马铃薯快速繁殖实验报告
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沸数分钟 →调节pH值 至5.8 →定容→装瓶（棕色）→贴标签→放入冰箱保 存。
用时每配 l L 培养基取 该溶液 5m l。
母
规定 浓缩 称取 母液定 配 1L MS 培
液
用量 倍数 量/mg 容体 积 养基 吸取量
种
成分
/mg.L-1
/mL
/mL
类
铁 Na2ED TA.2H2O
植物快繁与传统营养繁殖(vegetative propagation)相比，其特点表现在： ①繁殖效率高。由于不受季节和灾害性气候的影响，材料可周年繁殖。生长速度 快，材料能以几何级数增殖。②培养条件可控性强。培养材料完全是在人为提 供的培养基质和小气候环境条件下生长，便于对各种环境条件进行调控。③占 用空间小 。一间 30m 2的培养室可同时存放1 万多个培养瓶，培育数十万株苗木。④管 理方便，利于自动化控制。培养材料在 人为环境中生长，省去了田问栽培的一 些繁杂劳动，并可利用仪器进行自动化控制，便于工厂化生产。⑤便于种质保 存和交换。通过抑制生长或超低温贮存的方法，使培养材料长期保存，并保持 其生活力，既节约了人力、物力和土地，还防止了有害病虫的传播，更便于种 质资源的交换 和转移。 (2)马铃薯是高度杂合的，因此它们的种子后代不可能与原种完全相同。只有 由无性繁殖产生的植株，在遗传上才能与其亲本植物完全相同，从而使品种的 特性代代相传。利用植物组织培养技术，在无菌条件 下 对 外植体进行离体培 养，使其短期内获得遗传性一致的大量再生植株的方法称为植物离体无性繁 殖。马铃薯试管苗在光照条件下进行自养的程度大于异养。相反，在高浓度的
一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓
度的 10 倍 、100 倍或 更高。 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度
为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符
合要求的培养 基。
(6)利用适宜的培养基，诱导带有腋芽的马铃薯单节茎段进 行芽生长和根再生形
硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾 、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、 钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺 素、盐酸吡哆素 、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙 酸)、NAA（α -萘乙酸）、
6-BA 、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、蒸馏水、75% 酒精等。 （2）马铃薯快速繁殖培养基及诱导培养 基的配制：
成单苗，从而达到快速繁殖的目 的。
(7)培养基配方设计：①根据培养的目的选择一种培养基为基本培养基。②确定
培养基中各种激素的浓度及相对比例。本实验中马铃薯试管苗快速繁殖培 养基
培养基的配 方如下： MS 培养基 +C30g/L +A7g/L
PH 5.8
2.实验流程
（1）实验总体流 程
38000
素
NH4NO 3
1650
33000
CaCl2 .2H2O 440
8800
MgSO4 .7H2O 370
20 7400
1000
50
KH2PO 4
170
3400
MS 培养基中的微量元 素可由 Mn SO4•4H2O、 ZnSO4 •7H2O、 H3BO3 、Na2Mo O4•2H2O、
（2）母液配制流 程
（3）马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配 制流程
三 实验设备及 材料 1.实验设备
果酱瓶、500mL 搪瓷杯、三角瓶、烧杯、容量瓶、玻璃棒、25mL 量 筒、1mL 和 5 mL 移液管 、洗耳球、PH 试纸、封口膜、扎口用棉线、药勺、称量纸、普通电 子天平、酒精棉球、小块纱布、灭菌滤纸、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭 菌培养皿、酒精灯、超净工作台、冰箱、高压蒸汽灭 菌锅、电磁炉、记号笔。 2.药品和试剂 （1）母液配制：
生科院组培 实验室 32 5
实验内容 1 MS 培养基母液和常用试剂的配制 2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配 制 3 马铃薯试管苗的快速繁 殖 4 马铃薯试管 薯的诱导 5 马铃薯幼 苗的移栽 一 实验目的 1.通过本次实验，能熟练准确 配制 MS 培 养基母液和组培室常用的化学试剂，巩 固相关理论基础知识 。 2.通过本次实验，掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据 实验目的设计适合的培养 基配方。
细胞分裂素
6-BA
10
100
0.1
