大鼠前脑缺血再灌注后海马神经元细胞凋亡及Bcl-2表达研究
脑缺血再灌注损伤机制研究进展
脑缺血再灌注损伤机制研究进展一、概述脑缺血再灌注损伤（Cerebral IschemiaReperfusion Injury）是一个复杂且多因素参与的病理过程，涉及到多种细胞和分子机制的交互作用。
在脑缺血缺氧后恢复血液供应的过程中，缺血性脑组织不仅未能得到恢复，反而出现加重的损伤甚至坏死，这一现象引起了医学界的广泛关注。
近年来，随着对脑缺血再灌注损伤机制的深入研究，许多新的分子靶点和治疗方法被发现，为临床防治提供了新的思路。
脑缺血再灌注损伤的主要机制包括氧化应激、炎症反应、细胞凋亡和自噬等。
当脑组织缺血时，能量代谢障碍导致细胞内钙离子堆积，引发氧化应激反应，产生大量自由基和细胞因子，进而引发炎症反应。
这些炎症因子会破坏细胞膜和线粒体，导致细胞死亡。
同时，脑缺血再灌注过程中还会出现神经细胞凋亡和自噬等现象，这些现象在一定程度上也参与了脑缺血再灌注损伤的发生和发展。
目前，针对脑缺血再灌注损伤机制的研究已经涉及到许多方面。
一些药物如依达拉奉、胞磷胆碱等被发现可以减轻脑缺血再灌注损伤的程度，这些药物主要通过抗氧化、抗炎、抗凋亡等作用发挥保护作用。
细胞治疗也成为研究热点，一些干细胞如间充质干细胞、神经干细胞等在体内外实验中表现出对脑缺血再灌注损伤的保护作用，其机制主要包括减轻炎症反应、促进血管再生、减少细胞死亡等。
尽管已经取得了一定的研究进展，但脑缺血再灌注损伤的机制仍然存在许多未知领域需要探索。
未来，我们需要进一步深入研究脑缺血再灌注损伤的详细机制，发现更多参与损伤过程的分子靶点，并针对这些靶点进行药物设计和发现。
同时，随着细胞治疗技术的不断发展，干细胞治疗也将会在脑缺血再灌注损伤治疗中发挥更大的作用。
通过加强多学科之间的合作，包括神经科学、生物学、药理学、医学等，我们有望促进研究成果的快速转化和应用，为临床防治脑缺血再灌注损伤提供更为有效的方法和手段。
1. 简述脑缺血再灌注损伤的定义和重要性脑缺血再灌注损伤是一种复杂的病理过程，它涉及到缺血期的原发性损伤和再灌注期的继发性损伤。
银杏叶提取物EGb761对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响
银杏叶提取物EGb761对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2、Bax 蛋白表达的影响牟芳芳于永娟邵水金谭梦晖陆萍萍朱晶张泽安上海中医药大学（上海201203）【摘要】目的：探讨EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及Bcl-2和Bax 蛋白表达的影响。
方法：48只SD 雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、EGb761低剂量组及EGb761高剂量组，每组12只。
应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型，TTC 染色法测定脑梗死体积，应用TUNEL 法检测神经元凋亡，应用Western blot 方法检测Bcl-2及Bax 蛋白表达。
结果：与模型组比较，EGb761高低剂量组脑梗死体积显著减少（P ＜0．05），神经元凋亡数显著减少（P ＜0．01），Bax 蛋白表达明显减少（P ＜0．05，P ＜0．01），Bcl-2/Bax 比值明显升高（P ＜0．01）；EGb761高剂量组Bcl-2蛋白表达明显增多（P ＜0．01）。
EGb761高低剂量组间Bcl-2/Bax 比值差异有统计学意义（P ＜0．05）。
结论：EGb761能显著增加脑缺血再灌注后Bcl-2蛋白表达，减少Bax 蛋白表达，抑制神经元凋亡，减少脑梗死体积，对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。
【关键词】缺血再灌注；EGb761；凋亡；Bcl-2；Bax 【中图分类号】R285．5【文献标志码】A【文章编号】1008-861X （2012）03-0078-04［基金项目］上海市教委科研创新项目（09YZ123）；上海市教委重点学科建设项目（J50301）［作者简介］牟芳芳，女，讲师，在读博士生，主要从事脑缺血研究与解剖学教学。
［通讯作者］张泽安，教授，博士生导师。
E-mail ：tozeanzh@yahoo．com．cn银杏叶提取物EGb761（Ginkgo biloba extract761）主要成分为黄酮类及银杏内酯等，德国、法国等欧洲国家已经将其作为银杏叶的一种标准化提取物，广泛应用于治疗心脑血管系统疾病［1-2］。
异丙酚对大鼠缺血再灌注海马区Bax和Bcl-2表达的影响
ｌ ｅ ａ ｔ ｎ Ｊ Ａｎ ｓ ｃｉｆｇ Ａｆ ｉｔｄ Ｔ ｉ ｅＨｏ ｐ ｔ ｌ ｆ Ｙ ｎ ａ ｇ Ｍｅ ｉ ｌ ｏｌｇ ， ｈ ｙ ｎ４ ２ ０ ， ｈ ｎ ｐ ｒｍｅ ｔ ｅｌ ｓ （ ｙ， Ｊ ｌ ｅ ａ ｈ ｓ ｉ ｕ ｙ ｎ ｄ ｃ ｌ ｅ Ｓ ｉ ａ ４ ０ ０ Ｃ ｉａ Ｄ ｏ ｈ ｏ’ ｉａ ａ ｏ ’ Ｃ ｅ ａ ２ ｐ ｒｍｅ ｔｏ ｔ ｅｉｌｇ Ｓ ｅ ｚ ｅ ｔｒ ｉ ｎ ｈ ｌ ｅ ｓ ｔｌｏ ｏ ｔｅ ｎＭｅ ｉａ ｉｅｓｔ ａ ｔ ｎ Ｊ Ａｎ ｓｈ ｓｏ（ ｙ， ｈ ｎ ｈ ｎＭａｅ ｎｔ ａ ｄ Ｃ ｉｄｒｎ Ｈｏｐｉ ｆ Ｓ ｕｈ ｒ ｄ ￣ ｌＵｎ ｖ ｒｉ Ｄｅ ） ｙ ａ ’ ｙ，
摘 要 目 的
研究 异丙酚对缺血再灌注脑损 伤大 鼠海 马区凋亡 因子 Ｂｘ Ｂｌ ａ 、 ｅ ２及 大 脑 梗 死 体 积 的 影 响 ， 讨 异 丙 一 探
Ｗ ｉ ａ 大 鼠共 ４ ｓｒ ｔ Ｏ只 ， 机 分 为 ４组 ， 组 １ 随 每 Ｏ只 ， ｓ组 为 假 手 术 组 ， ｃ组 为 缺
护作用 。
关键词 异丙酚 ； 大鼠 ； 缺血再灌 注； 海马 ； Ｂ ｘ Ｂ － ａ ； ４２
中 图 法 分 类 号 Ｒ ７ ９１ Ｄ ： ０ ３ ７ ／．ｓｎ １ ７ — ７ １ ２ １ ． １ ０ ８ ＯＩ １ ． ８ ０ ｊｉｓ ． ６ ２０ ４ ． Ｏ ０ ０ ． ２
酚 对 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 的保 护 作 用 。方 法
血 再 灌 注 损 伤 对 照 组 ，组 为线 栓 梗 塞 缺 血 后 异 丙 酚 治 疗 组 ， 组 为 线 栓 梗 塞 缺 血 再 灌 注 后 异 丙 酚 治疗 组 。结 果 １ Ｒ
瑞芬太尼预处理对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2 Bax表达的影响
７
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加速损伤血管 内皮 的修复且抑 制平滑 细胞 的迁移 ， 因而临床
可应用 Ｈ Ｆ抑制或延缓动脉粥样硬化及促进新生血管形成 。 Ｇ
另 外 Ｍｏｉ ｉ ｒ ｈｔ ｓ ａ等 ［ 对 患 有 严 重 的肢 体 缺血 性 疾 病 患 者 给 予 ９ ３
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大鼠局灶性脑缺血再灌注芯片数据挖掘及生物信息学分析
大鼠局灶性脑缺血再灌注芯片数据挖掘及生物信息学分析2广西医科大学基础医学院生理学教研室广西南宁 530021）摘要：目的运用生物信息学方法分析局灶性脑卒中大鼠正常对照组和模型组的差异表达基因及涉及信号通路，为研究缺血性脑卒中的病理生理机制提供生物信息学的依据。
