《仪器分析实验》教学大纲

必
4 因子法测定复方炔诺酮片中炔诺酮 8
3-5
开
和炔雌醇
五、实验项目的具体类容：
实验一 双波长分光光度法测定复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑的含量
1．
本次实验的目的和要求
掌握等吸收双波长测定多组分含量的原理及方法。
熟悉双波长法测定方法。
2． 实践内容或原理
对二元组分混合物中某一组分的测定，若干扰组分在某两个波长处具有相同的吸光度，
实验三 荧光法测定维生素 B2 含量 1． 本次实验的目的和要求 掌握用工作曲线法进行荧光定量分析。 熟悉荧光分光光度计的使用方法。 2． 实践内容或原理 维生素 B2 水溶液在紫外光下产生黄绿色荧光，在酸性条件下荧光较强，在碱性溶液中 随碱性增加荧光减弱甚至消失。稀溶液（0.1～2.0ug/ml）中荧光强度与维生素 B2 的浓度成 正比，其激发波长为 467nm，发射波长为 525nm。 3． 需用的仪器、试剂或材料等 仪器 日立 F-7000 型荧光分光光度计 试剂 维生素 B2 标准储备液，维生素 B2 标准溶液。0.03mol/L 的 HAc 溶液，未知浓
瓶中，用水稀释至刻度。 3）样品储备溶液的配制 取维生素 B2 片（5mg/片）共 20 片，精密称量总重，置于研
钵中，研细，从中取出适量（约相当于维生素 B210mg）精密称定。以 0.03mol/L 的 HAc 溶 解，并稀释至 1000ml，超声助溶 10min，将此溶液过滤，弃去初滤液，接续滤液，放置待用。
度的维生素 B2 溶液。 4． 实践步骤或环节 1）10mg/L 维生素 B2 标准储备液的配制 精密称量 10.0mg 的维生素 B2 标准品，以
0.03mol/L 的 HAc 溶液稀释至 1000ml 即可。 2）标准系列溶液的配制 取此储备液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 分别置于 10ml 的量
4）测定 （1）波长的选择：选 2 号标准系列溶液：测定其最大激发波长，记录激发光谱、选定 最大激发波长。记录发射光谱、选定最大发射波长。 （2）绘制工作曲线：设定最大激发波长（λex=470nm）和最大发射波长（λem=525nm）， 按顺序测定 H2O(空白)以及标准溶液的荧光强度 F0、F1、F2、……F5，以荧光强度为纵坐标， 以浓度值为横坐标绘制工作曲线或求出回归方程。 （3）样品测定：避光操作，取样品储备液 0.5ml,置于 10 ml 的量瓶中，以水稀释至刻 度。测定此溶液的荧光值，用回归方程或在工作曲线上求得其浓度，并求算出维生素 B2 片 剂的标示含量。 5． 教学方式 面试与上机示范相结合。 6． 考核要求 要求学生独立操作仪器，独立处理分析数据。 7． 实践教学报告要求 必须包含：目的要求；反应原理；原料、试剂主要物理常数；仪器原理图；数据记录、 数据处理小结与讨论；思考题。
《仪器分析》课程实践教学大纲
Instrumental Analysis Experiment
课程编号：131301044 课程类别：非独立开设实验课程 学时：32 适用对象：修完本课程的药学、药物制剂等专业学生 先修课程：分析化学、仪器分析理论课等
一、课程的性质与任务 《仪器分析》实验是药学等类专业必修的基础实验课之一。在第四学期开设。内容包括
复方磺胺甲恶唑片每片含磺胺甲恶唑04g及甲氧苄啶tmp008gsmz和tmp在04氢氧化钠溶液中的紫外吸收光谱图见分析化学实验指导p102可见磺胺甲恶唑的吸收峰257nm与甲氧苄啶的吸收谷波长很相近而在甲氧苄啶光谱上与其吸光度相等的波长约在304nm处此处磺胺甲恶唑的吸光度较低因此可通过实验用甲氧苄啶溶液选定12257304nm左右两个波长再用已知浓度的磺胺甲恶唑溶液测定浓度与aa1a2的比例常数e即可用于测定磺胺甲恶唑的含量
实验四 校正因子法测定复方炔诺酮片中炔诺酮和炔雌醇 1． 本次实验的目的和要求 1）掌握校正因子的测定方法。 2）掌握校正因子法的实验步骤和计算方法。 3）了解高效液相色谱仪在药物制剂含量测定中的应用。
2． 实践内容或原理
1）复方炔诺酮片是一种复方避孕药，每 1000 片含有 600mg 炔诺酮和 35mg 炔雌醇。《中
紫外—可见分光光度法、原子分光光度法、红外分光光度法、核磁共振波谱法、质谱法、经 典液相色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。重点要求学生掌握上述各类仪器的基本操作 技术。具有初步分析问题、解决问题的能力。熟悉和掌握各种分离、分析方法的基本技能。 为以后的各门专业课奠定良好的基础。仪器分析方法包括的范围很广,限于教学时数(实践教 学 32),在取舍内容时,主要考虑药学专业所具有的一些特点,选取与本专业联系最密切的内 容进行教学,通过仪器基本原理与构造的学习，使学生能基本掌握主要仪器分析方法和原理， 并初步具有应用这些方法解决相应问题的能力。 二、教学的目的与要求
7． 实践教学报告要求
必须包含八个内容：目的要求；反应原理；原料、试剂主要物理常数；仪器原理图；数
据记录、数据处理小结与讨论；思考题。
实验二 阿司匹林红外吸收光谱的测定
1． 本次实验的目的和要求
学习用溴化钾压片法制作固体试样的方法。
了解傅里叶变换红外光谱仪的使用方法。
了解红外光谱鉴定药物的一般过程。
国药典》（2005 年版二部）规定其含炔诺酮量应为 0.54-0.66mg/片，炔雌醇量应为 31.5-38.5
μg/片。
炔诺酮分子中存在 C=C-C=O 共轭系统，炔雌醇分子中有苯环的结构，因此有紫外特性
吸收，可用紫外检测器进行检测。二者结构如下：
OH C CH
OH C CH
O 炔诺酮
HO 炔雌醇
2）校正因子法 将含有 mis（g）内标物质的内标溶液加入至含有 m（g）试样的试样
溶液中，混合后进样分析，测量待测组分 i 的峰面积 Ai 和内标物峰面积 Ais。按下式算试样
中所含 i 组分的量 mi：
mi

