茉莉酸甲酯浸种对水稻幼苗白叶枯病抗性及抗氧化酶活性的影响

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茉莉酸甲酯浸种对水稻幼苗白叶枯病抗性及抗氧化酶活性的影响
向妙莲1付永琦1何永明1黄友明1,2曾晓春1,2,∗
(1江西农业大学作物生理生态与遗传育种教育部重点实验室,南昌330045;2宜春学院生命科学与资源环境学院,江西宜春
336000;∗通讯联系人,EGmail:xchzeng2013@163.com)
EffectsofSeedSoakingwithMethylJasmonateonResistancetoBacterialLeaf BlightandAntioxidantEnzymeActivitiesofRiceSeedlings
XIANGMiaoGlian1,FUYongGqi1,HEYongGming1,HUANGYouGming1,2,ZENGXiaoGchun1,2,∗
(1KeyLaboratoryofCropPhysiology,EcologyandGeneticBreeding,MinistryofEducation,JiangxiAgriculturalUniversity,
Nanchang330045,China;2DepartmentofLifeScienceandEnvironmentalResources,YichunUniversity,Yichun336000,China,
∗Correspondingauthor,EGmail:xchzeng2013@163.com)
XIANGMiaolian,FUYongqi,HEYongming,etal.Effectsofseedsoakingwithmethyljasmonateonresistanceto
bacterialleafblightandantioxidantenzymeactivitiesofriceseedlings.ChinJRiceSci,2014,28(4):419G426.
Abstract:Thisexperimentwascarriedouttostudytheeffectsofseedsoakingwithexogenousmethyljasmonate(MeG
JA)onresistancetobacterialleafblightandantioxidantenzymeactivitiesofriceseedlingswithWen229(susceptibleto
ricebacterialleafblight)andJiazao312(resistant)asexperimentalmaterials.TheresultsshowedthatMeJAsoaking
significantlydecreasedthediseaseindexesofbacterialleafblightinriceseedlings,especiallyfortheresistantcultivar.
WithrisingMeJAsolutionconcentration,theactivitiesofsuperoxidedismutase,peroridase,catalaseandascorbateperG
oxidaseinleavesofriceseedlingsincreasedfirstlyandthendecreased,whilethemalondialdehyde(MDA)content
raisedatfirstanddroppedafterwards.Ataconcentrationof0.5mmol/L,MeJAsoakingcauseddamagetoriceseedG
ings.TheresponsesofantioxidantenzymeactivitiesandlipidperoxidationcontenttoMeJAsoakingvariedwithvariety.
TheaboveresultsindicatedthatMeJAsoakingcouldeffectivelyrelievethebacterialleafblightofriceseedlings.TheinG
creaseoftheantioxidantenzymeactivitiesandthedecreaseoftheMDAcontentarerelatedtoitsresistantreactionsto
bacterialleafblight.
Keywords:Methyljasmonate;riceseedlings;bacterialleafblight;antioxidantenzyme;lipidperoxidation
向妙莲,付永琦,何永明,等.茉莉酸甲酯浸种对水稻幼苗白叶枯病抗性及抗氧化酶活性的影响.中国水稻科学,
2014,28(4):419G426.
摘要:以温229(感白叶枯病)和嘉早312(抗白叶枯病)为材料,研究外源茉莉酸甲酯(methyljasmonate,MeJA)浸种对水
稻幼苗接种白叶枯病菌后抗氧化酶活性及膜脂过氧化的影响.结果表明,MeJA浸种显著降低了水稻幼苗白叶枯病病情指
数,对抗病品种的诱导效果优于感病品种;幼苗叶片超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、过氧化物酶(peroridase,
POD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(ascorbateperoxidase,APX)等酶活性随MeJA浓度的升高先增强
后减弱,丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量先降低后升高,MeJA浓度为0.5mmol/L时表现为毒害作用.不同抗性品种
幼苗抗氧化酶活性和MDA含量对MeJA浸种响应不同,表明MeJA浸种可有效减轻水稻幼苗白叶枯病的发生,其中,抗氧
化物酶活性的提高和MDA的下降与水稻对白叶枯病的抗性反应有关.
