培养基平皿添加青霉素酶验证预试验

培养基平皿添加青霉素酶验证预试验
1培养基平皿名称及代号：
2.培养基平皿层流采样
因目前本公司产品其抑菌性最强的是盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药及其制剂，所以本次验证将选择风量大粉尘大的地点进行采样，且采样时须进行盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药或其制剂生产操作。

2.1沉降菌检测采样
按《洁净区微生物监测标准操作规程》SOP-QA-031-V00进行操作。

打开培养皿（规格型号：90mm）盖，使培养基表面在百级层流下暴露4小时（风淋4小时），再将培养皿盖盖上后交QC处理。

采样地点：107车间（由QA定具体位置）
采样高度：0.8~1.5m。

（日常采样高度或平台上）
每种培养基采样数量：20皿/采样地点（百级层流）
2.2附着菌检测采样
按《洁净区微生物监测标准操作规程》SOP-QA-031-V00进行操作。

采样完后再将培养皿交QC处理。

采样地点：201车间（由QA定具体位置）
每种培养基采样数量：20皿/采样地点（百级层流）
3 促生长试验：
3.1菌种
（1）细菌：金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]
铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]
大肠埃希菌[CMCC（B）44102]
（2）细菌芽孢：枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]
3.2菌液制备：
接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基上，经30～35℃培养18～24小时，取上述培养物分别加入0.9%无菌氯化钠溶液洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度（500～1000）cfu/ml。

3.3试验组：
采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至经采样后的培养基上，然后用无菌涂布棒快速地将其均匀涂布，每种菌悬液各接种2皿，于30~35℃培养72小时，测定菌数。

3.4阳性对照组：(未经采样的各种培养基平板)
采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至未经采样的各种培养基中，每种试验菌在每种培养基中平行制备2个平板，于规定温度下培养72小时，测定菌数。

3.5菌液组：（菌液组所用的培养基须使用新鲜制备培养基）
采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至NA培养基和TSA培养基中，每种试验菌在每种培养基中平行制备2个平板，于30~35℃温度下培养72小时，测定菌数。

3.6供试品对照组：取经采样后的每种培养基平皿（未加菌处理的），于30~35℃培养120小时，按菌落计数法测定供试品本底菌数。

4.可接受标准：
4.1阳性对照组的菌回收率均应在70%~130%之间，则促生长试验结果有效，否
则判批培养基平皿适用性检查不符合规定。

注：阳性对照组回收率（%）=阳性对照组平均菌落数÷菌液组平均菌落数×100
4.2试验组的菌回收率均应在70%~130%之间，则促生长试验结果有效，否则需
重新进行试验。

注：试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数）÷阳性对照组平均菌落数×100
5.培养基平板营养性再确认
5.1将经培养120h后的供试品对照组平皿，按“促生长试验”中的“3.1~3.3、3.5、
3.6”进行加菌试验操作。

试验组：采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至经采样培养120小时后的培养基上，然后用无菌涂布棒快速地将其均匀涂布，每种菌悬液各接种2皿，于30~35℃培养72小时，测定菌数。

菌液组：（菌液组所用的培养基须使用新鲜制备培养基）
采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至NA培养基和TSA培养基中，每种试验菌在每种培养基中平行制备2个平板，于30~35℃温度下培养72小时，测定菌数。

供试品对照组：测定供试品本底菌数。

5.2试验组的菌回收率均应在70%~130%之间，则促生长试验结果有效，否则需
重新进行试验。

注：试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数）÷菌液组平均菌落数×100。