从ＰＣＲ扩增到条带的６８个单克隆中提取质粒，转化大肠杆菌ＤＨ５ａ并测序，在ＮＣＢＩ数据库中对测序得到的ＤＮＡ碱基序列进行比对分析，共获得３７个基因碱基序列㊂利用Ｕｎｉｐｒｏｔ在线分析网站，对３７个基因碱基序列进行功能分析，部分重要的候选蛋白质如表２显示㊂Ｍ：１００ｂｐＤＮＡｌａｄｄｅｒｍａｒｋｅｒ；１２４：插入片段的ＰＣＲ产物㊂图８㊀部分ｃＤＮＡ文库插入片段的ＰＣＲ检测结果Ｆｉｇ．８㊀ＰＣＲｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｓｅｒｔｆｒａｇｍｅｎｔｓｉｎｔｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙ表２㊀以ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ为诱饵筛选到的部分候选蛋白质信息Ｔａｂｌｅ２㊀ＴｈｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｐａｒｔｉａｌｃａｎｄｉｄａｔｅｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｗｉｔｈＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤｂｙｙｅａｓｔｔｗｏ⁃ｈｙｂｒｉｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇ克隆的基因编号蛋白质注释㊀㊀㊀㊀ＧｅｎＢａｎｋ登录号㊀功能２９４３⁃４类受体蛋白激酶ＸＭ＿０１５７７８７９５在植物生长发育㊁激素信号转导和逆境胁迫过程中发挥重要作用２９４３⁃５金属硫转运蛋白ＯｓＭＴ４ｃＡＫ１０５２１９作为活性氧（ＲＯＳ）清除剂，具有超氧阴离子自由基和羟自由基清除活性２９４３⁃６腺苷激酶蛋白ＡＫ０５９７７１催化腺苷生成腺苷⁃磷酸（ＡＭＰ）２９４３⁃７胁迫响应蛋白ＡＫ０６０１３２参与植物胁迫反应２９４３⁃１１脂肪酸去饱和酶ＦＡＤ２ＡＫ１０３６１８具有氧化还原酶活性，能够影响植物的耐盐性［２３⁃２４］２９４３⁃１２纤维素酶ＡＫ０６５０００将纤维素降解为葡萄糖２９４３⁃１４ＡＢＣ转运蛋白Ｃ２ＸＭ＿０１５７７９９６６参与植物胁迫反应２９４３⁃２７延伸因子ＡＦ０３０５１７ｍＲＮＡ翻译时促进多肽链的延伸２９４３⁃３０１４⁃３⁃３蛋白ＧＦ１４⁃ｄＸＭ＿０１５７６１５７２植物中的顺式ＤＮＡ调控元件２９４３⁃３２葡萄糖苷酶ＸＭ＿０１５７９１８８４水解酶活性，水解Ｏ⁃糖基化合物２９４３⁃３６金属硫转运蛋白ＯｓＭＴ２ｂＡＫ０７０９３７具有超氧阴离子和羟自由基清除活性，可通过细胞分裂素途径调节根的发育㊁侧根发生和种子胚萌发［２５⁃２６］２．７㊀水稻盐胁迫下ＯｓＲＰＫ１与部分候选基因的表达模式分析㊀㊀图９显示，采用生长１４ｄ的野生型水稻日本晴，用１５０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ处理０４８０ｈ，ＯｓＲＰＫ１受高盐胁迫诱导表达，处理１２．０ｈ时表达量最高，然后表达量又缓慢下降㊂２９４３⁃５（金属硫转运蛋白ＯｓＭＴ４ｃ）㊁２９４３⁃６（腺苷激酶蛋白）㊁２９４３⁃７（胁迫响应蛋白）㊁２９４３⁃１１（脂肪酸去饱和酶ＦＡＤ２）㊁２９４３⁃１２（纤维素酶）㊁２９４３⁃１４（ＡＢＣ转运蛋白Ｃ２）㊁２９４３⁃３０（１４⁃３⁃３蛋白ＧＦ１４⁃ｄ）和２９４３⁃３２（葡糖苷酶）８个候选基因受高盐胁迫诱导表达㊂２９４３⁃５在３０ｈ时开始诱导表达，其表达量在４８０ｈ达到最大；２９４３⁃６㊁２９４３⁃１２和２９４３⁃１４３个候选基因表达模式与ＯｓＲＰＫ１基本一致；２９４３⁃７㊁２９４３⁃１１和２９４３⁃３０３个候选基因的表达量分别在３０ｈ㊁３０ｈ和０５ｈ时达到最大；２９４３⁃３２受盐胁迫持续诱导表达，４８０ｈ９５７邹㊀禹等：水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质的筛选时表达量达到最大㊂２９４３⁃２７（延伸因子）㊁２９４３⁃３６（金属硫转运蛋白ＯｓＭＴ２ｂ）２个候选基因受高盐胁迫抑制表达，２９４３⁃２７的表达量抑制需要高盐胁迫１２０ｈ才发生㊂２９４３⁃４（类受体蛋白激酶）受盐胁迫瞬时（０５ｈ）诱导表达，然后表达量迅速下降，４８０ｈ时２９４３⁃４的表达量受到显著抑制㊂２９４３⁃４㊁２９４３⁃５㊁２９４３⁃６㊁２９４３⁃６㊁２９４３⁃７㊁２９４３⁃１１㊁２９４３⁃１２㊁２９４３⁃１４㊁２９４３⁃２７㊁２９４３⁃３０㊁２９４３⁃３２㊁２９４３⁃３６为克隆的基因编号㊂图９㊀盐胁迫下ＯｓＲＰＫ１和部分候选基因的表达模式Ｆｉｇ．９㊀ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆＯｓＲＰＫ１ａｎｄｐａｒｔｉａｌｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｓｕｎｄｅｒｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ３㊀讨论土壤盐渍化是目前影响农作物产量和质量的主要环境因子之一［２７］，而植物本身为了适应环境，在漫长的进化过程中建立了耐受高盐或将盐分排出细胞外的特殊分子机制［２８⁃３０］㊂胞外富含亮氨酸重复片段的植物类受体蛋白激酶ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ，在植物盐胁迫过程中发挥重要作用，但其参与的抗性机制和调控途径仍未被揭示㊂ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ的胞外ＬＲＲ基序首先识别外界刺激，在跨膜区将信号传递给胞内的激酶结构域，激酶结构域通过磷酸化作用将胞外信号传入胞内，从而调节植物响应胁迫㊂对于ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ作用的下游信号分子所知甚少，比较明确的下游靶分子包括激酶结合蛋白磷酸酶（ＫＡＰＰ）和丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）㊂ＫＡＰＰ与ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ的结合有赖于后者的磷酸化，ＫＡＰＰ能识别ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ磷酸化０６７江苏农业学报㊀２０１９年第３５卷第４期的丝氨酸和苏氨酸，并与之结合［３１］㊂目前比较清楚的信号途径包括受体蛋白激酶（ＣＬＶ１）㊁油菜素内酯受体（ＢＲＩ１）和鞭毛蛋白受体（ＦＬＳ２），其基本方式都是ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ结合各自的配基后形成同源（ＦＬＳ２）或异源（ＣＬＶ１／ＣＬＶ２；ＢＲＩ１／ＢＡＫ１）二聚体㊂二聚体导致ＬＲＲ⁃ＲＬＫｓ的自磷酸化，通过ＫＡＰＰ㊁ＭＡＰＫ或油菜素内酯信号通路激酶（ＢＳＫ）等胞内信号分子诱导相关转录因子表达，并在核内启动响应基因［３１］㊂前期开展盐胁迫下水稻质膜蛋白质组分析，鉴定出一个受盐胁迫诱导表达的ＬＲＲ型类受体蛋白激酶（ＯｓＲＰＫ１）㊂体外磷酸化试验结果表明，ＯｓＲＰＫ１依赖于Ｍｎ２＋或Ｍｇ２＋，并且需要在高盐处理的根部总蛋白质孵育前提下，才能发生磷酸化［２０］㊂ＯｓＲＰＫ１的组织定位及其在盐胁迫条件下的原位表达分析结果显示，ＯｓＲＰＫ１定位于细胞膜，蛋白质表达受盐胁迫显著诱导［１９］㊂同源比对和进化树分析结果表明，ＯｓＲＰＫ１蛋白没有与其同源性很高的蛋白质，而且同源蛋白质均未见其功能报道［２０］㊂因此，ＯｓＲＰＫ１是一个功能不冗余，有激酶活性，具有盐响应的典型ＬＲＲ型类受体蛋白激酶㊂为了进一步揭示ＯｓＲＰＫ１参与盐胁迫的分子机制，采用１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ处理水稻日本晴１２ｈ，构建了根尖ｃＤ⁃ＮＡ酵母文库，文库容量为１．