RT-PCR 分析

RT-PCR分析
以休眠解除过程中各个不同时期的cDNA为模板，以组成型表达的延伸因子（EF）为内参基因，调整不同时期的cDNA模板量，使内参基因（EF）在各个时期的表达量基本一致，在相同条件下，对每个候选基因分别做3次PCR重复，其基本一致的表达模式为该基因的RT-PCR分析结果。

PCR反应体系：
PCR反应条件：
电泳检测及分析：
（1）电泳检测：1×TAE缓冲液，5-7/cm电压下，电泳30min，紫外灯下观察，拍照。

（2）结果分析：用Gel-Pro软件分别对3次重复的PCR结果进行数量化统计，取其平均值作为该基因在某一时期的表达量。

利用Excel软件，以不同时期不同基因的表达量与内参基因（EF）表达量的比值（相对表达量，relative expression）作横坐标，以休眠解除过程中的不同时期（stage3-stage6）作纵坐标，分析其表达模式变化。