《普通植物病理学》课程实验教学大纲
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普通植物病理学》课程实验教学大纲
课程编号3021002 学时24 学分 1.5
一、课程性质和任务
普通植物病理学实验是配合普通植物病理学的教学内容,以病原菌的观察鉴定为主要内容,重点学习主要植物病原真菌的鉴定特征,使学生掌握各类病原的形态特征和分类系统,并了解植物病害的基本研究方法和基本技能,为下一步学习农业植物病理学课程奠定坚实的理论基础。
二、教学内容和方法
指导学生掌握各类常见植物病原生物(包括菌物、细菌、病毒和线虫等)的形态特征,能够对造成植物病害的病原物进行准确鉴定,了解生产中经常发生的植物病害种类;另外,通过对病原菌的分离培养、纯化和接种等一系列实验,掌握植物病理学常用的研究方法,并验证柯赫氏法则,用实践检验植物病理学的原理。
三、教学目的要求
本课程主要是配合普通植物病理学的理论教学,从实践中了解农业生产中经常发生的植物病害种类和症状,认识植物致病病原的形态,致病症状表现,植物病理学研究方法。
掌握植物病理学的原理和方法,为学生学好其他的病理学专业课打下坚实的基础。
具体要求学生掌握常见重要致病原生动物界Protozoa 根肿菌门Plasmodiophoromycota 茸鞭生物界Chromist 卵菌门Oomycota 真菌界Fungi 子囊菌门Ascomycota 担子菌门Basidiomycota 壶菌门Chytridiomycota 接合菌门Zygomycota 有丝分裂孢子真菌 ( Mitosporic fungi )病原真菌的形态特征;了解植物病原线虫的种类和形态特征及所造成的危害症状;学习植物病原细菌的鉴定方法和菌体及鞭毛染色方法;掌握植物病毒的接种方法和常规鉴定方法,认识常见寄生性种子植物。
学习培养基的制作,病原菌的分离培养和纯化,孢子萌发实验,然后进行接种实验,最终验证和深刻认识柯赫氏法则。
四、考核方式及办法
笔试,结合动手能力测试。
五、配套的实验教材或指导书
《普通植物病理学实验指导》许志刚主编,中国农业出处社。
《植物病理学实验技术》孙广宇,宗兆锋主编,中国农业出处社。
六、适用专业
植物保护专业七、实验项目
实验一植物病害的症状观察
(一)实验目的
本次实验目的在于了解植物病害的种类及多样性, 病状的一
认识病害对农业生产的危害性,并掌握病征和
般类型,以便在病害诊断中加以利用。
(二)实验项目内容
病状类型:变色、坏死、腐烂、萎蔫、畸型。
病征类型:粉状物、霉状物、锈状物、脓状物、粒状物、索状物
(三)主要仪器设备
按照植物病害的病状类型(变色、坏死、腐烂、萎蔫和畸形)和病征(粉状物、霉状物、小黑点、锈状物、菌脓等)准备植物病害的盒装标本、瓶装液浸标本及新鲜标本。
各种症状挂图、模型、多媒体课件等。
(四)实验室名称
云南农业大学普通植物病理学实验室。
(五)实验报告撰写
1将上述病害标本的发病部位,病状类型和病征类型,填于下表:
2、症状是有病植物外部可见的和的统称;症状分为、
、、和五大类型。
2、病状;病征;变色;坏死;萎蔫;腐烂;畸形。
3、简述生物显微镜的使用方法及注意事项。
I、答题要点:(1)右手握镜臂,左手抬底座,将显微镜取出。
(2)临时玻片制作。
(3)叙述显微镜正确观察方法。
(4)注意事项。
4、症状是有病植物外部可见的和的统称。
病状、病征
5、植物病害的定义是什么?
