结缔组织多色染色法
特殊染色和组织化学
⒉粘蛋白
在同一种上皮和腺体内常可同时分泌2种 粘液物质，而在同部位的分泌物中两者 的比例和含量都有所不同。
⒉粘蛋白
粘液物质一般具有下列性质： ①对异染性染料具有异染性； ②对碱性染料具有很强的亲和力； ③除胃粘蛋白外，其他粘液遇醋酸时 都会发生沉淀； ④可溶于弱碱性溶液。
2．在心肌病变及其他心血管疾病的研究 用显示糖原的特殊染色，可以观察到由缺 血缺氧所致急性早期心肌坏死病灶内的糖 原明显减少甚至消失，呈均质的浓染状态， 而病灶周围则出现反应性异常糖原增多； 已愈合的心肌梗死灶周围的心肌纤维内可 有糖原颗粒浸润；心肌的横纹肌瘤也有大 量糖原存在。
3．糖原累积病的诊断及研究 用显示糖原的 特染方法可观察到由先天性遗传缺陷引起的 糖原累积病时，心、肝、肾、骨骼肌、单核 吞噬系统等器官内均有大量的糖原堆积。
1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组织 细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类染 色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解 度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些染 色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸 收或沉淀到组织、细胞的小孔中去而着色的‘这种 机制的染色是很少的。
2、另有学者认为染色是染色剂与组织、细胞之间 的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反 应是最典型的例子。
5)蒸馏水洗涤数次。
6)用Schiff试剂浸染5一 10min，如温度低时 可延长浸染时间。
7)倾去Schiff试剂，直 接流水冲洗10min。
8)用明砚苏木素染液浅 染胞核2—3min，过 染时可用o5％盐酸乙 醇液稍分化。
9)流水冲洗5一l0min。
10)乙醇脱水，二甲苯运 明，中性树胶封固。
注意事项
2、类化学方法 有少数方法的染色反应有特 殊性，但机制不明。
医学院《结缔组织》课件
—————细菌
——真皮
分子筛功能 小分子物质可通过，物质交换 大分子物质不能通过，防御屏障
组织液 毛细血管动脉端渗入基质内的液体
毛细血管
动脉端 毛细淋巴管
静脉端
图24 组织液生成与回流示意图
疏松结缔组织 (光镜切片)
结缔组织种类
固有结缔组织 血液 软骨 骨
疏松结缔组织 致密结缔组织 脂肪组织 网状组织
脂肪组织 (光镜切片)
网状组织 (银染)
第四章 软骨和骨
器官
一、软骨 组成
软骨组织 软骨膜
软骨细胞 基质 纤维
分类（根据纤维的不同分三类） 透明软骨 含胶原原纤维 纤维软骨 含胶原纤维 弹性软骨 含弹性纤维
（一）透明软骨 1.软骨组织的结构
（1）软骨细胞 藏于软骨陷窝内
近软骨膜的软骨细胞
较幼稚，体小，扁圆（单个）
（2）基质 蛋白多糖
透明质酸 硫酸角质素 硫酸软骨素A和 C
大量在软骨陷窝周围
（3）纤维 胶原原纤维
软骨囊
———软骨细胞 —————软骨基质
胶原原纤维
2.软骨膜 软骨组织外表面的致密结缔组织
（1）外层 纤维多，细胞少
（2）内层 细胞多，纤维少 紧贴软骨组织处有骨原细胞
透明软骨 （光镜切片）
–––软骨膜 ––骨原细胞 ——————软骨组织
弹性纤维
物理特性 弹性大
外弹性膜
外膜
中膜 内膜
内弹性膜
血管壁组织结构图
3.网状纤维（嗜银纤维） (reticular fiber)
光镜 银染法 棕黑色 纤维较细 分支连成网
—网状纤维
化学成分 Ⅲ型胶原蛋白
胶原原纤维（外有蛋白多糖、糖蛋白）
Masson三色染色
Masson 三色染色一、实验原理结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。
Masson 三色染色又称马松染色，是结缔组织染色中最经典的一种方法，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织，而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织。
然而，淡绿或苯胺蓝的分子量很大，因此 Masson 染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈绿色或蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
二、实验材料Masson 试剂盒厂家货号：索莱宝 G1340产品组成：试剂(A):Weigert 铁苏木素染色液A1:Weigert 染液A 25ml RT避光A2:Weigert 染液B 25ml RT临用时，取 A1、A2 等量混合，成为 Weigert 铁苏木素染色液，不可预配制后放置。
试剂(B): 酸性乙醇分化液 50ml RT试剂(C): Masson 蓝化液 50ml RT试剂(D): 丽春红品红染色液 50ml RT 避光试剂(E): 弱酸溶液 50ml RT试剂(F): 磷钼酸溶液 50ml RT 避光试剂(G): 苯胺蓝染色液 50ml RT 避光自备材料：固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液系列乙醇二甲苯操作步骤（仅供参考）： 1、切片常规脱蜡至水。