mis

Ai Ais
fi fis
式中ƒi 和ƒis 分别为组分 i 和内标物质的校正因子。如果校正因子是以内标物质作为基准
b 2

c
a
(
E
a 1

E
a 2
)

l

c
b
(
E
b 1

E
b 2
)

l
由于 E1b E2b
所以 Δ Aab ca (E1a E2a ) l Δ E a ca l
此处设 b 为干扰物，在所选波长λ1 和λ2 处的吸光度相等。 本实验以复方磺胺甲恶唑片为例。复方磺胺甲恶唑片每片含磺胺甲恶唑 0.4g 及甲氧苄 啶（TMP）0.08g。SMZ 和 TMP 在 0.4%氢氧化钠溶液中的紫外吸收光谱图（见分析化学实 验指导 P102）可见，磺胺甲恶唑的吸收峰（~257nm）与甲氧苄啶的吸收谷波长很相近，而 在甲氧苄啶光谱上与其吸光度相等的波长约在 304nm 处，此处磺胺甲恶唑的吸光度较低， 因此，可通过实验用甲氧苄啶溶液选定λ1、λ2（257、304nm 左右）两个波长，再用已知 浓度的磺胺甲恶唑溶液测定浓度与ΔA(=A1-A2)的比例常数ΔE，即可用于测定磺胺甲恶唑的 含量。 3． 需用的仪器、试剂或材料等 仪器：移液管（2mL）、胶头滴管、洗耳球、100mL 容量瓶、滤纸、擦镜纸、石英比色 管、超声仪、研钵、称量纸。 试剂：复方甲噁唑片、无水乙醇（AR）、NaOH 溶液（0.4%）。 4． 实践步骤或环节 1）.对照品溶液的配制 精密称取 105oC 干燥至恒重的甲氧苄啶对照品约 10mg，用乙 醇溶解并定容至 100mL，精取 2.00mL 置 100mL 量瓶中，用 0.4%NaOH 稀释至刻度，摇匀。 取在 105oC 干燥至恒重的磺胺甲恶唑对照品约 50mg，精密称定，同法配制溶液。 2）.磺胺甲恶唑△E 的测定 分别在λ1=257nm 和λ2=304nm 处测磺胺甲噁唑对照品溶 液的 A1 和 A2，计算△E=△A/c。标准液的配制：取标准品的乙醇液 1.00mL，0.4%的 NaOH 溶液定容至 50mL，摇匀即得。 3）.复方磺胺甲噁唑片剂中磺胺甲噁唑的测定 取复方磺胺甲噁唑片 10 片→称重（W 总= ）→研细→称取 3 份（每份约平均重的 1/8）， 编号：①、②、③→乙醇定容至 100mL 容量瓶→超声 5min 使溶解→摇匀→过滤，每份取续 滤液 2.00mL 至 100mL 容量瓶中，对应编号：④、⑤、⑥，用 0.4%NaOH 定容→在λ1=257nm 和λ2=304nm 处测 A1、A2 值。 配制空白溶剂：取乙醇液 2.00mL，0.4%的 NaOH 溶液定容至 100mL，揺均即得。 4）.记录数据：
2． 实践内容或原理
选择固体样品绘制红外光谱，然后进行光谱解析，查对标准 Sadtler 红外光谱图。 3． 需用的仪器、试剂或材料等
仪器：傅里叶变换红外色谱仪、玛瑙研钵、压片机
试剂：KBr(光谱纯)、阿司匹林（标准品、样品） 4． 实践步骤或环节 1）.试样的制备 压片 ①空白片：称取干燥的 KBr 粉末约 200mg，置洁净玛瑙研钵中，研磨，然后转移至专用 红外压片模具中铺匀，压至 1.5-1.8MPa 约 2-5min。 ②标准品片：称取干燥的阿司匹林标准品 1mg，置洁净玛瑙研钵中，加入干燥的 KBr 粉 末约 200mg，研磨混匀，然后转移至专用红外压片模具中铺匀，压至 1.5-1.8MPa 约 2-5min。 ③样品片：称取干燥的阿司匹林样品 1mg,置洁净玛瑙研钵中，加入干燥的 KBr 粉末约 200mg，研磨混匀，然后转移至专用红外压片模具中铺匀，压至 1.5-1.8MPa 约 2-5min。 取出样品片，装入样品架，待测。 2）.设置扫描次数为 10，分辨率为 4cm-1,图谱纵坐标为透光率。 5． 教学方式 面授，上机示范等 6． 考核要求 要求学生独立操作仪器，独立处理分析数据。 7． 实践教学报告要求 必须包含：目的要求；反应原理；原料、试剂主要物理常数；仪器原理图；数据记录、 数据处理小结与讨论；思考题。
上机操作与笔试相结合 四、实验项目名称与学时分配：
仪器分析实验安排一览表
序号
实验项目名称
必
学
实分
开
时
验组
或
分
类人
选
配
型数
开
双波长分光光度法测定复方磺胺甲
必
1
8
3-5
恶唑片中磺胺甲恶唑的含量
开
必
2
阿司匹林红外吸收光谱的测定
8
3-5
开
必
3
荧光法测定维生素 B2 含量
8
3-5
开
内标对比法测定对乙酰氨基酚、校正
且待测组分在这两个波长处的吸光度差别显著，则可采用“等吸收双波长消去法”消除干扰
组分的吸收，直接测定混合物在此两波长的吸光度差值△A。在一定的条件下，△A 与待测
组分的浓度成正比，与干扰组分的浓度无关，用数学式表达如下：
Δ A ab