方法选用CEO数据库中编号为GSE61616的基因芯片数据，经过整理，假手术组和模型组各5个样本，分别进行基因筛选、差异表达基因分析及功能富集、相关信号通路分析。
结果与假手术组比较，模型组22个基因表达明显改变。
GO分析表明这些基因在生物学功能方面主要涉及氧化应激、炎症反应、细胞代谢、细胞凋亡等几个方面。
蛋白质互作网络分析进一步证实在炎症反应和细胞凋亡两个方面出现基因差异性表达显著。
通路涉及PI3K-Akt、EGF-ERBB2-RAS-ERK等。
结论脑缺血再灌注损伤后涉及多种蛋白和基因发生显著改变，通过控制炎症反应，减少细胞凋亡以及阻断氧化应激通路等干预是临床治疗局灶性脑卒中的有效策略。
关键词：缺血性脑卒中，生物信息学，基因芯片Bioinformatics Analysis of Chip Data of Focal Cerebral Ischemia-Reperfusion in RatsXU Ke-bei1,Wanxiang Hu21Department of neurosurgery,the People’s Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region,2Department of Physiology,School of Basic Medical Sciences, Guangxi Medical University, Nanning 530021, ChinaAbstract:Objective To bioinformatics analyze the differentially expressed genes and related pathway between control group and modelgroup in focal cerebral ischemia-reperfusion rat animal model, and provide bioinformatics basis for the study of the pathophysiological mechanism of ischemic stroke. Methods The gene chip data of GSE61616 was downloaded from Gene Expression Omnibus(GEO) database. After rearranging the data, each 5 samples from the sham and model group were used for gene screening, differential gene analysis, pathway enrichment analysis. Results Compared with the sham group, the expression of 22 genes in the model group was significantly changed. GO analysis showed that these genes mainly involved in oxidative stress, inflammatory response, cell metabolism, and apoptosis in biological functions. Furthermore, Protein interaction network analysis confirmed that differentially expressed genes wassignificantly both in inflammation and apoptosis, which involves several pathways such as PI3K-Akt, EGF-ERBB2-RAS-ERK and so on. Conclusions Many proteins and genes changed significantly after cerebral ischemia-reperfusion injury. Applying different intervention methods in controlling inflammation, reducing apoptosis or blocking oxidative stress pathway will provide effective therapeutic strategies for ischemic stroke.Keywords:ischemia stroke, bioinformatics, gene chip1.前言缺血性脑卒中，俗称“脑梗死”，是指脑部血供突然中断而引起不同程度脑损伤的一类疾病，其致死率和致残率居高不下[1]，严重威胁人类生命健康，为家庭、社会造成严重的经济负担。
大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马Bcl-2、Bax蛋白的表达
ｆｏ ｅｄ ｒｙｉ ｄｖｄ ａｓ Ｊ ．Ａｍ ｔ ｏ ， ０ １， ９ ３ ８ １ ８３ ｒ ｍ ｌｅ ｌ ｎ ｉｉｕ １［ ］ ＪＰａ ｈ ｌ２ ０ ５ （ ）： ３ ～ ５ Ｃ ３ 李 治 晓 ， 来 君 ， 红 卫 ． 膜 瘤 侵 袭 性 的分 子 研 究 进 展 Ｃ３ 中 国 ５ 宋 孙 脑 Ｊ．
ｃ ｄｈ ｒ ｎ ｇ ｎｅ ｂ ａ ｄｅ ｅ ｐ ａ ｉ ｎ ｏ ｍａ ｒ ｈ ｌ ｌ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ａ ｅ ｉ ｅ ｌｄ ｒｎ ｏ ｌ ｓａ ａ ｄ ｉ ｎ ｒ ｌ ｏｔ ｅ ｉ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ｕ ａｅ
侵袭 能力 随 之 下 降 。 这 就 从 侧 面 证 实 了本 实 验 的结 论 。 同 时检 测 ｕ Ａ 及 Ｅ ｅｄ ｅｉ 表 达 及 两 者 之 间 有 无 相 关 Ｐ －ａ ｈ ｒ ｎ的 性 ， 内报 道 较 少 。赵 茜 等 发 现 ｕ Ａ 及 Ｅ ｃｄ ｅｉ 大 肠 癌 国 Ｐ －ａ ｈｒ ｎ与 的分 化 程 度 不 相 关 ， ｕ Ａ 的 高 表 达 和 Ｅｃｄ ｅｉ 低 表 达 与 但 Ｐ －ａ ｈ ｒ ｎ的 大肠 癌 的侵 袭 转 移 密切 相关 。 Ｓ ｉ ０认 为 ， 合 检 测 ｕ Ａ 和 ｈｎ等 联 Ｐ Ｅｃｄ ｅｉ 胰 腺 癌 中 的表 达 ， 作 为 判 断 肿 瘤 转 移 的 一 个 有 －ａｈ ｒ ｎ在 可 用指 标 。我 们 的研 究 结 果 提 示 ， Ｐ 和 Ｅｃｄ ｅｉ 达 存 在 负 ｕＡ －ａ ｈ ｒ ｎ表 相 关 关 系 。在 脑 膜 瘤 的侵 袭 过 程 中 ， Ｐ 与 Ｅ ｃｄ ｅｉ 一 对 ｕＡ －ａｈ ｒ ｎ是
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中国实用神经疾病杂志 ２ ０ 年 ５ ０７ 月第 １ 卷第 ３ ０ 期 Ｃ ｉ ｓ ｒ ｈｎ ｅ ｎ ｅ Ｊ
愈风颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及bcl-2,bax表达影响的实验研究
愈风颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及bcl-2,bax表达影响的实验研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的研究愈风颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤模型脑神经细胞凋亡及bcl-2,bax表达的影响。