关键词:茉莉酸甲酯;水稻幼苗;白叶枯病;抗氧化酶;膜脂过氧化
中图分类号:文献标识码:A文章编号:1001G7216(2014)03G0419G08
植物在旱涝、冷热、盐渍、病虫害等逆境胁迫下, 植株体内活性氧代谢加强,产生过量O-2、H2O2、OH-等过氧化物自由基伤害细胞膜,损伤蛋白质、膜脂和其他细胞组分,严重影响植株生长发育,甚至
收稿日期:2013G08G01;修改稿收到日期:2014G03G
17.
基金项目:江西省“赣鄱英才555工程”领军人才培养计划资助项目;江西省科技支撑计划资助项目.914
中国水稻科学(ChinJRiceSci),2014,28(4):419-426http://www.ricesci.cn
DOI:10.3969/j.issn.1001G7216.20
14.04.011
导致植物死亡[1G2].为了适应外界环境的变化,植物
对逆境胁迫的应答反应涉及形态结构、生理生化、蛋
白及基因等一系列复杂变化过程.其中,以超氧化
物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、过氧化物
酶(peroridase,POD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)
和抗坏血酸过氧化物酶(ascorbateperoxidase,
APX)等抗氧化酶类组成的酶促清除系统,可清除
过量的自由基和过氧化物,抑制膜脂过氧化以保护
细胞免遭自由基伤害,从而减轻活性氧对植物的伤
害[3].
茉莉酸甲酯(methyljasmonate,MeJA)是一种
新型植物激素,具有广泛的生理效应.大量研究表
明,外源MeJA活性较强,易透过细胞膜作为信号分
子参与植物抗逆胁迫,逐渐成为植物抗逆反应研究
的热点[4G5].据李荣冲等[6]报道,MeJA能提高SOD
等抗氧化酶活性,缓解高温高湿造成的氧化损伤,有
效促进高温高湿胁迫下紫苏种子的萌发和幼苗生
长;段小华等[7,8]研究表明,适宜浓度的MeJA可提
高SOD、POD和CAT等活性,降低H2O2和O2-水
平及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,保护冷
胁迫下水稻和黄瓜幼苗对低温的抗性;另有试验证
明,JAs参与植物对病原菌等逆境胁迫的应答,诱导
活性氧迸发并增强POD、CAT等抗氧化酶活
性[9G10],显著上调PRG1、PRG2、PRG5和TaGJA2等抗性基因的表达,而上述酶活性和抗性基因表达的
增强与JAs诱导的抗病性密切相关[11].
我们在前期研究中发现,外源MeJA喷雾处理
水稻幼苗,能有效诱导水稻对细菌性条斑病的抗性,
显著降低白叶枯病病情指数,而这与MeJA诱导提
高水稻幼苗SOD、POD、CAT等防御酶活性密切相
关[10,12].本研究拟以常规水稻品种嘉早312(抗白
叶枯病)和温229(感白叶枯病)为实验材料,探索
MeJA浸种对水稻幼苗叶片抗氧化酶活性及膜脂过
氧化的影响,以期为MeJA诱导水稻幼苗抗逆性研
究开辟新的途径.
1材料与方法
1.1实验材料
嘉早312(抗白叶枯病)和温229(感白叶枯病)
均由江西农业大学作物生理生态与遗传育种实验室
提供.
茉莉酸甲酯购自美国Sigma公司.先以少量二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)溶解,再用
含0.1%Tween80的蒸馏水配成10mmol/L的溶
液备用.
白叶枯病菌为江西农业大学植物病理实验室保
存菌种.-80℃冷冻保存,试验前于NA培养基(牛
肉膏3.0g,蛋白胨5.0g,葡萄糖20.0g,琼脂17.0
g,蒸馏水1000mL,pH7.0)上活化,28℃下培养48
h,12000下离心10min,去除上清液,配制浓度为5
×108CFU/mL的菌液,以备接种之用.
