美国蜡杨梅组培快繁技术研究

美国蜡杨梅组培快繁技术研究
作者：金志新夏汉焱蔡红海
来源：《现代园艺·下半月园林版》 2017年第10期
1材料与方法
1.
1外植体的采集及处理
3月中旬从室外采集美国蜡杨梅的细嫩带芽茎段，在流水下冲洗 30min，然后在超净工作台上用 75%酒精消毒 30s，用无菌水冲洗 1次，放入 1%次氯酸钠溶液消毒 10min，无菌水冲洗 5次，待用。

1.
2培养条件
培养温度在（25±2）℃的恒温条件下，光照条件一般是 2000Lx，光照每日 12～16h。

1.
3愈伤组织的诱导
在无菌条件下，将消毒的外植体分别接种不同生长调节剂的 WPM培养基上（见表 1），诱导愈伤组织发生。

每处理 10瓶，每瓶 5个 0.5cm长的茎段，重复 3次。

20d后，调查出愈率和愈伤组织长势。

出愈率%=（形成愈伤组织的数 /接种数）×100。

表 1不同生长调节剂处理
处理编号
6-BA（mg/L）
NAA（mg/L）
A1
3
0.2
A2
3
0.4
A3
3
0.6
A4
4
0.2
A5
4
0.4
A6
4
0.6
A7
5
0.2
A8
5
0.4
A9
5
0.6
1.4不定芽的诱导
将培养 20d生长良好的愈伤组织切成边长约为 0.5cm的正方体的小块，接种于不同的分化培养基（见表 2）中，诱导愈伤组织产生不定芽。

每处理 10瓶，每瓶 3个愈伤块，重复 3次。

45d后调查平均出芽数和再生频率。

愈伤组织上产生的不定芽生长到一定高度时，可直接接种
于增殖培养基上进行继代培养。

平均出芽数 =分化出的不定芽总数 /接种愈伤块数
表 2愈伤分化的不同生长调节剂处理
处理编号
2，4－D（mg/L） IBA（mg/L）
B1
0.5
0.3
B2
0.5
0.6
B3
0.5
0.9
B4
1.0
0.3
B5
1.0
0.6
B6
1.0
0.9
B7
1.5
0.3
B8
1.5
0.6
B9
1.5
0.9
1.5生根诱导
生根培养基采用 1/2WPM基本培养基，附加不同浓度的 IBA和 NAA诱导生根，具体处理见表 3。

每处理 10瓶，每瓶 5
个苗，重复 3次。

30d后调查统计生根率、平均生根条数、平均根长及平均茎高。

生根率%=（不定根发生的茎段数 /接种茎段数）×100平均根长 =根长总合 /生根总条数1.6炼苗与移栽
当根系得到基本发育后，将培养瓶移到室外进行闭瓶炼苗 7～10d，遮荫度为 50%～70%。

然后在自然光下进行开瓶炼苗 2～3d。

开瓶炼苗可以分阶段进行，即首先松盖 1～2d，然后部分开盖 1～2d，最后完全揭盖。

2结果与分析
2.1不同生长调节剂对美国蜡杨梅愈伤组织诱导的影响
由表 4可见，下列处理中美国蜡杨梅的嫩茎都能产生愈伤组织。

处理 A1～A3中产生的愈伤组织白色柔软，培养 15d后逐渐变为褐色，没有再生能力。

当 6-BA为 4 mg/L时，愈伤组织多为绿色，长势良好，且 NAA为 0.4mg/L时出愈率最高为 89.5%。

当 6-BA为 6mg/L时，愈伤组织长势下降且出愈率下降。

表 4不同生长调节剂对美国蜡杨梅愈伤组织诱导的影响
处理编号
出愈率（%）
愈伤组织长势
A1
20.6
白色状转褐色，生长缓慢
A2
25.2
白色状转褐色，生长缓慢
A3
17.4
白色状转褐色，生长缓慢
A4
72.4
绿色，生长快，有不定芽
A5
89.5
绿色，生长快，较多不定芽
A6
81.3
绿色，生长快，较多不定芽
A7
31.2
浅绿色，生长缓慢
A8
45.7
浅绿色，生长缓慢
A9
51.3
浅绿色致密，生长缓慢
2.2不同生长调节剂对美国蜡杨梅分化不定芽的影响
在 WPM培养基中添加不同浓度的 2，4-D、IBA对美国蜡杨梅的愈伤进行培养，培养 45d 后进行调查。

由表 5可知，在 2，4-D浓度为 1.5mg/L，出芽率只有 6%以下，基本上不产生不定芽。

在 2，4-D浓度为 0.5mg/L，美国蜡杨梅的愈伤分化出芽率在 17%以上，不定芽的量不多。

当 2，4-D浓度为
1.0mg/L，IBA浓度为 0.6mg/L，分化的不定芽最多，不定芽出芽率为 66.9%。

表 5不同生长调节剂对美国蜡杨梅愈伤组织分化的影响
处理编号
出芽率（%）
B1
23.5
B2
16.7
B3
20.9
B4
23.8
B5
66.9
B6
52.9
B7
4.9
B8
5.1
B9
4.4
2.3不同生长调节剂对美国蜡杨梅生根的影响
接种数天后逐渐从基部产生数条不定根在 1/2WPM培养基中添加不同激素，培养 30d后调查其生根状况。

结果表明（表 6）：当 IBA浓度在 0.002mg/L，生根率最高在 85%以上，并和NAA46mg/L组合，生根效果最好，生根率在 97%，平均根长达 1.2cm。

随着 IBA浓度的增加，在 0.004mg/L浓度时，生根率下降 10%及以下，生根效果也明显下降。

表 6不同生长调节剂对美国蜡杨梅生根的影响处理编号
生根率（%）
平均根长（cm）
C1
64
0.6
C2
56
0.6
C3
73
0.7
C4
90
0.8
C5
97
1.2
C6
88
0.7
C7
10
0.1
C8
3
0.1
C9
5
0.1
2.4移栽
移栽之前应先闭瓶炼苗，再开瓶炼苗，使其逐步适应外界环境。

移栽基质选用砂和蛭石质量比1∶2。

温度保持在25℃左右。

30d左右后美国腊杨梅移栽苗的成活率在 90%。

3结论
美国腊杨梅最优化的组培成苗的生长调节剂的配方是愈伤组织的诱导配方是 A5：WPM +6-BA 4mg/L+ NAA
0.
4mg/L；不定芽诱导配方是 B5：WPM +2，4-D 1.0mg/L+ IBA
0.
6mg/L；生根配方是C5 ∶1/2 WPM +IBA 0.002 mg/L+NAA
6.
0mg/L。