培养基及其制备
培养基制备
培养基制备一、概述培养基是生物实验中必不可缺的基础设施，它为微生物、细胞等生物种群的繁殖和生长提供了必要的营养物质。
本文将介绍常用的培养基配方和制备方法，以及如何根据中国国情进行优化。
二、常用培养基1.大肠杆菌培养基（LB）配方：10克蛋白胨、5克酵母提取物、10克氯化钠、加水至1L。
特点：优点是制备方便、易于培养，多数菌株生长良好。
缺点是含有大量营养物质，若用于长期贮存菌株，容易导致突变风险增加。
2.液体麦康凯发酵培养基（BHI）配方：将500克肉汤蛋白胨培养基、10克氯化钠、2克二氢磷酸氢二钠、2克葡萄糖溶解在1L蒸馏水中。
特点：适合多种微生物的生长，包括厌氧微生物。
BHI较LB富含营养物质，可提供较好的生长环境，适合繁殖菌株。
3.青霉素酸糖盐地衣芽孢杆菌培养基（PDA）配方：20克琼脂、4克葡萄糖、0.75克潮霉素、0.125克青霉素钾盐、0.05克维生素B1、加水至1L。
特点：适用于分离和培养种类繁多的真菌、放线菌等微生物，能有效地防止杂菌的污染。
三、优化培养基由于中国的气候、温度等环境条件与西方国家有所不同，因此需要进行针对性的优化，以满足不同微生物的生长需求。
1.调整pH值许多微生物生存和生长所需的pH值范围在7.0-7.5之间。
但是，我们在制备培养基时应从当地水质的酸碱性入手，适当调整pH值，以便营养物质的有效吸收。
2.添加一些特殊成分在中国有些地区，水质有问题，例如含有高浓度的重金属和有机物污染，这些都会影响微生物的生长和繁殖。
因此，在制备培养基时，要添加些许抗菌剂和抗氧化剂，保证培养环境的纯净度和稳定性。
3.注意制备温度对于不同的菌株，其适宜的生长温度也有所不同。
在制备培养基时，应根据菌株的特点，以及所处的生态环境，调整制备温度，将传统的37度下的浸渍式消毒改为高温滤器灭菌法，避免纳米材料产生自拍。
四、结论在国内微生物学、生物医学和生物工程研究领域中，培养基是至关重要的实验基础设施。
培养基制备的方法
培养基制备的方法培养基是微生物学研究和实验室中微生物的生长和繁殖的基础。
培养基的制备主要分为固态培养基和液态培养基两种形式。
下面我将详细介绍培养基的制备方法。
1. 固态培养基制备方法：a. 准备所需材料：琼脂、食物源（如肉汤、蛋白胨等）、矿物质、维生素、葡萄糖等。
b. 称取适量矿物质、维生素和葡萄糖，并添加到蒸馏水中，溶解成浓缩液。
c. 称取适量肉汤或蛋白胨等食物源材料，并加入蒸馏水中，并在加热搅拌的条件下溶解。
d. 将步骤b和c中的溶液混合，并加热搅拌，使其完全溶解，并达到所需浓度。
e. 将溶液倒入试管或培养皿中，使用自动灌装机进行灌装。
f. 放入高压灭菌锅中，在121高压下灭菌15-20分钟。
取出后冷却至室温。
g. 检查培养基是否凝固，如凝固则放入冰箱中保存。
2. 液态培养基制备方法：a. 准备所需材料：氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、葡萄糖等。
b. 称取适量氯化钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠，并加入蒸馏水中，溶解成浓缩液。
c. 称取适量葡萄糖，并加入蒸馏水中，并在加热搅拌的条件下溶解。
d. 将步骤b和c中的溶液混合，并加热搅拌，使其完全溶解，并达到所需浓度。
e. 将溶液倒入试管或培养瓶中，并使用自动灌装机进行灌装。
f. 倒入适量培养基后，使用高压灭菌锅进行灭菌。
高压灭菌条件一般为121高压15-20分钟。
g. 取出后冷却至室温，检查液态培养基是否出现浑浊或沉淀物，若有则需要重新制备。
在制备培养基过程中，需要注意以下几个方面：1. 材料选择：根据实验需要，选择适合微生物生长的食物源、矿物质、维生素等材料。
2. 材料溶解：将所需材料称取放入试管或容器中，并加入适量的蒸馏水中进行溶解，加热搅拌加快溶解速度。
3. 浓度调整：根据实验需要和微生物的生长条件，调整培养基材料的浓度，以满足微生物生长的要求。
4. 灭菌处理：使用高压灭菌锅进行灭菌处理，达到高温高压杀灭细菌、真菌和病毒的目的。
灭菌是为了减少外界微生物对培养基的污染，保证实验的准确性和可靠性。
生产工艺第三章 培养基制备 第三节培养基的配制
第三节 培养基的配制
3．渗透压 配制培养基时，应注意营养物质要有合适的浓度。营 养物质的浓度太低，不仅不能满足微生物生长对营养物质 的需求，而且也不利于提高发酵产物的产量和提高设备的 利用率。但是，培养基中营养物质的浓度过高时，由于培 养基的渗透压太大，会抑制微生物的生长。此外培养基中 的各种离子的浓度比例也会影响到培养基的渗透压和微生 物的代谢活动，因此，培养基中各种离子的比例需求要平 衡。在发酵生产过程中，在不影响微生物的生理特性和代 谢转化率的情况下，通常趋向在较高浓度下进行发酵，以 提高产物产量，并尽可能选育高渗透压的生产菌珠。当然， 培养基浓度太大会使培养基黏度增加和溶氧量降低。
