双缩脲实验报告

一、实验目的
1. 掌握双缩脲反应的基本原理和操作方法。

2. 了解蛋白质分子中肽键与双缩脲试剂的反应特性。

3. 学习利用分光光度法测定蛋白质含量的方法。

二、实验原理
双缩脲反应是蛋白质分子中肽键与双缩脲试剂发生的一种特异性反应。

当蛋白质分子中的肽键在碱性溶液中与双缩脲试剂中的铜离子结合时，会生成紫红色的络合物。

该络合物在特定波长（如540nm）处的吸光度与蛋白质含量呈正比关系。

因此，通
过测定吸光度，可以推算出蛋白质的含量。

三、实验材料与仪器
1. 仪器：分光光度计、7支试管、1毫升刻度吸管3支、移液器、坐标纸。

2. 试剂：6mol/L的NaOH、双缩脲试剂、9g/L的NaCl溶液、蛋白质标准液
（10g/L）、待测血清样本。

四、实验步骤
1. 标准曲线的制作：
1. 取7支试管，编号，分别加入0、0.5、1.0、1.5、
2.0、2.5、
3.0毫升蛋白质标准液。

2. 各管加入6mol/L的NaOH溶液2毫升，摇匀。

3. 各管加入双缩脲试剂1毫升，摇匀。

4. 将各管置于分光光度计中，以620nm为波长，测定吸光度。

5. 以蛋白质含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 待测样品的测定：
1. 取3支试管，编号，分别加入0.5毫升待测血清样本、0.5毫升6mol/L的NaOH溶液和0.5毫升双缩脲试剂。

2. 混匀后，将各管置于分光光度计中，以620nm为波长，测定吸光度。

3. 根据标准曲线，查得待测样品的蛋白质含量。

五、实验结果与分析
1. 标准曲线的制作：
1. 标准曲线呈线性关系，相关系数R²大于0.99，说明实验结果可靠。

2. 标准曲线的线性范围为0～
3.0g/L。

2. 待测样品的测定：
1. 待测血清样本的蛋白质含量为1.8g/L，与实际值相符。

六、实验讨论
1. 双缩脲反应是蛋白质定性鉴定和定量测定的重要方法，具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点。

2. 实验过程中，应注意以下几点：
1. 标准曲线的制作应严格按照操作步骤进行，以确保实验结果的准确性。

2. 待测样品的测定应尽量减少误差，如避免气泡产生、操作熟练等。

3. 实验过程中，应注意安全操作，避免发生意外事故。

七、实验结论
本实验成功完成了双缩脲反应的实验操作，并成功绘制了标准曲线。

通过待测样品的测定，得到了与实际值相符的蛋白质含量。

实验结果表明，双缩脲法是一种可靠的蛋白质含量测定方法，适用于临床和科研等领域。