由生物因素和非生物因素引起的,植物表现出的生理代谢异常及外部表现的不正常现象。
6“病状”、“病征”、“症状”、“”的定义,并举例说明。
7、病状:是植物本身表现的异常现象。
如:变色、花叶、皱缩等。
8、病征:是病原物在发病部位所长出的一些结构。
如:霉状物、粉状物、颗粒状物等。
9、症状:是有病植物外部可见的病状和病征的统称。
如:白菜霜霉病,其症状为叶片正面是黄色多角形病斑,背面是白色霜霉层。
10、综合症:同一寄主植物上一种病害可能表现不同的症状。
如:水稻稻瘟病成株期表现为褐点型、白点型等病斑。
II、症状在病害诊断上有什么作用?
人们研究和认识病害,都首先从症状开始,症状有一定的变化幅度,常因品种抗性、环境以及发
病时期不同而有变化。
12、为什么一种病害可以表现出不同的症状?
a.一种病害处于不同时期,表现不一。
b.一种病害处于不同环境条件下,症状表现不一。
c.一种病害处于不同发病部位,症状表现不一。
实验二植物病原菌物一般形态和接合菌门真菌基本形态及所致病害观察
(一)实验目的
抱子类型。
认识接合菌门真菌的基本形态和分类依据。
(二)实验项目内容
1、菌物的营养体
1.1菌丝和菌丝体
1.2菌丝组织体
菌核、子座和根状菌索。
1.3菌丝体上分化岀的吸收养分组织
(1)吸器;(2)假根;(3)附着胞;⑷ 菌环和菌网。
2、菌物的繁殖体一一抱子
无性抱子:游动抱子、抱囊抱子、分生抱子和厚垣抱子。
有性抱子:卵抱子、接合抱子、子囊抱子、担抱子。
3.接合菌门真菌
根足霉属(Rhizopus)、毛霉属(Mucor)、笄霉属(Choanephora)、犁头霉属(Absidia )、毛
霉目真菌异宗配合现象观察。
(三)主要仪器设备
显微镜、挑针、刀片、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、擦镜纸、吸水纸等。
(四)实验室名称
云南农业大学普通植物病理学实验室。
(五)实验报告撰写
1、真菌营养体主要的变态有、、菌核和根状菌索
等。
2、真菌无性繁殖产生的抱子有、、和厚壁抱子;
有性繁殖产生的抱子有、、和。
3、实验中最常用的浮载剂是__________ 和乳酚油。
吸器、假根、子座
游动抱子囊和游动抱子、抱子囊和抱囊抱子、分生抱子;卵抱子、接合抱子、子囊抱子、担抱子。
水。
4、认识病原真菌菌丝、无性孢子、有性孢子有何意义
有利于真菌分类;有利于真菌研究;有利于病害的综合防治。
5、植物病原真菌的生活史包括哪几个阶段? 无性阶段和有性阶段。
何谓同宗配合、异宗配合?
由同型配子囊结合产生有性孢子的生殖方式称同宗配合;由异型配子囊结合产生有性孢子的生殖方式称异宗配合。
6、何谓同型配子囊、异型配子囊? 同型配子囊:外型大小相同的两个配子囊。
异型配子囊:外型大小不同的两个配子囊
7、绘匍枝根霉菌( Rhizopus stolonifer )孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子、假根、匍匐菌丝图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位。
8 、绘你所见到的接合孢子图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位
实验三子囊菌门真菌的基本形态及所致病害的观察
(一)实验目的
通过本次实验了解子囊菌的形态特征及分类概况,熟悉该菌所致病害的症状特点,以便为子囊菌的分类和病害鉴定打下基础。
(二)实验项目内容
1、半子囊菌纲
外囊菌目:外囊菌属;
2、核菌纲
球壳目:赤霉属、长喙壳属;白粉菌目:白粉菌属、单丝壳属、叉丝壳属、叉丝单囊壳属、钩丝壳属、球针壳属;
3、腔菌纲
痂囊腔菌属、小球壳属;
4、盘菌纲
核盘菌属。
(三)主要仪器设备显微镜、挑针、刀片、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、擦镜纸、吸水纸等。
(四)实验室名称云南农业大学普通植物病理学实验室。
(五)实验报告撰写
1、绘白粉菌属、单丝壳属、叉丝壳属、叉丝单囊壳属、钩丝壳属、球针壳属的形态图。
2、绘外囊菌属或散囊菌属的形态图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位。
3、绘白粉属、叉丝单囊壳属、球针壳属、钩丝壳属的形态图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位
4、绘赤霉属、多腔菌属、核盘菌属形态图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位
5、子囊菌门各纲的主要区别是什么?