第三节 培养基的配制
1．根据微生物的培养需要 不同的微生物所需要的培养基成分是不同的，要确 定一个合适的培养基，就需要了解生产用菌种的来源、 生理生化特性和一般的营养要求，根据不同生产菌种的 培养条件、生物合成的代谢途径、代谢产物的化学性质 等确定培养基。
第三节 培养基的配制
2．营养成分比例恰当 微生物所需的营养物质之间应有适当的比例，培养基 中的碳氮的比例（C/N）在发酵工业中尤其重要。如培养 基中氮肥源过多，会引起微生物生长过于旺盛，而不利于 产物的积累；氮源不足，则微生物菌体生长过于缓慢。当 培养基中的碳源供应不足时，容易引起微生物菌体的衰老 和自溶。培养基的碳氮比不仅会影响微生物菌体的生长， 同时也会影响到发酵的代谢途径。不同的微生物菌种、不 同的发酵产物所要求的碳氮比是不同的。即使是同一微生 物在不同的培养阶段，对培养基的碳氮比的要求也是不一 样的。
第三节 培养基的配制
为了减少实验次数，可考虑用“正交试验设计”等数 学方法来确定培养基给分和浓度，它可以通过比较少的实 验次数而得到较满意的结果，另处，还可通过方差分析， 确定哪些因素影响较大，以引起人们的注意。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法;二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物;培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水;根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法;牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基;由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用; 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果;三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等;2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制;2.调pH不要过头;3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物;4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物;5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存;。
培养基制备及灭菌
无 机 盐
在培养基中,镁, 磷,钾,硫,钙和 氯 被 视为 主 要组 份 , 而其他如钴,铜, 铁 , 锰 , 钼 和锌 等 , 也是必要的.但通 常 被 视为 微 量元 素 . 在合成培养基中选用 微量元素要谨慎. 微量元素要谨慎 . 常 用的微量元素及其浓 度有一定范围. 度有一定范围 . 随着 对代谢物成份的深入 了解, 了解 , 在设计培养基 时要考虑到特种无机 盐的需要
生长因子,前体,产物促进剂和 抑制剂
发酵培养基中某些成分的加人有助于调 节产物的形成,这些添加的物质包括生 长因子,前体,产物抑制剂和促进剂.
生长因子
从广义上讲,凡是微生物生长不可缺少 的微量的有机物质,如氨基酸,嘌呤, 嘧啶,维生素等均称生长因子.
前体
前体指某些化合物加人到发酵培养基中,能 直接被微生物在生物合成过程中结合到产物 分子中去,而其自身的结构并没有多大变化, 但是产物的产量却因加人前休而有较大的提 高. 前体作用前体的加人不但提高了产物的产量, 还显著提高了产物中目的成分的比重. 添加方式:流加
水
作用: 作用: 微生物生长需要水,水是微生物体内外的重要溶媒, 微生物生长需要水,水是微生物体内外的重要溶媒, 通过水微生物才能吸收营养物质和排泄废物; 通过水微生物才能吸收营养物质和排泄废物; 水组成原生质体并参与代谢过程的许多反应.水由 水组成原生质体并参与代谢过程的许多反应. 于其比热高,能有效的吸收代谢过程所放出的热量, 于其比热高,能有效的吸收代谢过程所放出的热量, 使温度不致骤然升高; 使温度不致骤然升高; 水又是热的良好导体,有利于散热便于调节温度 水又是热的良好导体,
发酵的培养基应该具有以下几个共同的特点: 培养基能够满足产物最经济的合成; 发酵后所形成的副产物尽可能的少; 培养基的原料应因地制宜,价格低廉,且性 能稳定,资源丰富,便于采购运输,适合大 规模储藏,能保证生产的供应; 所选用的培养基应能满足总体工艺的要求. 如不应该影响通气,提取,纯化及废物处理 等.
