豆芽中6-苄氨基腺嘌呤检测方法研究

非全日制硕士专业学位论文
豆芽中6-苄氨基腺嘌呤检测方法
研究
学位申请人：张翠侠
指导教师：张伟
校外导师：王丽霞
学位名称：农业推广硕士
研究领域：食品加工与安全
授予单位：河北农业大学
答辩日期：二〇一二年十一月二十四日
分类号：X836 单位代码：10086
密级：公开学号：Z2009147 非全日制硕士专业学位论文
豆芽中6-苄氨基腺嘌呤检测方法
研究
Determination metod of 6-Benzylaminopurine
in bean sprout
学位申请人：张翠侠
指导教师：张伟
校外导师：王丽霞
学位名称：农业推广硕士
研究领域：食品加工与安全
授予单位：河北农业大学
答辩日期：二〇一二年十一月二十四日
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

学位论文作者签名：签字日期：年月日
关于论文使用授权的说明
本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留及使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门（机构）送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查（借）阅。

本人授权河北农业大学可以将论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等方法加以保存或编成学位论文。

(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)
学位论文作者签名：导师签名：
签字日期：年月日签字日期：年月日
摘要
6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine）白色针状结晶，难溶于水，微溶于乙醇，可溶于酸性及碱性溶液中。

属于第一个人工合成的细胞分裂素，具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质分解，保绿防老的作用。

目前常用于蔬菜、水果的保鲜和无根豆芽的培育。

它在植物体内含量甚微但它对植物的生长发育具有显著的影响，其主要作用是促进细胞的分裂和扩大促进侧芽的发育抑制衰老等，具有诱导同化物向施用部位定向运输的作用。

它在细胞分裂素中活性最高。

6-苄氨基腺嘌呤作为促长剂和保鲜剂的主要成分，已在国内外进入应用阶段。

作为植物促长剂使用，6-BA 能提高种子发芽率，促进幼苗生长，最终提高产率，常被用于促进豆芽的生长，提高烟叶的产量等。

人体通过食物链摄入过多6-BA，会刺激食道、胃黏膜，造成损伤，出现恶心、呕吐等现象。

为了保证进出口食品添加剂6-苄氨基腺嘌呤质量和安全使用，维护消费者的利益，有必要尽快制定相应的质量检验标准，指导相关企业生产、改进生成工艺、加强生产管理；为探索适合我国相关生产企业特点的安全防护计划等方面提供可靠的依据,确保进出口食品添加剂检验检疫监管的有效实施，保证6-苄氨基腺嘌呤的质量和进出口贸易工作的顺利进行，建立一种快速准确测定豆芽中6-苄氨基腺嘌呤质量的方法，在生化、农业、食品行业和进出口行业中都具有很重要的意义。

本文研究了微波辅助提取高效液相色谱检测蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤中残留量的方法。

分别介绍紫外分光光度法、高效液相色谱法及豆芽中6-苄氨基腺嘌呤微波提取工作原理及主要应用领域；建立了高效液相色谱法和紫外分光光度法测定6-苄氨基腺嘌呤产品含量的标准方法。

实验中高效液相色谱法测得的平均含量为98.49 %，S 为0.20；紫外分光光度法为测得的平均含量为98.25 %，S 为0.14，经过F 检验和T 检验证明高效液相色谱法与紫外分光光度法精密度之间无显著性差异，两种方法之间无系统误差，即两种方法均可用于6-苄氨基腺嘌呤质量的测定。

探讨了微波辅助提取高效液相色谱检测蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤残留量的方法。

对蔬菜样品中残留的6-苄氨基腺嘌呤采用了两种提取方法，即微波提取和超声提取，讨论了两种提取方法中液固比、提取时间和温度对6-BA 提取产率的影响，其中UE 法提取绿豆芽样品中的6-BA 残留量实验条件为液固比为4:1，提取时间为30 min，测得提取产率为0.3765 µg/g，其RSD%均小于 1.9，重现性良好，回收率在84.85～86.57%之间；MAE 条件法提取绿豆芽样品中的6-BA 残留量实验条件为液固比为4:1，提取时间10 min，提取温度60 ℃，测得提取产率为0.7213 µg/g，其RSD 均小于3.8%，分析结果重现性良好，回收率在93.92%～96.46%之间。