方法将脑缺血再灌注损伤大鼠分为3组：中药组，西药组及模型组，另设正常组作对照。
观察各组大鼠脑组织TUNEL及bcl-2,bax表达的变化。
结果模型组大鼠脑组织TUNEL阳性数，bcl-2，bax阳性细胞数显著高于正常组，bcl-2/bax比值显著低于正常组（均P0.01）；中药组及西药组脑组织TUNEL阳性数，bax阳性细胞数显著低于模型组，bcl-2阳性细胞数及bcl-2/bax比值显著高于模型组(均P0.01)。
结论愈风颗粒有明显的抗凋亡作用，其作用机制可能与下调促凋亡基因bax水平，上调抗凋亡基因bcl-2水平，提高bcl-2/bax比值有关。
【关键词】愈风颗粒；bcl-2；bax；细胞凋亡愈风颗粒为自拟方药，有通腑泄热、凉血解毒之功，主要用于急性期脑梗塞的治疗。
为探讨其作用机制，为临床提供依据，本实验研究愈风颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及bcl-2,bax表达的影响。
1 材料与方法1.1 动物老年Wistar大鼠40只，清洁级，雌雄各半，体质量（300±20）g，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，动物字号：TJLA-2003-111。
1.2 药物与试剂愈风颗粒，以蒸馏水稀释为50%的水溶液（每毫升溶液含生药0.5 g）；尼莫地平片，以蒸馏水稀释为1%的水溶液（每毫升溶液含生药1 mg）；生理盐水。
原位细胞凋亡检测试剂盒（TUNEL），大鼠bcl-2免疫组化染色试剂盒，bax免疫组化染色试剂盒，均由武汉博士德生物工程有限公司生产。
1.3 分组大鼠随机分为4组：正常对照组（简称正常组）、造模对照组（简称模型组）、尼莫地平组（简称西药组）、愈风颗粒组（简称中药组），每组10只。
银丹心脑通对脑缺血再灌注大鼠海马区Bcl-2表达的影响
中Ｂ ｃ ｌ 一 ２的 表 达 。 结 摹 与假 手 术 组 比 较 ， 药物 组 、 对照组夏模型组 Ｂ ｃ ｌ － ２阳性 细 胞 明 显 升 高 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ； 与 模 型 组
比较 ， 药物 组 和 对 照 组 Ｂ ｃ ｌ 一 ２阳性 细胞 明 显 升 高 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ； 与 对照组 比较 ， 药物 组 Ｂ ｃ ｌ 一 ２阳 性 细 胞 明 显 升 高 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） 。 结论 上调 Ｂ ｃ ｌ － ２的 表 达 ， 可 能 是银 丹 心 脑 通 减 少脑 缺 血 再 灌 注 大 鼠神 经 细胞 凋亡 的作 用机 制 之 一 。
ｍｅ ｎｔ ｇｒ ｏｕ ｐ ｗｅ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｎｉ ｍｏ ｄｉ ｐ ｉ ｎ ａ ｎｄ ｇａ ｓ ｔ ｒ ｉ ｃ ｙｉ ｎｄ ａ ｎｘ ｉ ｎｎ ａ ｏ ｔ ｏｎ ｇ ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ｆ ｏ ｒ ７ ｄａ ｙ ｓ
中华 老 年心 脑 ｌ 衄管病 杂 志 ２ ０ １ ３年 ９月 第 １ ５卷 第 ９期
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｇ ｅ ｒ ｉ ａ ｔ ｒ Ｈｅ ａ ｒ ｔ Ｂ ｒ ａ ｉ ｎ、 ｒ ｅ ｌ Ｄ ｉ ｓ ， Ｓ ｅ ｐ ２ ０ １ ３ ， Ｖｏ ｌ １ ５ ， Ｎ ｏ ． ９
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长期停训大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达
长期停训大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2的表达赵永寿;田振军;白建超【摘要】The influence on the expression of Bax、Bcl-2 in the hippocampus neuron of stopping training 28 weeks rats is studied.Refered to the training scheme of Bedford,the training model of SD rats is established.All rats in the normal cage live 28 weeks and the expression change of Bax and Bcl-2 in the Hippocampus Neuron is observed.The results show that aerobic training promotes the ratio of Bcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus,fatigue training restrain the ratio ofBcl-2/Bax in CA1 area and CA3 area of hippocampus after stopping training.It is analyzed that aerobic training has taken good care of the hippocampus neuron of the aged rats,fatigue training has effected the function of the hippocampus neuron of the aged rats.%以不同强度训练大鼠停训28周为对象,应用免疫组织化学技术,探讨运动对大鼠海马神经元细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.参照Bedford训练方案,建立起Sprague dawley（SD）大鼠有氧训练与疲劳训练动物模型,停训28周后,观察大鼠海马神经元Bax、Bcl-2的表达变化.结果表明：长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值升高,长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2/Bax比值下降.这是因为长期有氧训练促进了大鼠海马神经元产生了良好的适应,对大鼠老年期海马神经元起到保护和延缓其衰老的作用.而长期疲劳训练会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.【期刊名称】《陕西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】5页(P104-108)【关键词】运动训练;海马;细胞凋亡因子;停训;免疫组织化学【作者】赵永寿;田振军;白建超【作者单位】陕西教育学院体育系,陕西西安710061;陕西师范大学体育学院,陕西西安710062;陕西教育学院体育系,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】G804.5细胞凋亡现象普遍存在于中枢神经系统的诸多疾病中.因此，神经细胞也涉及到复杂的凋亡机制.细胞凋亡与许多基因的表达状况密切相关，如Bax、p53、ced9、Bcl-2等.Bcl-2与Bax是细胞凋亡中两个重要基因调控的表达产物.Bcl-2的高表达可抑制细胞凋亡的发生，而Bax则起拮抗作用.Bcl-2和Bax蛋白之间的比例是决定细胞凋亡或抑制的关键因素.