实验室常用培养基
．常用培养基的制备（1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）和马铃薯蔗糖琼脂（PSA）培养基培养真菌最常用的培养基，成分如下：去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15－20g 水1000 ml配制方法：将马铃薯洗净去皮，称取200 g，切成小块（不必大小）放入锅中，加水1000ml，煮沸半小时，稍冷后用双层纱布过滤，在滤液中加蔗糖20g，加水补足到1000ml。
配成的培养基一般呈酸性，用于培养真菌，可以不必调pH。
如配制固体培养基，在加蔗糖前先加15－20g 琼胶加热熔化，最后加入蔗糖，混匀并加水补是至1000ml，趁热分装在试管或三角瓶中。
标准试管（15×150mm）分装量如下：一般用作斜面培养的每试管装培养基3－5ml，用作平面培养的每试管约10ml，加棉花塞后灭菌。
培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性（pH7．0左右）。
（2）牛肉汁蛋白胨培养基（NA）是培养细菌最常用的培养基，又称营养琼脂或肉汤培养基。
成分如下：酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖（或葡萄糖）l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法：称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用，在其余水中加入琼脂，加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀，然后加水补足到1000 ml，用NaOH或HCL调整至pH7.0，趁热分装，加棉花塞后灭菌。
（3）玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片，洗净后剪成1㎝2左右的小块，放在250ml的三角瓶中，盛放量一般为三角瓶的1／3，然后加少量的水以保持湿润，加棉花塞后灭菌。
天然培养基一般不必调整pH。
（4）查氏（Czapek）培养基查氏培养基是一种组合培养基，其成分如下：NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0．5g KCl 0．5gFeSO4 0．01g 蔗糖30g水1000ml（5）灭菌水的配制蒸馏水（或自来水）经过灭菌处理即成灭菌水，是实验室用量最大的必备品之一，常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项培养基是细菌、真菌、细胞等微生物进行繁殖和培养的营养地，广泛应用于微生物学和生物技术领域。
下面将介绍几种常用的培养基的制备方法及注意事项。
1.琼脂培养基：琼脂培养基是最常见的一种培养基，它以琼脂凝胶为基质，通过加入不同的营养成分，满足微生物的生长需求。
制备方法如下：1）称取适量琼脂，加入适量蒸馏水中搅拌均匀。
2）加入适量皂液，加热融化琼脂。
3）待琼脂溶液冷却至40°C左右时，加入已经制备好的培养基成分，如碳源、氮源、维生素等。
4）搅拌均匀，调整pH值，加热煮沸。
5）倒入装有适量培养基的培养皿中，使其凝胶化。
注意事项：1）使用较干燥的琼脂可减少湿润时间。
2）煮沸或加热时间不宜太长，以免过度加热导致一些营养成分失活。
3）制备过程中要注意无菌操作，避免细菌等微生物污染。
2.液体培养基：液体培养基适用于微生物的扩大培养、动态研究等实验。
制备方法如下：1）称取适量蒸馏水，加热至沸腾。
2）加入培养基成分，如碳源、氮源、维生素等，搅拌均匀。
3）调整pH值，加热至沸腾。
4）倒入试管或烧杯中，用胶塞或铝箔盖好。
注意事项：1）加热过程中要注意及时搅拌，避免成分沉积或变色。
2）制备前要将试管或烧杯等容器进行高温灭菌处理。
3）使用培养基前要进行菌液均匀混合，避免因成分沉积而导致的营养不均匀。
3.固体选择性培养基：固体选择性培养基是指根据微生物对特定组分的感受性选择性地制备的培养基。
制备方法如下：1）制备好的琼脂培养基加热至融化，放置冷却至40°C左右。
2）加入特定的抗生素、色素或指示剂等，搅拌均匀。
3）倒入装有适量培养基的培养皿中，等待凝胶化。
注意事项：1）特定抗生素或其他抑菌剂的添加量需要谨慎，过量添加可能抑制需要培养的微生物。
2）搅拌均匀时，应快速且均匀，以避免导致混合不均。
3）固体选择性培养基凝胶化后，尽量避免暴露于空气中，以免细菌等微生物的污染。
以上所述的常用培养基只是其中的一部分，不同微生物的培养要求不同，制备方法也有所差异。
培养基及其配制
GA (赤霉素)： 有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各有不 同、培养基中添加的是GA3，主要用于促进幼苗茎的伸长 生长，促进不定胚发育成小植株；赤霉素和生长素协同作 用，对形成层的分化有影响，当生长素／赤霉素比值高时 有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化；此外， 赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌 发。一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体 的生长。
