DNA的粗提取与鉴定(优秀课件)
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶 液（体积分数为95 ％） ，静置2－3min，溶液中
会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻 璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸
取上面的水
第十五页，编辑于星期三：一点 三分。
第十六页，编辑于星期三：一点 三分。
2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加
答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个 DNA子聚在一起形成的
第三十六页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十七页，编辑于星期三：一点 三分。
【实验总结】
此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤？几次 析出？几次搅拌？分别在哪一步？
答：整个实验共
两次蒸馏水：
三次过滤：
两次析出：
六次搅拌：
两次蒸馏水： 第1次： 步骤1.细胞吸水胀破
物理性质
溶解性： ➢ 在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小 ➢ 不溶于酒精
耐受性： ➢80℃以上高温变性 ➢被DNA酶分解，而不被蛋白酶分解 ➢洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂 质和蛋白质,但对DNA没有影响
第四页，编辑于星期三：一点 三分。
思考：
如何利用DNA的物理化学性质 提取和鉴定DNA？ 1.洗涤剂能溶解细胞膜，但不会破坏DNA 将DNA从细胞中提取出来
DNA的粗提取与鉴定
第一页，编辑于星期三：一点 三分。
DNA从哪
儿提取？
DNA的提取和鉴定
怎样将DNA与 细胞中的其他
物质分离？
怎样鉴定
我们提取
的DNA？
第二页，编辑于星期三：一点 三分。
基础知识
内容解析
DNA的物理化学性质
化学性质
在沸水浴条件下，DNA 与二苯胺反应呈蓝色
第三页，编辑于星期三：一点 三分。
原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑， 但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可 能性更大
第八页，编胞，获取含DNA的滤液
动物细胞：
无细胞壁，将其加入蒸馏水中 其破裂释放DNA
，使
植物细胞： 有细胞壁，需要先用一定的洗涤剂和
食盐溶解细胞膜，进行充分的搅拌和研 磨，才能使其破裂释放DNA
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使 提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变 性，与DNA分离。
第十三页，编辑于星期三：一点 三分。
第十四页，编辑于星期三：一点 三分。
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
第九页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有 利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液
第十页，编辑于星期三：一点 三分。
第2次： 步骤3.使 DNA黏稠物析出
第三十八页，编辑于星期三：一点 三分。
三次过滤： 第1次：步骤1. DNA存在于滤液里 第2次：步骤4. DNA被留在纱布上 第3次：步骤6. DNA存在于滤液里
过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有 关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用 多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的
器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失， 最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液
第二十四页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论： （1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会 有什么变化？
答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸 水以至胀破 （2）用玻璃棒搅拌有什么意义？
答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破 裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快 太猛，防止打碎DNA
② DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质 可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提 取出含杂质较少的DNA。
③ DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二 苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
第十九页，编辑于星期三：一点 三分。
3、实验材料和用具：
鸡血细胞液（5~10ml）；体积分数为95%的冷 酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；蒸馏 水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；务 质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯 化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子； 三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤 纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯； （100ml，一个，50ml、500ml各二个）；试 管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。
（2）观察丝状物呈什么颜色？
答：白色
第三十三页，编辑于星期三：一点 三分。
⑧ DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓 度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其 中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然 后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混 合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试 管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变 化
③析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停 地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观 察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中 出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时 停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量 浓度相当于0.14 mol／L）
第二十六页，编辑于星期三：一点 三分。
（3）滤去的是什么物质？得到的是什么？
答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到 的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA
第二十五页，编辑于星期三：一点 三分。
②溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶40mL加
入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min， 使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态
第二十七页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使 DNA从NaCl溶液中析出
注意事项：
将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验 成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻 轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子 的附着和缠绕
第二十一页，编辑于星期三：一点 三分。
第二十二页，编辑于星期三：一点 三分。
②柠檬酸钠作用
防止血液凝固
③作用机理
柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠檬 酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少，血液 就不会凝固
讨论：提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液 中的上清液？
答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是 血细胞，离心后除去的上清液是血浆
纱布为1－2层
第三十九页，编辑于星期三：一点 三分。
两次析出： 第1次： 步骤3.用0.14 mol／L 的NaCI溶液
（含杂质多）
第2次： 步骤7.用冷却的95％的酒精
六次搅拌： 第1、2、3、5、7步
其中除第8步外，其余均要朝一个方向搅拌， 在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧 杯底部，这样才能保证得到完整的DNA
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的 影响？
答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提 取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉 淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷 起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成 分就是DNA
第三十一页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十二页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：
（1）为什么要加50mL的冷酒精？
答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在 酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮 于溶液中
第十一页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂 质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中 不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去 溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与 析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂 质
第十二页，编辑于星期三：一点 三分。
第二十八页，编辑于星期三：一点 三分。
④滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布 上
⑤将DNA的粘稠物再溶解
取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的 量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱
布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地 搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中
鉴定DNA
第六页，编辑于星期三：一点 三分。
提取DNA的实验步骤 选取实验材料
破碎细胞，获取含DNA的滤液 去除滤液中的杂质
析出DNA 鉴定DNA
第七页，编辑于星期三：一点 三分。
二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
（一）实验材料的选取
材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动 物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培 养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材 料）
②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实 验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操 作繁琐，历时较长
第十八页，编辑于星期三：一点 三分。
2、实验原理
① DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度 的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以 使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
第三十四页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十五页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论： （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？
答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是 原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？
答：提取出的丝状物是DNA
（3） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出 现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的 大小？
第二十九页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十页，编辑于星期三：一点 三分。
⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液
取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗
过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液 中
⑦提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积 分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精，对 DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液
2、当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L 时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。
可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
第五页，编辑于星期三：一点 三分。
3、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某 些物质则可以溶于酒精。
可以将DNA与蛋白质进一步分离 4、DNA与二苯胺在沸水浴条件下呈蓝色
第二十页，编辑于星期三：一点 三分。
4、课前准备鸡血细胞液
①过程 取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）
100ml，置于500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约 180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳 溶液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰 箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将 血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离 心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验 时。用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到 鸡血细胞液。）
第二十三页，编辑于星期三：一点 三分。
5、方法步骤
①提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到 50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同
时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。 然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至
500mL。取其滤液。
注意事项： 鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容
入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。混合均匀后，
将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两 只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是
否有蓝色
第十七页，编辑于星期三：一点 三分。
三、实验案例 （一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提 取
1、鸡血细胞做实验材料的原因
①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得
会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻 璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸
取上面的水
第十五页，编辑于星期三：一点 三分。
第十六页，编辑于星期三：一点 三分。
2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为 2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加
答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个 DNA子聚在一起形成的
第三十六页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十七页，编辑于星期三：一点 三分。
【实验总结】
此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤？几次 析出？几次搅拌？分别在哪一步？
答：整个实验共
两次蒸馏水：
三次过滤：
两次析出：
六次搅拌：
两次蒸馏水： 第1次： 步骤1.细胞吸水胀破
物理性质
溶解性： ➢ 在0.14mol/L NaCl溶液中溶解度最小 ➢ 不溶于酒精
耐受性： ➢80℃以上高温变性 ➢被DNA酶分解，而不被蛋白酶分解 ➢洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂 质和蛋白质,但对DNA没有影响
第四页，编辑于星期三：一点 三分。
思考：
如何利用DNA的物理化学性质 提取和鉴定DNA？ 1.洗涤剂能溶解细胞膜，但不会破坏DNA 将DNA从细胞中提取出来
DNA的粗提取与鉴定
第一页，编辑于星期三：一点 三分。
DNA从哪
儿提取？
DNA的提取和鉴定
怎样将DNA与 细胞中的其他
物质分离？
怎样鉴定
我们提取
的DNA？
第二页，编辑于星期三：一点 三分。
基础知识
内容解析
DNA的物理化学性质
化学性质
在沸水浴条件下，DNA 与二苯胺反应呈蓝色
第三页，编辑于星期三：一点 三分。
原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑， 但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可 能性更大
第八页，编胞，获取含DNA的滤液
动物细胞：
无细胞壁，将其加入蒸馏水中 其破裂释放DNA
，使
植物细胞： 有细胞壁，需要先用一定的洗涤剂和
食盐溶解细胞膜，进行充分的搅拌和研 磨，才能使其破裂释放DNA
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使 提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变 性，与DNA分离。
第十三页，编辑于星期三：一点 三分。
第十四页，编辑于星期三：一点 三分。
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
第九页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有 利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液
第十页，编辑于星期三：一点 三分。
第2次： 步骤3.使 DNA黏稠物析出
第三十八页，编辑于星期三：一点 三分。
三次过滤： 第1次：步骤1. DNA存在于滤液里 第2次：步骤4. DNA被留在纱布上 第3次：步骤6. DNA存在于滤液里
过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有 关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用 多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的
器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失， 最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液
第二十四页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论： （1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞会 有什么变化？
答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸 水以至胀破 （2）用玻璃棒搅拌有什么意义？
答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破 裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快 太猛，防止打碎DNA
② DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质 可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提 取出含杂质较少的DNA。
③ DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二 苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
第十九页，编辑于星期三：一点 三分。
3、实验材料和用具：
鸡血细胞液（5~10ml）；体积分数为95%的冷 酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24h）；蒸馏 水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；务 质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯 化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子； 三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤 纸；滴管；量筒（100ml，一个）；烧杯； （100ml，一个，50ml、500ml各二个）；试 管（20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。
