DNA重组技术的工具(原创)
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作用： 特异性，即识别特定核苷酸序列，切 割特定切点。切点：磷酸二酯键。 结果： 产生DNA片段，末端通常有两种
形式——黏性末端和平末端。
限制酶所 识别的序 列有什么 特点呢？
•大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。
•中轴线两侧的碱基是反向对称重复排列的。
学案例 1
例1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中 很少 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键
学案例 2
答案： （1）限制酶 GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷 酸 腺嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 黏性 末端 （2） E· coli DNA 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺 嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 T4DNA连 接酶
运输车：基因的载体
载体必须具备怎样的条件？
你能想象选用霍乱弧菌中的质粒来做载体的后 对受体细胞无害 果吗？ 具有某些标记基因，便于进行筛选（如抗菌 我们用肉眼看不到载体是否真正进入了受体细 素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 胞，那么如何鉴定？ 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基 没有切割位点，能进行 DNA的重组吗？ 因连接 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 重组 DNA如果不能复制，会是怎样的结果？
答案：B
缝合针：DNA连接酶
1.
2.
分类及作用： E· coli DNA连接酶：只能连接黏性末端； T4 DNA连接酶：既可“缝合”黏性末端， 又可“缝合”平末端。
缝合针：DNA连接酶
DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为 什么？ 不是。DNA聚合酶是以一条DNA链为模板， 合成与模板链互补的DNA链；而DNA连接 酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起 来，不需要模板。 均合成磷酸二酯键。
转基因大南瓜
乳汁中含有人生长激素 的转基因牛(阿根廷)
抗虫害的转基因玉米
能 够 产 生 胰 岛 素 的 转 基 因 莴 苣
会发荧光的转基因斑马鱼和烟草
会发荧光的转基因兔子和猫
专题 1 基因工程
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格 的设计，通过体外 DNA重组和转基因等技 术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更 符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 又称为基因拼接技术、DNA重组技术、转 基因技术等。
运输车：基因的载体
常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等
质粒是基因工程 最常用的运载体，它 广泛地存在于细菌中， 是拟核DNA以外能够 自主复制的很小的环 状的裸露的DNA分子， 大小只有普通细菌拟 核DNA的百分之一。
学案例 3
答案：③ 平 T4DNA连接酶 ② ④ 黏性 E· coli DNA连接酶
完成学案“课堂巩固”1—10小题。
题号 答案
1 C
2 D
3 A
4 C
5 B
6 A
7 A
8 B
9 B
Hale Waihona Puke 10 C总DNA 重 组 技 术 的 基 本 工 具
结
来源 作用 结果
限制酶
分类 DNA连接酶
基因的载体 作用 载体的条件 常用载体
作
业
课后练习 学案11、12、13 预习《基因工程的基本操作程序》
1.1 DNA重组技术的基本工具
手术刀： 限制性核酸内切酶 缝合针： DNA连接酶 运输车： 基因进入受体细胞的载体
手术刀：限制性核酸内切酶
这种酶从哪里寻找呢？
原核生物
我们学过噬菌体侵染细菌的实验，知道细菌等 单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。 那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭， 有何保护机制？ 这类酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够 限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己 的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的 遗传信息。
手术刀：限制性核酸内切酶
能够限制异源DNA的侵入， 在DNA分子内部进行切割， 故名限制性核酸内切酶（简 称限制酶）。
手术刀：限制性核酸内切酶
来源： 原核生物
作用： 特异性，即识别特定核苷酸序列，切 割特定切点。切点：磷酸二酯键。 结果：
磷酸二酯键
手术刀：限制性核酸内切酶
来源： 原核生物
形式——黏性末端和平末端。
限制酶所 识别的序 列有什么 特点呢？
•大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。
•中轴线两侧的碱基是反向对称重复排列的。
学案例 1
例1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中 很少 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键
学案例 2
答案： （1）限制酶 GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷 酸 腺嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 黏性 末端 （2） E· coli DNA 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺 嘌吟脱氧核苷酸 磷酸二酯键 T4DNA连 接酶
运输车：基因的载体
载体必须具备怎样的条件？
你能想象选用霍乱弧菌中的质粒来做载体的后 对受体细胞无害 果吗？ 具有某些标记基因，便于进行筛选（如抗菌 我们用肉眼看不到载体是否真正进入了受体细 素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 胞，那么如何鉴定？ 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基 没有切割位点，能进行 DNA的重组吗？ 因连接 能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 重组 DNA如果不能复制，会是怎样的结果？
答案：B
缝合针：DNA连接酶
1.
2.
分类及作用： E· coli DNA连接酶：只能连接黏性末端； T4 DNA连接酶：既可“缝合”黏性末端， 又可“缝合”平末端。
缝合针：DNA连接酶
DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为 什么？ 不是。DNA聚合酶是以一条DNA链为模板， 合成与模板链互补的DNA链；而DNA连接 酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起 来，不需要模板。 均合成磷酸二酯键。
转基因大南瓜
乳汁中含有人生长激素 的转基因牛(阿根廷)
抗虫害的转基因玉米
能 够 产 生 胰 岛 素 的 转 基 因 莴 苣
会发荧光的转基因斑马鱼和烟草
会发荧光的转基因兔子和猫
专题 1 基因工程
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格 的设计，通过体外 DNA重组和转基因等技 术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更 符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 又称为基因拼接技术、DNA重组技术、转 基因技术等。
运输车：基因的载体
常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等
质粒是基因工程 最常用的运载体，它 广泛地存在于细菌中， 是拟核DNA以外能够 自主复制的很小的环 状的裸露的DNA分子， 大小只有普通细菌拟 核DNA的百分之一。
学案例 3
答案：③ 平 T4DNA连接酶 ② ④ 黏性 E· coli DNA连接酶
完成学案“课堂巩固”1—10小题。
题号 答案
1 C
2 D
3 A
4 C
5 B
6 A
7 A
8 B
9 B
Hale Waihona Puke 10 C总DNA 重 组 技 术 的 基 本 工 具
结
来源 作用 结果
限制酶
分类 DNA连接酶
基因的载体 作用 载体的条件 常用载体
作
业
课后练习 学案11、12、13 预习《基因工程的基本操作程序》
1.1 DNA重组技术的基本工具
手术刀： 限制性核酸内切酶 缝合针： DNA连接酶 运输车： 基因进入受体细胞的载体
手术刀：限制性核酸内切酶
这种酶从哪里寻找呢？
原核生物
我们学过噬菌体侵染细菌的实验，知道细菌等 单细胞生物容易受到自然界外源DNA的入侵。 那么这类原核生物之所以长期进化而不绝灭， 有何保护机制？ 这类酶在生物体内能将外来的DNA切断，即能够 限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己 的DNA却无损害作用，这样可以保持细胞原有的 遗传信息。
手术刀：限制性核酸内切酶
能够限制异源DNA的侵入， 在DNA分子内部进行切割， 故名限制性核酸内切酶（简 称限制酶）。
手术刀：限制性核酸内切酶
来源： 原核生物
作用： 特异性，即识别特定核苷酸序列，切 割特定切点。切点：磷酸二酯键。 结果：
磷酸二酯键
手术刀：限制性核酸内切酶
来源： 原核生物