More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
No NAA Poor shoot development and no roots
芽从外植体的上表面发 生而根从下表面发生
(3)肌醇又叫环己六醇：在糖类的相互转化中起重要作用。使用 浓度一般为l00mg／L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长 以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用， 对细胞壁的形成也有作用。
⑷氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基 中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、 天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。
⑴IAA(吲哚乙酸)是天然存在的生长素，亦可人工合成， 其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的 副作用小、，高温高压易被破坏，也易被细胞中的1AA分 解酶降解，受光也易分解。 ⑵NAA(萘乙酸)在组织培养中的起动能力要比IAA高出3-4 倍，且由于可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解 破坏，所以应用较普遍。NAA和IBA广泛用于生根，并与 细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 ⑶IBA(吲哚丁酸)是促进发根能力较强的生长调节物质。
培养基及其制备方法
培养基及其制备方法1、营养肉汤培养基胨10g肉浸液1000ml氯化钠5g取胨与氯化钠，加入肉浸液内，微温溶解后，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。
2、营养琼脂培养基照上述营养肉汤培养基的处方及制法，加入15～20g琼脂，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。
3、虎红琼脂培养基胨5g虎红（四氯四碘荧光素）0.0133g葡萄糖10g （或0.133％虎红溶液10ml）磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g琼脂15～20g硫酸镁(MgSO4.7H2O) 0.5g水1000ml除葡萄糖、虎红外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、虎红，分装，115℃灭菌30分钟。
4 、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨10g琼脂15～20g酵母浸出粉5g水1000ml葡萄糖20g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热融化后，滤过，加入葡萄糖，分装，115℃灭菌15分钟。
5 、胆盐乳糖培养基(BL)胨20g牛胆盐 1.3g乳糖5g （或去氧胆酸钠0.25g）氯化钠5g水100ml磷酸氢二钾(K2HPO4) 4.0g磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.3g除乳糖、牛胆盐外，取上述成分,混合,加热使溶解,调节pH值使灭菌后为7.4±0.2,煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，115℃灭菌30分钟。
6 、曙红美亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基100ml2％曙红溶液2ml20％乳糖溶液5ml0.5％亚甲蓝溶液 1.3～1.6ml取营养琼脂培养基，加热融化后，冷至60℃,按无菌操作加入灭菌的其它三种溶液,摇匀，倾注平皿。
7 、麦康凯琼脂培养基(MaCC)胨20g1％中性红溶液 2.5ml乳糖10g琼脂15～20g牛胆盐5g水1000ml氯化钠5g除乳糖、1％中性红溶液、牛胆盐及琼脂外、取上述成分,混合，加热使溶解，调节pH 值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热融化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，115℃灭菌30分钟，冷至约60℃，倾注平皿。
培养基及配制
5.2.其它
玻璃纤维 滤纸桥 海绵、卡拉胶等
6 辅 助 性 物 质
6.1 活性炭 6.2 抗氧化物 6.3 抗生素
6.1 活性炭
1)作用：具吸附作用； • 茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 -0.2%）； • 促进生根,根避光生长； • 防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）； • 有利于胚胎培养。 2)常用浓度：0.5－10g/L 3)注意：活性炭具副作用。选择 吸附性差，导致营养损耗和 pH↓， 应适当调高营养物质与激素水平， 并加大Agar用量。
