杨梅渣黄酮类化合物提取及其抗氧化活性研究

［ .%&.Q ］ .B%BSB=! 还原能力的测定 ! 将杨梅渣黄酮粗提
!#$" 实验方法
.B%B.! 杨梅渣黄酮类化合物的提取 ! 称取一定量的 杨 梅 渣 粉 末， 与 N>O 的 乙 醇 按 料 液 比 . P => 混 匀， Q>R 超 声 提 取 =>6’+ ， 提 取 两 次， 真 空 抽 滤， 除去滤 浓缩 渣， 合并滤液。滤液再经过旋转蒸发仪 （ SER ） 至浸膏状。 .B%B%! 杨梅渣黄酮类化合物的萃取 ! 用三倍的去离 子水溶解浸膏， 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇分 别萃取两次， 经旋转蒸发仪 （ SETEER ） 浓缩至呈浸膏 状， 冷 冻 干 燥， 即 得 石 油 醚 相、 乙 酸 乙 酯 相、 正丁醇 相、 水相， 于超低温冰箱保存， 待用。 .B%B=! 粗提物中总黄酮含量的测定 .B%B=B.! 标准曲线的绘制! 精 密 称 取 .>65 芦 丁 （ .%>R 干燥至恒重） ， 用 =>O 的乙醇溶液溶解， 置于 .>>6; 容量瓶中， 加 =>O 的乙醇溶液定容， 得 .>>"5 U 6; 芦丁标准溶液， 备用。 准确吸取芦丁标准溶液 > 、 >BE 、 .B> 、 %B> 、 =B> 、 SB> 、 EB>6;， 分别置于 .>6; 刻度试管中， 各加 =>O 的乙醇 至 EB>6;， 加 EO 的亚硝酸钠 >BS6;， 摇匀， 放置 E6’+ ， 再加 .>O 的硝酸铝溶液 >BS6;， 摇匀， 放置 E6’+ ， 加 SO 的氢氧化钠溶液 SB>6;， 摇匀， 最后加 =>O 的乙醇 定容至刻度， 摇匀， 放置 .>6’+ 。在波长 E.>+6 处测 定其吸光度。以浓度 A （ "5 U 6;） 为横坐标， 吸光度 G 为纵坐标， 绘制标准曲线。
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&’(’)*+, -. /,’ ’0/*)+/1-. ).2 )./1R -012)/1-. -3 34)5-.-12( 1. !"#$%& #’(#& 6)*+
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［ +R( ］ 中所含的黄酮类化合物 ， 如杨梅素、 二氢杨梅素、
杨梅总重的 &)K ， 年产量约为 &) 万 1， 且呈逐年上升 趋势， 但均作为废物处理， 污染环境。开发利用杨梅 渣资源， 不但解决了废渣处理所带来的环境污染问 题， 而且延长了杨梅产业链。因此， 以杨梅渣为研究 对象， 提取其中的黄酮类化合物， 开发其药用价值功 能， 对进 一 步 利 用 杨 梅 资 源 具 有 重 要 的 现 实 意 义。 鉴于此， 本文对杨梅渣的黄酮类物质进行了提取并
收稿日期： +)&)R)&R)YJ !通讯联系人 作者简介： 陈学丽 （ &ZY* R ） ， 女， 硕士， 研究方向： 农产品加工与贮藏。 基金项目： “ 十一五” 国家科技支撑计划重点项目 （ +))IEX,+QE)( ） ； 宁波市农业攻关国际科技合作项目 （ +))YM&))H+ ） 。
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［ E&Q ］ .B%B=B%! 粗提物中总黄酮含量的测定 ! 称取 >B.5
物配成 S>> "5 U 6;， 取 %BE6; 样品于试管中， 依次加 入 %BE6; >B%6@- U ; #K4 和 %BE6; .O 六氰合铁酸钾溶 液， 于 E>R 水 浴 保 温 %>6’+ 后 快 速 冷 却， 再加入 %BE6; .>O 三氯乙酸溶液。然后取 %BE6; 于 .>6; 比 色管中， 依次加入 %BE6; 蒸馏水， >BE6; >B.O 三氯化
［ .. ］ 清除羟基自由基的能力测定 !
!" 材料与方法
!#!" 材料与设备
杨梅渣 ! 浙江海通食品集团股份有限公司提 "##$ （ %， % & "’()*+,- & . & #’/0,-),1023,- ） ! 4’562 供； 公司 （ 7*062+, ） 。 89":;<9"&%=> 型 真 空 冷 冻 干 燥 机 ! ?)*06@ A@B ， ;C1B ； :D & %EE> 紫 外 可 见 光 分 光 光 度 计 ! 4$F8G"H: A@B ， ;C1B ； IJ&E%G 旋转蒸发器、 循环水式 多 用 真 空 泵 4$K & ! G ! 上 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂； LM&.>> 型超声波! 昆山市超声仪器有限公司。
对其抗氧化活性进行了初步研究， 为杨梅渣的进一 步开发提供一定的科学理论依据。
式中， G X 为 %6; 乙醇或水 Z %6; "##$ 溶液的 G / 为 %6; 样 品 溶 液 Z %6;#34;##$ 溶液的吸光值。 .B%BSB%!