１１ˑ１０７ＣＦＵ，重组率和插入片段大小达到标准ｃＤＮＡ文库要求㊂利用ＯｓＲ⁃ＰＫ１胞内激酶区构建诱饵表达载体ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ，ｐＧＢＫＴ７⁃ＯｓＲＰＫ１⁃ＣＤ诱饵表达载体无自激活活性，无毒性㊂通过构建的文库，筛选到了３７个候选基因，对其基因碱基序列进行功能分析，从中选择了１１个重要的候选蛋白质分析其在高盐处理下的表达模式，为进一步研究ＯｓＲＰＫ１的分子机制及下游作用因子奠定了基础㊂植物ＬＲＲ型受体蛋白激酶不仅在识别信号的过程中发挥重要作用，也可以作为信号传导途径下游重要的调节因子㊂在油菜素内酯（ＢＲ）信号传导的过程中，油菜素内酯受体ＢＲＩ１能够识别ＢＲ，ＢＲＩ１磷酸化激活，而负调控因子ＢＫＩ１与ＢＲＩ１相互作用并被解离，然后ＢＲＩ１与共受体ＢＡＫ１相互作用，将ＢＲ信号传递给下游作用蛋白质［３２⁃３３］㊂本研究中，ＯｓＲＰＫ１受高盐诱导表达，而高盐处理０．５ｈ时类受体蛋白激酶表达量瞬时上升，这可能是受到高盐胁迫后的一种应激反应，处理１２．０ｈ时表达量最高，然后表达量又缓慢下降㊂ＯｓＲＰＫ１和类受体蛋白激酶的表达模式与ＢＲ信号传导途径中的ＢＲＩ１和ＢＫＩ１相似，故推测类受体蛋白激酶可能是ＯｓＲＰＫ１参与高盐信号传导过程中的负调控因子㊂本试验筛选到２个金属硫转运蛋白ＯｓＭＴ２ｂ和ＯｓＭＴ４ｃ，金属硫转运蛋白能提高植物对不同重金属的耐受性，具有自由基清除活性，可提高植物对生物胁迫和非生物胁迫的抗逆性［３４］㊂刘佳等［３５］通过分析金属硫转运蛋白家族基因ＯｓＭＴｓ的组织表达以及胁迫下的表达情况，发现ＯｓＭＴ２ｂ在各个组织中的表达丰度明显高于其他家族成员，而ＯｓＭＴ４在各个组织中的表达量均最低，ＯｓＭＴ２ｂ受干旱胁迫抑制表达，高盐（２００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）处理３ｈ表达量变化不大㊂本研究用１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ处理，发现ＯｓＭＴ２ｂ的表达量是缓慢受到抑制，３ｈ时的表达量与０ｈ差异不显著，但到４８ｈ时表达量已受到显著抑制，所以认为ＯｓＭＴ２ｂ同样也受到高盐抑制表达㊂ＯｓＭＴ２ｂ具有超氧阴离子和羟自由基清除活性，通过影响细胞分裂素在植物体内的含量来调节根的发育，侧根的发生以及种子胚的萌发［２５⁃２６］㊂在盐胁迫过程中，植物体内将有大量自由基产生，并且诱导脱落酸和细胞分裂素含量的增加，所以推测ＯｓＭＴ２ｂ可能在盐胁迫过程中与ＯｓＲＰＫ１相互作用，进而影响水稻体内的活性氧含量和细胞分裂素含量，调控水稻耐盐性㊂ＯｓＭＴ４ｃ在高盐胁迫中的表达模式与ＯｓＭＴ２ｂ不同，可能暗示ＯｓＭＴ２ｂ和ＯｓＭＴ４ｃ在盐胁迫过程中行使的功能不同㊂在盐胁迫过程中，植物细胞壁最先感知胁迫信号，继而是细胞膜，因而在盐胁迫过程中控制细胞壁和细胞膜的合成蛋白质非常重要㊂本试验筛选到了脂肪酸去饱和酶㊁纤维素酶和葡萄糖苷酶，盐胁迫后这３种酶编码的基因表达量都受诱导表达㊂脂肪酸去饱和酶控制细胞膜中不饱和脂肪酸的合成，已有研究结果［２４］表明，水稻ＯｓＦＡＤ２不受低温诱导表达，而受黑暗诱导表达㊂在拟南芥中，ＡｔＦＡＤ２受高盐诱导表达，高盐胁迫后ＦＡＤ２突变体的萌发率和存活率都明显下降，Ｎａ＋／Ｋ＋值升高，超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性降低，ＦＡＤ２在液泡和质膜中维持Ｎａ＋外排，从而调节拟南芥耐盐性［２３］㊂这３个酶是否通过ＯｓＲＰＫ１来感知高盐胁迫信号途径值得深入研究㊂１４⁃３⁃３蛋白ＧＦ１４可通过识别特异的磷酸化序列与激酶㊁跨膜蛋白等信号蛋白质结合，从而发挥作１６７邹㊀禹等：水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及ＯｓＲＰＫ１胞内互作蛋白质的筛选用［３６］㊂ＧＦ１４参与盐胁迫，如水稻盐胁迫后ＧＦ１４表达量上调［３７］，ＯｓＧＦ１４ｅ与ＯｓＣＰＫ２１相互作用并被其磷酸化，参与ＡＢＡ信号传导途径，增强水稻的耐盐性［３８］㊂拟南芥ＧＦ１４λ㊁ＧＦ１４κ与盐超敏感ＳＯＳ信号途径中的钙依赖蛋白激酶ＳＯＳ２（ＣＩＰＫ２４）结合，并抑制ＳＯＳ２（ＣＩＰＫ２４）激酶活性，负调控拟南芥的耐盐性［３９］㊂由此可见，ＧＦ１４通过多种信号途径调控植物的耐盐性，本研究筛选到的１４⁃３⁃３蛋白ＧＦ１４⁃ｄ和ＯｓＲＰＫ１是否通过新的信号途径参与盐胁迫，也是值得研究的㊂ＡＢＣ转运蛋白几乎参与植物所有的生命活动，Ｃ亚族ＡＢＣＣ蛋白是人类多种药物抗性相关蛋白质，所以又称为ＭＲＰ蛋白，该类蛋白质参与植物非生物胁迫的报道较少㊂在拟南芥中，ＡｔＭＲＰ４和ＡｔＭＲＰ５主要在气孔保卫细胞中表达，能够通过影响气孔关闭来调控水利用效率和作物耐旱性［４０⁃４１］㊂ＡｔＭＲＰ４和ＡｔＭＲＰ５也能够被盐胁迫诱导表达，而且盐胁迫后ＡｔＭＲＰ４㊁ＡｔＭＲＰ５突变体的气孔不能关闭，认为ＡｔＭＲＰ４和ＡｔＭＲＰ５可能是通过调节气孔的开关来参与盐胁迫过程，但具体的分子机制现在还不清楚［４２］㊂进一步研究ＡＢＣ转运蛋白Ｃ亚族２及其与ＯｓＲＰＫ１的相互作用，对于改良植物耐盐性意义重大㊂本研究得到的３个蛋白质（腺苷激酶蛋白㊁胁迫响应蛋白和延伸因子）与ＯｓＲ⁃ＰＫ１在盐胁迫过程中的作用需要进一步研究㊂参考文献：［１］㊀赵可夫，李法曾，张福锁．中国盐生植物［Ｍ］．２版．北京：科学出版社，２０１３．［２］㊀宁丽华，何晓兰，张大勇．大豆耐盐相关基因ＧｍＮｃｌ１功能标记的开发及验证［Ｊ］．江苏农业学报，２０１７，３３（６）：１２２７⁃１２３４．［３］㊀夏秀忠，张宗琼，杨行海，等．广西地方稻种资源核心种质的耐盐性鉴定评价［Ｊ］．南方农业学报，２０１７，４８（６）：９７９⁃９８４．［４］㊀蔡继鸿，徐㊀鹏，张香桂，等．盐胁迫下陆地棉耐盐相关ＷＲＫＹ基因的表达分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１８，４６（１８）：２８⁃３２．［５］㊀ＺＨＵＪＫ．Ｓａｌｔａｎｄｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＰｌａｎｔＢｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３（１）：２４７⁃２７３．［６］㊀ＨＡＮＩＮＭ，ＥＢＥＬＣ，ＮＧＯＭＭ，ｅｔａｌ．Ｎｅｗｉｎｓｉｇｈｔｓｏｎｐｌａｎｔｓａｌｔｔｏｌｅｒａｎｃｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｔｈｅｉｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｕｓｅｆｏｒｂｒｅｅｄｉｎｇ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０１６，７：１７８７．［７］㊀ＱＵＡＮＲ，ＬＩＮＨ，ＭＥＮＤＯＺＡＩ，ｅｔａｌ．ＳＣＡＢＰ８／ＣＢＬ１０，ａｐｕｔａ⁃ｔｉｖｅｃａｌｃｉｕｍｓｅｎｓｏｒ，ｉｎｔｅｒａｃｔｓｗｉｔｈｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＳＯＳ２ｔｏｐｒｏ⁃ｔｅｃｔＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｓｈｏｏｔｓｆｒｏｍｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００７，１９（４）：１４１５⁃１４３１．［８］㊀ＱＵＩＮＴＥＲＯＦＪ，ＭＡＲＴＩＮＥＺ⁃ＡＴＩＥＮＺＡＪ，ＶＩＬＬＡＬＴＡＩ，ｅｔａｌ．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅＮａ／ＨａｎｔｉｐｏｒｔｅｒＳａｌｔ⁃Ｏｖｅｒｌｙ⁃Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ１（ＳＯＳ１）ｂｙｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆａｎａｕｔｏ⁃ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙＣ⁃ｔｅｒ⁃ｍｉｎａｌｄｏｍａｉｎ［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉ⁃ｅｎｃｅｓ，２０１１，１０８（６）：２６１１⁃２６１６．［９］㊀ＹＵＬ，ＮＩＥＪ，ＣＡＯＣ，ｅｔａｌ．ＰｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃａｃｉｄｍｅｄｉａｔｅｓｓａｌｔｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＭＰＫ６ｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔ，２０１０，１８８（３）：７６２⁃７７３．［１０］查笑君，马伯军，潘建伟，等．植物富亮氨酸重复类受体蛋白激酶的研究进展［Ｊ］．浙江师范大学学报（自然科学版），２０１０，３３（１）：７⁃１２．［１１］ＯＵＹＡＮＧＳＱ，ＬＩＵＹＦ，ＬＩＵＰ，ｅｔａｌ．Ｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅＯｓ⁃ＳＩＫ１ｉｍｐｒｏｖｅｓｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｓａｌｔｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎｒｉｃｅ（Ｏｒｙｚａｓａｔｉ⁃ｖａ）ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０１０，６２（２）：３１６⁃３２９．［１２］ＯＳＡＫＡＢＥＹ，ＭＡＲＵＹＡＭＡＫ，ＳＥＫＩＭ，ｅｔａｌ．Ｌｅｕｃｉｎｅ⁃ｒｉｃｈｒｅ⁃ｐｅａｔｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ１ｉｓａｋｅｙｍｅｍｂｒａｎｅ⁃ｂｏｕｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄｅａｒｌｙｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２００５，１７（４）：１１０５⁃１１１９．［１３］ＯＳＡＫＡＢＥＹ，ＭＩＺＵＮＯＳ，ＴＡＮＡＫＡＨ，ｅｔａｌ．Ｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｅｍｂｒａｎｅ⁃ｂｏｕｎｄｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ１，ＲＰＫ１，ｅｎ⁃ｈａｎｃｅｓａｂｉｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏ⁃ｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，２８５（１２）：９１９０⁃９２０１．［１４］ＫＵＭＡＲＤ，ＫＵＭＡＲＲ，ＢＡＥＫＤ，ｅｔａｌ．ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａＲＥＣＥＰＴＯＲＤＥＡＤＫＩＮＡＳＥ１ｆｕｎｃｔｉｏｎｓａｓａｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｉｎｐｌａｎｔｒｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏＡＢＡ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔ，２０１７，１０（２）：２２３⁃２４３．［１５］ＫＡＮＧＪ，ＬＩＪ，ＧＡＯＳ，ｅｔａｌ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｌｅｕｃｉｎｅ⁃ｒｉｃｈｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅｇｅｎｅＬＲＫ２ｉｎｃｒｅａｓｅｓｄｒｏｕｇｈｔｔｏｌｅｒａｎｃｅａｎｄｔｉｌｌｅｒｎｕｍｂｅｒｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＪｏｕｒｎａｌ，２０１７，１５（９）：１１７５⁃１１８５．［１６］ＷＵＦ，ＳＨＥＮＧＰ，ＴＡＮＪ，ｅｔａｌ．Ｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅｌｅａｆｐａｎｉｃｌｅ２ａｃｔｓｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｏｆｔｈｅｄｒｏｕｇｈｔａｎｄｓａｌｔｔｏｌｅｒ⁃ａｎｃｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｔｏｒｅｇｕｌａｔｅｄｒｏｕｇｈｔｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙ，２０１５，６６（１）：２７１⁃２８１．［１７］ＷＡＮＧＪ，ＬＩＣ，ＹＡＯＸ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＡｎｔａｒｃｔｉｃｍｏｓｓｌｅｕｃｉｎｅ⁃ｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ（ＰｎＬＲＲ⁃ＲＬＫ２）ｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｓａｌｉｎｉｔｙａｎｄｄｒｏｕｇｈｔｓｔｒｅｓｓａｄａｐｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｏｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２０１８，４１（２）：３５３⁃３６４．［１８］ＤＩＥＶＡＲＴＡ，ＰＥＲＩＮＣ，ＨＩＲＳＣＨＪ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｐｈｅｎｏｍｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｕｔａｎｔａｌｌｅｌｅｓｉｎｌｅｕｃｉｎｅ⁃ｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅｇｅｎｅｓｉｎｒｉｃｅｒｅｖｅａｌｓｎｅｗｐｏｔｅｎｔｉａｌｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｓｔｒｅｓｓｔｏｌｅｒａｎｔｃｅｒｅａｌｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，２０１６，２４２：２４０⁃２４９．［１９］ＣＨＥＮＧＹ，ＱＩＹ，ＺＨＵＱ，ｅｔａｌ．Ｎｅｗｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｐｌａｓｍａ⁃ｍｅｍｂｒａｎｅ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｏｍｅｏｆｒｉｃｅｒｏｏｔｓｕｎｄｅｒｓａｌｔｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００９，９（１１）：３１００⁃３１１４．［２０］ＺＯＵＹ，ＬＩＵＸ，ＷＡＮＧＱ，ｅｔａｌ．ＯｓＲＰＫ１，ａｎｏｖｅｌｌｅｕｃｉｎｅ⁃ｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ，ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｓｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓ⁃ｐｏｒｔａｎｄｒｏｏｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ（ＢＢＡ）⁃ＧｅｎｅｒａｌＳｕｂｊｅｃｔｓ，２０１４，１８４０（６）：１６７６⁃１６８５．［２１］ＪＡＩＮＭ，ＮＩＪＨＡＷＡＮＡ，ＴＹＡＧＩＡＫ，ｅｔａｌ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆｈｏｕｓｅ⁃ｋｅｅｐｉｎｇｇｅｎｅｓａｓｉｎｔｅｒｎａｌｃｏｎｔｒｏｌｆｏｒｓｔｕｄｙｉｎｇｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｒｉｃｅｂｙｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅＰＣＲ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄ２６７江苏农业学报㊀２０１９年第３５卷第４期。