2.2 肌
醇
• 促进愈伤组织生长、 胚状体和芽的形成 • 对组织细胞繁殖、 分化的促进作用 • 浓度100 mg/L
2.1维生素 2.2 肌 醇
2 有 机 物
2.3天然复合物
2.4 氨基酸
2.3 天然复合物
椰乳：
促愈伤组织和细胞培养， 用量10～20%。使用注 意茎尖大小。
香蕉泥：
对pH值缓冲大，用量 150～ 200ml/L ， 应用 在兰花组培。
4.3 赤霉素（GAs）
（1）种类：GA3
（2）作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打 破休眠；一般在器官形成后加入。 • 注意：不耐热；生理活性5－15d，时间太长 有抑制作用。 • 较生长素和细胞分裂素少用，可溶于水。
ABA →因物种不同，能促进或抑制愈伤组织生长；
5 琼脂/培养体支持材料
5.1.琼脂 (1)用量 6－10g/L (2)种类 琼脂粉 琼脂条 (3)作用 固化作用 注意：琼脂使用有优缺点；新买应试凝固力。
常用培养基的制备及注意事项
常用培养基的制备及注意事项制备常用培养基的步骤：1.准备所需材料和试剂：包括原材料、化学试剂、水质等。
2.按照配方准备培养基的成分，称取所需质量的每种成分，并放入容器中备用。
需要注意的是，成分的配比应严格按照配方比例进行。
3.取一定容积的纯化水，进行加热和搅拌。
加热需注意温度控制，以避免高温引起成分变性和水的蒸发。
4.将加热的纯化水慢慢倒入容器中的培养基成分中，同时用搅拌器搅拌，以保证成分均匀溶解。
5.溶液温度降至室温后，通过过滤器或高温高压灭菌器对培养基进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
6.消毒后，将培养基分装到适当的容器中，如试管、琼脂培养皿等，并密封好，以免受到外界的污染。
7.对于固体培养基，添加适量的琼脂、琼脂糖或者琼脂葡萄糖固化成体，用压力灭菌器灭菌。
8.储存培养基要注意避光、防潮和防火，并在相关容器上标明名称、配方和制备日期。
1.成分准确：制备培养基时，需要准确称取每种成分的质量，确保配方比例准确。
不同的微生物和细胞需要不同的营养成分，所以要了解不同微生物和细胞的需求，选择适当的配方。
2.水质净化：培养基的制备需要使用纯化水，如去离子水、超纯水等，以确保水质的纯净。
水质若不符合要求，会影响培养基的质量。
同时，加热时要控制温度，以避免成分变性和水的蒸发。
3.消毒杀菌：培养基在制备完成后需进行消毒处理，以杀灭存在的微生物。
可以通过过滤器或高温高压灭菌器进行消毒。
消毒过程中要做到严格的操作规范，保证培养基的纯度。
4.容器选择：对于不同的培养基，选择合适的容器也非常重要。
常用的容器包括试管、琼脂培养皿、培养瓶等。
选用容器时要考虑到培养的需求，如气体交换、液体混合等。
5.储存注意：制备完成的培养基需要正确储存，避免光照、潮湿和高温。
同时要在容器上标明名称、配方和制备日期，以便管理和使用。
总结：制备常用培养基需要严格按照配方比例进行，控制水质和温度，并进行消毒处理。
在容器选择和储存过程中也要注意一系列的注意事项，以确保培养基的质量和纯度。
各种培养基的配方
各种培养基的配方在微生物学中，培养基是为微生物提供营养和生长所必需的营养物质的混合物，可以根据微生物的特性和需求来设计不同成分的培养基。
不同种类的微生物需要不同的培养基来生长和繁殖，为了获得最佳的生长效果，需根据微生物的特性制备相应的培养基。
下面介绍几种常用的培养基及其配方。
1. 加尔沙基培养基（Luria-Bertani，LB培养基）LB培养基是一种常用的细菌培养基，适用于大多数细菌的培养。
其成分包括牛肉浸出物、酵母提取物和氯化钠，PH为7.0。
配方：- 水：1000ml-氯化钠：10g-酵母提取物：5g-牛肉浸出物：10gLB培养基的主要特点是富含氨基酸和碳源，适合于细菌的快速生长。
2. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）PDA培养基是一种适合真菌和霉菌生长的培养基，成分简单易得。
它主要包括马铃薯提取物、葡萄糖和琼脂。
PDA培养基是一种半固体培养基，适合于真菌的产孢。
配方：-马铃薯提取物：200g-葡萄糖：20g-琼脂：20g-静置180s后，灭菌PDA培养基适合于真菌和霉菌的生长，常用于菌落计数和生长的研究中。
3.营养琼脂培养基营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于多种微生物的培养。
它主要包括蛋白水解物、酵母提取物、氯化钠和琼脂。
配方：-蛋白水解物：5g-酵母提取物：1g-氯化钠：5g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌营养琼脂培养基适合于大多数微生物的生长，是最常用的培养基之一4. 马尼特尔-梅尔特培养基（Mannitol-Salt Agar，MSA）MSA培养基是一种选择性培养基，主要用于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的分离和鉴定。
它的成分包括马尼托尔、氯化钠、酵母提取物和琼脂。