不同强度运动训练对海马细胞凋亡影响的研究近年时有报道［1-3］.实验研究显示，大强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡显著增加，而中等强度运动训练后大鼠海马CA1区神经元凋亡不明显［4］.也有研究认为，中等强度运动可促进Bcl-2蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著降低，从而抑制了细胞凋亡；大强度运动促进Bax蛋白的表达，使Bax／Bcl-2比率显著升高，促进细胞凋亡.但有关长期运动训练停训后对中枢神经细胞凋亡的影响还未见报道.早年进行大强度运动训练后，由于种种原因停止训练，运动员往往出现一些不适应的临床表现，运动员晚年机体的健康问题受到广泛关注.早年进行不同强度的系统训练，停训后运动员晚年期的健康问题是否受早年训练的继续影响，值得研究.本研究以实验大鼠为对象，应用免疫组织化学技术探讨早年运动对停训大鼠老年期海马CA1和CA3区细胞凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响.雄性SD大鼠（3月龄，西安交通大学医学院动物管理中心提供）24只，体重248±24g，国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养，自由饮食，温度为22℃～27℃，湿度为40%～60%.适应性喂养1周，然后进行实验.将SD大鼠随机分为安静对照组、有氧训练组和疲劳训练组，每组各8只.采用递增强度的跑台运动方式，运动负荷参照Bedford跑台训练法.对照组为正常笼内生活，不参与运动训练.有氧训练与疲劳训练组预先适应性训练3 d，起始训练速度为15 m／min，时间为15 min.有氧训练组每周训练5 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动至速度为20 m／min后增加跑台坡度至5°，训练时间为60 min.疲劳训练组每周训练6 d，共8周.递增速度为3 m／min，时间为5 min，运动速度至20 m／min后，增加跑台坡度到5°，运动速度至35 m ／min后跑台坡度增为10°，运动时间为60 min.训练8周后有氧与疲劳组停止训练，和对照组同处笼内，正常生活状态下饲养28周.乌拉坦（10%）腹腔注射麻醉，开胸左心室插管.中性甲醛固定液灌注40min，快速开颅取材，多聚甲醛（4%）固定，常规脱水，二甲苯透明石蜡包埋.切片厚为5μm，HE染色定位.Santa Cruz公司生产的兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bax，兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗体Bcl-2.采用免疫组织化学SABC法，按试剂盒（博士德）说明书操作步骤进行.Bax、Bcl-2微波抗原修复.Bax、Bcl-2（1∶100），4℃过夜，37℃复温，PBS冲洗.滴加二抗37℃，20 min后PBS冲洗.滴加SABC 20 min，Tween＋PBS混合液冲洗2 h.DAB显色，苏木精复染、分化、脱水、透明、中性树胶封片.每次染色设阴性对照染色，PBS取代一抗，其他程序相同.Olympus 光学显微镜观察，数码相机照相，IPP图像分析软件进行分析处理，计算灰度值.免疫组织化学指标计算平均灰度值，结果以均数±标准差表示，所有数据采用SPSS软件分析，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义.由表1可知，海马CA1区，Bax的阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异（P＜0.05）；海马CA3区Bax阳性表达疲劳组＞对照组＞有氧训练组，各组间未见显著性差异.不同强度训练长期停训大鼠海马神经元Bax阳性表达显示，疲劳训练促进了Bax在CA1和CA3区阳性表达，而有氧训练抑制了Bax在CA1和CA3区的阳性表达.由表2可知，在海马CA1和CA3区神经元，Bcl-2的阳性表达为有氧训练组＞对照组＞疲劳组.在海马CA1区，疲劳训练组与对照组有显著性差异；疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达，在CA1区更为显著.有氧训练促进了长期停训大鼠海马神经元Bcl-2的阳性表达.细胞凋亡的作用机制比较复杂，受多重凋亡促进或抑制因素的影响.Bax蛋白的表达与维持脑缺血再灌注后细胞的存活相关［5］.Bax与Bc1-2的比值与细胞受刺激后发生凋亡的比率成正相关［6］.Bax的促细胞凋亡机制可能是其具有Ca2＋通道的活性，这一活性参与了细胞凋亡相关的线粒体通透性转变和凋亡发生的蛋白酶激活因子的过程［7-8］.Bax也可能通过控制释放细胞色素C这一通道而促进凋亡发生.Bc1-2的作用机制可能是通过线粒体外膜上的Bcl-2蛋白来稳定线粒体膜，防止线粒体促凋亡蛋白泄漏至胞质及阻断Ca2＋从内质网的释放，使依赖Ca2＋的核酸内切酶活性下降等途径阻断细胞凋亡［9］.此外，血小板激活因子、氧自由基、兴奋性氨基酸（如谷氨酸）、Ca2＋等都参与了细胞凋亡的过程［10］.Zhong等研究发现，在ionophore处理的PC1-2细胞中，Bcl-2过量表达并不能阻止胞内游离Ca2＋升高.它显示Bcl-2可以通过阻止Ca2＋升高事件下游的凋亡信号来抑制凋亡.因此，Bcl-2抗凋亡功能的发挥很大程度上依赖于它与别的蛋白的结合及相互作用.已证实有多种蛋白均可与Bcl-2发生结合性相互作用.另有研究称，氧化作用与细胞凋亡相关［11-12］.有人提出 Bcl-2可以通过一种抗氧化剂的作用或者通过抑制氧自由基的生成来抑制细胞的死亡［13］.在接受许多不同凋亡信号而发生凋亡的造血细胞中，Bcl-2的过度表达与组织细胞氧化损伤的降低程度相关联，而与活性氧中间体的生成、减少无关［14］.在因缺少谷胱甘肽而坏死的神经元细胞中，Bcl-2的表达与氧自由基的生成减少和对细胞组织氧化损伤的降低均相关.可见，Bcl-2似乎起一种抗氧化剂的作用，但仍不清楚Bcl-2是否保护内活性氧物质特异诱导的细胞死亡.通常，Bcl-2和Bax的比值决定着细胞凋亡的发生与否，当该比值上升时抑制细胞凋亡；比值下降时则促进细胞凋亡［15］.张梅等研究认为，大强度训练与海马神经元凋亡增加、海马神经元Bax基因表达增加及海马神经元Bcl-2／bax下降密切相关［4］.相关实验研究显示，不同强度运动长期停训后，Bax和Bcl-2在胸腺皮质淋巴细胞的胞浆髓质区表达不明显，有氧运动形成的生物学效应在长期停训后消失；疲劳训练产生生物学效应.长期停训后，伴随胸腺器官增龄性变化而呈下降趋向［16］.疲劳训练使大鼠海马区自由基过量，神经细胞受损.也可能缺血性脑损伤使兴奋性氨基酸（如谷氨酸）含量增加，过量的谷氨酸对神经元具有明显的损伤作用，致使细胞凋亡［17］.而长期间歇性训练使机体增强了抗氧化及自身的调节适应力，通过增强抗凋亡基因的表达来强化机体对运动的适应能力［18］.研究显示，长期适量运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.该实验结果显示，疲劳训练抑制了长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.而有氧训练促进了海马神经元CA1、CA3区Bcl-2的阳性表达.在长期停训大鼠海马CA1、CA3区，疲劳训练促进了神经元Bax的阳性表达，有氧训练抑制了神经元Bax的阳性表达.