企业信用报告_中国华西工程设计建设有限公司

基础版企业信用报告
中国华西工程设计建设有限公司
基础版企业信用报告
目录
一、企业背景 .........................................................................................................................................................5 1.1 工商信息 ......................................................................................................................................................5 1.2 分支机构 ......................................................................................................................................................5 1.3 变更记录 ......................................................................................................................................................8 1.4 主要人员 ....................................................................................................................................................14 1.5 联系方式 ....................................................................................................................................................15

政府补贴在新能源汽车充电桩产业中的作用三方博弈视角

岳为众，刘颖琦，童宇，等．政府补贴在新能源汽车充电桩产业中的作用：三方博弈视角［Ｊ］．中国人口·资源与环境，２０２０，３０（１１）：１１９－１２６．［ＹＵＥＷｅｉｚｈｏｎｇ，ＬＩＵＹｉｎｇｑｉ，ＴＯＮＧＹｕ，ｅｔａｌ．Ｒｏｌｅｏｆｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔｓｕｂｓｉｄｉｅｓｉｎｔｈｅｎｅｗｅｎｅｒｇｙｖｅｈｉｃｌｅｃｈａｒｇｉｎｇｆａｃｉｌｉｔｙｉｎｄｕｓｔｒｙ：ａｔｈｒｅｅｐａｒｔｙｇａｍｅｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ］．Ｃｈｉｎａｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ，ｒｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２０２０，３０（１１）：１１９－１２６．］收稿日期：２０２０－０４－０８　修回日期：２０２０－０６－１９作者简介：岳为众，博士生，主要研究方向为产业创新。

Ｅｍａｉｌ：５６８１５＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ。

通信作者：刘颖琦，教授，博导，主要研究方向为创新管理。

Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｙｑ＠ｂｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。

基金项目：国家社会科学基金重点项目“技术驱动下的新能源汽车产业商业模式创新研究”（批准号：１６ＡＧＬ００４）。

政府补贴在新能源汽车充电桩产业中的作用：三方博弈视角岳为众１，２　刘颖琦３　童　宇３　宋泽源３（１．北京工业大学经济管理学院，北京１００１２４；２．北京市住房和城乡建设委员会，北京１０１１６０；３．北京交通大学经济管理学院，北京１０００４４）摘要　伴随着新一轮科技革命和产业变革，２０２０年我国提出了“新基建”的发展方向，充电桩产业作为“新基建”的七大产业之一，不仅支持新能源汽车产业升级，更为无线充电、储能、微电网和新能源消纳等新兴产业提供发展空间。

因此对于充电桩产业而言，政府的支持作用非常重要，为了有效地探讨政府在充电桩产业的补贴政策效用，促进充电桩产业健康发展，文章基于博弈模型探讨了政府对充电桩运营商与换电站运营商不同的博弈策略演化过程。