半子囊菌纲:子囊由双核菌丝发育而成;子囊裸生,无子囊果;子囊无孔口。
不整囊菌纲:子囊果是闭囊壳;子囊由产囊丝形成;子囊壁早期溶解。
核菌纲:子囊果是子囊壳;子囊双层壁;有的子囊间有侧丝;有发达的无性阶段。
6、白粉属、叉丝壳属和叉丝单囊壳属的主要区别是什么
白粉属:闭囊壳内有多个子囊;附属丝菌丝状
叉丝壳属:附属丝粗、刚直,顶端二叉状重复分枝,分枝末端卷曲。
叉丝单囊壳属:附属丝粗、刚直,顶端二叉状重复分枝,分枝末端螺旋状卷曲
实验四担子菌门真菌的基本形态及所致病害的观察
(一)实验目的通过本次试验掌握担子菌的形态特征及担子菌所致病害的症状特点,为担子菌
的分类和病害鉴定打下初步基础。
(二)实验项目内容认识担子菌门真菌担子果的类型,冬孢菌纲黑粉菌目的分科及重要病原菌的生活史,锈菌目的分科及重要病原菌的生活史。
1、冬孢菌纲黑粉菌目的主要属:黑粉菌属、条黑粉菌属、轴黑粉菌属、叶黑粉菌属、腥黑粉菌属、实球黑粉菌的病原菌形态和所致病害的症状观察。
锈菌目的主要属:双胞锈菌属、单胞锈菌属、多胞锈菌属、胶锈菌属、栅锈菌属和层锈菌属病原菌形态和所致病害的症状观察。
2、层菌纲外担子菌属、隔担耳属的病原菌形态和所致病害的症状观察。
3、腹菌纲马勃目竹荪的形态观察。
(三)主要仪器设备显微镜、挑针、刀片、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、擦镜纸、吸水纸等。
(六)实验室名称云南农业大学普通植物病理学实验室。
(四)实验报告撰写
1、绘柄锈菌属、胶锈菌属、层锈菌属、黑粉菌属、条黑粉菌属的形态图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位。
2 、担子菌门真菌根据什么进行分类?
担子菌门真菌根据担子果、冬孢子的有无及担子果类型进行分类
3、黑粉菌目和锈菌目生活史有何不同? 举例说明
黑粉菌目生活史简单。
无转主寄生现象;锈菌目生活史较复杂,有转主寄生现象。
4 、多型现象、转主寄主
许多锈菌具有明显的多型现象,即生活史中能出现多种类型的孢子;转主寄主的锈菌需在两种不同的寄主上生活才能完成生活史。
实验五原生动物、茸鞭生物、壶菌门真菌基本形态及所致病害的观察
( 一) 实验目的
通过本实验了解原生动物、茸鞭生物、真菌界中根肿菌门、卵菌门和壶菌门的主要形态特征,掌握与植物病害有关的重要属的基本形态特征、分类依据及其所致病害的症状特点;同时,学习使用检索表来鉴定病原菌,为分类鉴定打下初步
基础。
(二) 实验项目内容
1、根肿菌门(Plasmodiophoromycota)
根肿菌属( Plasmodiophora ) 、粉痂属( Spongospora)
2 、壶菌门(Chytridiomycota)
3 、卵菌门(Oomycota)
水霉目(Saprolegniales) :水霉属( Saprolegnia )、绵霉属( Achlya )。
霜霉目(Peronosporales) :腐霉属( Pythium ) 、疫霉属( Phytophthora ) 、单轴霉属(Plas mopara) 、霜霉属( Peronospora ) 、假霜霉属( Pseudoperonospora ) 、盘梗霉属(Brem
ia ) 、白锈菌属( Albugo ) 。
( 三) 主要仪器设备
显微镜、挑针、刀片、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、擦镜纸、吸水纸等。
( 四) 实验室名称
云南农业大学普通植物病理学实验室。
(五)实验报告撰写