实验表明：微波提取具有耗时短、提取产率高的优点，更适用于蔬菜中6-BA 的提取。

方法检出限为0.019 mg/kg；方法回收率为93.92～96.46%，RSD＜5.7%，此方法可用于豆芽中6-BA残留量的测定。

关键词：6-BA ；提取；紫外分光光度法；高效液相色谱
Determination metod of
6-Benzylaminopurine in bean sprout
Author: Zhang Cuixia
Supervisor: professor Zhang wei
Major: Food process and security
Abstract
6-Benzylaminopurine (6-BA) was the first cytokinin of artificial synthesis.Its main ingredients is purine and some inorganic substances and it is the highest active in the cytokinin. 6-Benzylaminopurine as the main component of preservative agent and
growth-promoter has been on the application stage at home and abroad. Use as a
growth-promoter, 6-BA was able to enhance seed germination, seedling growth and ultimately improve productivity, often used to promote the growth of bean sprouts, increase tobacco yields.
6-BA was also able to keep plant fresh by inhibiting plant chlorophyll, nucleic acid, protein degradation and respiration, etc, so 6-BA also as preservatives was used to keep fresh and store for a variety of green leafy vegetables (such as green pepper, cucumber, beans). Excessive intake 6-BA of the body through the food chain will stimulate the esophagus, gastric mucosa, cause these phenomenons including damage, nausea, vomiting and so on. At present, standard determination for food-grade 6-BA has not been established in the domestic and foreign. In order to ensure the quality and safety of food additives
6-Benzylaminopurine for import and export, safeguard the interests of consumers, it is necessary to develop appropriate quality determination standards.
In this paper, standard determination of the 6-Benzylaminopurine quality (content, impurities, etc.) is to fill a gap of quality testing methods (the standard method of preparation). The 6 -Benzylaminopurine residue of the bean sprout was determined by High Performance Liquid Chromatography and microwave-assisted extraction with the acidified methanol as extraction agent. This paper includes as followed:
First, the standard method which determine content of 6-Benzylaminopurine established by high performance liquid chromatography and ultraviolet spectrophotometry fills the gaps of the country. High performance liquid chromatography experiments measured the average content of 98.49%, S=0.20; UV spectrophotometry for the measured average concentration of 98.25%, S=0.14, throw F test and T test after that precision of high performance liquid chromatography and spectrophotometry was no significant difference between the two methods and had no system errors, or both methods can be used for 6-BA determination.
And second, In the first part of the content, based on high performance liquid chromatography of 6-Benzylaminopurine bean sprout residues, residues two extraction
methods using 6-BA in vegetable samples, namely, microwave extraction and ultrasonic extraction, two extraction methods are discussed in the liquid-solid ratio, time and temperature on the 6-BA extraction yield. UE which samples extracted from mung bean sprouts 6-BA in experimental conditions residual liquid to solid ratio of 4:1, the extraction time was 30 min, the measured extraction yield was 0.3765 μg/g,
In order to find an effective implementation of monitoring to ensure the the RSDs were less than 1.9, good reproducibility, recoveries between 84.85 ~ 86.57%; MAE conditions of samples of mung bean sprouts 6-BA in experimental conditions residual liquid to solid ratio of 4:1, extraction time 10 min, extraction temperature 60 ℃, extraction yield was measured 0.7213 μg/g, the RSDs were less than 3.8%, the analysis results were reproducible good recovery between 93.92% and 96.46%.
Experimental results show: Microwave extraction method is more suitable for vegetables in the 6-BA extraction, sample handling in the vegetable has a good prospect. The results of two extraction methods showed that: Compared with ultrasonic extraction, microwave extraction has the time-consuming and less extraction yields advantages. In this paper, the microwave extraction-HPLC determination of 6-BA residues in vegetables in the amount of the detection limit 0.019 mg / kg .recovery of method was 93.92 ~ 96.46%, RSD <5.7%, this method can be used for vegetables in the 6-BA residues.
Keywords：6-Benzylaminopurine;distill;Ultraviolet Spectrophotometry ;High Performance Liquid Chromatography ,
目录
1 前言 (1)
1.1 6-苄氨基腺嘌呤简介 (1)
1.2 6-BA质量检测方法的研究 (2)
1.3 紫外分光光度法 (3)
1.3.1 紫外分光光度法原理与应用 (3)
1.4 高效液相色谱法 (5)
1.4.1 高效液相色谱法的基本原理与分类 (6)
1.4.2 高效液相色谱法的应用 (6)
1.5 微波提取技术与超声提取技术 (8)
1.5.1 微波辅助提取 (8)
1.5.2 超声辅助提取 (13)
2 材料与方法 (19)
2.1 紫外可见分光光度法测定6-BA (19)
2.1.1 仪器与试剂 (19)
2.1.2 6-苄氨基腺嘌呤标准溶液的配制 (19)
2.1.3标准曲线绘制 (19)
2.1.4 6-苄氨基腺嘌呤样品溶液制备与测试 (19)
2.2 高效液相色谱法测定6-BA含量 (20)
2.2.1 仪器与试剂 (20)
2.2.2 6-苄氨基腺嘌呤标准溶液的配制 (20)
2.2.3 6-苄氨基腺嘌呤样品溶液制备 (20)
2.2.4 标准曲线绘制 (20)
2.2.5样品测试 (21)
2.3 6-BA的提取 (21)
2.3.1 仪器与试剂 (21)
2.3.2 标准溶液的配制 (21)
2.3.3 样品的制备 (21)
2.3.4 微波辅助提取（MAE） (21)
2.3.5 超声辅助提取（UE） (22)
3结果与分析 (23)
3.1 6-苄氨基腺嘌呤紫外吸收光谱特性 (23)
3.1.1 稳定性实验 (23)
3.1.2 线性范围及检出限 (23)
3.2 HPLC测定6-BA (25)
3.2.1甲醇浓度的选择 (25)
3.2.2流速的选择 (25)
3.2.3 柱温的选择 (26)
3.2.4 标准曲线及检出限 (27)
3.3 6-BA的提取 (28)
3.3.1 提取剂的选择 (28)
3.3.2 微波提取条件的优化 (29)
3.3.3 超声条件的优化 (30)
4结论 (32)
5 参考文献 (33)
作者简介 (38)
致谢 (39)
1 前言
1.1 6-苄氨基腺嘌呤简介
6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine，6-BA ）是一种人工合成的植物生长激素，主要作为促长剂和保鲜剂使用。