首先结合我国政府对充电桩产业的补贴方式，将充电桩与换电站的补贴进行归类，将充电桩运营商获得的补贴归为运营补贴，将换电站获得的补贴归为投资额补贴。

热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算方法综述

第２卷第３期２０２４年３月国家公园（中英文）ＮＡＴＩＯＮＡＬＰＡＲＫＶｏｌ．２，Ｎｏ．３Ｍａｒ．，２０２４基金项目：海南国家公园研究院科研项目成果（ＫＹ⁃２３ＺＫ０２）；中央高校基本科研业务费专项资金收稿日期：２０２４⁃０１⁃１２；㊀㊀采用日期：２０２４⁃０３⁃１１∗通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｙａｎｇｑｉｎｇ１４＠ｍａｉｌｓ．ｕｃａｓ．ｅｄｕ．ｃｎＤＯＩ：１０．２０１５２／ｊ．ｎｐ．２０２４０１１２００１２陈宇龙，杨青，刘耕源，杨志峰．热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算方法综述．国家公园（中英文），２０２４，２（３）：１５４⁃１６５．ＣｈｅｎＹＬ，ＹａｎｇＱ，ＬｉｕＧＹ，ＹａｎｇＺＦ．Ｒｅｖｉｅｗｏｆｖａｌｕｅａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｉｎｔｒｏｐｉｃａｌｒａｉｎｆｏｒｅｓｔｎａｔｉｏｎａｌｐａｒｋｓ．ＮａｔｉｏｎａｌＰａｒｋ，２０２４，２（３）：１５４⁃１６５．热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算方法综述陈宇龙１，杨㊀青１，∗，刘耕源２，３，杨志峰２，４１北京师范大学环境与生态前沿交叉研究院，珠海㊀５１９０８７２北京师范大学环境学院，环境模拟与污染控制国家重点联合实验室，北京㊀１００８７５３北京市流域环境生态修复与综合调控工程技术研究中心，北京㊀１００８７５４广东工业大学生态环境与资源学院，大湾区城市环境安全与绿色发展教育部重点实验室，广州㊀５１０００６摘要：热带雨林类国家公园的水库价值对国家具有重要战略意义㊂但由于热带雨林类国家公园水生态系统服务受益主体复杂㊁生态效益与核算边界多元，其价值核算方法仍存在诸多挑战，使得建立在其准确计量基础上的热带雨林类国家公园保护与修复难以有效开展，阻碍了国家公园水生态产品价值实现及国家生态文明试验区建设进程㊂基于此，首先厘清现有研究中热带雨林类国家公园水生态系统服务的多元受益主体㊁多尺度生态效益㊁多边界评估框架，综述现有研究中热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算方法，并总结其优势与挑战，进一步结合热带雨林类国家公园水生态系统服务形成机制指出其对核算研究的启示㊂可为后续热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算㊁水生态系统管理与保护等提供理论与方法支撑㊂关键词：国家公园；热带雨林；水生态系统服务；受益主体；生态效益；价值核算框架ＲｅｖｉｅｗｏｆｖａｌｕｅａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｉｎｔｒｏｐｉｃａｌｒａｉｎｆｏｒｅｓｔｎａｔｉｏｎａｌｐａｒｋｓＣＨＥＮＹｕｌｏｎｇ１，ＹＡＮＧＱｉｎｇ１，∗，ＬＩＵＧｅｎｇｙｕａｎ２，３，ＹＡＮＧＺｈｉｆｅｎｇ２，４１ＡｄｖａｎｃｅｄＩｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄＥｃｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｕｈａｉ５１９０８７，Ｃｈｉｎａ２ＳｔａｔｅＫｅｙＪｏｉｎｔＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔＳｉｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄＰｏｌｌｕｔｉｏｎＣｏｎｔｒｏｌ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ＢｅｉｊｉｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８７５，Ｃｈｉｎａ３ＢｅｉｊｉｎｇＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＷａｔｅｒｓｈｅｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＲｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ＆ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＥｃｏｌｏｇｉｃａｌＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８７５，Ｃｈｉｎａ４ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｉｔｙＣｌｕｓｔｅｒＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳａｆｅｔｙａｎｄＧｒｅｅｎＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＥｃｏｌｏｇｙ，ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｇｅｎｅｒａｌ，ｔｈｅｖａｌｕｅｏｆｔｈｅｒｅｓｅｒｖｏｉｒｏｆｔｒｏｐｉｃａｌｒａｉｎｆｏｒｅｓｔｎａｔｉｏｎａｌｐａｒｋ（ｈｅｒｅｉｎａｆｔｅｒｒｅｆｅｒｒｅｄｔｏａｓＴＲＮＰ）ｐｏｓｓｅｓｓｅｓｓｔｒａｔｅｇｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｆｏｒａｃｏｕｎｔｒｙ．Ｎｅｖｅｒｔｈｅｌｅｓｓ，ｏｗｉｎｇｔｏｔｈｅｆａｃｔｔｈａｔＴＲＮＰｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄｂｙｃｏｍｐｌｅｘｂｅｎｅｆｉｃｉａｒｉｅｓ，ｍｕｌｔｉｐｌｅｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｂｅｎｅｆｉｔｓａｎｄａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｂｏｕｎｄａｒｉｅｓｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓ，ｓｔｉｌｌｅｘｉｓｔｓａｍｕｌｔｉｔｕｄｅｏｆｃｈａｌｌｅｎｇｅｓｆｏｒｉｔｓａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ，ｗｈｉｃｈｎｏｔｏｎｌｙｒｅｓｕｌｔｓｉｎｇｒｅａｔｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙｉｎｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇｔｈｅｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｏｆＴＲＮＰｂａｓｅｄｕｐｏｎａｎａｃｃｕｒａｔｅａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ，ｂｕｔａｌｓｏｈｏｌｄｓｂａｃｋｔｈｅａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔｏｆｔｈｅｗａｔｅｒｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｄｕｃｔｖａｌｕｅｏｆＴＲＮＰｓａｎｄｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇｎａｔｉｏｎａｌｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｃｉｖｉｌｉｚａｔｉｏｎｐｉｌｏｔｚｏｎｅ．Ｕｎｄｅｒｓｕｃｈｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｃｅｓ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｆｉｒｓｔｃｌａｒｉｆｉｅｄｔｈｅｍｕｌｔｉ⁃ｂｅｎｅｆｉｃｉａｒｉｅｓ，ｍｕｌｔｉ⁃ｓｃａｌｅｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｂｅｎｅｆｉｔｓ，ａｎｄｍｕｌｔｉ⁃ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｆｒａｍｅｗｏｒｋｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｏｆＴＲＮＰ，ｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｏｆＴＲＮＰａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｔｈｅｉｒａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ，ａｎｄｆｕｒｔｈｅｒｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｏｆＴＲＮＰｔｏｐｕｔｆｏｒｔｈｉｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｓｔｕｄｉｅｓ．Ａｌｔｏｇｅｔｈｅｒ，ｔｈｉｓｐａｐｅｒｉｓｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｓｕｐｐｏｒｔｆｏｒｔｈｅａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓａｎｄｔｈｅｍａｎａｇｅｍｅｎｔａｎｄｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｏｆＴＲＮＰ．ＫｅｙＷｏｒｄｓ：ｎａｔｉｏｎａｌｐａｒｋ；ｔｒｏｐｉｃａｌｒａｉｎｆｏｒｅｓｔ；ｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓ；ｂｅｎｅｆｉｃｉａｒｉｅｓ；ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｂｅｎｅｆｉｔｓ；ｖａｌｕｅａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｆｒａｍｅｗｏｒｋ森林给人类提供重要的生态系统服务，包括食物与水资源供给㊁调节水文㊁调节气候㊁生物多样性保护等㊂热带雨林提供的生态系统服务占所有森林生态系统服务比例最高［１２］，估计约５３８４＄ｈｍ－２ａ－１，约为温带森林的两倍［３］㊂大量研究强调热带雨林对水循环的积极作用，包括减少地表径流㊁补给地下水㊁维持土壤水分等［４６］㊂热带雨林能通过影响关键的水文过程（如蒸散发㊁林冠层拦截㊁增强土壤下渗）对降水再分配，来影响径流（总产水量）和涵养水源［７８］㊁净化水质（如污染物去除）［９１０］㊁调节局地气候［１１］等㊂据测算，１万ｈｍ２林地所蓄水量相当于一座３００万ｍ３的水库［１２］㊂在成熟的热带雨林中，只有少量降水直接降落至地面，大部分降水会以穿透雨和树干茎流的形式到达土壤，其中约８０％９５％最终会入渗到土壤层被保留下来［１３］㊂树干茎流和地表径流在经过植物淋溶作用和土壤贮滤作用后得到净化［１４１５］，使集水区的径流相较于降水的总磷㊁总氮及ＢＯＤ５浓度减少［１６］㊂热带雨林中植被的蒸腾过程，能增加大气水分，促进雾的形成与滞留［１７］，并在风的作用下向外输送水汽与热量，调节当地的气候㊂然而，有研究表明，热带雨林砍伐和退化已使热带雨林所覆盖的面积从１２％降低至地球土地面积的不到５％［１８］，影响了陆地与大气间的水分循环，使部分地区降雨量下降，甚至导致干旱［１９］㊂油棕林和橡胶林扩张是热带雨林大面积砍伐的主要驱动力㊂在１９９３２０１６年期间，东南亚地区总共有４１０万ｈｍ２的热带森林被砍伐用于橡胶园［２０］；马来西亚和印度尼西亚过去４０年热带森林砍伐总量的４７％和１６％是为油棕林种植［２１］㊂热带雨林向丛林式橡胶林㊁油棕和橡胶单一种植园转化，使得林地冠层开放性变高，平均相对湿度大幅下降，导致当地小气候的改变［２２］㊂Ｍａｎｏｌｉ等［２３］根据东南亚７个地区的热带雨林和油棕林实测数据模拟得出，相较于原始热带雨林，年轻的油棕人工林会降低生态系统蒸散量，导致更热和更干燥的气候；成熟的油棕人工林则会消耗更多的水，从而导致径流补给减少［２４］㊂在人口增加及经济增长的需求下，持续的农业扩张加速了热带雨林损失和退化，热带雨林生态系统变得更加脆弱，生态系统服务的流动进而减少或停止，提供给人类的福祉被大幅破坏与减少［２５２７］㊂已有研究表明，由于热带雨林的全球重要性及其对人类福祉的影响被大大低估［２８］，在气候变化和人类活动的多重压力下，热带雨林生态系统正不断地退化［２９］㊂因此，各国开始制定保护热带雨林的政策与方案［３０］㊂国家公园作为一种严格的生态保护措施得到了世界各国的普遍认可［３１］㊂如巴西为保护作为生物多样性热点区域的大西洋沿岸热带雨林，设立了包括卡帕拉奥国家公园［３２］㊁伊塔蒂亚亚国家公园［３３］等；澳大利亚在北部的季风雨林区域设立了具有自然和文化价值的卡卡杜国家公园，并被列入世界遗产名录［３４］；哥斯达黎加在２０世纪８０年代设立圣塔罗莎国家公园，来保护其最后一片热带雨林［３５］㊂在哥斯达黎加，超过１５０条河流起源于塔潘蒂国家公园，是哥斯达黎加水资源的关键来源，占哥斯达黎加２５％水电发电量和饮用水供应量［３６］㊂我国在党的十八届三中全会提出建立国家公园体制以后，为保护和修复海南热带雨林生态系统，２０２０年６月１日，中共中央㊁国务院印发‘海南自由贸易港建设总体方案“，提出建立热带雨林等国家公园，构建以国家公园为主体的自然保护地体系㊂２０２１年９月３０日，国务院批复同意设立海南热带雨林国家公园［３７］㊂２０２２年４月１１日，习近平总书记在海南省考察时指出，热带雨林类国家公园是国宝，是水库㊁粮库㊁钱库，更是碳库，要充分认识其对国家的战略意义，努力结出累累硕果㊂然而，现有研究在核算热带雨林类国家公园水生态系统服务价值时，大多仅考虑了公园范围内服务产生５５１㊀３期㊀㊀㊀陈宇龙㊀等：热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算方法综述㊀６５１㊀国家公园（中英文）㊀㊀㊀２卷㊀的效益，这可能会造成国家公园水生态系统服务价值被严重低估㊂同时，热带雨林类国家公园提供的水资源可能未被最佳利用（例如将Ｉ类水用于生产），其真正的生态价值难以显现㊂２０２０年发表在ＰＮＡＳ的文章指出：在没有市场（即影子价格）的情况下估算水的价值，会缺乏明确受益主体；并且，若以用水价值（生产过程中水产生的价值）来核算生态系统提供的水资源，则在很大程度上会被生产的产品所影响，例如农产品虽然在生产中需要消耗大量的水，但其定价却未包含用水成本，使得水在农业中的价值比其他部门（采矿㊁工业或市政）至少低一个数量级［３８］㊂此外，缺乏准确核算基础也使热带雨林类国家公园生态保护与修复制度难以有效开展，难以最大限度保护水生态资源并发挥最佳效益及让百姓共享资源价值红利㊂２０２１年联合国粮食及农业组织等联合发布的‘森林⁃水资源管理指南“中明确指出：迫切需要解决热带雨林水生态系统服务价值核算，并以提高水安全的方式进行热带雨林管理［１９］㊂尽管已有大量研究表明热带雨林提供丰富的水生态系统服务，但目前尚未形成认可度高的价值核算理论，核算方法不一，缺少统一的术语㊁分类㊁方法和模型等㊂因此，本研究综述了目前热带雨林水生态系统服务价值核算方法及其存在的优点和挑战，并提出热带雨林类国家公园水生态系统服务价值多边界核算框架，为热带雨林类国家公园水库研究提供参考㊂１㊀热带雨林类国家公园水生态系统服务的多元受益主体与多尺度生态效益分析框架生态系统服务（ＥＳ）是描述和理解人与自然之间相互联系的交叉概念㊂评估热带雨林类国家公园这样行政管理边界的水生态系统服务价值时，首先需要明确各项服务的受益主体及产生的生态效益㊂受益主体可以是当地居民，也可以是工农业生产㊁旅游业㊁生态系统与生物多样性保护等㊂生态效益指受益者从水生态系统服务中获得的价值惠益，可以是清洁的水资源供给㊁工农业或第三产业用水㊁自然水生态景观㊁调洪补枯㊁减少洪水灾害等㊂每项生态效益和水生态系统服务密切相关，关联程度取决于水量㊁水质㊁水文㊁水情等水生态系统特征及相关规划㊁政策等的制定与变化，正向和负向影响程度都存在［３９］㊂１．１㊀热带雨林类国家公园水生态系统服务多元受益主体分析框架生态系统服务是人类从生态系统中获得惠益，因此可以构建生态系统服务与受益主体的关系㊂水生态系统服务可以提供点为源，受益点为汇，将源⁃汇连线为流，绘制生态系统服务在空间上的分布与流动［４０］㊂生态系统服务⁃受益主体的关系可以通过建立受益主体与生态系统服务的关联矩阵来确定，热带雨林类国家公园中与水相关的供给㊁调节服务的多元受益主体及其受益领域如表１所示㊂表１㊀热带雨林类国家公园水生态系统服务多元受益主体确定矩阵Ｔａｂｌｅ１㊀Ｍａｔｒｉｘｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｍｕｌｔｉｐｌｅｂｅｎｅｆｉｃｉａｒｉｅｓｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｏｆｔｒｏｐｉｃａｌｒａｉｎｆｏｒｅｓｔｎａｔｉｏｎａｌｐａｒｋｓ水生态系统服务ＥｘａｍｐｌｅｓｏｆｂｅｎｅｆｉｃｉａｌａｒｅａｓＷａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓ受益主体示例Ｅｘａｍｐｌｅｓｏｆｂｅｎｅｆｉｃｉａｒｉｅｓ受益领域示例供给服务水资源供给工业㊁农业㊁当地居民取水水源Ｐｒｏｖｉｓｉｏｎｉｎｇｓｅｒｖｉｃｅｓ水力发电工业㊁当地居民电力调节服务水文调节工业㊁农业㊁当地居民减少洪水㊁干旱的负面影响Ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｓｅｒｖｉｃｅｓ水质净化工业㊁当地居民减少水净化成本调节气候当地居民㊁游客调节局地的温湿度１．２㊀热带雨林类国家公园水生态系统服务多尺度生态效益分析框架在评估水生态系统服务与其生态效益之间的关联程度时，通常会利用生态系统服务效益矩阵来厘清各项要素之间的逻辑关系㊂该矩阵主要分为两个维度：水生态系统服务与各项服务对应的生态效益㊂水生态系统服务呈现其具体服务子类，生态效益显示这些服务带给受益主体的具体生态惠益，每项生态效益受到生态系统服务子类的影响程度不同㊂以海南热带雨林国家公园范围为例，其水生态系统服务效益表（表２）能够清晰地反映区域内各类群体的受益情况，以及形成这些效益的水文生态过程㊂水生态系统服务效益表能在明确其的相关受益者㊁效益及支持这些效益的生态过程等基础上，进一步帮助评估者理解某一效益与生态系统服务之间相互影响的程度是强还是弱㊂如通过服务效益矩阵来表示热带雨林类国家公园内某一效益在多大程度上取决于生态系统服务，从而为制定或完善相关规划㊁政策提供支撑㊂表２㊀水生态系统服务效益矩阵：以海南热带雨林国家公园为例Ｔａｂｌｅ２㊀Ｗａｔｅｒ⁃ｒｅｌａｔｅｄｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｂｅｎｅｆｉｔｍａｔｒｉｘ：ＡｃａｓｅｓｔｕｄｙｏｆＨａｉｎａｎＴｒｏｐｉｃａｌＲａｉｎｆｏｒｅｓｔＮａｔｉｏｎａｌＰａｒｋ生态效益取决于水生态系统服务的程度Ｔｈｅｄｅｇｒｅｅｏｆｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｂｅｎｅｆｉｔｓｄｅｐｅｎｄｉｎｇｏｎｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓ水生态系统服务Ｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓ水资源供给水力发电调节水文净化水质调节气候效益清洁的饮用水㊁生产用水强相关中等相关弱相关强相关中⁃弱相关Ｂｅｎｅｆｉｔｓ水电供应㊁生产用水强相关强相关中⁃弱相关中⁃弱相关弱相关调节径流㊁拦洪补枯中等相关中⁃弱相关强相关中⁃弱相关中⁃弱相关减少洪水㊁干旱等自然灾害带来的损失中等相关中等相关强相关中⁃弱相关中⁃弱相关清洁的水资源强相关强相关中等相关强相关中等相关调节局地温湿度中等相关中⁃弱相关中等相关中⁃弱相关强相关１．