DNA提取-DNA提取的注意事项

DNA提取-DNA提取的注意事项
1、裂解液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进DNA溶解。

2、酚一定要碱平衡。

苯酚具有高度腐蚀性，飞溅到皮肤、粘膜和眼睛会造成损伤，因此应注意防护。

氯仿易燃、易爆、易挥发，具有神经毒作用，操作时应注意防护。

3、各操作步骤要轻柔,尽量减少DNA的人为降解。

4、取各上清时,不应贪多,以防非核酸类成分干扰。

5、异丙醇,乙醇.NaAc,KAc等要预冷,以减少DNA的降解,促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀。

6、提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。

7、所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。

8、用大口滴管或吸头操作，以尽量减少打断DNA的可能性。

9、要用新鲜样品或液氮冷冻-70度保存的样品。

这样通过降低内切酶的活性DNA 的降解。

10、避免剧烈吸打DNA，不能搅动基因组DNA。

11、吸取基因组DNA时，要用专用的粗口吸头，普通吸头可能会切断DNA或造成DNA缺口。

12、基因组应4度保存，如-20度保存可能导致DNA断裂。

13、在准备实验的过程中，应将DNA样品放在碎冰上。

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14、用Tris缓冲液溶解DNA。

15、加缓冲液后，为了加速DNA溶解，可以轻轻晃动或轻弹试管。

16、加入缓冲液后，置于4度过夜，也可以溶解DNA。

17、将DNA溶液65度温育10分钟，可以灭活DNase。

18、在抽提过程中如果水相和有机层的界面不太清楚，说明其中蛋白质含量较高，可增加酚/氯仿抽提的次数或适当延长离心的时间。

19、酚抽提时如果上清液太粘稠，无法进行水相转移时，可加入适量TES稀释后再抽提。