可见，疲劳训练致使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区Bcl-2／Bax的比值降低，神经细胞趋于凋亡.其可能机制为：在长期疲劳训练的状态下，大脑处于相对的缺血、缺氧状态，海马神经元自由基含量升高，出现了神经细胞的线粒体钙超载，导致了海马神经细胞的缺血、缺氧性损伤，这成为了脑细胞凋亡的诱因.脑细胞长期的缺血、缺氧状态可使机体产生一种保护性抑制，通过细胞凋亡的形式将那些受到运动损伤、功能相对较差的细胞进行清除，以满足中枢神经系统对内外环境的适应需要，从而维持了中枢神经系统的功能，此一机制会持续到训练恢复后的较长一段时间.实验表明，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元CA1、CA3区 Bcl-2／Bax的比值升高，海马神经元趋向于存活.可能机制为：（1）长期有氧运动可使脑细胞的存活能力和活动调节功能得到改善.Bcl-2可能通过调整其线粒体巯基的氧化还原水平控制其膜电位，进而达成对海马神经元的凋亡抑制；（2）Bcl-2也可通过对线粒体膜调节，改变其凋亡蛋白前体的通透性水平来发挥抗凋亡作用.分析认为，有氧训练使长期停训大鼠海马神经元产生了良好的适应能力，从而起到了保护脑神经细胞、延缓其衰老的作用.早年长期运动训练可影响到大鼠老年期海马神经元的功能状态.长期有氧训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值升高，对海马神经细胞起到了保护作用，对延缓海马神经元衰老及促进其生理功能的正常发挥具有积极意义.长期疲劳训练大鼠老年期海马神经元Bcl-2／Bax比值下降，促进了细胞凋亡的发生，可能会影响到大鼠老年期海马神经细胞的功能状态.提示健身人群身体锻炼的运动量不宜过大；运动员早年应避免疲劳训练及其引起的机体组织器官的运动性应激损伤.【相关文献】［1］Oltvai Z N，Milliman C L，Korsmeyer S J.Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog Bax that accelerates programmed cell-death［J］.Cell，1993，74（4）：609-619..［2］Kroener G.The protonco gene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis［J］.Nat Medicine，1997，3（6）：614-620.［3］Gervais F G，Singaraia R，Xanthoudakis S，et al.Recruitment and activation of caspase-8 by the huntingtininteracting protein hip-1 and a noxel partner hippi［J］.Nature Cell Biology，2002，4（2）：95-105.［4］张梅，何叶.不同强度运动训练对大鼠海马CA1区神经元凋亡的影响［J］.天津体育学院学报，2006，21（2）：151-153.［5］Currie R W，Ellison J A，White R F，et al.Benign focal ischemic preconditioning induces neuronal HSP 70 and prolonged astrogliosis with expression of HSP 27［J］.brain research，2000，863（1／2）：169-181.［6］Guan qiu hua.Brain ischemia／reperfusion induced Expression of DP5 and its interaction with Bcl-2 thus freeing Bax from Bcl-2／Bax dimmers are mediated by c-Jun n-terminal kinase（JNK）pathway ［J］.Neuroscience Letters，2006，393（2／3）：226-230.［7］王景涛，陈贺忠.大鼠局灶性脑缺血后Bax蛋白质阳性表达的变化和细胞凋亡关系的研究［J］.黑龙江医药科学，2003，26（2）：8-9.［8］屈红林，王勇.干细胞与运动性骨骼肌细胞凋亡［J］.中国临床康复，2010，14（6）：1088-1091.［9］Mertens H J，Heinerman M J，Evers JL.The expression of apoptosis related proteins Bcl-2 and Ki67 in endometrium of ovulatory menstrual cycles［J］.Gynecol obstet invest，2002，53（4）：224-230.［10］Bozlu G，Atici A，Turhan H，et al.Platelet-activating factor antagonist（ABT-491）decreases neuronal apoptosis in neonatal rat model of hypoxic ischemic Brain Injury ［J］.Brain Research，2007，1144（2）：193-198.［11］Reed J C.Bcl-2 and the regulation of programmed cell death［J］.Cell Biology，1994，124（1／2）：1-6.［12］Nunnez G.In vitro electrophysiological properties of rat dorsal column nuclei neurons［J］.Immunology Tody，1994，15（8）：582-589.［13］Zhuang J，Dinsdale D，Cohen G M.Apoptosis，in human monocytic THP 1 Cells，results in the release of cytochrome c from mitochondria prior to their ultrocondensation formation of outer membrane discontinuities and reduction in inner membrane potential ［J］.Cell Death Difference，1998，5（11）：953-962.［14］Lin E Y，Kozak C A，Orlofsky A，et al.The Bcl-2 family member，Bcl-2，maps to mouse chromosome 9 and human chromosome 15［J］.Mamm Genome，1997，8（4）：293-298.［15］彭黎明，王曾礼.细胞凋亡的基础与临床［M］.北京：人民卫生出版社，2000：125-132. ［16］朱德元，田振军.运动训练长期停训对大鼠胸腺组织细胞凋亡的影响［J］.陕西师范大学学报：自然科学版，2009，36（6）：102-105.［17］邱宏军，田振军，赵永寿，等.运动训练大鼠长期停训后海马神经元NSE的表达变化［J］.北京体育大学学报，2009，32（11）：58-60.［18］陈德权，邓树勋，彭峰林.间歇运动对大鼠骨骼肌凋亡基因Bax、Bcl-2及相关因素的影响［J］.北京体育大学学报，2008，31（7）：922-925.。
高血压大鼠脑缺血再灌注后IGF-Ⅰ Bcl-2的表达与细胞凋亡