能够促进与调节植物生长发育以及蔬菜、水果的保鲜和储存。

也称为：6-苄氨基嘌呤、N-苄基腺苷、2-苄氨基嘌呤（化工词典），结构式见图1.1：
图1.1 6-BA结构式
6-BA是第一个人工合成的细胞分裂素，主要成份是嘌呤类生物碱和一些无机物，在细胞分裂素中具有较高活性。

6-BA作为植物促长剂和果蔬保鲜剂的主要成分，已在国内外进入应用阶段。

目前，6-苄氨基腺嘌呤的应用已经拓展到农业、果树栽培和园艺等领域[1-4]。

作为植物促长剂使用，可以提高种子发芽率，促进幼苗生长，最终提高产率，常被用于促进豆芽的生长，提高烟叶的产量等。

在作物生长过程中，6-BA 能够起到将氨基酸生长素、无机盐等向植物的茎、根等部位输运的作用，改善其生长。

另外6-BA 还能够通过抑制植物内的叶绿素、核酸、蛋白质分解、抑制呼吸等方式对作物防衰保鲜，因此6-BA适用于各种绿叶蔬菜（如青椒、黄瓜、豆角等）贮藏前使用。

然而，在实际应用中，6-苄氨基腺嘌呤的使用量会直接影响植物性状改善的效果、作物增产率的高低以及蔬菜的防腐储存的工作，因此，此方面的研究也受到广泛关注。

周琴等[5]研究6-苄氨基腺嘌呤(6 -BA)和PP333（多效唑)对油菜幼苗抗寒性的影响。

结果表明, 在一定范围内提高6-BA使用量可以提高油菜幼苗单株重量, 降低离体叶片电导率和游离氨基酸的渗出率。

随6-苄氨基腺嘌呤(6 -BA)和PP333（多效唑)浓度升高, 叶片中内源激素活性及根系活力均呈正态分布,一定浓度的6-BA 和PP333可提高叶片膜系统保护酶活性，降低叶片中膜脂过氧化程度，改善根系活力，从而增强油菜的抗寒性。

袁学军等[6]研究了6-BA对草坪草绿期影响，结果表明低温条下，6-苄氨基腺嘌呤(6 -BA)提高清除活性氧酶的活性，提高膜不饱和脂肪酸指数和三磷酸腺苷的含量，降低电解质渗透率和丙二醛的含量，这对低温条件下叶绿体的保护有显著的作用，因此，其可抑制叶绿素的分解，延缓衰老。

