人白介素-7重组蛋白的原核表达、纯化及活性测定

人白介素-7重组蛋白的原核表达、纯化及活性测定
汤建才;龙凤;李丹;王永生
【期刊名称】《现代肿瘤医学》
【年(卷),期】2015(000)023
【摘要】Objective:To acquire recombinant human interleukin 7 prokaryotic expressing plasmid,fusion protein is expressed,purified and identified. Methods:The hIL - 7 gene was inserted into the prokaryotic expressing vector pET - 32a( + )to acquire pET32 - hIL - 7 and transformed into BL21(DE3)cells. IPTG induced the expression of fusion protein Trx - IL - 7. The induced product was washed,dissolved and purified by affinity chromatogarphy under renaturing condition. IL - 7 was identified by Western blot,and the biologic activity was detected by proliferation of IL - 7 dependence cell 2E8. Results:The recombinant plasmid pET32 / rhlL - 7 has been constructed correctly. The recombinant hlL - 7 was gained after gradient dialysis,enzyme digestion and purified,which has the right immunology specificity and biologic activity. Conclusion:The recombinant human interleukin - 7 with biologic activity has been acquired,which lay the foundation for the further study of function of IL - 7.%目的：构建重组质粒 pET32a - hIL -7，诱导表达，纯化并鉴定目的蛋白。

方法：将人白介素-7基因克隆到原核表达载体 pET32a（＋）上，得到重组质粒 pET32a - hIL -7，转化大肠杆菌 BL21（DE3），经 IPTG 诱导得到融合蛋白 Trx - hIL -7。

融合蛋白主要以包涵体形式存在。

包涵体通过复性、酶切、纯化等步骤处理。

利用 Western blot
鉴定重组蛋白，对其生物学活性用其依赖性细胞株2E8增殖实验测定。

结果：成
功构建重组质粒 pET32a - hIL -7。

包涵体通过透析复性，肠激酶切，镍柱纯化等步骤得到重组蛋白人 IL -7。

纯化的重组蛋白经 Western blot 鉴定能与抗人的 IL -7抗体特异性结合。

经体外细胞实验检测证明，纯化的重组蛋白具有生物学活性。

结论：得到了有活性的重组蛋白 IL -7，为研究其功能奠定了基础。

【总页数】4页(P3397-3400)
【作者】汤建才;龙凤;李丹;王永生
【作者单位】川北医学院生化教研室，四川南充 637000;南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院药学部，四川南充 637000;四川大学生物治疗国家重点实验室，四川成都 610041;四川大学生物治疗国家重点实验室，四川成都 610041【正文语种】中文
【中图分类】R73-3
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