1、观察十字花科蔬菜根肿病菌、马铃薯粉痂病菌、禾谷多粘霉菌、玉米褐斑病菌、水霉菌或绵霉菌,绘一个孢子囊图。
要求: 1. 孢子囊各部分比例适中。
2.分类依据明显。
3. 注明分类地位
2、绘瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌孢囊梗、卵孢子
孢子囊、图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位。
3、绘大白菜霜霉病菌孢囊梗、孢子囊图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位。
实验六有丝分裂孢子真菌的基本形态及所致病害的观察
(一)实验目的本实验的主要目的是熟悉有丝分裂孢子真菌的形态特征和分类概况,熟悉有丝分裂孢子真菌所致病害的基本症状,为有丝分裂孢子真菌的分类和病害鉴定打下良好的基础。
(二)实验项目内容认识有丝分裂孢子真菌的基本形态和分类依据。
1.丝核菌属、小核菌属的病原菌形态和所致病害的症状观察。
2.粉孢属、梨孢属、轮枝孢属、葡萄孢属、尾孢属、链格孢属、黑星孢属、内脐蠕孢属、离蠕孢属、突脐蠕孢属的病原菌形态和所致病害的症状观察。
3.镰刀菌属的病原菌形态和所致病害的症状观察。
4.拟棒束孢属的病原菌形态和所致病害的症状观察。
5.炭疽菌属、痂圆孢属、拟盘多毛孢属、盘二孢属的病原菌形态和所致病害的症状观察。
6.叶点霉属、茎点霉属、大茎点霉属、壳针孢属、壳囊孢属、壳二孢属、色二孢属的病原菌形态和所致病害的症状观察。
(三)主要仪器设备显微镜、挑针、刀片、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、擦镜纸、吸水纸等。
(四)实验室名称云南农业大学普通植物病理学实验室。
(五)实验报告撰写1、绘梨孢、链格孢、尾孢、青霉、镰孢、炭疽菌、茎点和壳二孢属等病原菌的形态特征图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位。
2、在显微镜下你能分辨出分生孢子器和子囊壳吗? 如何区别?
a•子囊壳有附属丝、产生子囊和子囊抱子。
b.分生抱子器无附属丝、产生分生孢子。
实验七植物病原原核生物和植物病毒的基本形态及所致病害的观察
(一)实验目的
通过本次实验,掌握植物细菌病害的鉴定技术,熟悉植物细菌病害症状类型和病原细菌的基本形态;认识植物病毒病的病状类型及其特点,了解病毒的一般性质,学习病毒病害的鉴定方法及其原理,为以后植物细菌病害、病毒病害的正确诊断和病原的分类鉴定打下良好的基础。
(二)实验项目内容
1、认识细菌性病害的症状表现类型;观察细菌性病害引起的喷菌现象;学习细菌革兰氏染色、
鞭毛银盐染色的方法,认识周生鞭毛和极生鞭毛;认识原核生物的培养性状和生理性状。
2、认识植物病毒病害的症状表现类型;观察植物病毒的电镜照片;认识植物病毒的常见粒子形态;学习植物病毒内含体的观察方法。
(三)主要仪器设备显微镜、挑针、刀片、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、擦镜纸、吸水纸、香柏油、二甲苯等。
(四)实验室名称云南农业大学普通植物病理学实验室
(五)实验报告撰写
首先,观察发病部位有没有菌脓,如果有就有可能是细菌病害;其次可把切病健交界处进行镜检,看有没有喷菌现象,如果有就是细菌病害。
要求每人提交纯菌种各一支,相应记录一份。
1、记录不同症状类型的细菌病害的特点。
维管束寄生:这类病害多产生萎焉、坏死等症状;可产生明显的喷菌现象。
非维管束寄生:产生斑点、坏死等症状;喷菌现象不明显。
2、噬菌体技术在实际应用时有哪些优缺点?
