PCR基本原理示意图PPT课件

精选课件
4
新链延伸方向 总是从5’ → 3’
5 ’
引物2 3’
升温至 Taq酶最 适温度
3’
引物1 3’
3’
5’
在Taq酶最适温度下，新链合成，不断延伸；在终止
延伸时，新链的长度可能长于目的片段，延伸至目的
片段外侧区域。
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5
新链延伸方向 总是从5’ → 3’
5 ’
引物2 3’ 5’
3’
升温至 Taq酶最 适温度
PCR基本原理示意图
精选课件
1
氢键
5’
3’
3’
5
’
待扩增目的 DNA片段（红
色区域）
5’
3’
3’
5’
加热 变性
5’
3’
3’
5’
加热变性后氢键被破坏，模板分成两条单链。
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3
引物是人工设计并合成 的脱氧核苷酸短链。
5 ’
引物2
退火 （迅速 降温）
3’
引物1
3’
5’
退火后，由于引物分子小，浓度又高，在模板之间 还未复性前就迅速与模板匹配结合。
反复经过变性、退火、延伸等步骤， 经过约30~40次循环，下面这种产物将 以指数级方式递增，成为主要产物。
5’
3’
3’
5’
精选课件
10
在PCR循环过程中，以下双链 形式的DNA只能以算术级方式扩增。成为
PCR反应的副产物。
难点？！！
5’ 5’
5’ 5’
精选课件
11
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3’
5’ 引物1
3’
5’
在Taq酶最适温度下，新链合成，不断延伸；在终止
延伸时，新链的长度可能长于目的片段ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ延伸至目的
片段外侧区域。
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6
再次升 温至变 性温度
3’
3’
5’
5’ 3’
3’ 5’
变性温度下链间氢键又被破坏，双链分开成单链。
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注意引物与模 板匹配的位置
5 ’ 引物2
3’
退火 （迅速 降温）
3’
引物1
5’
引物2 3’
5’
3’ 引物1
5’
退火后，引物又精与选课模件 板匹配结合。
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新链延伸方向 总是从5’ → 3’
5 ’
引物2 3’
升温至 Taq酶最 适温度
5’
3’ 引物1
5’
5’ 引物2
3’
3’ 引物1
5’
在Taq酶最适温度下，新链合成，不断延伸。
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新链的长度不会超过模板。
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难点？！！