1.2试验方法
1.2.1水稻种子处理
水稻种子用0.1%的HgCl2表面消毒15min,
蒸馏水冲洗3次,阴干.选取大小一致、饱满的种子
分别用浓度为0.0008、0.0040、0.0200、0.1
000和
0.5000mmol/L的MeJA溶液浸泡24h,对照为含
0.1%Tween80的无菌蒸馏水.处理完后蒸馏水
冲洗3次,备用.
1.2.2水稻幼苗培养
先加入5mL蒸馏水湿润滤纸,将1.2.1处理后
的水稻种子置于垫有滤纸的培养皿中,放入30℃±
1℃人工气候箱中催芽,待种子露白后,采用国际常
用砂培法培养.培养钵中先放入灭菌砂,后放置
100粒催芽种子,置于25℃~30℃、光周期为12h光
照/12h黑暗的生长室中培养.水稻幼苗培养10d
后备用.
1.2.3MeJA诱导对水稻白叶枯病抗性的影响
取1.2.1中水稻幼苗,用灭菌剪刀蘸取菌液剪
去幼苗叶尖1.0cm,每株接种2~3片叶.接种后置
于25℃~30℃、相对湿度90%以上的发病室观察.
当对照病情发展趋于稳定时(接种后15~21d),每
处理调查15片叶,逐叶测量被剪水稻叶片的病斑长
度和叶片全长,按分级标准记载病情并计算病情指
数和诱导效果[13]:病情指数=∑(各级病叶数×该
病级值)/(调查总叶数×最高级值)×100;诱导效果
(%)=(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照
组病情指数×100.
1.2.4MeJA浸种对水稻抗氧化酶活性的影响
1.2.4.1MeJA调控水稻抗氧化酶活性的浓度效应
将1.2.1中经不同浓度MeJA浸种(以含0.1%
Tween80的无菌蒸馏水浸种为对照),按1.2.2方法
培养的水稻幼苗接种白叶枯病菌.48h后取各处
理叶片0.5g冷冻保存(-80℃),用于各项生理指
024中国水稻科学(ChinJRiceSci)第28卷第4期(2014年7月)
标测定.每处理3个重复,每重复1盆,每盆80株. 1.2.4.2MeJA调控水稻抗氧化酶活性的动态变化选用1.2.1中经0.004mmol/LMeJA浸种处理的水稻幼苗,设置以下处理:清水浸种(CK)、清水
浸种+白叶枯病菌接种(Xoo)、MeJA浸种+白叶
枯病菌接种(Xoo),处理0、24、48、72和96h后取各处理水稻叶片0.5g冷冻保存(-80℃),用于各
项生理指标测定.方法同上.
1.2.5生理指标测定
SOD活性采用NBT法测定[14];POD活性采用
愈创木酚法测定[15];CAT活性参照陈利锋等[14]测定;APX活性参照刘凤权等的方法[16]测定;MDA
含量采用硫代巴比妥酸法测定[17].
1.3数据统计与分析
采用Excel2003和DPS7.05统计软件进行数
据分析处理,用单因素方差分析统计各处理平均值
的差异,Duncan新复极差法比较各处理间的差异显
著性.
2结果与分析
2.1MeJA浸种诱导水稻幼苗白叶枯病抗性
从图1可知,MeJA浸种可诱导水稻幼苗白叶
枯病抗性,诱导效果与MeJA浸种的浓度和时间有
关,不同抗性的水稻品种对MeJA反应存在差异.
MeJA浸种对抗病品种嘉早312的诱导效果优于感
病品种温229,随MeJA浓度上升,两水稻品种的诱
导效果先上升后下降,当MeJA浓度为0.004
mmol/L时,温229和嘉早312的诱导效果分别为
45.09%和54.42%,说明MeJA浸种诱导水稻幼苗抗白叶枯病具有浓度效应.
2.2MeJA浸种对水稻幼苗SOD活性的影响
经MeJA浸种处理后,两水稻品种幼苗叶片
SOD活性均随MeJA浓度上升先增强后减弱(图2G
A).感病品种温229和抗病品种嘉早312的SOD
活性均在MeJA浓度为0.0200mmol/L时达最高
值,分别为对照的1.63倍和1.85倍.当MeJA浓度
为0.5000mmol/L时,SOD活性最低,分别比对照
下降23.97%和6.18%,表明高浓度MeJA浸种对水稻SOD活性存在抑制作用.