KT
10
100
0.1
6.其它常用试 剂的配制
盐酸（lmol·L-1 ）：用浓度 36 .5%、密度 1.19g/cm3 的浓 盐酸配制
氢氧化钠（lmol·L-1 ）：用固体氢氧 化钠配制
75%酒精(v/v) ：用 95%的酒精来配 制
稀铬酸洗涤 液：重铬酸钾 5 0g 溶于 10 00 ml 蒸馏水中，冷却后缓慢加入工业用
本科学生综合性实验报 告
学号
姓名
学院 生命科学学 院 专业、班级
实验课程名 称
马铃薯快繁 和移栽
教师及职称
开课学期 2012 至 2013 学年 下
填报时间 2013
年6
月
学期 日
云南师范大学教务处编 印
实验序号
实验二
实验名称
马铃薯快繁 和移栽
实验时间 2012.03.15—2012.06.26 实验室
硫酸 90 ml。
配制好的各种母液应分别贴上标签，写明母液名称、配制倍数、配制
者、配制日期。母液最好在 2～ 4℃的冰箱中保存。尤其对生长调节物质与有
机类物质要求较严。贮存时间不宜过长，如发现有霉 菌和 沉淀结晶产生，就
不能再使 用。
（二）马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配 制 基本配方：MS 基本培 养基＋0.7％琼脂＋3％蔗糖（每小组配制 0.5L） （１）根据需要配制的培养基的量称好所 需的琼脂（3.5g），放入医用口杯中， 加入适量的蒸馏水（估计加入母液后不超过配制总量）置于电磁炉上加热溶解 ，边加热边用 玻棒搅动。 （２）MS 基本培养基配置：（配置前先检查各母液情况，如发现有霉菌和沉淀 结晶产生，就不能再使用）。大量元素母 液：25ml；微量元素母 液：2.5ml；铁 盐母液：2.5ml；有机物母液 ：各 2.5ml。混匀。 （３）待琼脂完全溶解后，加入规定用 量的蔗 糖 （ 15g），继续加温并不断搅 拌，待琼脂煮透后端离火源，再加入所需用量的母液（可事先取好放于一烧杯 中），最后加蒸馏水至所需体 积，即 500m l。 （4）调节培养基的酸碱性至 pH5.8： 由于培养基 的pH值直接影响到培养物对离子的吸收，因而过酸或过碱都对植物 材料的生长有很大影响。此外，琼脂培养基 的pH值还影响到凝固情况。所以， 当培养基配制好后应立 即进行 pH 值的调整。最好用酸度计测试，既快又准，如 无条件也 可用精密 p H试纸。培养基若偏 酸时用 lm ol·L-1 NaOH 来调节，偏碱则 可用lmol·L-1 HCl 来调 节。一般来说，当 pH 值高 于6.0 时，培养基将会 变硬； pH 值低于 5.0 时，琼脂不能很 好地凝固。 （5）培养基的分 装： 配制好的培养基要趁热分装，分装时容器口小者可采用漏斗分注，口大者直接 加注。试管、三角瓶等培养容器加注量占其容积 的 1/4～1/3 为宜，果酱瓶每瓶 20～30ml，太多既浪费培养基，又减少了培养材料的生 长空间；太少又会因营养 不良影响生长。培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧。本次实 验中 500ml 分装到 10 个果酱瓶，每人两瓶，剩余两瓶备 用。 （6）培养基的灭 菌： 培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。消毒灭菌时，压力表读 数 约为 1.06kgf ·cm-2 或 0.105 MPa（可在 0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过 0.14 MPa），温度 121 ℃时保持 15 ～30 min 左右即可。为了保证灭菌彻底，在蒸气灭菌 锅增压前应先将灭菌锅内的冷空气放尽。排净冷空气的办法有两 种： A、可以事前打开灭菌锅放气阀，煮沸，待大量热蒸气排出后再 关闭； B、也可采用先关闭放气阀，待压力升到 约0.04 MPa，温度超过 1 08℃时打开放 气阀排出空气，待压力表指 针回到 0 时再关闭放气 阀。 （三）马铃薯试管苗的接种和 快速繁殖 A、准备工作： ①接种室的清 洁和消毒 ②超净工作台的开机和消 毒 ③剪刀、镊子、已灭菌培养皿、酒精棉球、酒精灯、待用培养基 等的准备 ④ 实验材料的 准备。 B、马铃薯试管苗单节茎段繁殖无菌操 作： ① 实验操作前，操作人员洗手及手和小 臂消毒。 ② 使用的镊子、解剖刀等用 95％酒精浸泡，之后放在酒精灯上灼烧灭菌，再 放在灭菌后的培养皿中冷却后使 用。 ③培养瓶外壁用酒精拭擦 消毒 ④将马铃薯试管苗剪为单节茎段后接种到培养基中，在植入材料的前后，培养
KI、 CuSO4 •5H2O、 CoCl2 •6H2O 几种无机盐来供应，它们也可配在同一母液中
（具体配制见下表）。配制步骤同大量元素（混合时不要求先后顺序 ）。
母液 种类
成分
规定用量 浓 缩 称 取 量 母液定 配 1L MS
/mg.L-1 倍数 /mg
容体 积 培养基 吸
积小、贮藏运输方便、能工厂化周年生产，从而为马铃薯优良种质的保全提供
了一条理想 的途径。
(5)培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的 营养基质。配制培养基时，为