配方：-马尼托尔：5g-氯化钠：75g-酵母提取物：1g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌MSA培养基在金黄色葡萄球菌的生长过程中，可以通过红色菌落的形成来进行识别。
培养基的制备过程
培养基的制备过程一、引言培养基是细胞、微生物等生物体在实验室中进行研究和培养的必需品，其制备过程涉及到多个步骤和组分。
本文将详细介绍培养基的制备过程。
二、材料及设备1. 纯水2. 食品级明胶3. 葡萄糖4. 氯化钠5. 磷酸二氢钾6. 氨基酸混合物7. 维生素混合物8. 纯净乙醇9. 经过高温高压灭菌的玻璃烧杯、量筒、移液器等实验室常用设备。
三、制备步骤1. 制备明胶溶液将10g食品级明胶加入500ml纯水中，搅拌均匀后加热至溶解。
待溶解后降温至室温，静置1小时，将上清液倒入干净容器中备用。
2. 制备基础盐类溶液将8g氯化钠、0.2g磷酸二氢钾加入800ml纯水中，搅拌均匀后加热至溶解。
待溶解后降温至室温，静置1小时。
3. 制备氨基酸混合物将0.5g苏氨酸、0.5g丝氨酸、0.5g天冬氨酸、0.5g谷氨酸、0.5g精氨酸、0.5g赖氨酸、0.5g异亮氨酸、0.5g缬氨酸加入50ml纯水中，搅拌均匀后过滤，得到无菌的氨基酸混合物。
4. 制备维生素混合物将1mg生物素、1mg叶酸、1mg核黄素、1mg泛酸、1mg吡哆醇加入10ml纯水中，搅拌均匀后过滤，得到无菌的维生素混合物。
5. 制备完整培养基将基础盐类溶液和明胶溶液按照4:1的比例混合，并加入2ml氨基酸混合物和2ml维生素混合物，最终体积调整至1000ml。
搅拌均匀后过滤灭菌即可。
四、质量控制1. 培养基的pH值应控制在7.0左右。
2. 培养基的透明度应良好，无悬浮物和沉淀。
3. 培养基的灭菌应严格遵守规定，确保无菌状态。
五、结论本文介绍了培养基的制备过程，包括明胶溶液、基础盐类溶液、氨基酸混合物、维生素混合物以及完整培养基的制备步骤。
同时，还对培养基的质量控制进行了说明。
这些步骤和质量控制是保证培养基质量的关键因素。
第二章 培养基1
• 水解酪蛋白 为蛋白质的水解物，主要成分 为氨基酸，使用浓度为100-200mg／L。受 酸和酶的作用易分解，使用时要注意。
• 其他 酵母提取液(YE)(0．01％-0．05％)， 主要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取 液(0．01％~0.5％)、苹果和番茄的果汁、 黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。遇热较 稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。
4．2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)
优点：诱导能力要比IAA高10-20倍，特别在促进愈伤组 织的形成上活力最强。 缺点：但它会强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。因 而其适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。 适用：一般用于细胞启动脱分化阶段，而诱导分化阶段 往往不用2,4-D，而用NAA 或IAA 、IBA等。 脱分化---是指使已分化了的停止分裂的细胞失去分化特 性，回复到未分化的幼龄状态，恢复细胞分裂的 能力的过程。 分化---是指使脱分化形成的处于幼龄状态的细胞团或组 织，再产生根、芽、胚状体等有高层次组织结构 的特化细胞。
五、糖类
糖在组培中是不可缺少的 1.作用： 一是作为离体组织赖以生长的碳源 二是使培养基维持一定的渗透压（一般在1.5-
4.1MPa）。
2.种类：蔗糖（多用），其浓度为1%-5%,也可 用砂糖、葡萄糖或果糖等。
• 不同糖类对生长的影响不同。从各种糖对 水稻根培养的影响来看，以葡萄糖效果最 好，果糖和蔗糖相当，麦芽糖差一些。不 同植物不同组织的糖类需要量也不同，实 验时要根据配方规定按量称取，不能任意 取量。高压灭菌时一部分糖发生分解、制 定配方时要给予考虑。在大规模生产时， 可用食用的绵白糖代替。
1．吲哚乙酸（IAA）:是从植物中提取出来的，它 在高等植物中普遍存在，在幼嫩的生长旺盛的部 位含量更高。 优点：对器官形成的副作用较小 缺点：易受体内酶的分解，受光易氧化，在高温 高压的灭菌中热稳定性较差，并且其药剂 的活性也较低，可能是最弱的激素。 而人工合成的生长素则不会受到酶的分解，高温 高压下表现也比较稳定。所以在组织培养中通常 使用人工合成的类似物，如IBA 、NAA和2,4-D。
培养基制备规程及使用规程
培养基制备规程及使用规程一、培养基制备规程1.实验室环境准备：a.准备洁净的实验室，保持室内的洁净度和通风良好。
b.检查实验室设备，确保所有设备都处于良好的工作状态。
2.实验室操作准备：a.准备所需的培养基成分，如葡萄糖、氨基酸、盐类和维生素等。
b.准备所需的试剂和溶液，如酚红指示剂和加热消毒用的稀盐酸等。
c.准备所需的实验器材，如计量容器、培养皿和pH调节器等。
3.培养基制备步骤：a.按照配方准确称取所需成分，并加入适量的蒸馏水中。
b.用适当的方法加热溶解所需成分，如用水浴或高压灭菌锅加热至沸腾。
c.将溶解后的培养基过滤，以去除可能存在的微生物污染。
