抗菌药物对鸡大肠杆菌敏感性的对比试验

抗菌药物对鸡大肠杆菌敏感性的对比试验
随着养禽业的发展，鸡大肠杆菌病的流行日益严重，本试验对天津市周边的四个养殖场进行了采样，并进行了细菌分离鉴定及药敏试验，旨在为寻找治疗大肠杆菌的敏感药物奠定试验及理论依据。

一、材料与方法
（一）试验材料
药敏试纸：由杭州天合试剂有限公司按照美国NCCLs（National Committee for ClinicalLaboratory Standards）最新药敏试验法制备，采用标准厚纸片冰冻干燥法生产，直径6.35毫米，纸片含药量符合标准。

本试验测定了分离珠对10种抗菌药物的敏感性。

受试药物：红霉素、青霉素、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星、新霉素、左旋氧氟沙星、多粘霉素、恩诺沙星可溶性粉[兽药字（2009）020182118，规格：2.5%，天津汉普森药业有限公司]。

试剂：营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂，购于哈尔滨万泰试剂公司；各种糖发酵管生化试剂，购自杭州天合微生物试剂有限公司；绵羊琼脂培养基、革兰氏染色液按标准自行配置。

试验仪器：真空干燥箱（DZF-2），北京市永光明医疗仪器厂；台式PH计（PHS－25），上海理达仪器厂；立式压力蒸汽消毒器（628B），铁岭市医疗器械总厂；万分之一电子天平（FA2204B），上海精密科学仪器有限公司。

试验动物：病鸡采自天津市周边的4个养殖场。

（二）试验方法
对试验动物的临床症状观察试验鸡群表现为精神沉郁，食欲废绝，羽毛松乱，离群呆立，粪便呈黄绿色、灰白色水样，气管啰音。

肝肿大、出血，表面有一层纤维素性渗出物，气囊炎、心包炎，肠道广泛性出血，气管环轻微出血，脾、肾肿大，出血。

病料的采集样品来自天津市周边的4个肉鸡养殖场，对临床症状比较明显的25只大肠杆菌病死鸡，无菌采取心、肝、脾、气管等病料，以备试验。

细菌的分离培养与鉴定将所采取的25只病死鸡的病料涂于绵羊血琼脂培养基上，并对其进行划线，37℃培养24小时。

挑取单个菌落，37℃培养24小时后染色、镜检，对其镜检形态进行观察，并进行相应生化试验，其中大肠杆菌生化试验通过伊红美蓝琼脂、麦康凯琼脂接菌以及三糖铁发酵试验、明胶水解试验、V-P试验、吲哚试验、甲基红试验、枸橼酸盐利用试验等生化试验进行鉴定。

恩诺沙星可溶性粉药敏片的制备将定性滤纸用0.6厘米的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的西林瓶内，每瓶100片，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20分钟，再放入60~100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。

然后将配制好的恩诺沙星可溶性粉溶液精密量取1.0毫升，加入预处理的装有纸片的西林瓶内，放置片刻，在4~8℃环境中浸泡1个半小时，再将小瓶置37~50℃的温箱内2~3小时烘干，置冰箱内8℃以下冷藏保存备用。

药物对细菌的敏感性试验采用世界卫生组织推荐，目前各实验室广泛采用的纸片琼脂扩散法对细菌药物敏感性进行测定。

二、试验结果
（一）细菌鉴定结果
该试验共分离出菌种63株，其中大肠杆菌占34株（54.0%），其余分别为金黄色葡萄球菌5株（7.9%）、多杀性巴氏杆菌3株（4.8%）、伤寒沙门氏菌8株（12.7）、其他菌株13株（20.6%），具体鉴定结果见下表。

表1 各鸡场分离的病原菌分布统计表
通过上表可以看出，大肠杆菌均为4个鸡场发病的主要致病菌，并且这4个鸡场很少有单一感染，多为混合感染。

（二）药物对细菌的敏感性试验结果
表2 分离细菌的药敏试验结果（单位：毫米）
注：药敏片直径为6.25毫米，当药物对某菌抑菌圈直径为6.25毫米时，说明该药对其无效。

由上表可见，大肠杆菌对恩诺沙星可溶性粉、庆大霉素均能达到极敏；卡那霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、多粘菌素优于其他抗生素，对混合菌（大肠杆菌：金黄色葡萄球菌：多杀性巴氏杆菌：伤寒沙门氏菌=1：1：1：1）的试验结果与单纯大肠杆菌试验结果一致。

作者简介：和翀翼：男，（1982-），硕士研究生，毕业于黑龙江八一农垦大学，目前主要从事新兽药的研发工作。