了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分
混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为
37.3
200 3730
500
5
盐
FeSO4 .7H2O
27.8
2780
5.植物生长调节物质母液 的配制
对于植物生长调节物质，配制成母液 时，通常用 mg ·ml-1 或 ppm 较为方便，
一般配制成 0.1-1mg·ml-1 的母液，这样的浓度便于计算也可避免冷藏时形成
结晶 。
糖类存在的情况下，以及在无光照的限制条件下，马铃薯向着诱导生成试管薯
的过程。这样生长出来的试管薯称之为原种 种薯。
(3)短枝发生型是指外植体携带的带叶茎段，在适宜的培养环境中萌发，形成完
整植株，再将其剪成带叶茎段，继代再成苗的繁殖方法。该方法与田间枝条的
扦插繁殖方法类似，故又称为微 型扦插。能一次成苗，遗传性状稳定，培养过程
事先配好的 MS 基本培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物 质、蒸馏 水 、 1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH 等。 3.实验材料：马铃薯脱毒 苗 四 实验方法步骤及注意事 项 实验步骤： （一）MS 培养基母液和常用试剂的配制 与保存 1.大量元素母 液的配制
MS 培养基 中的 9 种大 量元素除 C 、H、O 外，剩下的六种 可由 KNO 3、NH4NO 3、CaCl2 • 2H2O、MgSO4 • 7H2O、KH2PO 4几种无机盐来供应，它们可配在同一母液中 （具体配制见下表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化
/mL
取量/mL
MnSO4 ．H2O
16.9
ZnSO4 .7H2O
8.6
微 量 H3BO3
6.2
元 素 KI
0.83
3380 1720 1240 166
Na2Mo O4.2H2O
0.25
200 50
1000
5
CuSO4 .5H2O
0.025
5
CoCl2 .6H2O
0.025
5
3.有机成分母 液的配制
MS 培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制（具体配
制见下表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和体积→计算各种化合物用量
→称量→溶解→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保 存。
亦可配制成混合母液（不主张采用 ）。
母液 种类
成分
规定用量 浓缩 称取量/mg 母液定容 配 1L 培养 基
3.熟悉马铃薯快繁培养基及试管薯诱导培养基的 配置方法。
4.通过本次实验，进一步掌握无菌操作技 术。 5.了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要 的基础 苗。 6.熟悉移栽的过程和原理 。 7.掌握马铃薯幼苗移栽的技术和操作 方法。
二 实验原理、实验流程或装置示意图 1.实验原理
2,4-D/NAA 用少 量 95％酒精溶解，再加水定容 ；6-BA/KT 应先溶 于少量 1
mol·L-1 的 HCl 中，再加水定容 。
具体配制见 下表：
母液种类
成分
称取量（mg） 母液定容体 积 母液浓度
（mL）
（mg/mL）
生长素
2,4—D
50
100
0.5
NAA
50
100
0.5
简单，移栽成活率高。许多花卉、葡萄、马铃薯等试管苗的繁殖常用此方法 。
(4)在黑暗环境的诱导下，马铃薯试管苗可以在试管薯诱导培养基中结出种薯，
且悬于茎秆上。马铃薯试管薯是利用茎尖分生组织脱毒技术，在组织培养条件
下高倍扩繁脱毒试苗，进而诱导试管苗所形成的块茎。试管薯具有无病原、体
(1)作为植物营养繁殖的一个新手段，植物组织培 养技术现正日益普及。利 用 植 物 组织培养技术，在无菌条件下对外植体进行离体培养，使其短期内获得 遗传性一致的大量再生植株的方法称为植 物离 体 无 性繁 殖(propagation in vitro )。植物离体无性繁殖又称 植物快繁或微繁(micropropagation)，它是植 物组织培养技术在农业生产中应用最广泛、产生经济效益最大的研究领域，涉 及的植物种类繁多，技术日益成熟并程序化，繁殖速度突破了植物自 然繁殖的 界限，成就了工厂化育苗的梦 想。
/mg.L-1 倍数
体 积/mL 吸取量/mL
有
甘氨酸
2.0
100
机 盐酸硫胺素
0.1
5
成 盐酸吡哆素
0.5
200
25
பைடு நூலகம்250
5
分
烟酸
0.5
25
肌醇
100
5000
4.铁盐母液的 配制
铁盐母液宜单独配制，其配制步骤 为：
确定母液的浓度和体积→计算各种化 合物用量→称量→分别溶解→混合→煮
合物用量→称量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保 存。 注意： CaCl2 • 2H2O 最 后加入 2.微量元素母 液的配制
母液 种类
成分