水稻幼苗经MeJA和白叶枯病菌诱导后,
SOD活性变化如图2GB所示.结果表明,与对照
图柱上方不同小写字母表示处理间经Duncan新复极差法检验,在
P<0.05水平差异显著. Differentlowercaselettersindicatesignificantdifferencesamong
treatmentsatP<0.05levelbytheDuncan’smultiplerangetest.
图1MeJA浸种对水稻幼苗白叶枯病抗性的影响Fig.1.Effectsofseedsoakingwithmethyljasmonate(MeJA)onbacteG
rialleafblightresistanceofriceseedling.
相比,SOD活性随MeJA作用时间延长先逐渐升高
后缓慢下降,MeJA浸种+白叶枯病菌接种的SOD
活性上升速度快.其中,温229的SOD活性于接种
48h后达最大值,比对照上升48.62%,随后逐渐减
弱;接种24h后,抗病品种SOD活性达第一次高
峰,比对照增加33.08%,第二次高峰为接种后72
h,比对照增加50.26%.
2.3MeJA浸种对水稻幼苗POD活性的影响
由图3GA可知,当MeJA浓度为0.02mmol/L
时,温229幼苗POD活性上升幅度最大,为
55.57%,嘉早312在MeJA浓度为0.004mmol/L
时上升幅度最大,为92.43%.当MeJA浓度为0.50
mmol/L时,涠洲和嘉早312POD活性最低,分别
比对照下降38.89%和3.62%.
MeJA和白叶枯病菌处理后不同抗性水稻品种
POD活性动态变化如图3GB.对照水稻幼苗POD
活性呈缓慢上升趋势,差异不显著,而MeJA+白叶
枯病菌诱导后,温229和嘉早312的POD活性分别
于接种后48h和24h达最大值,比对照增加
76.37%和63.91%,但感病品种温229的POD活性
始终低于抗病品种嘉早312.以上结果表明,MeJA
124向
妙莲等:茉
莉酸甲酯
浸种对水
稻幼苗白
叶枯病抗
性及抗氧
化酶活性
的影响
W GCK -对照;W GXoo GMeJA -MeJA 浸种+白叶枯病菌接种(温229);W GXoo -白叶枯病菌接种(温229);J GCK -对照(嘉早312);J GXoo G MeJA -MeJA 浸种+白叶枯病菌接种(嘉早312);J GXoo -白叶枯病菌接种(嘉早312).图柱上方不同小写字母表示处理间经Duncan 新复极 差法检验,在P <0.05水平差异显著.
W GCK,Check(Wen 229);W GXoo GMeJA,MeJAsoaking +Xooinfection(Wen 229);W GXoo,Xooinfection(Wen 229);J GCK,Check(Jiazao 312);J GXoo GMeJA,MeJAsoaking +Xooinfection(Jiazao 312);J GXoo,Xooinfection(Jiazao 312).Differentlowercaselettersindicatesignificant differenceamongtreatmentsatP <0.05levelbytheDuncan’smultiplerangetest .
图2 外源MeJA 浸种对水稻幼苗叶片SOD 活性的影响
Fig .2.Effectsofseedsoakingwithmethyljasmonate(MeJA)onthesuperoxidedismutase(SOD)activityofriceseedlingsleaves .
图柱上方不同小写字母表示处理间经Duncan 新复极差法检验,在P <0.05水平差异显著.
DifferentlowercaselettersindicatesignificantdifferenceamongtreatmentsatP <0.05levelbytheDuncan’smultiplerangetest .
图3 外源MeJA 浸种对水稻幼苗叶片POD 活性的影响
Fig .3.Effectsofmethyljasmonate(MeJA)soakingontheperoridase(POD)activityofriceseedlingsleaves .
224中国水稻科学(ChinJRiceSci) 第28卷第4期(2014年7月)
图柱上方不同小写字母表示处理间经Duncan 新复极差法检验,在P <0.05水平差异显著.
DifferentlowercaselettersindicatesignificantdifferenceamongtreatmentsatP <0.05levelbytheDuncan’smultiplerangetest .