d.在制备过程中，确保培养基的pH值在所需范围内，如需调节pH值可使用氢氧化钠或盐酸等酸碱调节剂。
e.将制备好的培养基分装到适当的容器中，并密封保存。
4.培养基质量控制：a.制备好的培养基应进行质量检查，如外观、pH值、无菌性和有效成分浓度等。
b.注册并记录所用的培养基成分和制备过程，以备后续参考。
二、培养基使用规程1.实验室操作准备：a.检查所需的培养基是否已经过期，如已过期应立即报废。
2.培养基使用步骤：a.将需要处理的样品制备成适当浓度的悬浮液或溶液。
b.使用无菌的技术将培养基分装到试管或培养皿中。
d.将处理好的样品加入培养基中，保持无菌操作。
e.在使用过程中，必要时对培养基进行保温或恒温操作。
f.记录实验过程中的有关数据和观察结果。
3.培养基处理和存储：a.使用完毕的培养基应按照实验室规定的方法进行处理，防止污染和传播病原微生物。
b.剩余未使用的培养基应密封保存，存放于适当的温度和湿度条件下，以保证培养基的质量和有效性。
c.定期检查存储的培养基是否已过期，如已过期应立即报废。
d.记录所用培养基的批号和过期日期，以备后续参考。
总结：培养基的制备与使用直接关系到实验结果的准确性和可靠性。
制备过程中需要注意材料的准确称量和溶解、过滤的无菌操作。
使用过程中要注意无菌操作，以保证培养物的纯度和有效性。
发酵培养基及其制备
要求此种培养基的组成丰富完整，营养成分浓度和粘度适中， 即利于菌体生长，又利于合成大量的代谢产物。
发酵培养基的组成要考虑菌体在发酵过程中的各种生化代谢的 协调，在产物合成期，使发酵液pH值不出现大的波动。
不同的菌体，不同的产品，对培养基的要求是不同的。不同的 发酵产品，培养基的状态、粘度、各成分的含量也是不同的。但是， 基本的营养需求是一致。因此，应根据不同的情况选择发酵培养基。
根据使用目的可分为: （生物）鉴别培养基(differential medium) 选择培养基(selected medium)：
根据形状可分为: 固体培养基（solid medium）： 半固体培养基（semi-solid medium）： 液体培养基（ liquid medium）：
根据生产工艺的要求可分为:
碳氮比不当，还会影响菌体按比例地吸收营养物质，直接影响 菌体生长和产物的形成，菌体在不同生长阶段，对其碳氮比的最适 要求是不一样的。
根据元素组成：酵母菌的碳氮比约为10020；霉菌的碳氮比约 为10010。
一般发酵工业的碳氮比约为100 0.2~2.0，但在氨基酸发酵中， 碳氮比就高。如谷氨酸发酵C:N=100:15~21，若碳氮比为 100:0.2~2.0，则会出现只长菌体，而不产谷氨酸的现象。
微生物的营养活动，是依靠向外界分泌大量的酶，将周 围环境中大分子的蛋白质、糖类、脂肪等营养物质分解成小 分子化合物，再借助于细胞膜的渗透作用，吸收这些小分子 营养来实现的。
第一节 培养基的选择与制备
一、培养基的类型和用途
根据来源可分为: 天然培养基(complex /undefined medium): 合成培养基(defined medium): 半合成培养基(semi-defined medium)：
培养基的制作过程
培养基的制作过程培养基是细菌、真菌、细胞等生物体在实验室中进行培养和繁殖所必需的营养物质和环境条件的混合物。
制作培养基是生命科学实验中非常重要的一步，下面将从原材料、制备步骤、注意事项等方面详细介绍培养基的制作过程。
一、原材料1. 离子交换水或双蒸水：用于配制培养基时稀释各种试剂，保证试剂的纯度。
2. 蛋白胨：是从动物肉类或鱼虾等蛋白质含量高的食品中提取出来的，是常用的一种氮源，可供微生物生长使用。
3. 酵母提取物：是从酵母菌体中提取出来含有丰富氮源和多种维生素B族成分的营养液，常用于培养真菌和酵母等微生物。
4. 葡萄糖：是微生物进行代谢反应所必需的碳源。
5. 磷酸盐缓冲液：用于调节培养基pH值，以维持适宜的生长环境。
6. 硫酸镁：是微生物进行代谢反应所必需的微量元素，同时也可用于调节培养基pH值。
7. 染色剂：如溴甘酚、溴蓝等，用于检测微生物在培养基上的生长情况和形态特征。
二、制备步骤1. 称取所需试剂：按照配方要求，精确称取每种试剂，并将其分别加入离子交换水或双蒸水中。
2. 搅拌溶解：将试剂加入水中后，使用磁力搅拌器将其充分搅拌溶解，直至无明显沉淀出现。
3. 调节pH值：使用磷酸盐缓冲液调节培养基的pH值，通常在7.0-7.4之间为宜。
如果pH值过高或过低，会影响微生物的生长和代谢反应。
4. 灭菌：使用高压灭菌器或自制压力锅对培养基进行灭菌处理。
灭菌时间一般为20-30分钟，在121℃下进行高温高压处理。
灭菌后要及时冷却到室温。
5. 包装保存：将制好的培养基分装到无菌瓶中，并在瓶口处加上无菌棉塞或铝箔封口，避免外界污染。
储存温度通常为4℃，可保持较长时间的稳定性。
三、注意事项1. 原材料质量要求高：制备培养基的原材料必须是纯度较高、无污染的试剂，以避免影响微生物的生长和代谢反应。
2. 操作要严谨：在制备过程中要注意操作规范，遵守无菌操作规程，防止微生物污染。
3. 灭菌时间和温度要控制好：灭菌时间和温度是保证培养基无菌的关键因素之一，必须严格按照标准化程序进行操作。
培养基的制备