３㊀热带雨林类国家公园水生态系统服务多边界评估框架以海南热带雨林国家公园为例，提供水生态系统服务的源头在公园内部，但由于水文连通性的自然属性及水资源跨区域调动的社会经济需求，海南热带雨林国家公园水生态系统服务不仅为公园内部提供福祉，还可为公园周边地区㊁整个海南岛甚至是海南岛以外地区提供相关服务［４１］㊂因此，为使海南热带雨林水生态系统服务价值不被低估，需要构建多边界的热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算框架㊂该框架可考虑包括四个边界，如图１所示，其中边界１为国家公园边界，边界１内的服务可称为公园内直接服务；边界２为国家公园以外但仍为热带雨林生态系统或发源于公园的水系所流经的公园周边地区，边界２内的服务可称为公园内间接服务；边界３国家公园所在的海南岛，边界３内的服务可称为公园外直接与间接服务；边界４为海南岛以外的区域，边界４的服务可包括隐含在产品或者服务中来自公园的水服务，可称为公园区域外的隐含服务㊂不同边界内水生态系统服务对应着不同受益主体及主要服务类型：边界１内的受益主体主要是自然生态系统，边界２㊁３和４的受益主体主要是人或生物；边界１和２内的服务可能主要但不限于包括调节水文㊁净化水质㊁调节气候，边界３内的服务可能主要但不限于水资源供给㊁水力发电㊁调节水文㊂图１㊀热带雨林类国家公园水生态系统服务多边界评估框架：以海南热带雨林国家公园为例Ｆｉｇ．１㊀Ｍｕｌｔｉ⁃ｂｏｕｎｄａｒｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｆｒａｍｅｗｏｒｋｆｏｒｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｏｆｔｒｏｐｉｃａｌｒａｉｎｆｏｒｅｓｔｎａｔｉｏｎａｌｐａｒｋ：ＡｃａｓｅｏｆＨａｉｎａｎＴｒｏｐｉｃａｌＲａｉｎｆｏｒｅｓｔＮａｔｉｏｎａｌＰａｒｋ热带雨林类国家公园水生态系统服务多边界评估框架强调水生态系统服务对人类社会福祉的重要贡献作用㊂在边界１与边界２内，周边社区作为热带雨林类国家公园水生态系统服务的优先受益主体，能从生态系统多种生态过程与功能中获取惠益，如清洁的水资源㊁蓄洪调洪㊁丰富的生物多样性与旅游资源等，使周边社区居民可获得优质的生产生活资源㊁降低洪涝灾害风险㊁增加旅游收入等㊂边界３内，强调热带雨林类国家７５１㊀３期㊀㊀㊀陈宇龙㊀等：热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算方法综述㊀８５１㊀国家公园（中英文）㊀㊀㊀２卷㊀公园水生态系统服务在更大社区尺度的贡献，尤其是水资源供给㊁水力发电等方面，譬如海南热带雨林国家公园的水资源可供给整个海南岛使用，为海南岛社会经济系统提供一定的保障㊂此外，热带雨林国家公园所提供的水生态系统服务在海南岛外的区域仍存在价值，即边界４内的服务㊂水的必要性决定了生产过程中水的消耗，当缺水地区进口某些消耗大量水资源的产品（如农产品）时，事实上也享受了水源充沛地区提供的水生态系统服务㊂例如，海南岛内的橡胶林种植会消耗大量由生态提供的水资源，其他地区在进口橡胶原料时便享用了海南岛内生态系统提供的服务㊂同样，当蓝水资源（即来自地表水体或含水层的水）固有地被其他类型的土地占用时，水会以降水的形式隐含地从其他类型用地中获得，这些水服务价值仍难以核算㊂因此，在核算热带雨林类国家公园水生态系统服务价值时需构建多边界评估框架，将国家公园周边社区纳入热带雨林水生态系统服务价值评估框架，从社会⁃生态复合系统角度全面系统评估热带雨林类国家公园水生态系统服务价值，避免热带雨林类国家公园水生态系统服务给人类提供福祉的低估㊂２㊀热带雨林类国家公园水生态价值现有核算方法与结果现有热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算逻辑（图２），主要是基于对生态系统服务的分析上，结合所对应的生态过程，选取具有代表性的实物指标，再通过实地监测或模拟模型得到实物量，最后根据各生态系统的特点，选取合适的价值量核算方法，如影子工程法㊁替代成本法等，将实物量转化为货币量，使不同的生态系统服务价值能进行加和，得出热带雨林类国家公园生态系统服务的总价值㊂现有热带雨林类国家公园㊂水生态系统服务价值核算方法与结果汇总详见表３，下面结合表３对各项服务核算方法分别进行阐述Array图２㊀现有热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算逻辑Ｆｉｇ．２㊀Ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇｌｏｇｉｃｏｆｗａｔｅｒｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓｅｒｖｉｃｅｓｉｎｔｒｏｐｉｃａｌｒａｉｎｆｏｒｅｓｔｎａｔｉｏｎａｌｐａｒｋ２．１㊀水资源供给热带雨林类国家公园水资源供给服务主要体现在公园内集水区和径流为自来水厂㊁农渔业供给水资源以及为水电站提供水力发电所需的持续水流㊂由于热带雨林中的水资源通过人类利用后会成为具有明确价格的商品（如电力㊁自来水等），于是有研究用市场价格法来核算其水资源供给与水力发电服务㊂从表２可知，陈宗铸等［４２］基于统计调查的热带雨林周围的水电站发电量及当地电价，核算出海南热带雨林国家公园２０１９年提供了０．０４亿元的电力；根据渔业产品产量与产值，核算出海南热带雨林国家公园水资源供给服务为渔业贡献了２．２２亿元的经济价值㊂Ｂｅｒｎａｒｄ等［３６］则根据热带雨林保护能减少堤坝沉积物，从而避免水力发电厂发电量的损失，核算出哥斯达黎加塔潘蒂国家公园（ＴａｐａｎｔｉＮａｔｉｏｎａｌＰａｒｋ）每年在水力发电中的价值约为１６５万美元㊂然而，以水资源被人类利用生产出的商品价格进行价值核算可能会造成热带雨林类国家公园作为服务产生者对人类社会水资源供给贡献的低估㊂例如，以电价来核算热带雨林类国家公园水资源供给服务在发电中的价值，其结果主要反映的是发电㊁输电成本以及当地政策等［４３］，而非生态系统为人类提供水资源所做出的贡献，如形成集水区㊁径流等，使人类能设置取水口获得稳定的水源［４４］㊂且将水资源以商品的形式进行核算，更多考虑的是人类对热带雨林类国家公园内水资源的利用与交易，容易忽略因水文连通性㊁上下游连接性以及为社会经济需求而跨区域调水等从热带雨林类国家公园外流出的水资源供给服务提供的福祉，可能会低估热带雨林类国家公园对整个区域或流域如中下游居民生活㊁工农业生产等的贡献㊂２．２㊀水文调节热带雨林类国家公园为人类提供的水文调节服务，如贮存降水㊁调节径流等，在功能上与水利工程相似，故有研究采用影子工程法核算调节水文服务，即假设一个水库调节水文功能与生态系统相同，通过核算该工程建造或维护的费用来表示生态系统调节水文服务的价值㊂如张治军等［４５］基于降雨储存量法，用森林生态系统相较于裸地的蓄水效益来估算调节水量乘以每平方水库库容造价来核算调节水文价值㊂由表２可知，Ｎｉｎａｎ等［４６］基于水量平衡模型，通过年平均降雨量减去蒸散与径流量得到热带雨林因降雨保存的水量，再根据卡比尼水库项目的总累计支出以及年度维护成本，结合贴现率核算出２０１４年印度纳加霍尔国家公园（ＮａｇａｒｈｏｌｅＮａｔｉｏｎａｌＰａｒｋ，以热带落叶林和开放草地混合植被为主）水源涵养服务的经济价值为２０万美元㊂Ｋｉｂｒｉａ［４７］等通过与裸露土地（或非森林地区）相比，采用热带森林生态系统中增加的水量乘以每立方米水库建设成本，核算出柬埔寨旺西暹国家公园（ＶｅｕｎＳａｉ－ＳｉｅｍＰａｎｇＮａｔｉｏｎａｌＰａｒｋ，以热带常绿和半常绿森林为主）水文调节服务价值为５８１美元／ｈｍ２㊂陈宗铸等［４２］采用水量平衡法，即降水输入与暴雨径流和生态系统自身水分消耗量的差值来计算热带雨林保持的水量，并通过水量储存模型来计算洪水调蓄量，再以建造一个蓄水功能与生态系统水源涵养质量相同的水利工程所需的工程造价及维护成本来核算海南热带雨林类国家公园调节水量和洪水调蓄服务价值，总计为５６２．５２亿元㊂由此可以看出利用影子工程法核算热带雨林类国家公园水文调节服务价值实质是将热带雨林降水入渗㊁径流调节等复杂的生态过程视为人类修建和维护水库的劳动，两者功能虽有相同，但价值形成过程却相差甚远㊂热带雨林水文调节服务对人类社会的价值，是在生态系统与水相互作用的各个过程中形成的，其影响因素主要在于生态系统能够调蓄的水量，而影子工程法中研究所选取的材料㊁劳动力等价格受市场影响存在很大波动性，会在很大程度上影响核算结果，导致不同研究核算结果间可比性较差㊂２．３㊀水质净化和气候调节热带雨林类国家公园水质净化和气候调节服务多采用效益转移法㊁替代成本法核算，即将生态系统为人类在水质处理和温湿度调节方面节省的人力㊁能源等成本来核算水质净化和气候调节服务价值㊂如表２所示，Ｎｉｔａｎａｎ等［４８］基于效益转移法，将纯净水处理成本作为热带雨林水质净化服务价值的代替，以集水区的水量作为实物量，核算出２０１６年马来西亚兴楼云冰国家公园（马来西亚仅存的低地热带雨林之一）每公顷水质净化服务的价值为１２５６林吉特㊂陈宗铸等［４２］将森林生态系统蓄积降水的年增加量作为水质净化的实物量核算出海南热带雨林国家公园２０１９年水质净化服务价值为１５８．６８亿元；杜傲等［４９］用污水治理成本核算出海南热带雨林国家公园２０１５年水质净化服务价值为０．２亿元㊂热带雨林类国家公园气候调节服务，目前研究主要将生态系统蒸散发过程中消耗的能量作为人类在调节温湿度方面所节省的能源，再根据能源价格核算该服务的价值［４２，４９５０］㊂如杜傲等［４９］将该服务视作对电力的节省，结合当地的电价将计算出的电力成本作为其价值量，核算出海南热带雨林国家公园２０１５年的气候调节服务价值为８３３．４亿元；陈宗铸等［４２］以电力成本作为替代，核算出海南热带雨林国家公园２０１９年气候调节服务为５５．４６亿元㊂与影子工程法相似，替代成本法在核算生态系统服务价值时同样存在局限性㊂以人类社会中自来水厂水处理成本当作水质净化服务价值的核算方法，其价值主要由自来水厂处理工艺决定，而不同污水处理工艺成本不同，尚未形成统一标准㊂且由于热带雨林通常为当地河流发源地，水源用途广泛，各用途对水质要求不同，若以单一标准（如自来水或工业用水）对热带雨林水质净化服务进行核算，会与实际用水情况发生偏差，核算出的结果难以反映其真正的价值㊂对于气候调节服务，单纯的能量生产和运输价值并不能完全体现出热９５１㊀３期㊀㊀㊀陈宇龙㊀等：热带雨林类国家公园水生态系统服务价值核算方法综述㊀。