ｍＬＰ Ｓ液再离心 ４ｒｉ（０ ／ ｉ） ～２次 ， Ｂ ｎ ８０ｒｒ ｎ ｌ ａ ａ 弃上清 ， 调整 细胞 浓度 ５×ｌ ０ 个细胞 ／ 。取 １０ Ｌ ０ Ｌ细胞悬 液 ， ＤＮ 加 Ａ
染液 （ ｌ２ ｇ Ｉ Ｎ ｓ 糖 核 酸 酶 ：０ｍｇ Ｌ及 ０ １ Ｐ ：０ｍ ／ Ｒ ａｅ核 １ ／ ．％ Ｔｉｎ ｒｏ Ｘ一１０ ３０ 止 ， 光 染 色 ２ ｎ 上 机 检 测 。 采 用 ｔ ０）０ 避 ０ｍｉ， 氩 离 子激 光器 发 射 的 ４ ８１ １ 长 作 为 激 发 光 源 ， 胞 获 取 ８ １ 波 １ １ 细
制备高血压 大鼠脑缺 血再 灌注模型 ， 用免疫组织化学染 色法及流式 细胞术分别 观
同 对 照 组 相 比缺 血再 灌 注 组 神 经 细 胞 凋 亡 率 增 高 Ｉ Ｆ— Ｉ、 Ｇ
达与 细胞凋亡 的关 系。方法
察脑 组 织 中 Ｉ Ｆ— Ｉ、 ｃ一２的表 达 情 况 及 细 胞 凋 亡 。结 果 Ｇ Ｂｌ
医科大学提供） 。大 鼠肾动脉 狭窄后 ｌ 周 进行脑缺血再 灌 ２
流实 验 ， 时 大 鼠血 压 （ 此 收缩 压 ） （７ ±７ ｎ ｇ 显 著 高 为 １ １ ）ｍｌ ， Ｈ 于基 础 血 压 （０±９ ｎ ｎＨ ９ ）ｕ ｇ用 Ｒ ～ ｌ 大 鼠血 压 计 （ Ｉ Ｂ型 中
速冲洗血液 ， 然后 在冰 盘上 立即 断头取 脑 ， 将额 极枕 极切
除 ， 大 脑 纵 裂 切 开 ， 右 侧 脑 组 织 视 交 叉 前 ２ｎｌ 皮 质 置 沿 取 ｌｌ Ｔ
于冷的 ７ ％乙醇 中， ０ ４℃保存 ， 准备行流式细胞仪检测凋亡
率 。 视交 叉７０ ７４ ， ｐ ．－ ）
【 关键词 】 脑缺血再灌注 ； 细胞凋亡 ； 胰 岛素生 长因子 一Ｉ
调控基因Bcl-2、Bax在脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的表达的实验研究
Ｂ ｌ ２组 ： ｅ一 ａ与 ｂ ｅ ｄ、 、 相 比 ， 、 、 ｅｆ ｅ与 ｅ ｆ 比 ， 、相 ｄ与 ｆ 比 Ｐ Ｉ０ ； 相 ＜ １ １ ｂ与 ．
ｆ 比， 相 ｄ与 ｅ ｅ相 比 Ｐ ００ ；ａ 、 ＜ ．５Ｂ ｘ组 ： ｄ与 ａ ｂ相 比 ， 、 ｅ与 ａ ｂ Ｃ ｄ．相 比 ， 、、、 ｆ ｆ 与 ａ ｂ ｅ相 比 Ｐ ０ １ ｄ与 ｆ 比 Ｐ ００ ；Ｕ Ｌ组 ： 、、 ＜． ： ０ 相 ＜ ．５ ＮＥ Ｔ ａ与 ｆ 比 与 ａ ｂ 相 、、 ｅｆ 比 ， 、相 ｄ与 ａ ， 比 Ｐ ００ ； 与 ｂ ｅ ｄ相 比 ， 与 ｂ ｅ ｄ相 比 ｊ ０ ５ ， ｅ相 ｂ ＜ ．１ ｆ 、、 ｆ 、、 Ｉ ． ＜０
维普资讯
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基 础研 究 ・
２７ ７ 第 卷 ２ ０年 月 ４钙１ ０ 期
调 控基 因 Ｂ ｌ２ Ｂ ｘ在脑 缺 血再 灌 注 ｃ一 、 ａ 损伤 细胞 凋 亡 的表 达 的 实验研 究
李桂 兰 于哩哩 ， ， 白丽亚 。毕长 柏 ， （． １河北省 丰 宁满族 自治 县 医院儿科 ， 北丰 宁 河 ０ ８ ５ ２河 北省 人 民医 院儿科 ， 北石 家庄 ６ ３ ０；． 河 ０ ０５ ） ５ ０ １
一
【 章编 号］１ ７ — ２ ０（０ ７ ０ （ ） １ ８ ０ 文 ６ ３ ７ １ ２ ０ ）７ ｃ一 １ — ２
２ 结 果
２ １各 组 ＴＵＮＥ ． Ｌ标 记 凋 亡 细 胞 变 化
Ｂ ｌ２表 达 至 再 灌 注 １ ｅ一 ２ｈ达 高 峰 ．再 灌 注 ２ ～ ２ｈ组 逐 ４ ７
表 １ 脑 缺 血再 灌 注 后 不 同 时 间 点 Ｂ ｌ２ Ｂ ｘ ＴＵ Ｌ标 记 细 月 的 变化 ｃ一 、 ａ 、 ＮＥ ！
再灌注后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响
蛭龙活血通淤胶囊对大鼠急性脑梗塞缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的探讨蛭龙活血通淤胶囊对大鼠急性脑梗塞缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关基因表达的影响。
方法采用线拴法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，将40只雄性SD大鼠随机分为观察组(蛭龙活血通淤胶囊)10例，对照组(步长脑心通)10例、模型组10例及假手术组10例，用药7 d，应用TUNEL法和免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织凋亡细胞的分布及bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。
结果实验证实了急性脑梗塞缺血再灌注损伤凋亡细胞的存在，模型组脑神经细胞凋亡数量显著高于假手术组(P0.01)，蛭龙活血通淤组与步长脑心通药物干预组与模型组相比细胞凋亡指数显著下降(P0.01)，但蛭龙活血通淤组与步长脑心通药物干预组二者比较无明显差异(P0.05)。
模型组脑神经细胞bc1-2和Caspase-3基因蛋白表达均显著高于假手术组(P0.01)，与模型组相比，蛭龙活血通淤组与脑心通组明显上调bc1-2的基因表达(P0.01)，明显抑制Caspase-3基因蛋白表达(P0.01)，蛭龙活血通淤组与步长脑心通药物干预组间比较无明显差异(P0.05)。
结论蛭龙活血通淤胶囊对急性脑梗塞引起的神经细胞凋亡有明显抑制作用。
其机制可能与上调bcl-2，抑制Caspase-3有关。
【关键词】蛭龙活血通淤胶囊;急性脑梗塞;缺血性中风;细胞凋亡;bcl-2;caspas-3脑梗塞是临床常见病、多发病，其发病率、死亡率和致残率均较高[1]，因而其治疗受到国内外医药界广泛关注，而“蛭龙活血通淤胶囊”是泸州医学院附属中医院心脑内科杨思进教授针对中风风痰淤阻的主要临床证型创制的纯中药制剂，主要功能为益气活血，化淤通络，主要用于缺血性脑血管疾病、冠心病、静脉血栓性疾病等的防治，被临床运用多年起到了很好的临床疗效。
大鼠全脑缺血再灌后海马CA1区Bax蛋白和bcl-2表达及EGb761的保护作用
摘要： 目的 观察 Ｅ ｂ ６ 对 大鼠全脑缺血再灌 注后 ｂ１ Ｇ７ １ ｃ－ ２和 Ｂｘ表达 的影响 ， ａ 以初步探 讨 Ｅ ｂ６ Ｇ ７ １对脑 缺 血损伤保护 的分子机制。方法 采用 Ｐ ｌ ｎｌ ｕｓ ｅｉ四血管 闭塞法 略作 改动制各大 鼠弥漫性全脑缺血模 型。将健 康 ｉ ｌ
Ｌ ｉ －ｕ ，Ｕ ａ —ｎ ， Ｎ ｉ—ｕ Ｖ Ｊ ｎｇ ｏ Ｓ Ｎ Ｙ ｎｌ ｇ ＷＡ Ｇ Ｑｕｇｉ ａ ｉ （ ｌ ｉ ｌ ｄｃｌ ｃｏｌ ｆＸａ ｎｎ ｎｖｒｔ ， ｉｎ ｉｇＨｕｅ ４ ７ ０ ， ｈｎ ） Ｃｉ ｃ ｉ ｈ ｏ ｏ ｉｎ ｉ Ｕ ｉ ｓｙ Ｘ ａ ｎｎ ｂｉ ３ １０ Ｃ ｉａ ｎ ａ Ｍｅ ａ Ｓ ｇ ｅｉ
ｔｅｅ ｙ ｉ ｅ ｔｄ ｂ ｍｍｕ ｈｉｔｃ ｅ ｓｒ ｔｉ ｉ ｇ ａｔｒ２ ｎｏ ｓｏ ｈ ｍｉｔｙ ｓａ ｎ ｎ ｆｅ ４ｈ，４ ｎ ２ ｆｒｐ ｒｕ ｉｎ．Ｒｅ ｕ ｔ ｅ ｐ ｓｔｖ ｉｎ ｌ ｆ ８ｈ ａ ｄ ７ ｈ ｏ ｅ ｅ ｆ ｓｏ ｓ ｌｓ Ｔｈ ｏ ｉｉｅ ｓｇ ａｓｏ
ｓ Ｄ大鼠 ７ ２只随机分为缺血再灌注组（ Ｉ Ｒ组）假 手术组（Ａ 组） Ｅ ｂ６ 预处理组 （ Ｇ 、 ＳＭ 和 Ｇ７ １ Ｅ ｂ组）采用 免疫组 ，
化 ＳＢ Ａ Ｃ法和原位杂交方法对海马 Ｃ Ａ１区各 再灌注时间点的 Ｂｘ蛋 白和 ｂｌ Ｒ Ａ进 行检 测。结果 Ｂ ｘ蛋 ａ ｃ ２ｍ Ｎ － ａ 白免疫组化和 ｂｌ Ｒ Ａ原位 杂交检测可见 阳性信号 以再灌注 ２ ｈ最强 ， ｃ－ ｍ Ｎ ２ ４ 之后下 降， ２ 以７ ｈ下 降最 明显（ Ｐ＜