2、用配制好的 Weigert 铁苏木素染色液染色5min-10min。
3、酸性乙醇分化液分化 5-15s，水洗。
4、 Masson 蓝化液返蓝 3-5min，水洗。
5、蒸馏水洗 1min。
6、丽春红品红染色液染色 5-10min。
7、在上述操作过程中按蒸馏水：弱酸溶液=2:1 比例配置弱酸工作液，用弱酸工作液洗 1min。
《组织学与胚胎学》名词解释
组胚名词解释第一章绪论1．组织：组织是形态和功能相同或相似的细胞组成的细胞群体。
据形态结构和功能，可分为上皮组织、结缔组织、肌组织和神经组织4种基本类型。
2．H-E染色法：是组织学中最常用的染色方法，使用苏木精和伊红；苏木精是碱性染料，将细胞核染成蓝紫色；伊红是酸性染料，将细胞质染成红色。
3．组织化学术：是应用化学反应、物理反应或免疫学反应等原理，在组织、细胞原位检测组织或细胞内化学成分，并对其进行定位、定量及相关功能研究的实验技术。
凡是组织、细胞内的糖类、脂类、蛋白质、酶类和核酸等都可与相应试剂反应，最终形成有色反应终产物或电子致密物，应用光镜或电镜进行观察。
广义的组织化学术还包括免疫组织化学术、原位杂交术等。
4．PAS反应：即过碘酸-希夫反应，是显示多糖的一种组织化学反应。
根据反应产物的多少、颜色的深浅、光密度可对多糖进行半定量。
第二章上皮组织1．内皮：铺衬于心血管和淋巴管内表面的一层单层扁平上皮，其表面光滑，利于血液或淋巴流动。
2．间皮：覆盖在胸膜、腹膜和心包膜表面的单层扁平上皮，其主要功能是保持器官表面光滑，减少器官间的摩擦。
3．间充质：是胚胎时期，由间充质细胞和无定形基质组成。
间充质细胞：呈星形，细胞核较大，核仁明显，胞质弱嗜碱性，细胞间以突起相互连接成网。
间充质细胞分化程度很低，但增殖和分化能力很强。
4．基膜：是上皮细胞基底面与深部结缔组织之间共同形成的薄膜。
在HE染色的标本一般不易分辨。
电镜下，基膜分为两部分，靠近基底面的部分为基板，与结缔组织相接的部分为网板。
基膜具有支持、连接和固定作用；还是半透膜，有利于上皮细胞与深部结缔组织进行物质交换；还能引导上皮细胞移动，影响细胞的增殖和分化。
5．微绒毛：是上皮细胞游离面伸出的微细指状突起，在电镜下，微绒毛的胞质中有许多纵行的微丝。
微绒毛使细胞的表面积显著增大。
第三章结缔组织1．细胞外基质：即细胞间质，由基质、纤维和组织液组成。
细胞外基质由细胞产生，构成细胞生存的微环境，有支持、联系、保护和营养细胞的作用，对细胞增殖、分化、迁移以及信息传导有重要影响。
HE染色技术
HE染色技术一、相关理论A1型1. 病理切片HE染色的目的是A 显示组织正常和病变的一般形态结构B 保持细胞原有的形态结构C 保留细胞内原有的特殊成分D 保留细胞内原有物质的颜色E 便于长期保存切片答：A 易X 型2. 显微镜下HE染色组织切片颜色是A 细胞核呈蓝色B 细胞浆呈红色C 纤维和肌肉呈红色D 胶原纤维等呈蓝色E 脂类呈红色答：ABC 中二、专业知识A1型3. HE染色切片如出现核浆共染，结构不清，其主要原因是：A 组织脱水、透明、浸蜡不足B 组织脱水、透明、浸蜡过度C 组织陈旧、腐败D 分化时间过短E 胞浆染色时间过长答案：C 中X 型4.HE染色中二甲苯的作用是：A 减少组织收缩，避免细胞变形B 溶解切片中的石蜡，以使染料易于与组织结合C 起透明作用，以利光线透过D 防止切片不洁污染E 脱去福尔马林色素答案：BC 易三、实践能力A2型要使苏木红对细胞核具有强的亲合力，必须在苏木红染液加入媒染剂，所谓媒染剂是指能促进染色能力，本身能与织和染料发生结合，能把组织染料联系起来的试剂。
配制Harris苏木精液常用的媒染剂是：A 硫酸铁铵B 硫酸铝钾C 三氯化铁D 三氯化铬E 硫酸氢钾答案B 难A3型6.苏木素分子中并不具备发色基，它仅仅是一种容易变成染料的变色物质，要使苏木素变成真正的染料（染液）－苏木红，必须使苏木素分子氧化变成酸性染料苏木红，而苏木红和铝结合形成一种带正电荷的蓝色色精。
问题1. 配制Harris苏木精液常用的氧化剂是：A 钾明矾B 红色氧化汞C 氯化氢D 硫酸铝E 氢氧化物答案：B 中问题2 Harris苏木精液配制的优点是A 配制麻烦B 容易形成沉淀C 染色力强D 染色力弱E 染色方法复杂答案：C 难A4型7.HE染色方法虽然是最常用、最简单的染色方法，但它的染色过程却是复杂的，每一染色步骤都关系到切片质量，其中包括固定液的选择、脱水、染色、分化、还原等步骤。
问题1 病理组织切片最常用的固定液是A 乙醚乙醇固定液B 95%乙醇C Lugol液D 10%福尔马林E Carnoy固定液答案：D 易问题2 配制伊红染液时加入少量冰醋酸是作为A 氧化剂B 发色剂C 分化剂D 促染剂E 媒染剂答案：D 中问题3 . HE染色分化、还原后应用乙醇的目的是：A 苏木精染料的清洁B 清洗二甲苯C 使水分进入细胞D 清洗伊红染料E 去除组织切片中水分，为二甲苯透明做准备答案：E 易问题4. HE染色核最佳的着色是：A 红色B 黄色C 黑色D 粉红色E 紫蓝色答案：E 易X 型8. HE染液中的助色团的作用是：A 使染料分子染色度加深B 使染料分子与被染物之间产生亲和力C 使染料分子极性增强，易离子化D 使染料分子电离为负离子，易与细胞结合着色E 多为极性基团答案：ABCE 难9. HE染色细胞核染色原理是A 细胞核内的染色质主要是DNAB DNA两条链上的磷酸基向解，带正电荷C DNA呈酸性D 苏木精为碱性染料E DNA很容易与苏木精以离子键或氢键结合而被染色答案：ACDE 难10.HE染色盐酸酒精分化作用是：A 促进细胞核着色B 促进细胞还原蓝染C 为细胞核还原蓝染做准备D 去除核、胞浆、多余染料及过染E 去除细胞核过多水分答案：CD 中四、多项问题型11.HE染色方法是目前病理诊断及研究工作最常用的方法之一，其苏木素的配制方法不断的改良，涌现了许多不同的配制方法。