图4 外源MeJA 处理对水稻幼苗叶片CAT 活性的影响
Fig .4.Effectsofmethyljasmonate(MeJA)pretreatmentonthecatalase(CAT)activityofriceseedlingsleaves .
和白叶枯病菌处理均可诱导水稻幼苗POD 活性增 强,活性水平与水稻品种基础抗性有关. 2.4 MeJA 浸种对水稻幼苗CAT 活性的影响
当MeJA 浓度低于0.1000mmol/L 时,温229 和嘉早312幼苗CAT 活性随MeJA 浓度上升呈增 强趋势(图4GA).当MeJA 浓度分别为0.1000 mmol/L 和0.0200mmol/L 时,温229和嘉早312 幼苗CAT 活性达最大值,其活性依次较对照增加
30.96%和38.61%.高浓度(0.5000mmol/L)Me G JA 浸种使温229和嘉早312幼苗CAT 活性分别降 低了4.96%和15.11%.
MeJA 和白叶枯病菌对水稻幼苗CAT 活性的 影响如图4GB.结果表明,MeJA +白叶枯病菌处理 可诱导水稻幼苗CAT 活性上升,感病品种温229 和抗病品种嘉早312分别于48h 和24h 后达最高 值,分别比对照增加89.45%和98.11%;白叶枯病 菌处理后温229和嘉早312幼苗CAT 活性亦于48 h 和24h 后出现高峰,分别为对照的1.69倍和1.75 倍,随后逐渐减弱.
2.5 MeJA 浸种对水稻叶片APX 活性的影响
如图5GA 所示,低浓度MeJA 浸种均能增强水 稻幼苗叶片APX 活性.其中,温229幼苗APX 活
性最高值出现在MeJA 浓度为0.10mmol/L 时,为 对照的2.73倍;嘉早312在MeJA 浓度为0.02 mmol/L 时活性最强,为对照的2.81倍.当MeJA 浓度为0.50mmol/L 时,温229和嘉早312幼苗 APX 活性反而分别比对照低3.05%和63.79%.
MeJA 和白叶枯病菌对水稻幼苗APX 活性影 响如图5GB.结果表明,MeJA 和白叶枯病菌处理均 可增强APX 活性.其中,感病品种温229经MeJA
和白叶枯病菌诱导后,APX 活性均在72h 后出现 最大值,分别为对照的2.94倍和1.99倍;MeJA 和 白叶枯病菌诱导后嘉早312的APX 活性在48h 后 达最高峰,依次为对照的2.27倍和1.72倍. 2.6 MeJA 浸种对水稻叶片MDA 含量的影响
从图6GA 可以看出,2个水稻品种MDA 含量 均随MeJA 浓度的上升先降低后升高.温
229MDA 含量在MeJA 浓度为0.008mmol/L 时最 小,比对照低10.42%.嘉早312则在MeJA 浓度为 0.02mmol/L 时MDA 含量最低,比对照低
37.19%.随着MeJA 浓度上升,温229和嘉早312 幼苗MDA 含量上升,当MeJA 浓度为0.50mmol/ L 时达最大值,分别为对照的1.37倍和1.46倍. 由图6GB 可知,MeJA 和白叶枯病菌处理后两
324向妙莲等:茉莉酸甲酯浸种对水稻幼苗白叶枯病抗性及抗氧化酶活性的影响
图柱上方不同小写字母表示处理间经Duncan新复极差法检验,在P<0.05水平差异显著. DifferentlowercaselettersindicatesignificantdifferenceamongtreatmentsatP<0.05levelbytheDuncan’smultiplerangetest.图5外源MeJA处理对水稻幼苗叶片APX活性的影响
Fig.5.Effectsofmethyljasmonate(MeJA)pretreatmentontheascorbateperoxidase(APX)activityofriceseedlingsleaves.
图柱上方不同小写字母表示处理间经Duncan新复极差法检验,在P<0.05水平差异显著. DifferentlowercaselettersindicatesignificantdifferencesamongtreatmentsatP<0.05levelbytheDuncan’smultiplerangetest.图6外源MeJA处理对水稻幼苗叶片MDA含量的影响
Fig.6.Effectsofmethyljasmonate(MeJA)pretreatmentonmalondialdehyde(MDA)contentofriceseedlingsleaves.