ｂ ｔ ｂ ｌ Ｎ ｎ ａ ｒ ｅ Ｒ ｇｏ ｐｗ ｒ ｉ ｉｃｎ ｙｉｃ ａｅ Ｐ＜ ． ５ ｎ ａｈ ｄａｐａ ｔ ｏｈ ｃ ２ｍＲ Ａ ａ ｄＢ ｘｐｏ ｉ ｉ Ｉ ｒｕ ｅｅｓ ｆ ａ ｔ ｒ ｓｄ（ ０ ０ ）ａ ｄｒ ｃｅ ｅｋａ 一 ｔｎ ｎ ｎ ｇｉ ｌ ｎ ｅ ｅ
转bcl-2基因大鼠全脑缺血再灌注后c-Myc蛋白的表达
ｃＭ ｃ 白在全脑缺血再灌注后 海马 回 Ｃ １区 —ｙ 蛋 Ａ
及 Ｃ ３区都有表达 ， Ａ 只是强弱及细胞分布不 同 ，ｃ－ ｂｌ ２可通过抑制 ｃＭ ｃ的表达抑制凋亡。 —ｙ
Ｌ ｉ Ｘ Ｅ Ｒ ｎ －ａ ｇ （ ｅｔ ｆＡ ｅｔ ｓ ｌ ｙ Ｓｃｎ ｆ ｌ ｔ ｏ ｈ ｌＭｅｉ ｌＳｈｏ ｏ ｉ ａ ｉ ｔ ｇ Ｕ ｉ ｒｔ， ｉ ａ Ｉ Ｗｅ， Ｕ ｏ ｇｌ ｎ Ｄｐ ｎｓ ｅｉｏ ， ｅ ｄＡ ｉ ｅ Ｈ ｓ ａ， ｄ ａ ｃｏｌｆ Ｘ ’ ｎ Ｊ ｏｏ ｎ ｅｓｙ Ｘ ’ ｎ ｉ ｏ ｈ ｏｇ ｏ ｉ ｆ ａｄ ｐ ｃ ａ ｎ ｖ ｉ ７００ ， ｈ ａ １０ ４ Ｃ ｉ ） ｎ
摘要 ： 目的 研究转 ｂ１ ｃ． ２基因大鼠全脑 缺血灌 注后 ｃＭｙ — ｃ蛋 白在海 马 回的表达 。 方法 健康 雄性 Ｓ Ｄ大 鼠随机 分为 三
组： 缺血再灌注组（Ｒ， ０ ， Ｉ ｎ＝３ ） 采用 ４一血管法建立全脑缺ｍ再灌 注模 型 ， 全脑缺血 ６ｍｎ后再灌注 ； ｉ 假手 术组 （ Ｏ， Ｓ ｎ＝３ ） 只 ０， 暴露血管 而不夹 闭； ｂ１ 转 ｅ－ 因模 型加 缺血再灌注组（ ｅ－， ３ ） ２基 ｂｌ ｎ＝ ０ 。各组动 物于 ６ １ ，４ ４ ，２ ９ ２ ，２ ２ ，８ ７ ，６ｈ以 ４ 多聚 甲醛灌 注 ％ 处死 ， 将脑组织切片进行 Ｔ Ｎ Ｌ染色 和 Ｈ ＵＥ Ｅ染色 ， 光镜下观察 海马 回神经元形态结构 改变 、— ｙ ｃＭ ｃ在 Ｃ 和 Ｃ ３区不 同表达 ＡＩ Ａ
ｈ 海 马 Ｃ １区凋亡阳性细胞数 减少 ， ｃ－ 凋亡阳性 细胞均较少。 结论 ， Ａ ｂｌ ２组 关键词 ： 缺血再灌注 ； ｃｍ ｃ 海 马 ； 大 鼠； 凋亡 ； ｂ１ ； 转 基因 －ｙ； ｃ－ ２
依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡相关蛋白Bcl-2及Caspase-3表达的影响
著 ・
Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ４ ， Ｖ Ｏ １ ． １ ２ ， Ｎ ｏ ． ５
依达拉奉对大 鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡相关 蛋 白Ｂ ｅ ｌ － ２ 及Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ － ３
表达的影响
潘 登 谭 军
（ １ 新 乡市第一人 民医院神经 内科 ，河南 新 乡 ４ ５ ３ ０ ０ ０ ；２ ． 新乡医学院第三附属医院神经内科 ，河南 新乡 ４ ５ ３ ０ ０ ３ ）
【 摘 要 】目的 观 察依迟拉 奉 对 大 鼠脑 缺血 再 灌注后神 经 凋亡 相 关蛋 白 Ｂ ｃ １ ． ２及 Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ ． ３表达 的影响 。方 法 ７ ２只 Ｓ Ｄ 大 鼠随机 分 为假 手 术 组 （ ｓ组） 、缺血 对 照组 （ Ｉ Ｒ 组 ）和 依 达拉 奉 治疗 组 （ Ｐ组） （ 每组 ２ ４只 ） ，利 用 大脑 中动脉 栓 线 阻断法 制作 大 鼠局灶 性脑 缺血 ２ ｈ 后 再 灌
２ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｔ ｈ ｅ Ｔ ｈ ｉ ｒ ｄ Ａ ｆ ｉ ｆ ｌ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｘ ｉ ｎ ｘ ｉ ａ ｎ ｇＭｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｘ ｉ ｎ ｘ ｉ ａ ｎ ｇ４ ５ ３ ０ ０ ３ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
能 与增加 Ｂ ｃ ｌ ・ ２的表 达 ，减 少 Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ 一 ３的 表达 有 关。
＜０ ． ０ ５ ） 。结 论 依达拉 奉 对 大鼠缺血 再 灌注损 伤 具有一 定的保 护作 用 ，可
【 关键 词】 脑 缺血再 灌 注 ；依 迭拉 奉 ；细胞 凋亡 ；Ｂ ｃ ｌ － ２ ；Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ ． ３ 中图 分类 号 ：Ｒ ７ ４ ３ 文 献标识 码 ：Ｂ 文 章编 号 ：１ ６ ７ １ － ８ １ ９ ４（ ２ ０ １ ４ ）０ ５ － ０ ０ ２ ４ － ０ ２
大鼠短暂脑缺血后海马区c-fos mRNA和FOS蛋白表达的时间规律
ｍ ｔｉｍｅ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｃ－ｌｏｓ ｍＲＮＡ ａｎｄ ＦＯＳ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｒｅｇｉｏｎ ｉｎ ｒａｔ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｅ．ｅｒｅ－
Ｓｔｒｏｋ—ｅ ａｎｄ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｊｕｎ ２００３，Ｖｏ—ｌ １０ １Ｎ—ｏ．—３
中，待分别下沉；（４）冰冻切片机冠状连续切片，切 片厚度２０ ｂｔｍ；（５）切片贴附于载玻片；（６）保鲜膜 密闭片盒，置于一２０℃保存。 １．６免疫组化步骤（１）用ＰＢＳ—Ｔｘ洗３次，每 次５ ｍｉｎ；（２）滴加正常血清封闭液，室温１ ｈ；（３） 依次加人第一抗体（羊抗大鼠ｃ—ｆｏｓ １：１００稀释），过 夜；（４）ＰＢＳ—ＴＸ洗３次，每次５ ｒａｉｎ；（５）加入生 物素化免抗山羊ＬｇＧ（Ｈ十Ｌ）（１：２００稀释），搴温 ２ ｈ。（６）ＰＢＳ ＴＸ洗３次，每次５ ｒａｉｎ；（７）加入辣 根酶标记链亲台素，室温１ ｈ；（８）ＤＡＢ显色：１ ｍＬ
万方数据
卒中与神经疾病２００３年６月第１０卷第３期
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近年研究表明【“，ｃ—ｆｏｓ基因在正常情况下参与 细胞生长、分化、信息传递、学习和记忆等生理过 程，而在病理情况下ｃ。ｌｏｓ基因表达及调控变化与 多种疾病的发生和发展有关［“，ｃ－ｌｏｓ基因为早期反 应基因，能对外界刺激在数十分钟内作出反应，在
基金项ｄ：崮家长江学者奖励计划基金资助项目 作者单位：１００７００北京中医药大学东直门医院老年病科（田 金蝌时晶尹军祥）；中国医学科学院基础医学研究所免疫室 （高扬林嘉友）；中国中医研究院（王永炎）
Bcl-2基因抑制神经细胞凋亡的实验研究
Bcl-2基因抑制神经细胞凋亡的实验研究韩贵和;魏威;顾军;汪翼凡;应小樟【摘要】目的：观察原癌基因bcl-2对神经细胞凋亡的抑制作用。
方法：培养PC12细胞至对数生长期，用100感染复数（multiplicity of infection，MOI）的携带bcl-2基因的慢病毒质粒及未携带bcl-2基因的慢病毒质粒感染PC12细胞。