结缔组织观察实验
3．软骨组织
透明软骨玻片标本
大部分的底质染成相同的均匀颜色，这 是软骨的基质，基质中有许多圆形或卵 圆形的陷窝，称为胞窝。常常可见2个或 4个胞窝并列在一起，胞窝内有软骨细，细胞收缩，胞窝可 见到空隙。
组成软骨的纤维是胶原纤维，但在基质
中未见到，因为透明软骨的胶原纤维的
细胞核大而卵圆形的细胞; 巨噬细胞：或称组织细胞, 染色质颗粒较粗，着色较深，胞
核较小的,这种细胞具有吞噬能力，因此有防卸功能。 1
疏松结缔组织
2
结缔组织观察
2．致密结缔组织
• 腱的纵切标本
• 可见大量平行排列的胶 原纤维束，成纤维细胞
成行排列在纤维束之间，
细胞体成长方形，细胞
核近圆形。
3
结缔组织观察
折光率与基质相同，因而活体时透明，
固定染色后不能看到。
4
结缔组织观察
4．骨组织
• 长骨横切磨片标本
• 许多不规则圆形或椭圆形的同心环状结 构——哈弗氏系统（Haversian system）， 中间的空腔——哈弗氏管（Haversian canal），为神经、血管的通道。在哈弗氏 系统之间为不规则的骨间板（interstital lamellae）。哈弗氏管之间及内、外环骨板 之间斜行的，没有骨板环绕的导管——浮 克曼氏管（Volkmann’s canal），即横 向的血管。哈弗氏系统骨板间的梭形裂隙
为骨陷窝（lacuna），骨细胞存在其中。 骨陷窝之间有大量的骨小管，多数的骨小
管与骨板垂直。骨细胞，借着骨小管，与
哈弗氏管内的血管进行营养物质和代谢产
物的交换。
5
6
结缔组织观察
5． 人 的 血 液 涂 片 观 察
7
几种常用特殊染色操作过程中的要点
一、网状纤维染色 ——氢氧化银氨法（Gomori法）
5
（一）网状纤维的形态结构
较细的纤维组织、短、分支多，交织成网状
（与胶原纤维共同为细胞丰富的器官起到支撑作用）
HE呈淡红色，银氨液浸染、甲醛还原后呈黑色
（嗜银性/嗜银纤维：黑色）
主要由Ⅲ型胶原蛋白构成，表面被覆糖蛋白
（PAS染色：淡紫红色）
6
＋蒸馏水，洗涤沉淀（50-100ml蒸馏水） <反复/3次，沉淀不浑浊>
留下沉淀及少许上清液（4ml）
<保留沉淀物质>
逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入）
<边加摇晃>
至沉淀逐渐完全溶解
<无色溶液>
逐滴＋10%硝酸银，至刚出现浑浊 加氢氧化铵一至数滴，使沉淀消失
＋蒸馏水至40ml，2-8°C冰箱
<浑浊状态>
2
四、淀粉样物 刚果红法（甲醇刚果红、碱性刚果红）、甲基紫法 五、色素 含铁血黄素（Perls）、黑色素（Masson-Fontana）铜（罗 丹明、红氨酸） 六、糖类物质 糖原（PAS）、黏液物质（AB-PAS、AB） 七、脂内物质 中性脂肪（苏丹Ⅲ、Ⅳ、油红O）
3
八、神经组织 尼氏体（硫瑾、甲苯胺蓝）、神经髓鞘（变色酸2R、砂罗 铬花青） 九、肝脏穿刺 Masson、网状纤维、含铁血黄素、PAS、铜等。 十、肾脏穿刺组织 Masson、六胺银、PAS、刚果红等
1.氧化（KMnO4）：使网状纤维内羟基转变为醛基。<选择性> 2.漂白（H2C2O4）：棕色变为无色。 3.媒染（铁明矾）：增加网状纤维对银氨液的选择性。 4.浸银（氢氧化银氨）：银氨液中Ag（NH3）2+被组织吸附后与醛基结合。 5.还原（甲醛）：与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成黑色的金属 银。
病理学技术特殊染色总结
病理学技术特殊染色总结一、结缔组织染色法Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维蓝褐色：胞核三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞二、胶原纤维染色法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（伊红复染）四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳紫红色：弹性纤维橘黄色：背景五、弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维淡黄色：背景六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或玫红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌△早期心肌病变组织染色Nagar-Olsen染色法（HBFP）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核Poley显示缺氧心肌染色法红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织1七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核八、黏液物质（黏多糖）染色Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（AB-PAS）染色法红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质阿尔辛蓝（爱先蓝，PH 