口蹄疫病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达系统的构建

口蹄疫病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达系统的构建
窦小龙;任晓冰;魏婕;苗书魁;冉多良;马文戈
【期刊名称】《动物医学进展》
【年(卷),期】2014(000)003
【摘要】为制备Asia 1型口蹄疫病毒（FMDV）双层结构病毒样颗粒，选择牛病毒性腹泻病毒（BVDV）流行株BVDV JZ05-1核心蛋白p14的第169～270位氨基酸和 FMDV Asia 1/JS/CHA/05结构蛋白 VP1的第1～211位氨基酸，两者之间设计柔性肽连接，人工合成 p14-柔性肽-VP1融合蛋白编码序列，全基因长990 bp。

合成基因与枯草芽胞杆菌表达载体 p7257-P43连接，构建成表达质粒p7257-P43-P14-VP1。

转化枯草芽胞杆菌 WB800，经筛选、鉴定，获得表达
p14-VP1融合蛋白的枯草芽胞杆菌。

该重组表达菌在含有40μg/mL氯霉素的 LB 中培养后，菌体超声破碎可检测到目的蛋白。

Western blot 结果显示，该蛋白能特异性识别Asia 1型FMDV抗体，具有良好的反应原性。

电镜观察显示，融合蛋白组装为直径约50 nm大小的病毒样颗粒（VLP）。

%In order to prepare the double-layer structure virus-like particles of foot-and-mouth disease virus (FMDV)type Asia 1,the 169-270 amino acids of bovine viral diarrhea
virus(BVDV)JZ05-1 strain,its core protein P14,and the 1-211 amino acids of FMDV Asia 1/JS/CHA/05,its structural protein VP1 ,were se-lected
out,respectively.Between the two peptides,a flexible motif sequence was inserted into as a linker. The P14-flexible motif-VP1 coding sequence was synthesized and inserted into Bacillus subtilis expression vector p7257-P43 to build up the shuttle plasmid p7257-P43-P14-VP1,and its positive clones
were screened out and confirmed by sequence analysis.The shuttle plasmid was transformed into Bacillus subti-lis WB800 cells,and SDS-PAGE analysis showed that expression product consists in the WB800 cells in LB broth with 40μg/mL chloromycetin (Cm),and the fusion protein P14+VP1 could specifically react with the bovine positive sera against FMDV type Asia 1 in Western blot test.By electron microscopy observa-tion,the fusion protein can produce VLPs,which diameter is 50 nanometer aproximately.It provided a new way to explore new VLP vaccine.
【总页数】4页(P11-14)
【作者】窦小龙;任晓冰;魏婕;苗书魁;冉多良;马文戈
【作者单位】新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052; 新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830000;新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052; 新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830000;新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830000;新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐830000;新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐 830052;新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆乌鲁木齐 830000
【正文语种】中文
【中图分类】Q789
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