6-BA不仅降低了电导率，抑
制了叶绿素的分解，而且提高了可溶性糖、脯氨酸的含量，从而提高了抗寒性，延长了青绿期。

张敏等[7]研究了6-BA对小麦花后糖类和物质运转和籽粒品质的影响，结果表明，经6-BA处理降低了小麦籽粒质量和总淀粉含量，显著提高了籽粒蛋白质含量，且叶部处理比穗部处理的效果更为显著。

刘运正等[8]研究了6-苄氨基腺嘌呤对黄瓜幼果生长及其激素含量的影响，发现6- BA 处理使幼果细胞数目增多，生长加快，体现了其作为细胞分裂素的作用。

6-苄氨基腺嘌呤已被广泛应用于农业、果树栽培和园艺等领域。

在豆科植物促长，蔬菜的防腐储存等方面普遍使用，因此6-BA在市售水果和蔬菜中一般都有一定的残留，文献报道人体摄入过多会刺激食道、胃黏膜，造成食道、胃黏膜损伤，出现恶心、呕吐等现象[11]。

国家标准GB2760-1996将6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)作为允许使用的食品添加剂，同时也规定了其最高允许使用限量（0.01 g/kg）和最高允许残留量（0.20 mg/kg）。

为了保证食品安全，食品添加剂的质量标准一直受到世界各国相关领域的密切关注，美国为此专门成立了食品添加剂联合专家委员会（JECFA），为国际食品添加剂贸易或食品产品贸易提供相关标准。

然而，目前一方面国内外至今尚未建立6-苄氨基腺嘌呤进出口产品质量的检测标准及其测定方法，这给6-BA的生产使用和进出口贸易以及食品卫生监督与监测工作带来很大的阻碍；另一方面食品中6-BA残留量的检测方法也没有国家标准。

为了保证食品添加剂6-BA使用安全，维护消费者的利益，有必要尽快制定相应的检验标准，指导相关企业生产、改进生产工艺、加强生产管理，探索适合我国相关生产企业特点的安全防护计划，并为此提供可靠的依据，确保进出口食品添加剂检验检疫监管的有效实施，因此建立6-BA质量（含量、杂质等）检测方法及研究其在豆芽中残留量的检测方法势在必行，这将对生化、农业、食品制造和进出口等行业都具有很重要的意义。

本文建立了高效液相色谱法和紫外分光光度法测定豆芽中6-苄氨基腺嘌呤含量的分析方法，方法简便、准确，经 F 检验和T 检验证明两种方法测得结果之间无显著性差异，均可用于豆芽中6-BA含量的检测。

本文以酸化甲醇为提取剂，用超声和微波两种提取方法提取豆芽中6-BA残留量，优化了提取温度、提取时间和液固比等微波提取条件，并以甲醇/水/乙腈（v/v, 55/40/5）为流动相，采用高效液相色谱法对蔬菜中6-BA残留量进行检测。

微波提取与超声提取方法相比提取产率高、提取时间短，更适用于蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤的提取。

高效液相色谱法检测蔬菜中6-苄氨基腺嘌呤残留量方法的线性范围为0.050-80 µg/mL，检出限为0.019 mg/kg，加标回收率为92.82-96.98%，RSD 小于 3.8%。

研究方法准确、简便，适用于豆芽中6-苄氨基腺嘌呤残留量的检测。

1.2 6-BA质量检测方法的研究
目前6-苄氨基腺嘌呤(N6-Benzylaminopurine, 6-BA )的质量检验尚无国家标准，这给6-苄氨基腺嘌呤食品添加剂生产使用和进出口贸易以及食品卫生监测工作带来很大的困难。

为了使进出口食品添加剂6-苄氨基腺嘌呤产品质量能符合食品加工等相关2
行业使用的安全标准，维护广大消费者的利益，有必要尽快制定6-苄氨基腺嘌呤质量标准和检测方法，指导相关企业生产、改进生成工艺、加强生产管理，保证食品添加剂6-苄氨基腺嘌呤的质量和进出口贸易工作的顺利进行。

因此制定进出口食品添加剂6-苄氨基腺嘌呤的质量标准和相应的检测方法有着重要的意义。

根据我国食品添加剂6-苄氨基腺嘌呤生产的实际情况，参考了相关的食品添加剂质量检验的标准，采用紫外分光光度法和高效液相色谱法（HPLC）对6-BA进行定量检测，建立了两种准确、简便、快速、灵敏检测6-BA含量的方法。

1.3 紫外分光光度法
1.3.1 紫外分光光度法原理与应用
朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律是分光光度法确定浓度与吸光度之间定量关系的基础。