2.5）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色或淡然：强硫酸化黏液物质红色：胞核阿尔辛蓝（爱先蓝，PH 1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：胞核（如复染）九、黑色素染色Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景Lillie硫酸亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色亚铁氰化钾法（Perls blue普鲁士蓝显示三价铁）蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织十一、胆色素染色三氯醋酸染色法绿色：胆色素红色和黄色：其他（复染）十二、脂褐素染色三氯化铁-铁氰化钾法（非特异性）暗蓝色：脂褐素醛品红法（现配现用）深紫色：脂褐素浅黄色：背景十三、脱色素染色通常用来鉴定是否有黑色素存在，3张连续石蜡切片，1张HE，1黑色素染色，1张氧化漂白脱色素十四、纤维蛋白染色Lendrum等MSB染色法*本法的MSB指马休黄猩红蓝法红色：纤维蛋白紫色：陈旧性纤维蛋白蓝色：细胞核黄色：红细胞Gram甲紫染色法蓝黑色：纤维蛋白红色：背景十五、淀粉样物质染色刚果红染色法红色：淀粉样物质蓝色：细胞核Jurgens甲紫染色法红色或紫红色：淀粉样物质蓝色：细胞核十六、真菌染色2Grocott六胺银染色法*真菌均被着色黑褐色：菌丝和孢子红色：细胞核淡绿色：背景高碘酸复红染色法紫红色：真菌浅黄色：红细胞十七、细菌染色一般细菌革兰氏染色（Gram碱性复红结晶紫染色法）蓝色：革兰阳性菌红色：革兰阴性菌红色：细胞核抗酸杆菌Ziehl-Neelsen抗酸杆菌染色法红色：抗酸杆菌灰蓝色：背景胃幽门螺杆菌Warthin-Starry胃幽门螺杆菌染色法棕黑色或黑色：胃幽门螺杆菌淡黄色：背景十八、螺旋体染色硝酸银染色法黑色或棕黑色：梅毒螺旋体、钩端螺旋体淡黄至淡棕色：背景Ryu碳酸钠碱性复红法红色：螺旋体十九、病毒包涵体染色荧光桃红-酒石黄法亮红色：病毒包涵体蓝褐色：细胞核黄色：背景二十、乙型肝炎表面抗原染色Shikata地衣红染色法（现配现用）棕色：HBsAg阳性醛复红改良染色法紫色：HBsAg阳性红色：结缔组织黄色：红细胞及基质维多利亚蓝染色法蓝绿色：乙型肝炎表面抗原物质红色：细胞核二十一、神经组织染色△神经细胞尼氏体染色方法缓冲亚甲蓝法蓝色：尼氏小体及核仁△神经纤维的染色方法Holmes神经纤维染色黑色：神经纤维灰紫色：背景Bielschowsky神经纤维染色黑色：神经纤维紫色：背景Von Braunmubl神经纤维、扣结、老年斑染色黑色：神经纤维、扣结、老年斑浅灰色：背景Eager退变神经纤维染色黑色：退变神经纤维浅棕色：背景△神经髓鞘的染色方法Weigert-Pal髓鞘染色蓝黑色：髓鞘淡灰色：背景Weil髓鞘染色（石蜡切片理想）蓝黑色：髓鞘淡灰色：背景Kultshitzky髓鞘染色蓝黑色：髓鞘淡黄色：背景3Luxol fast blue髓鞘染色蓝色：髓鞘紫色：核仁、尼氏体变色酸2R—亮绿髓鞘染色深红色：神经髓鞘绿色：轴索、间质不着色：脱髓鞘纤维Marchi退变髓鞘染色方法黑色：退变髓鞘浅棕色：背景△神经胶质细胞染色方法Cajal星形细胞染色紫黑色：原浆性及纤维性星形胶质细胞Weil及Davenport小胶质细胞及少突胶质细胞黑色：神经胶质细胞、少突胶质细胞黄棕色：背景二十二、神经内分泌细胞染色△亲银反应Lillie-Masson二胺银反应法黑色：亲银颗粒细胞红色：细胞核淡灰黄色：背景Gomori-Burtner六胺银法黑色：亲银细胞浅红色：背景△嗜银反应De Grandi改良硝酸银反应法棕黑色：嗜银细胞颗粒红色：细胞核碱性重氮反应法橘红色至红色：嗜银细胞颗粒蓝色：细胞核黄色：胞质二十三、嗜铬细胞染色Giemsa改良染色法红色至紫红色：嗜铬细胞蓝色：皮质细胞粉红色：红细胞Wiesel染色法黄绿色：嗜铬细胞质红色：细胞核蓝色：其他二十四、肥大细胞染色甲苯胺蓝改良染色法紫红色：肥大细胞颗粒蓝色：细胞核醛复红法深紫色：肥大细胞颗粒橘黄色：红细胞黄色：其他组织二十五、DNA染色酸水解—无色品红法紫红色：DNA绿色：细胞质、其他成分甲基绿—派洛宁法紫红色：细胞质和核仁内RNA 绿色或绿蓝色：核内DNA二十六、脂肪染色苏丹法橘红色：中性脂肪蓝色：细胞核油红O染色法深橙红色：中性脂肪蓝色：细胞核4。
结缔组织的染色方法
结缔组织的染色方法结缔组织的染色方法一般所说的结缔组织是指纤维性结缔组织而言，其结构特点是细胞间质内基质外含有较多的纤维成分，主要是胶原纤维、弹性纤维和网状纤维，我们仅简述这三种纤维的常见染色方法。
（1）Mallory三色染色法：常用于判定多种组织、器官的病变程度及修复状况，区分肿瘤组织中的纤维成分与平滑肌。
染色步骤：①中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
②重铬酸钾液10min。
③蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。
④酸性复红液2min，蒸馏水稍洗。
⑤苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。