水稻品种MDA含量随时间延长迅速上升,接种后
96h,感病品种温229和抗病品种嘉早312的MDA
含量分别为对照的1.36倍和1.71倍.而MeJA处
理可显著降低水稻幼苗温229和嘉早312的MDA
含量,最低值依次为对照的61.47%和69.75%,随时间延长,两品种MDA含量逐渐升高.以上结果
说明适宜浓度的MeJA处理在一定时间范围内可有效减缓水稻幼苗细胞氧化损伤,维持细胞膜正常结构及功能,增强植株抗逆性.
424中国水稻科学(ChinJRiceSci)第28卷第4期(2014年7月)
3小结与讨论
MeJA等信号物质诱导脂类过氧化产物的积
累,改变病程相关蛋白的表达,增强病原菌等生物胁
迫的抗性,与SOD、POD、CAT和APX等抗氧化酶
活性密切相关.Sun等[18]报道低浓度MeJA对人
参根腐病菌无抑制作用,但显著增强了人体内CAT
和POD等酶活性,从而降低了根腐病的发生,说明MeJA诱导人参抗根腐病可能与其激活了抗氧化酶
活性有关.Cao等[19]用10μmol/LMeJA预处理枇杷,结果发现枇杷冷害症状减少,且O2-和H2O2的含量显著降低,而SOD、CAT、APX等抗氧化酶活
性明显增强.另有报道证明MeJA诱导番茄抗灰霉
病是由于MeJA促进了SOD、CAT和APX等酶基
因表达,有利于清除过量的活性氧和减轻蛋白质氧
化损伤[20].然而,JAs类外源激素通常可清除植株
体内活性氧自由基,增强抗氧化酶活性从而提高植
株抗病性,但抗氧化酶活性与诱导抗病性的相关性
在不同植物或同一植物不同器官可能不尽相同[21]. Ferrareze等[22]在试验中发现,甜菜采后用JA处
理,贮藏期腐烂显著减轻,但甜菜的APX、CAT、POD等抗氧化酶活性并没有相应显著提高,表明这
些抗氧化酶类可能并没有直接参与JA诱导的抗病
反应.MDA是植物组织在逆境下遭受氧化胁迫发
生膜脂过氧化的产物,其含量可作为膜脂过氧化的
一个重要指标[23].在水稻遭受逆境胁迫时,其体内存在系列的酶促抗氧化剂可清除活性氧自由基,保
护植物细胞免受活性氧伤害,维持膜系统稳定[24].
本研究结果表明,水稻经MeJA浸种后幼苗接
种白叶枯病菌,可有效降低病情指数,这与前期试验MeJA喷雾处理可诱导水稻幼苗抗白叶枯病的结果
一致[10],MeJA浸种后水稻幼苗叶片内上述4种抗氧化酶活性均表现为随MeJA浓度增大先增强后减弱,呈单峰曲线;幼苗叶片MDA含量变化则随MeG
JA浓度增大先降低后升高.说明MeJA浸种对水
稻抗氧化酶活性及MDA含量的影响与其浓度有
关,同时证明了MeJA能有效提高SOD、POD、CAT
和APX等抗氧化酶活性,减轻膜脂过氧化,从而提
高植株抗逆境胁迫能力.
不同抗性水稻抗氧化酶活性及MDA含量的变
化不尽相同,暗示MeJA诱导不同水稻品种的抗性
途径可能存在一定的差异[5].两种对白叶枯病不同
抗性的水稻品种经MeJA处理后,幼苗叶片抗氧化
酶活性及MDA含量变化亦有异.与感病品种温
229比较,抗病品种嘉早312的SOD、CAT和APX
的活性基数高,对MeJA较敏感,且4种抗氧化酶活
性增幅大,而MDA含量下降快,说明外源MeJA浸
种对水稻幼苗抗氧化酶活性及MDA含量的影响可
能与水稻品种本身的遗传背景有关,其生理生化及
分子机制有待深入研究.
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