A = ε⋅b⋅c，A 是某一测量波长所对应的吸光度值，ε 为摩尔吸光系数，b 为吸收介质的厚度(cm)，c是吸光物质的浓度（mol/L）。

ε 为与测量波长等因素有关的常数，在固定的测试条件下保持不变，因此吸光度值与浓度之间呈线性关系。

比尔定律成立的基础是入射光为单色光。

吸光度与试液中被测物质浓度和光程长度成正比，当吸收池的厚度固定，以吸光度对浓度作校正曲线，应当得到一条过原点的直线。

紫外—可见光分光光度法的最主要的应用是在分析化学领域即对为数众多的无机化合物和有机化合物进行定性鉴定或定量测试以及各种金属与非金属元素的分光光度测试。

分光光度法的早期应用集中在无机分析化学领域。

有机物的光度分析较无机物的开展晚，但发展十分迅速，已经从定性、半定量分析发展到定量分析，方法的灵敏度和选择性也有了很大的提高，能够用光度法进行分析测试的物质种类也在不断增多。

利用紫外与可见光吸收光谱来预测和判断有机化合物的结构。

紫外分光光度法还广泛地应用于有机化合物的各种异构体，诸如顺—反异构体、互变异构体和旋光异构体的判别，以及有机化合物分子量的测试。

紫外—可见光分光光度法还有效地应用于化学反应的机理研究，例如测试溶液中络合物组成和不稳定常数，以及测试一些酸或碱的离解常数。

紫外—可见分光光度法应用非常广泛，在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医疗卫生、环境保护、生命科学等各个领域和科研生产工作中都已得到了极其广泛的应用。

（一）紫外分光光度法在环境科学领域的应用
水中氮总量总氮、总磷等营养盐是发生富营养化的必要条件。

在受污染的水体水质评价指标中,总氮是判断地表水、饮用水和水源污染程度的重要指标之一。

国家标准首选的水中总氮测试的经典方法为《碱性过硫酸钾氧化-紫外分光光度法》(GB 11894-1989)[11]。

该方法操作步骤比较简单，实验室容易操作，所用试剂普遍常见。

杜潇等[12]进行了紫外分光光度法测试水中总氮影响条件的实验研究。

王爱莲等[13]讨论了微波消解紫外分光光度法测试水中的总氮量，应用于环境水样和城市污水中总氮的测试，获得了满意的结果。

万琛[14]在实验中采用总氮、总磷联合测试，即同一
消解过程、同一条件下联合消化，然后再分别进行分光光度法进行测试，相关系数分别为r = 0.9992 和r = 0.9990，对锡东水厂的水源水进行重复性测试,结果的RSD
≤1%，结果满意。

（二）紫外分光光度法食品科学领域的应用
食品中苯甲酸的测试葛会奇[15]在食品防腐剂测试方法的研究中，采用乙醚提取紫外分光光度法在223 nm处，测试食品中苯甲酸的吸光度，通过标准曲线从而确定苯甲酸含量。

研究表明该方法简便准确、快速可行，经样品处理检验，该方法最小检出限为0.001 mg/mL，回收率达98%。

食品中硝酸盐的测试张社等[16]运用一阶导数紫外分光光度法直接测试食品中的硝酸盐，以干扰物亚硝酸盐的一阶导数值为0处的波长作为待测物硝酸盐的测试波长。

结果表明，硝酸盐质量浓度在0～5 µg/mL. 范围内符合比耳定律；以一阶导数值对硝酸盐质量浓度作线性回归，回归系数在0.9983～0.9998之间。

该法最低检出限为2 ng/mL，灵敏度较高；加标回收实验和盲法测标准品实验均表明准确度良好，可作为测试食品中硝酸盐的参考方法。

食品中甜蜜素的测试甜蜜素（环己基氨基磺酸钠）是一种新型的人工合成甜味剂, 近年对甜蜜素的毒理学研究发现其可能有致癌性及其代谢产物环己胺对心血管
系统和睾丸有毒理作用，成为人们关注的焦点。