A ab 1

A ab 2

A
a 1

A
a 2

A
b 1

A
物质而测得，则ƒis=1。也可用试样溶液中内标物浓度 cis 代替 mis 求出待测组分浓度 ci。
3）校正因子的测定 高效液相色谱法的校正因子很难由手册中查到，常常需要自己测
定。测定校正因子时，配制含有 mis（g）内标物质（基准物质）和 mi（g）待测物质对照品
的溶液，在与测定试样完全相同的实验条件下，进样 5-10 次，分别测定 Ais 和 Ai。用下式计
算校正因子：
fi
(mi （mis
/ Ai )对照 / Ais )对照
（mi Ais )对照 （mis Ai )对照
式中 mis 和 mi 也可用校正因子测定用的对照溶液中内标物质（基准物质）和对照品 i 的浓度 cis 和 ci 代替。
4）药物制剂的标示量的相对含量 小剂量口服固体制剂常需检查每片（个）制剂的含 量偏离标示量的程度，因而需要测定以标示量为 100 的相对含量，后者用下式表示：
本课程的目的是通过学习这门课，不仅让学生掌握各种仪器分析方法和有关理论，同时 培养学生观察判断问题的能力和精密地进行科学实验的技能。其任务是运现代分析仪器进行 定性分析、定量分析、结构分析。要求学生掌握各种分析方法的基本原理、基本知识、基本 技能；熟悉常用分析仪器的使用、维护；了解仪器分析的发展趋势。 三、考核方式及办法
标示量的相对含量（%）
实际测得每片中待测组分的量 标示量
100%
3． 需用的仪器、试剂或材料等
仪器 高效液相色谱仪，ODS 色谱柱，量瓶，移液管等。 试剂 炔诺酮对照品，炔雌醇对照品，对硝基甲苯对照品，复方炔诺酮片（市售），甲
W
A1
A2
ΔA
样品④
样品⑤
样品⑥
磺胺甲恶唑对照品
5）.数据处理
ΔE=(A1-A2)/C=ΔA/C=60.16
标示量%

C 100 称样量(g)
2

平均片重( g ) 标示量(g / 片)
100
C（g/mL)
样品
标示量%
样品
样品
RSD%
5． 教学Байду номын сангаас式
面授，上机示范等
6． 考核要求
要求学生独立操作仪器，独立处理分析数据。