⑥直接用无水乙醇脱水，二甲苯透亮，中性树胶封固。
结果判定：胶原和网状纤维呈蓝色。
（2）Van Gieson苦味酸酸性复红法：可以显示组织、器官的损伤、修复及硬化状况，特殊是用于鉴别肿瘤组织中的胶原纤维与平滑肌纤维，可为诊断供应重要依据。
染色步骤：①组织切片按常规脱蜡水洗。
②用Weigert苏木素液染细胞核5~l0 min。
③自来水充分洗涤数分钟。
④用显微镜检查细胞核的着色程度，过深可用0.5%盐酸乙醇分化。
⑤自来水洗至变蓝；用蒸馏水洗。
⑥用Van Gieson液染1~5 min。
⑦倾去染液，直接用95%乙醇分化和脱水。
⑧无水乙醇脱水，二甲苯透亮，中性树胶封固。
结果判定：胶原纤维呈深粉红色，肌纤维、胞浆及红细胞黄色，细胞核呈棕黑色或兰黑色。
（3）网状纤维染色－Wider染色法：可以用来显示病变组织网状支架的破坏状况。
特殊是在肿瘤病理诊断中，网状纤维染色对于鉴别来源于上皮组织和间叶组织的恶性肿瘤具有重要价值。
染色步骤：①组织切片脱蜡至水。
10%②磷钼酸，2~5min。
蒸馏水冲洗，5min。
1%③硝酸铀，5s。
蒸馏水冲洗，10s。
④氧化银溶液，5~10min。
95%⑤乙醇速洗，1~2s。
⑥还原液还原，1~2s。
蒸馏水冲洗，2min。
0.2%⑦氯化金调色，2~20s。
蒸馏水冲洗，5min。
5%⑧次亚硫酸钠，2min。
生物显微技术-第二章-其他常用制片方法和特殊染色方法
❖ 注意事项
❖ 玻片的清洗：新玻片常有游离碱质，因此应用清洗液 或10%盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。用过的玻片 可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20min， 再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗,必 要时再置95%乙醇中浸泡1h，然后擦干或烤干备用。
❖ 缺点： ❖ 1、不容易做连续切片。 ❖ 2、切取的组织不能过大，组织过大不容易冻
结或者组织冻结不均，影响切片及染色效果。 ❖ 3、不容易制作较薄的切片。 ❖ 4、组织块在冻结过程中容易产生水的结晶而
影响细胞的形态结构及抗原物质的定位，并 且组织结构也不如石蜡切片清晰。
（四）主要应用
❖ 1、用于有些水解酶的定位的组织化学方法以 及免疫组织化学方法等。
主要部件： ①恒冷箱 ②样 品冷却系统 ③切片机 ④一 次性不锈钢刀片
LEICA CM1900型恒冷箱切片 机具有一个完全封闭式的恒 冷箱，工作时可24小时制冷， 使箱内温度常年保持在20℃的工作状态，并具有自 动除霜的功能。此外，它还 具有一个独立的样品冷却系 统，使生物样品被迅速冷冻， 达到一定硬度后，即可切片。 样品的前进与后退，由恒冷 箱外的电动按钮控制。
（一）冷冻切片的种类
半导体冰冻切片机
低温恒冷箱冰冻切片法
二氧化碳冰冻切片法
甲醇循环制冷冰冻切片法等
这些方法，随着时代的变迁，科技的发展， 许多年前被认为是非常重要的技术，现在也 逐步被淘汰了。当然有些技术，如低温恒冷 箱冰冻切片法，正在受到青睐。
❖ （二）冷冻切片的制作方法
低温恒冷箱冷冻切片制作法 冷冻箱内左边的冷冻台，温度可达-60℃左 右，冷冻箱的中间为一台切片机，工作间 的温度在0-30℃间可任意调节，并在箱面 上的荧屏显示出来。
组织胚胎学03结缔组织
胶原纤维 • 功能：免疫防御
弹性纤维
网状纤维 基质
疏松结缔组织
致密结缔组织
脂肪组织
网状组织
成纤维细胞 巨噬细胞
胶原纤维（collagenous fiber）又称白纤
浆细胞
维
图17-
肥大细胞 脂肪细胞
• LM：粉红色，直径1～20 µ m ，1波9 浪状，
间充质细胞 分支交织成网
白细胞 胶原纤维 弹性纤维 网状纤维 基质
胶原纤维 弹性纤维 网状纤维 基质
• 功能：为干细胞，可增殖、分化为成 纤维细胞、内皮细胞、平滑肌细胞， 参与创伤修复
疏松结缔组织
致密结缔组织
脂肪组织
网状组织
成纤维细胞
巨噬细胞 白细胞（leukocyte）
浆细胞
肥大细胞 • 来源于血液的中性粒细胞、嗜酸性粒
脂肪细胞 细胞、淋巴细胞等
间充质细胞
白 细 胞 • 形态：（在血液一章中讲述）
• 不规则致密结缔组织：构成真皮、器官被膜
等；粗大胶原纤维纵横交错，形成致密板层
结构，其间有成纤维细胞
图25-
• 弹性组织：构成韧带、弹性膜等；粗2大7 的弹
性纤维或平行排列，或编织成膜状
疏松结缔组织
致密结缔组织
脂肪组织
网状组织
脂肪组织（fat tissue）
图28-31
• 由大量脂肪细胞群集构成，被疏松结缔组织
白 细 胞 分于毛细血管静脉端回流入血，部分
胶原纤维 弹性纤维 网状纤维 基质
进入毛细淋巴管成为淋巴
• 功能：构成细胞赖以生存的微环境； 产生或回流障碍，导致组织脱水或水 肿
疏松结缔组织
致密结缔组织
脂肪组织
病理学技术-特殊染色技术
结缔组织染色 肌肉组织染色 糖类染色 色素类染色 病理内源性沉着物染色 病原微生物染色 内分泌细胞染色
一、纤维素染色
纤维素 (fibrin) 又称为纤维蛋白， 它是存在于血液内的纤维蛋白原分子聚合 而形成的特殊蛋白质。 在病理状态下， 血管内和血管外以及其它组织中， 均可见到纤维素沉着物 。 常见于炎症渗出性改变， 弥漫性血管内凝血 、 高血压的小血管壁和一些胶原性疾病的疏松纤维，肾小球的毛细血管腔内和 基底膜等均有纤维素的存在。
.