陈少波等[17]利用紫外分光光度计对测试食品中的甜蜜素进行了探索。

研究结果表明：甜蜜素的质量浓度在0.2～1.0 g/L 范围内符合比尔定律，回收率为95.0～102.7%，相对标准偏差（RSD）为2.66～5.70%。

（三）紫外分光光度法在中药学的应用
在鉴别一些中药材的真伪工作中，常应用紫外分光光度法，简便易行可靠性高，重现性好。

李水福等[19]对木兰科等10种中药材进行了紫外光谱分析，结果表明厚朴花、辛夷花及其混淆品的紫外特征吸收峰（0阶和1阶导数）有一定的差别，可作为真伪鉴别的依据。

在中成药相关成分测试的工作中，也常常应用紫外分光光度法。

紫外分光光度法中有通常分为单波长法、双波长法和导数法。

巫军等[20]以虎皮素为对照品，采用分光光度法，选定测试波长为368 nm, 测试了银杏叶胶囊中总黄酮的含量。

结果表明，在3.728～26.096 µg范围其线性良好（r = 0.9999；平均回收率=96.06 % , RSD =0.23%。

回收率结果表明其方法测得的数据稳定, 可作为该制剂的质量控制方法之一。

刘志才等[21]利用紫外分光光度计测试了苦参中苦参总碱的含量。

结果表明，吸收值与苦参总碱的含量在3.285～16.43 (µg/L) 的范围内有良好的线性关系（r =0.9999；平均回收率=103.2 %，RSD =0.3 %。

肖志欣[22]应用双波长紫外分光光度法，在276 nm和324nm两处对牛黄口液中黄芩苷的含量进行了测试。

平均回收率是99.74%，RSD=1.41%。

陈新梅等[23]于324 nm和277.5 nm处测试绿原酸含量含量。

结果表明，在0.46～46.00 µg范围内线性关系良好（r =0.9992）；平均回收率是97.33%，RSD= 1.49%。

由实验结果得出, 本法可以消除辅料及其它成分的干扰，较其它方法快速、简便。

李凤前等[24]采用一阶导数法，通过测试338 nm处的振幅值，对水飞蓟速固体4
分散体中总黄酮含量进行了测试。

在4～20 µg/mL范围内线性良好（r = 0.9999）；高、中、低浓度平均回收率分别为101.21 %、98.93 % 和100.24% ，实验结果说明该法具有较好的准确性。

栾江等[25]用二阶导数光谱法，采用峰零法直接读取(276±1) nm 波长处导数值，对羚羊清肺散中黄芩苷的含量进行了测试。

本法测试时，既不需要样品进行复杂分离，又可消除干扰成分的影响，具有方法简便、快捷、准确的优点。

嘌呤类物质是一种双环杂原子化合物，其结构中含有共轭双键，在紫外光谱区有很强的吸收，可选用紫外分光光度法进行测试，但是关于紫外分光光度法对6-苄氨基腺嘌呤产品（食品级）含量测试的报道几乎没有。

本文将6-BA样品溶解后用1 cm
石英比色皿，以50%的甲醇溶液为参比，以为270 nm波长为测量波长测定其吸光度值，计算出6-BA样品含量。

方法准确、简便、快速，适于6-BA纯品的样品分析。

1.4 高效液相色谱法
色谱法是俄国植物学家茨维特（Tswett）于1906 年研究采用碳酸钙分离植物色素时发现的，命名色谱法(Chromatography)。

后来在此基础上相继发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳[27]。

高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱理论的基础上，在60 年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的，它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC ），又因分析速度快而称为高速液相色谱法（High Speed Liquid Chromatography，HSLP），也称高效液相色谱[28]。

HPLC 有以下特点高压—压力可达150～300 Kg/cm2；高速—流速为0.1～10 mL/min；高效—可对百余种物质同时进行分离测试；高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01 ng；样品消耗量少。

HPLC 与经典液相色谱相比有以下优点：检测速度快—通常分析一个样品只需15～30 min，有些样品甚至在5 min 内即可完成；分辨率高—可对例如手性物质等差异性很小的物质进行分离分析；灵敏度高—紫外检测器可达0.01 ng，荧光和电化学检测器可达0.1 pg；柱子可反复使用，一根色谱柱可分离不同的化合物；样品用量少；易回收；样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做样品制备。

不断发展的高效液相色谱法不仅吸取了经典液相色谱法的经验，而且引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和测试精度。

使用计算机控制的高效液相色谱仪，自动化程度很高，既能控制仪器的操作参数（如溶剂梯度洗脱、流动相流速、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等），又能对获得的色谱图进行处理，如将图形放大、收缩、叠加，以及对处理峰高、峰面积等保留数据等，为色谱分析工作者提供了功能完备、效率高的分析工具。

因此高效液相色谱法在分析化学研究领域得到广泛的应用。