优点:a. 噬菌体技术灵敏度高,能检测低浓度的细菌存在;b. 专一性强;
缺点:a. 噬菌体难于保存;b. 应用范围不广;
3、夏季的菜园中,茄、瓜等作物经常出现萎蔫症状,怎样判断这是细菌病害还是真菌病害?
4、用病毒标样接种1-2 个鉴别寄主,并记载寄主反应类型。
要求每人提交相应记录一份。
5、为什么要分离并纯化病原物?
因为要进行病原物的柯赫氏法则。
6、是否所有的病害都能分离到病原物?为什么?
不能。
非侵染性病害无病原物。
7、以小组为单位进行接种,每一组作一套,每人每天自己负责观察记载。
每一组提交合格的观察记录一份。
8、接种的目的是什么?
验证分离物是否是病原物。
实验八植物病原线虫和寄生性种子植物的基本形态及所致病害的观察
(一)实验目的熟悉植物病原线虫的基本形态及其所致病害的症状特点,以及学习分离和鉴定主要植物病原线虫
的方法。
学会识别常见的寄生性植物的种类、寄生方式和特点。
(二)实验项目内容观察粒线虫属、茎线虫属、滑刃线虫属、异皮线虫属、根结线虫属、剑线虫属、孢囊线虫和长针剑线虫属的形态及所致病害的症状。
学习从根瘤中挑取柠檬形雌性根结线虫的制样方法。
认识植物桑寄生、槲寄生、菟丝子、列当等寄生性种子植物的形态、为害特点。
(三)主要仪器设备
显微镜、挑针、刀片、酒精灯、火柴、载玻片、盖玻片、纱布、擦镜纸、吸水纸等。
(四)实验室名称
云南农业大学普通植物病理学实验室。
(五)实验报告撰写
1、绘小麦粒线虫雌虫、雄虫体型图;绘孢囊线虫雌虫体型图
要求:1. 各部分比例适中。
2.分类依据明显。
3.注明分类地位。
2、绘槲寄生、菟丝子形态图。
要求:1. 真菌各部分比例适中。
2. 分类依据明显。
3.注明分类地位。
实验九病原物的分离培养与接种(综合性技能实验)
(一)实验目的通过本次实验学习植物病原菌分离培养的原理和常用方法,学习常用的接种方法,掌握根据柯赫氏法则鉴定植物病原物的方法。
(二)实验项目内容1、学习田间采样的方法。
2、学习PDA培养基的制作方法、湿热火菌方法、干热火菌方法和无菌平皿的制作方法。
3、学习病原物的组织分裂方法和稀释分离方法。
4、学习喷雾、针刺、摩擦接种的方法并观察接种的结果。
(三)主要仪器设备电炉、天平、烧杯、玻棒、记号笔、高压火菌锅、烘箱、三角瓶、超净工作台、小型喷雾器、防虫温室。
(四)实验室名称云南农业大学普通植物病理学实验室。
(五)实验报告撰写提交分离培养、接种试验报告一份。
要求:以一种病害分离、接种结果为题材,试按试验的目的意义,试验材料和方法、试验结果及结果分析和讨论等格式来写。
实验十植物的抗病性和病原菌的生理分化
一、实验目的利用和培育抗病品种,是防治病害的根本性措施,要搞好抗病育种工作,必须熟练掌握植物
抗病性和病原物致病性分化的测定方法,病害的性质不同,其寄主抗病性和病原物生理分化测定的方法也不同。
国内外,在水稻对稻瘟病的抗病性方面的研究很多,尤其是生理小种的鉴定工作,
许多方法对水稻的研究都是适用的,对其他病害也可借鉴,在理论和实践上颇具代表性,因此选水稻稻瘟病作实验材料,学习植物抗病性鉴定和病原物生理分化测定的基本方法,以便为今后抗病育种工作打下坚实的基础。
二、内容、材料和方法
( 一) 繁殖菌种
进行抗病性鉴定,需要足够的菌量,故需对采集标本上的锈菌加以活化繁殖,菌量够用后即开始品种抗病性鉴定,繁殖菌种的方法如下:
1.准备感病品种幼菌,盆播高感稻瘟病的品种。
2. 接种:在秧苗长出1—2 片叶时即可接种,接种常用的方法:喷雾法:孢子量多时,可在三角瓶中洗下孢子,调成孢子悬浮液,用喉头喷雾器喷洒,配制孢子悬浮液时,先用少量水调成稠糊状,待孢子表面充分湿润后,再逐步加水稀释,以免孢子漂浮在水面上。
为了提高接种效果接种前毛笔加石英砂去掉叶表面的蜡层,以利孢子悬浮液展着和病菌的侵入,方法是用姆指和食指蘸水少许,轻轻捏住叶片,自基部向上摩擦几次即可。
3.保湿:稻瘟病病菌需要在叶面有水滴或水膜的高湿条件下方能萌发侵入,所以接种后必须
在保湿框或保湿箱中保湿35—48 小时,方法是将小花盆放在保湿框中,罩上塑料布,塑料布外再缠上润湿的棉布,保湿过程中,保持16—22C的温度,对抱子的萌发侵
入是很重要的条件。
4.接种后管理
(1)光照:接过种的秧苗自保湿箱中取出后应放在有日光的地方,冬季在温室中一般还要给以辅助光照,辅助光照多40 瓦日光灯或100 瓦灯泡,在傍晚和夜间补充照射,对形成孢子或稻瘟病症状的正常反应都很有利,日光灯更好些,因为近照秧苗时,不致于热力伤苗。
(2)温度:稻瘟病病菌的潜育适温是25 C左右。
(3)湿度:在接种后潜育期内,湿度虽不象光照和温度那样重要,但与孢子形成和症状的正常反应也有一定关系,因此,温室中应经常洒水,以提高室内空气湿度。
(4)防止污染:无论生理小种鉴定,还是品种抗瘟性测定,都要注意保持菌种纯度,防止污
染,操作时要严格消毒,接种针每挑取一个标样上的孢子后要经灯焰灭菌,凡改换菌种标样都需
用70%的酒精擦手消毒。
5.菌种的保存
保存菌种:保存菌种常用以下两种方法
a)干燥保存法:将装有抱子的指形管,用两纱布包住管口,放入干燥器内,再将干燥器放
在2—4C的冰箱内,此法可保存1—3个月。
b)半真空保存法,将抱子装在安培瓶中,瓶中堵以少量的脱脂棉,由抽气机将瓶中气压抽至1mm水银柱,然后将瓶口用火烧封闭,放在 2 —4°C冰箱中,可保存1年左右。
接种用的菌种,可分别用不同的小种单接也可将几种混合混接。
一般先混合接种,进行
初步鉴定和筛选,再分别接种作进一步的鉴定,接种保湿方法同前。
(三)生理小种鉴定
1.鉴定步骤
从田间收到一个标本(以下称标样)到确定它属何生理小种,大致经过如下程序:标样采
集—菌种培养—抱子洗涤—接种鉴定。
2.鉴定方法
扩繁菌种,接种的具体方法同抗病性鉴定。
生理小种鉴定,是观察某一标本在一整套鉴定品
种上的反应型,反应型记载标准如下:
调查分级标准:按国际水稻所稻瘟病抗性评价分级标准。
叶瘟:
0级:无病
1级:仅有小的针尖大小的褐点
2级:较大褐点
3级:小而圆以至稍长的褐色的环死灰斑,直径1—2毫米。
4级:典型的稻瘟病斑或椭圆型,长1—2厘米,常限于两条叶脉间,病斑面积不足叶面积的2%
5级:典型的稻瘟病斑,受害面积小于10%
6级:典型的稻瘟病斑,受害面积为10—25%
7级:典型的稻瘟病斑,受害面积为26—50%
8级:典型的稻瘟病斑,受害面积为51—75% 9级:全部叶片死亡
2)然后查阅检索表,最后确定该标样属何小种。
所有标样都鉴定之后,统计某一小种出现的频率。
在反应型符号的后面,有时还加一些附加符号,这些符号的意义如下:“ +”或“- ”指反应型的差异范围,“ ++”指差异的最高限,“ =”指差异最低限,“±”指差异在</SP< SPAN>。