再将其分为A、B、C、D四组，A组为携带bcl-2基因慢病毒质粒的PC12细胞（bcl-2-PC12细胞），B组为未携带bcl-2基因慢病毒质粒PC12细胞（NC-PC12细胞），C组为bcl-2慢病毒质粒PC12细胞加H2O2（bcl-2-PC12细胞+H2O2），D组为NC慢病毒质粒PC12细胞加H2O2（NC-PC12细胞+H2O2）。
应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率，采用BCA（bicincho⁃ninic acid）法检测bcl-2基因表达蛋白。
结果：A组细胞凋亡率低于B组（P<0.05），C组细胞凋亡率低于D组（P<0.05）；A组bcl-2基因蛋白浓度高于B组（P<0.05），C组bcl-2基因蛋白浓度高于D组（P<0.05）。
结论：bcl-2基因对正常神经细胞的凋亡有抑制作用，能够增强神经细胞的抗损伤能力。
%Objective: To observe the inhibiting role of the proto-oncogene bcl-2 in the apoptosis of nerve cells. Methods: PC12 cells were cultured to the logarithmic growth phase and then slow virus plasmid carrying the bcl-2 gene and slow virus plasmid infected PC12 cells by 100 multiplicity of infection, respectively. The PC12 cells infected were then divided into 4 groups. Group A:PC12 cells with slow virus plasmid carrying the bcl-2 gene;group B:PC12 cells with slow virus plasmid;group C:PC12 cells with slow virus plasmid carrying the bcl-2 gene,which were damaged by H2O2;group D:PC12 cells with slow virus plasmid,which were damaged by H2O2. The rate of apoptosis wasdetected by flow cytometry. The proteinum concentration of bcl-2 gene ex⁃pression was detected by using bicinchoninic acid method. Results: The apoptosis rate of group A was lower than that of group B and the protein concentration of bcl-2 gene expression of group A was higher than that of group B,both of which were significantly different between the 2groups(P<0.05). The apoptosis rate of group C was lower than that of group D and the protein concentration of bcl-2 gene expression of group C was higher than that of group D,both of which significantly differed between the 2 groups(P<0.05). Conclusion: Bcl-2 gene can inhibit apoptosis of normal nerve cells and can enhance resistance ability of nerve cell to be damaged.【期刊名称】《浙江中西医结合杂志》【年(卷),期】2013(000)006【总页数】3页(P430-432)【关键词】bcl-2基因;神经细胞;凋亡【作者】韩贵和;魏威;顾军;汪翼凡;应小樟【作者单位】杭州市红十字会医院骨科杭州 310003;杭州市红十字会医院骨科杭州 310003;杭州市红十字会医院骨科杭州 310003;杭州市红十字会医院骨科杭州310003;杭州市红十字会医院骨科杭州 310003【正文语种】中文脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）可导致严重的神经系统功能障碍，如截瘫和四肢瘫。
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平 ， 结 论 ： ｃ ２蛋 白表 达 在 海 马神 经 元 凋 亡 过 程 中起 重要 作 用 。 、 Ｂ１ 关 键 词 脑 缺 血 再 灌 注 基 因 ， ｃ ２ 细胞 凋 亡 免 疫 法 大 鼠 Ｂｌ 一
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｅ ｒ ｎ ｌ ａ ｏ ｔ ｓｓ ａ ｄ Ｂｃ － ｅ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｅ ｏ ｅ ｒ ｉ ｓ ｈ ｍｉ ・ ｅ ｅ ｆ ｓｏ ｎ ｒ ｔ ＸＵ Ｚ ｉ ｔ ｄ ｎ ｎ ｕ ｏ ａ ｐ ｐ ｏ ｉ ｎ ｉ２ ｇ ｎ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ａ ｔ ｒ ｆ ｒ ｂ ａ ｎ ｉｃ ｅ ａ ｒ ｐ ｒ ｕ ｉ ｎ ｉ ａ ｓ ｈ—
免 疫 组 化 方 法检 测 相 关 基 因 Ｂ ｌ ｃ一 达 的 变化 。 结 果 ： 脑 缺 血 再 灌 注 １３ｈ海马 区 未 见 凋 亡 细 胞 出现 ， ２表 前 、 ６ｈ开始 出现 ．２ ４ｈ达 高峰 ， 后 开 始 下 降 。 Ｂ ｌ 阳性 表 达 在 前 脑 缺 血再 灌 注 １ｈ即 出现 ，２ｈ达 高峰 ， 后 下 降 至 低 水 之 ｃ一 ２ １ 之
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实用医学 杂志 ２０ 年第 ２ 卷第 ２ ０７ ３ Ｑ期
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大 鼠前 脑 缺 血 再灌 注后 海 马神 经 元 细 胞 凋 亡及 Ｂｌ ｃ一 达研 究 ２表
徐 志鹏 黎红 华 陈文 军 武 强 崔 敏 严 华
摘 要 目的 ： 察 Ｂ ｌ 观 ｃ一 ２蛋 白在 前 脑 缺 血 再 灌 注 后 细 胞 凋 亡 中 的 变化 ， 讨 脑 缺 血 再 灌 注后 细 胞 凋 亡 的 分 探 子 机 制 。 方 法 ： １只雄 性 Ｓ 大 鼠 随 机 分 为 ７组 ， 对 照 组 ， 缺 血 再 灌 注后 １ ３ ６ １ 、 ４ ４ ２ Ｄ 即 脑 、 、 、 ２ ２ 、 ８ ｈ组 。 大 鼠 断 头 处 死后 ． 剖取材 ， 解 固定 、 包埋 、 片 。 用原 位 末 端标 记 法 （ Ｕ Ｅ ） 测 前 脑 缺 血 再 灌 注 模 型 海 马 的 细 胞 凋 亡情 况 ， 切 Ｔ Ｎ Ｌ检 用
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