遂川县:继往开来谱新篇

遂川县：继往开来谱新篇
遂川县扶贫和移民办公室
【期刊名称】《老区建设》
【年(卷),期】2016(0)7
【摘要】遂川县位于江西省西南部、湘赣两省八县交界之处,是国家扶贫开发工作重点县、原中央苏区振兴县、国家罗霄山脉集中连片开发县、国家主体功能区建设试点示范县。

＂十二五＂以来,遂川县紧紧抓住罗霄山片区区域发展与扶贫攻坚战略机遇,团结和依靠全县人民,立足县情实际,致力于打基础、管长远、抓产业、惠民生,
【总页数】2页(P68-69)
【作者】遂川县扶贫和移民办公室
【作者单位】
【正文语种】中文
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韬睿—东风乘用车第三周工作计划

东风乘用车公司与韬睿咨询公司
“以平衡计分卡为导向的绩效管理体系”咨询项目
第三周工作计划
期间：2003/11/3→2003/11/9
报：吉田卫总经理、任勇副总经理、周先鹏副总部长、陈斌波副总部长、徐建明副中心长、于占渤部长、郑乐华部长、高国林部长、刘喜鲁副部长送：各项目工作组、各部门协调人
本周工作成果：
⏹形成关于国内外相关汽车行业业务与管理流程以及组织架构成功经验和最佳实践的分析报告，并提供行业标杆数据⏹韬睿公司对东风乘用车目前核心业务与管理流程优化咨询意见
⏹东风乘用车目前核心流程进行绘制和梳理，形成公司跨部门的核心业务与管理流程相应文件
⏹岗位分析与评估工作计划及公司所有岗位梳理
⏹KPI体系培训教材
⏹初步设定公司层级平衡计分卡指标
东风乘用车战略明晰研讨，明确公司战略和关键成功要素，及相应的公司愿景、使命、战略目标和公司级绩效关键衡量指标、行动方案的初步确定
本周工作地点：韬睿公司/东风乘用车
项目经理签字认可：
东风乘用车韬睿咨询公司。

常州市池一供应链管理有限公司介绍企业发展分析报告模板

Enterprise Development专业品质权威Analysis Report企业发展分析报告常州市池一供应链管理有限公司免责声明:本报告通过对该企业公开数据进行分析生成，并不完全代表我方对该企业的意见，如有错误请及时联系;本报告出于对企业发展研究目的产生，仅供参考，在任何情况下，使用本报告所引起的一切后果，我方不承担任何责任:本报告不得用于一切商业用途，如需引用或合作，请与我方联系:常州市池一供应链管理有限公司1企业发展分析结果1.1 企业发展指数得分企业发展指数得分常州市池一供应链管理有限公司综合得分说明：企业发展指数根据企业规模、企业创新、企业风险、企业活力四个维度对企业发展情况进行评价。

该企业的综合评价得分需要您得到该公司授权后，我们将协助您分析给出。

1.2 企业画像类别内容行业空资质空产品服务：道路货物运输（不含危险货物）；道路危险货1.3 发展历程2工商2.1工商信息2.2工商变更2.3股东结构2.4主要人员2.5分支机构2.6对外投资2.7企业年报2.8股权出质2.9动产抵押2.10司法协助2.11清算2.12注销3投融资3.1融资历史3.2投资事件3.3核心团队3.4企业业务4企业信用4.1企业信用4.2行政许可-工商局4.3行政处罚-信用中国4.5税务评级4.6税务处罚4.7经营异常4.8经营异常-工商局4.9采购不良行为4.10产品抽查4.12欠税公告4.13环保处罚4.14被执行人5司法文书5.1法律诉讼（当事人）5.2法律诉讼（相关人）5.3开庭公告5.4被执行人5.5法院公告5.6破产暂无破产数据6企业资质6.1资质许可6.2人员资质6.3产品许可6.4特殊许可7知识产权7.1商标7.2专利7.3软件著作权7.4作品著作权7.5网站备案7.6应用APP7.7微信公众号8招标中标8.1政府招标8.2政府中标8.3央企招标8.4央企中标9标准9.1国家标准9.2行业标准9.3团体标准9.4地方标准10成果奖励10.1国家奖励10.2省部奖励10.3社会奖励10.4科技成果11 土地11.1大块土地出让11.2出让公告11.3土地抵押11.4地块公示11.5大企业购地11.6土地出租11.7土地结果11.8土地转让12基金12.1国家自然基金12.2国家自然基金成果12.3国家社科基金13招聘13.1招聘信息感谢阅读:感谢您耐心地阅读这份企业调查分析报告。

北京航天澳润电子有限公司诉北京奥润办公设备技术公司计算机软件著作权及商标权转让合同纠纷案

北京航天澳润电子有限公司诉北京奥润办公设备技术公司计算机软件著作权及商标权转让合同纠纷案中华人民共和国最高人民法院民事判决书（2002）民三终字第6号上诉人（原审被告）：北京航天澳润电子有限公司。

法定代表人：周正清，该公司董事长。

委托代理人：林建军，北京市金之桥专利事务所专利代理人。

被上诉人（原审原告）：北京奥润办公设备技术公司。

法定代表人：董书君，该公司董事长。

委托代理人：张延庆，该公司法律顾问。

委托代理人：董永森，北京市正见永申律师事务所律师。

北京航天澳润电子有限公司（以下简称航天澳润公司）因与北京奥润办公设备技术公司（以下简称北京奥润公司）计算机软件著作权及商标权转让合同纠纷一案，不服北京市高级人民法院（2000）高知初字第38号民事判决，向本院提起上诉，本院以（2001）民三终字第2号民事裁定，撤销原判，发回重审。

北京市高级人民法院经重审后作出（2002）高民初字第2号民事判决。

航天澳润公司不服该重审判决，再次向本院提起上诉。

本院依法组成由审判员董天平担任审判长，审判员于晓白、代理审判员段立红参加的合议庭对本案进行了审理，书记员李剑担任记录，现已审理终结。

原审法院经审理查明：航天澳润公司系由天通计算机应用技术中心（以下简称天通中心）、哈尔滨工业大学高新技术开发总公司（以下简称哈工大总公司）、北京奥润公司三方共同出资设立，成立时注册资金为300万元。

1997年9月15日，北京奥润公司与航天澳润公司签订了计算机软件著作权转让合同，约定北京奥润公司将其所有的BANK STAR-951、961、971、2000、2100、405、8600等七项打印机的软件著作权转让给航天澳润公司，转让费由双方认可的中介机构评估后另行确定偿付办法。

1998年1月28日，北京奥润公司又将其所有的注册商标“BANK STAR”、“ORIEN”转让给了航天澳润公司。

1998年5月16日，航天澳润公司的三方股东天通中心（甲方）、哈工大总公司（乙方）、北京奥润公司（丙方）共同签署协议，约定：（1）航天澳润公司增资至注册资金1600万元；增资同时办理扩股和股权变更手续；（2）航天澳润公司扩股、股权变更和增资手续完成后，出资700万元购买丙方和深圳奥士达电子有限公司的技术、商标商誉和软件著作权等无形资产，其中500万元补偿给丙方，200万元补偿给深圳奥士达电子有限公司；（3）用于购置无形资产的700万元，在航天澳润公司增资后支出，该款项在上市前暂不在无形资产项下列支，待航天澳润公司改制上市完成后，再履行无形资产的购置手续。