抗酸杆菌 (acid fast bacteria) 体内含有脂质、蛋白质和多糖类并由糖脂形成一 个蜡质的外壳，能与苯酚碱性复红结合成复合物，这种复合物能抵抗酸的脱色， 所以称为抗酸杆菌。
病毒是最小的非细胞型微生物，当病毒引起疾病的时候，其感染 的细胞内可以形成包涵体，而存在于细胞浆和细胞核内，但有时 胞浆和胞核内同时可见到包涵体，在一般的情况下， RNA病毒形 成胞浆内包涵体，DNA病毒形成核内包涵体。
一、弥散神经内分泌细胞染色(diffuse neuroendocrine system， DNES) 弥散神经内分泌系统的细胞具有细胞化学、 病理和超微结构的形态特点 。 从生物
化学方面而言，这些内分泌细胞都能合成和分泌胺，而且细胞是通过摄取胺前体 (氨基酸) 经脱羧后产生胺的。随着对细胞研究的深入，发现其不仅产生胺，而且还 产生肽。 DNES 的组成至今已有40多种细胞，分为中枢和周围两大部分。中枢部分包括下丘 脑一垂体轴的细胞和松果体细胞。周围部分包括胃、肠、胰、呼吸道和泌尿生殖道 的内分泌细胞，以及甲状腺滤泡旁组胞，甲状旁腺细胞，嗜铬细胞，颈动脉体细胞 等。 日前证明这些细胞的染色方法较多，但常用的是使用亲银和嗜银反应来鉴别细胞浆 中的银颗粒。
马松三色染色法
马松三色染色法马松三色染色法是一种用于显示组织中纤维的染色技术，特别适用于结缔组织的染色。
该方法使用三种染料：苏木精、酸性品红和丽春红，分别染色细胞核、肌纤维和胶原纤维。
首先，切片需要经过常规脱蜡至水的过程，以确保染色剂能够充分渗透到组织中。
然后，使用配制好的Weigert氏铁苏木素染色液对组织进行染色，以突出显示细胞核。
染色完成后，需要充分水洗，以去除未结合的染料。
接下来是酸性品红染色，用于标记肌纤维。
这个步骤需要在弱酸环境中进行分化处理，以将染色剂与组织中的碱性物质区分开来。
弱酸还能帮助酸性品红更好地渗透到组织中。
最后，使用丽春红品红染色液对胶原纤维进行染色。
在这个步骤中，需要使用弱酸工作液来洗去未结合的染料。
在整个染色过程中，组织固定起着非常重要的作用。
不同的固定液会影响染色时间，因此需要根据具体情况进行调整。
在完成染色后，需要进行常规脱水、透明和封固处理，以便在显微镜下观察。
马松三色染色法的优点在于它能够清晰地显示结缔组织中的胶原纤维和肌纤维，特别是在病理情况下，如器官硬化性疾病和瘢痕组织的鉴别诊断中，该方法能够提供有价值的信息。
此外，该方法具有较高的特异性和灵敏度，能够检测出病理变化中较小的差异。
然而，该方法也有一些局限性。
首先，该方法需要使用多种染料和化学试剂，这使得操作过程相对复杂。
其次，某些组织可能需要特定的处理步骤，例如脱蜡、脱水和固定等。
这需要技术人员具备一定的经验和技术水平。
尽管存在这些局限性，马松三色染色法仍是一种非常重要的病理学技术。
它可以提供关于组织结构和功能的重要信息，有助于病理医生做出准确的诊断和制定治疗方案。
结缔组织实验报告思考
一、实验背景结缔组织是人体四大基本组织之一，具有连接、支持、保护、营养等多种功能。
为了更好地了解结缔组织的形态结构及其生理功能，我们进行了结缔组织实验。
二、实验目的1. 观察结缔组织的形态结构，了解其组成成分和分布特点。
2. 研究结缔组织的生理功能，探讨其在人体中的作用。
3. 培养学生运用显微镜观察、分析实验结果的能力。
三、实验材料与方法1. 实验材料：兔耳组织切片、显微镜、载玻片、盖玻片、盐酸酒精、苏木素、伊红等。
2. 实验方法：（1）取兔耳组织切片，用盐酸酒精固定。
（2）用苏木素染色，观察结缔组织的细胞核。
（3）用伊红染色，观察结缔组织的细胞质。
（4）用显微镜观察结缔组织的形态结构。
四、实验结果与分析1. 结缔组织的形态结构通过显微镜观察，我们发现结缔组织由细胞和基质两部分组成。
细胞包括成纤维细胞、巨噬细胞、肥大细胞等。
基质主要由胶原纤维、弹性纤维、蛋白多糖和糖胺聚糖等物质组成。
2. 结缔组织的生理功能（1）连接作用：结缔组织将不同组织器官连接在一起，使人体成为一个统一的整体。
（2）支持作用：结缔组织中的胶原纤维和弹性纤维具有很高的抗拉强度，为人体提供支撑。
（3）保护作用：结缔组织中的脂肪组织具有缓冲作用，保护器官免受外力损伤。
（4）营养作用：结缔组织中的血管和淋巴管为细胞提供氧气、营养物质和代谢废物。
五、实验思考1. 结缔组织在人体中具有多种功能，这与其独特的形态结构密切相关。
细胞和基质两部分在结构和功能上相互配合，共同完成结缔组织的各项生理功能。
2. 观察结缔组织实验时，需要注意以下几点：（1）实验材料的选择：选择新鲜、无病变的组织切片，以保证实验结果的准确性。
（2）染色方法：合理选择染色剂，保证细胞核和细胞质的染色效果。
（3）显微镜观察：注意观察结缔组织的整体结构，分析其组成成分和分布特点。
3. 结缔组织实验有助于我们了解人体组织结构，培养我们的观察、分析能力。
同时，通过实验，我们认识到人体各个组织器官之间的密切联系，为今后的医学研究和临床实践奠定基础。
结缔组织(connective tissue)
纤维细胞与成 纤维细胞是处于不 同状态的同一种细 胞，前者功能静止； 后者功能旺盛，二 者可互相转化。纤 维细胞呈梭形，胞 质嗜酸性，核呈杆 状着色深。
巨噬细胞（macrophage）
LM： 形态不规则，多呈圆形；核小，
深染，偏心位；胞质嗜酸性。
致密结缔组织
不规则的致密结缔组织 规则的致密结缔组织
新鲜状态下呈 黄色，又名黄纤 维。HE染色着 色轻微,淡红色。
图肠系膜铺片 ①胶原纤维 ②弹性纤维 ③肥大细胞 ④巨噬细胞
H-E染色切片中的结缔组织纤维