（2）观察丝状物呈什么颜色？
答：白色
第三十三页，编辑于星期三：一点 三分。
⑧ DNA的鉴定
取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓 度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其 中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然 后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混 合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试 管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变 化
③析出含DNA的粘稠物
沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停 地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观 察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中 出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时 停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量 浓度相当于0.14 mol／L）
第二十六页，编辑于星期三：一点 三分。
（3）滤去的是什么物质？得到的是什么？
答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到 的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA
第二十五页，编辑于星期三：一点 三分。
②溶解细胞核内的DNA
将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶40mL加
入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min， 使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态
第二十七页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使 DNA从NaCl溶液中析出
注意事项：
将溶液中的DNA与其他杂质分离，这一步骤是实验 成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水，并轻 轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子 的附着和缠绕
第二十一页，编辑于星期三：一点 三分。
第二十二页，编辑于星期三：一点 三分。
②柠檬酸钠作用
防止血液凝固
③作用机理
柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应，生成柠檬 酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少，血液 就不会凝固
讨论：提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液 中的上清液？
答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分是 血细胞，离心后除去的上清液是血浆
纱布为1－2层
第三十九页，编辑于星期三：一点 三分。
两次析出： 第1次： 步骤3.用0.14 mol／L 的NaCI溶液
（含杂质多）
第2次： 步骤7.用冷却的95％的酒精
六次搅拌： 第1、2、3、5、7步
其中除第8步外，其余均要朝一个方向搅拌， 在第三、五步搅动还要轻缓，玻璃棒不要直插烧 杯底部，这样才能保证得到完整的DNA
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的 影响？
答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提 取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉 淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷 起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成 分就是DNA
第三十一页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十二页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：
（1）为什么要加50mL的冷酒精？
答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在 酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮 于溶液中
第十一页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂 质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中 不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去 溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与 析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂 质
第十二页，编辑于星期三：一点 三分。
第二十八页，编辑于星期三：一点 三分。
④滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布 上
⑤将DNA的粘稠物再溶解
取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的 量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱
布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地 搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中
鉴定DNA
第六页，编辑于星期三：一点 三分。
提取DNA的实验步骤 选取实验材料
破碎细胞，获取含DNA的滤液 去除滤液中的杂质
析出DNA 鉴定DNA
第七页，编辑于星期三：一点 三分。
二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计
（一）实验材料的选取
材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动 物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培 养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材 料）
②鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实 验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操 作繁琐，历时较长
第十八页，编辑于星期三：一点 三分。
2、实验原理
① DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度 的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以 使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。
第三十四页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十五页，编辑于星期三：一点 三分。
讨论： （1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？
答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是 原来颜色 （2）这一鉴定结果说明什么问题？
答：提取出的丝状物是DNA
（3） DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出 现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的 大小？
第二十九页，编辑于星期三：一点 三分。
第三十页，编辑于星期三：一点 三分。
⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液
取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗
过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液 中
⑦提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积 分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精，对 DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液
2、当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L 时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。
可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
第五页，编辑于星期三：一点 三分。
3、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某 些物质则可以溶于酒精。
可以将DNA与蛋白质进一步分离 4、DNA与二苯胺在沸水浴条件下呈蓝色
第二十页，编辑于星期三：一点 三分。
4、课前准备鸡血细胞液
①过程 取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液（抗凝剂）
100ml，置于500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血（约 180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸纳 溶液充分混合，以免凝血。将烧杯中的血液置于冰 箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。（也可以将 血液倒入离心管内，用1000r/min（转每分）的离 心机离心2min，血细胞沉淀于离心管底部。实验 时。用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到 鸡血细胞液。）
第二十三页，编辑于星期三：一点 三分。
5、方法步骤
①提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到 50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同
时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。 然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至
500mL。取其滤液。
注意事项： 鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容
入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml 试剂。混合均匀后，
将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两 只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是
否有蓝色
第十七页，编辑于星期三：一点 三分。
三、实验案例 （一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提 取
1、鸡血细胞做实验材料的原因
①鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得