摘J 要： 杨梅是我国的特产水果， 年产量约为 &)) 万 1， 其中杨梅渣约占果实总重的 &)K 。目前以杨梅为资源的食品工 业已初具规模， 然而在杨梅深加工过程中， 杨梅渣都作为废物进行处理， 对其开发利用仍然一片空白。基于此， 以杨梅 渣为研究对象， 对杨梅渣中黄酮类化合物进行提取、 浓缩、 萃取， 分成四个级分 （ 石油醚相、 乙酸乙酯相、 正丁醇相和水 相） ； 用 ,@@L 法、 5-31#3 反应法和还原能力评价了四个不同级分的杨梅渣提取物的体外抗氧化能力。结果表明， 杨梅 渣粗提物正丁醇相和乙酸乙酯相具有较强的清除 ,@@L 自由基能力， 其半抑制浓度 （ AM*) ） 分别为 () 、 H) != N 2O， 分别是 维生素 M （ AM*) P &&) != N 2O） 的 (’IQ 、 +’Q* 倍。 关键词： 杨梅渣， 总黄酮， 提取， 抗氧化
参照
[*+C@+ 反应的方法建立反应体系模型， 利用 $% 9% 与 二价铁离子混合后产生・ 9$。 [*+C@+ 反应为： $% 9% Z [*% Z V 9$ & Z ・ 9$ Z [*= Z ， 但・ 9$ 具有很强的反 应活性， 存活时间短， 若在反应体系中加入水杨酸， 能有效 地 捕 捉 ・ 9$ 并 产 生 有 色 产 物。 该 产 物 在 E.>+6 处有较强吸收， 若加入具有清除・ 9$ 功能的 被测物便会与水杨酸竞争・ 9$， 从而使有色产物的 生成量减少， 采用固定反应时间法， 在 E.>+6 处测定 吸光度， 并做空白对照， 便能测定被测物对 ・ 9$ 的 清除作用。 ・9$ 清除率 （ O ）V ［.& （ G 加样 & G 未损伤 ） U G 损伤 ］Y .>>O 式 （%） G 损伤 为反应体系原来的吸光度， G 未损伤 为加 式中： 入提取液但不加入 $% 9% 的吸光度， G 加样 为反应体系 加入提取液后的吸光度。 将杨梅渣黄酮粗提物稀释成不同浓度梯度： E> 、 .>> 、 %>> 、 S>> 、 Q>> "5 U 6;。取 Q66@- U ; 水 杨 酸 .6; 于 .>6; 试管中， 加入 %66@- U ; 的 [*49S .6;， 摇匀， 再加入 Q66@- U ; $% 9% .6;， 摇匀， 于 =NR 水浴中恒温 .E6’+ 后， 测定其吸光度 G 损伤 （ 用水作为参比） 。测定 摇 匀， 放置 后， 各 加 入 上 述 浓 度 的 粗 提 液 .6;， .>6’+ ， 再测 定 其 吸 光 度 G 加样 ， 并 用 水 代 替 $% 9% 的 G 未损伤 做参照， 使用公式进行计算即可得清除率。同 时以 相 同 浓 度 的 K$? 和 D A 作 为 对 照， 重复上述 操作。
［& ］ 和多酚类等多种营养和功效成分 ， 具有消食、 御寒、
槲皮素等具有明显的抗溃疡、 抗炎、 抗菌、 抗氧化、 增 强机体免疫力、 软化血管、 降血糖、 降血脂等生理活
［H ］ 性作用 。杨梅渣是杨梅榨汁或酿酒后的副产物， 占
消暑、 止泻、 治疗痢疾以及生津止咳、 清肠胃等多种 药用价值， 是水果中的医药珍品。现代研究表明， 其
样品总黄酮含量萃取相石油醚相乙酸乙酯相正丁醇相自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基对其清除的效果表明样品能有效降低羟自由基烷自由基或过氧芦丁标准曲线自由基和打断脂质过氧化链反应
! 陈学丽! ， 叶立斌! ， 励建荣!， ， 孙金才" ， 陈# 卫! ， 许庆炎" ， !"#$ %$ % （ &’ 浙江工商大学食品与生物工程学院， 浙江杭州 (&))(* ； +’ 浙江海通食品集团， 浙江慈溪 (&*()) ； (’,-./012-31 #4 5##6 789-38- : ;-8"3#<#=> ， ?90=939/ @#<>1-8"398 A3B191$1E</8FBG$0= ?90=939/ +H)I& ） /36 71/1- C39D-0B91>，