成纤维细胞 ( fibroblast ) LM: 扁平星状;核大,浅,核仁明显;胞质 嗜碱性，
纤维细胞与成纤维细胞
(fibrocyte) (fibroblast)
透明软骨
（胶原原纤维）
纤维软骨
（胶原纤维束）
弹性软骨
（弹性纤维）
骨组织
骨单位
内、外环骨板间 长柱状结构 中央管 同心圆骨板
骨组织
间骨板
骨单位之间或骨 单位与环骨板之间
不规则平行骨板
图骨磨片 ①骨陷窝 ②哈弗斯管 ③骨小管 ④粘合线
ห้องสมุดไป่ตู้
疏 松 结 缔 组 织
铺 疏 片
松 结 缔 组 织
切 片
胶原纤维（collagenous fiber）
LM:
又名白纤维。 嗜酸性，着红色, 粗细不一，呈波 浪形，分支交织
成网, 由胶原原
纤维集合而成
弹性纤维（elastic fiber）
LM: 纤细、直行 末端常卷曲; 须经醛复红或 地衣红等染色才 明显呈现;
LM： 银浸染呈深褐色，故又名嗜银纤维。纤维细， 分支多，交织成网
功能及分布：
结缔组织的实验报告
结缔组织的实验报告结缔组织的实验报告引言结缔组织是人体内一种重要的组织类型，它具有连接、支持和保护器官的功能。
本实验旨在探究结缔组织的特性和功能，通过实验方法研究其组织结构、细胞类型和分布情况，以及其在人体中的生理作用。
实验方法1. 实验材料准备我们选择了小鼠尾椎骨作为实验材料，采用组织切片技术进行观察。
为了确保实验的准确性和可靠性，我们使用了先进的显微镜设备和染色试剂。
2. 组织切片制备首先，我们将小鼠尾椎骨取出，并用生理盐水洗涤干净。
然后，将其固定在甲醛溶液中，以保持其结构完整性。
接下来，使用切片机将骨骼切割成薄片，厚度约为5-10微米。
最后，将切片置于载玻片上，并进行染色处理。
3. 组织染色为了更好地观察结缔组织的细胞和结构特征，我们使用了常见的染色方法，如苏木精-伊红染色和马尔尼染色。
这些染色方法可以使细胞和组织结构更加清晰可见。
实验结果1. 结缔组织的组织结构在显微镜下观察，我们可以清晰地看到结缔组织由胶原纤维、弹力纤维和细胞组成。
胶原纤维是结缔组织的主要成分，呈束状排列，具有较高的抗拉强度。
弹力纤维则赋予结缔组织一定的弹性。
细胞主要包括成纤维细胞、巨噬细胞和淋巴细胞等。
2. 结缔组织的细胞类型和分布成纤维细胞是结缔组织中最主要的细胞类型，其形状呈星状或梭形，具有合成胶原纤维和基质的功能。
巨噬细胞是一种重要的免疫细胞，具有吞噬和消化病原体的能力。
淋巴细胞则参与免疫反应，对抗感染和炎症。
3. 结缔组织的生理作用结缔组织在人体中具有多种重要的生理作用。
首先，它可以提供机械支持和保护，保持器官的形态和结构稳定。
其次，结缔组织参与免疫反应，调节炎症和抗感染过程。
此外，结缔组织还参与物质交换和营养供应，通过血管和淋巴管的分布，为组织细胞提供氧气和营养物质。
结论通过本实验，我们对结缔组织的组织结构、细胞类型和生理作用有了更深入的了解。
结缔组织在人体中起着重要的连接、支持和保护作用，对于维持人体正常功能具有不可或缺的作用。
结缔组织的实习报告
一、实习背景结缔组织是人体的重要组成部分，广泛存在于人体的各个器官和组织中，具有连接、支持、保护、营养等多种功能。
为了更好地理解结缔组织的结构和功能，提高自己的专业素养，我参加了为期两周的结缔组织实习。
二、实习目的1. 了解结缔组织的分类、组成和分布。
2. 掌握结缔组织的显微镜观察技术。
3. 通过实际操作，加深对结缔组织功能的认识。
4. 培养自己的动手能力和团队协作精神。
三、实习时间与地点实习时间：2023年X月X日至2023年X月X日实习地点：XX医学院解剖实验室四、实习内容1. 理论学习实习前，我们学习了结缔组织的基本知识，包括结缔组织的分类、组成、分布、功能等。
通过学习，我们对结缔组织有了初步的认识。
2. 显微镜观察在实习过程中，我们主要进行了以下几种结缔组织的显微镜观察：（1）疏松结缔组织：观察其纤维排列、细胞分布、基质特点等。
（2）致密结缔组织：观察其纤维排列、细胞分布、基质特点等。
（3）脂肪组织：观察其脂肪细胞的大小、形状、分布等。
（4）网状组织：观察其纤维排列、细胞分布、基质特点等。
3. 实验操作在显微镜观察的基础上，我们进行了以下实验操作：（1）结缔组织切片的制作：从动物体内取出所需组织，进行固定、脱水、透明、包埋、切片等步骤。
（2）染色：采用苏木精-伊红染色法对结缔组织切片进行染色。
（3）观察：在显微镜下观察染色后的结缔组织切片，分析其结构特点。
五、实习心得与体会1. 理论与实践相结合通过本次实习，我深刻体会到理论与实践相结合的重要性。
在理论学习的基础上，通过实际操作，我对结缔组织有了更深入的了解。
2. 培养动手能力在实验操作过程中，我学会了结缔组织切片的制作、染色等基本技能，提高了自己的动手能力。
3. 增强团队协作精神实习过程中，我们分工合作，共同完成实验任务。
这使我认识到团队协作的重要性，提高了自己的团队协作精神。
4. 深化对结缔组织功能的认识通过显微镜观察，我了解到结缔组织在人体中的重要作用，如连接、支持、保护、营养等。
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结缔组织多色染色法
一、Mallory三色染色法
1. 试剂配制
（1）重铬酸钾液重铬酸钾 2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml
（2）苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml
（3）酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml
2.染色步骤
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（2）重铬酸钾液10min。
（3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。
（4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。
（5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。
（6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果
胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项
（1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。
（2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。
（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。
（4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。
二、Masson三色染色法
1.试剂配制
（1）Masson复合染色液酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。
（2）亮绿染色液高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。
2.染色步骤
中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（1）Masson复合染色液5min。
（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。
（3）5%磷钨酸5-10min。
（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。
（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。
（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。
4.注意事项
（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。
三显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993年）
1.试剂配制
（1）高锰酸钾硫酸液 0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。
（2）维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。
将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。
然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min，不断搅拌
溶液呈胶体状。
去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60℃恒温箱中烤干。
残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml 的70%乙醇液中。
然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。
（3）丽春红染色S染色液 0.5%丽春红S水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液85ml。
（4）Gomori氨性银改良液取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。
最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。
2.染色步骤
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（2）高锰酸钾硫酸液氧化3min后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白2min。
（3）5%硫酸铁铵1min。
（4）Gomori氨性银改良液染1min。
（5）蒸馏水洗2次，用15%甲醛液还原1min。
（6）蒸馏水洗2次，0.2%氯化金30s，蒸馏水洗1次。
（7）70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h。
（8）95%乙醇分化1min左右。
（9）浸入蒸馏水中1min后，用丽春红S染色液染色2min。
（10）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。
4.注意事项
氨性银液滴染时，要用干净吸管，防止银液污染而发生沉淀。
氨性银液作用后的切片不能倾倒，应将蒸馏水冲洗切片上的银液，这样就不会使银液表面挥发的银颗粒而沉积在组织上。