维生素B1、B2的测定方法比较

维生素B1、B2的测定方法比较
比较维生素B1、B2含量测定方法。

方法：采用紫外分光光度法中三种不同方法测定维生素B1、B2含量。

结果：1、按 E 值测标示量维生素B1：98.3 ± 2.51，维生素B2：94.8 ±0.308，复合维生素B片中维生素B1:102.1± 1.70，维生素B1平均回收率为100.4%，RSD为2.13%(n=6)，维生素B2平均回收率为94.9%，RSD为6.5%(n=6)。

2、标准曲线法维生素B1、B2浓度分别在3～18、1～8μg/ml范围内，均呈良好线性关系，标示量分别为：102.9±0.661，98.4±0.152。

3、双波长法测维生素B1标示量：94.2±1.97。

结论：三种方法用于维生素B1、B2含量测定，操作简便、快速、准确，精密度好。

近年来对维生素B1、B2测定方法报道较多，如高效液相色谱法[1,2]、流动注射化学发光法[3]、多元线性分光光度法[4]、荧光分光光度法[5]、毛细管电泳电化学法[6]、氧瓶燃烧电位滴定法[7]等。

这些方法操作麻烦、时间较长。

本文采用紫外分光光度法中按 E 值测定法、标准曲线法和双波长分光光度法，测定维生素B1、B2含量，并将三种方法进行比较。

三种方法均操作简便、快速、准确。

1 仪器和材料
仪器：722型分光光度计DU-7紫外—可见分光光度计材料：维生素B1、B2对照品(购自Sigma 公司) ；维生素B1片(批号：20021202) 维生素B2片(批号：20021288-02)；复合维生素B片(批号：20021283-02)三种片剂均为昆明制药股份有限公司产品；冰醋酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。

2 试验及结果
2.1 维生素B1含量测定
2.1.1 按E 值测定维生素B1标示量
取本品 1 0 片，精密称取、研细，精密称取适量(约相当于维生素B125mg)，加盐酸(9 →1000)约70ml，振摇15min使之溶解，再加盐酸(9→1000)定容至100ml，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取滤液5 m l，用盐西装盐酸(9 →1000)稀释至100ml，摇匀，扫描得最大吸收波长为246nm(图1)，在该波长处测定吸光度，按其吸收系数( )为421计算：A 为供试品在246nm 波长处测得的吸光度；
D 为稀释倍数；W 为维生素B1片的平均片重；W样为称取的维生素B1片粉重；S标为标示量，测定结果(X ±SD)：98.3±2.51(n=7)。

2.1.2 按标准曲线法测维生素B1含量
2.1.2.1 标准曲线的绘制
精密称取维生素B1对照品33.5mg，先用少量蒸馏水溶解，再定容至25ml，取1ml 置50ml 量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。

分别取不同量上述溶液置25ml 量瓶中，配成：3、6、9 、12、15 、1 8μg / m l 的溶液，于波长 2 4 6 n m 处测定吸光度，每个点测三次，求A。

以浓度C(μg/ml)为横坐标, 以A值为纵坐标, 绘制标准曲线, 计算回归方程和相关系数：A=0.02307C+0.0025, r=0.9992, 显示维生素B1在3～18μg/ml浓度范围内线性关系良好, 2.1.2.2维生素B1 样品测定精密称取本品 5 片，研细，精密称取细粉18.8mg，置100ml 量瓶中，先用少量蒸馏水溶解，再定容至刻度，取1ml 稀释到10ml，于246nm 处测吸光度。

按标准曲线求出标示量X ±SD：102.9 ±0.661(n=6)。

2.1.3 维生素B1
加标回收率测定在经测定含量的样品中加入不同浓度的标准品，于246nm 处测定吸光度
2.2 维生素B2含量测定
2.2.1 按E 值测定维生素B2样品含量取本品4 片，精密称定，研细，精密称取适量( 约相当于维生素B210mg)，置100ml量瓶中，加冰醋酸0.5ml与水10ml，置水浴上加热1h，并时时振摇使维生素B2溶解，加水稀释，放冷后，加4% 氢氧化钠溶液3 m l，并用水稀释至刻度，摇匀，取滤液4ml 稀释至24ml ，照分光光度法，在444nm 波长处测定吸光度，按吸收系数( )为323计算：A 为供试品在444nm 波长处测得的吸光度；D 为稀释倍数；W 为维生素B2片的平均片重；W样为称取的维生素B2片粉重；S标为标示量。

结果(X±SD)：94.8±0.308(n=5)。

2.2.2 按标准曲线法测维生素B2含量
2.2.2.1 标准曲线的绘制
精密称取维生素B2对照品4.8mg，用少量蒸馏水溶解后定容至10ml，分别取不同量对照液用蒸馏水稀释成不同浓度：1、2、4、6、8μg/ml，于波长444nm 处测吸光度，每个点测定三次，求A。

以浓度C(μg/ml)为横坐标，以A 为纵坐标绘制标准曲线。

求出回归方程和相关系数A=0.07814C-0.00059，r=0.9985表明维生素B2在1～8μg/ml 浓度范围内，浓度与A 呈良好线性关系
2.2.2.2 维生素B2样品含量测定
取本品6 片，精密称取、研细，精密称取细粉15mg，先用少量蒸馏水和冰醋酸溶解后再移至50ml 量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，用干燥滤纸过滤取滤液，适当稀释后，于444nm 处测定吸光度，按标准曲线求标示量：X ±SD：98.4 ±0.152(n=4)。

2.2.3 维生素B2回收率测定
在已经测定含量的样品中分别加入不同浓度的对照品，于444nm 处测定A 值求回收率
2.2.4 复合维生素B 片中维生素B2
含量测定精密称取本品 6 片，研细，精密称取细粉69.0mg，置50ml 量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。

适当稀释成一定浓度，于444nm处测定吸光度，按吸收光系数( )为323 计算，标示量X ±SD：102.1 ±1.70。

(在此波长处复合 B 片中其它组分：维生素B1、B6、烟酰胺不干扰测定。

)
3 讨论维生素B1易溶于水，而维生素B2在水中溶解度较小，在处理维生素B2时应加少量酸、碱或在水浴上加热使之完全溶解。

紫外分光光度法中，按E 值测定含量为药典中药品含量测定广泛使用的方法，不需要标准品，但受仪器测定波长是否准确影响大。

标准曲线法受λ波动影响小，且可采用不同λ测定，此法需要对照品，有些样品找不到合适的对照品就不能用此法。

双波长分光光度法，可排出干扰组分的干扰，即使干扰组分的浓度发生较大变化，也几乎不会影响到待测组分的测定值，此法的关键是找到二个λ值对干扰组分△A=0，对待测组分△A 尽量大。

三种方法操作简便、快速、准确，适合在不同条件下使用。