一、培养基的制备:(一)液体培养基1、称量用电子天平称量配制培养基所需的各种药品:牛肉膏3.0 g 蛋白胨10 g 氯化钠5.0 g2、溶化将称好的药品置于烧杯中,加入少量蒸馏水,用玻璃棒搅拌,加热溶解3、定容待全部药品溶解后,加水至所需体积1000ml4、调pH 用剪刀剪出一小段pH试纸,然后用镊子夹取此段pH试纸,在培养基中蘸一下,观看其pH范围，直至将pH调制7.2-7.45、过滤6、分装将配好的液体培养基分别装入锥形瓶中,并加塞包扎7、灭菌将加塞包扎好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中,在121℃下灭菌20min.8、保存将配置好的培养基放入4℃的冰箱中，保存备用（二）固体培养基1、称量用电子天平称量配制培养基所需的各种药品:牛肉膏3.0 g 蛋白胨10 g 氯化钠5.0 g 琼脂粉15 g2、除无需过滤外，其余步骤同液体培养基二、供试样品处理1.苔藓植物提取液制备将采集来的苔藓样品用自来水冲洗，再用去离子水洗净，放入培养箱于50℃恒温条件下烘干，用电动粉碎机将植物体粉碎。
称取 2.0 g 样品粉末，置于具橡胶塞的三角瓶中，加20 ml无水乙醇, 在摇床上振荡提取20 h, 以1500 r/ min 离心10 min, 收集上清液, 将残渣再用无水乙醇重复提取2次, 方法同上，合并3次的提取液于小烧杯中, 置4℃冰箱保存备用。
2.苔藓植物浸出液的制备分别将植物体洗净,蒸馏水浸泡至吸水饱和,然后用滤纸吸去体表多余水分,但不能过重挤压。
称取8 g藓体,加少许蒸馏水,研磨成浆状,再加水至40ml。
放入50℃恒温水浴锅12 h。
取出并离心去渣,得上清液即为浸出液。
三、菌悬液的制备取供试细菌菌株，用接种环各取菌苔少许接种至牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上，在37℃恒温培养箱中培养20 h 活化，然后将活化后的菌株接一环于 5 mL 液体培养基中，在恒温振荡器中37℃下培养6- 8 h ，即制成菌悬液。
四、滤纸片法测定抑菌作用取直径12 mm 的灭菌滤纸片放入上述苔藓植物提取液中浸泡过夜，将菌悬液各取0．5 mL 与相应的固体培养基制成含菌平板，用无菌镊子取含浸出液的滤纸片贴在含菌平板上，每皿贴4 片，每菌做 3 次重复，且用无水乙醇浸泡滤纸片作空白对照，置于37℃恒温培养箱中培养24 h 后，取出测定抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。
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三、发酵培养基的选择
一）、配置培养基的原则 1、根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基 2、注意各营养物质的浓度和配比 3、调节适宜的物理化学条件
4、根据培养微生物的目的配置
5、尽量使用廉价易得的原料
二）、配置培养基的方法
1、生态模拟 2、查阅文献
3、借助优选法或正交试验法精心设计培养基配方
例如：微生物发酵生产甘油中，例如亚硫酸氢钠， 它与代谢过程中的乙醛生成加成物。
7.水分 功能：生化反应均在水溶液中进行
二、培养基的类型
1.依营养物质的来源分类 天然培养基； 合成培养基，也称组合培养基（多用于定量研究）； 半合成培养基，（用的最多，在部分天然有机碳源、 氮源、生长因子的基础上，适当加入一些化学药品）；
2）半固体培养基 配置好的液体培养基中加入0.5%左右的琼脂 作为凝固剂，形成的培养基称之微半固体培养 基。 主要用于菌种鉴定，观察细菌运动特征及噬 菌体的效价测定等
3）液体培养基； 培养基中80～90%是水。
3.依培养基的用途来分 1）、孢子培养基 2）、种子培养基 3) 、 发酵培养基 4）、补料培养基 5）、加富培养基 6）、选择培养基 7）、鉴别培养基 8）、增殖和保存培养基 9）、富集培养基 10）、测定培养基
2.依培养基的物理状态来分： 1）固体培养基 A、凝固培养基 ：即遇热可融化，冷却后则凝固的固 体培养基 B、非可逆性凝固培养基：指有血清凝固成的固体培 养基或由无机硅胶配成的凝固后即不能再融化的固体 培养基 C、天然固体培养基：由天然固体状基质直接制成的 培养基，如麸皮，米糠，木屑等 D、滤膜：是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄 膜，把它制成圆片状覆盖再营养琼脂或浸有培养液的 纤维衬垫上，就形成了具有固体培养基性质的培养条
4、实验比较 实验的规模一般由定性到定量，由小到大。 发酵培养基的用途与要求、成分、配比经实验确定，配制时兼顾 原料来源、成本及工艺管理；（举例1 ，2，3）
培养基配方举例
牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)
牛肉膏5克 蛋白胨10克 NaCl5克 水1000毫升 pH7.2～7.4 (琼脂15～20克)
第二章 培养基的制备与灭菌
1、培养基的组成？如何选择培养基？ 2、如何制备培养基？ 3、如何对培养基进行灭菌？
第一节 培养基的原材料
一、培养基的营养成分及用途
光 光能自养 自养菌 氢、硫、氨 化能自养 1.能源 亚硝酸盐、亚铁盐 碳水化合物等有机物 石油天然气和石油化工产品（如醋酸） 异养菌
第二节 淀粉水解糖的制备
一、淀粉水解糖的制备方法 1、酸解法： 定义：以酸（无机酸或有机酸）为催化剂，在高温高 压下将淀粉水解为葡萄糖的方法. 优点：设备要求简单，水解时间短（20min），设备 生产能力大 缺点：高温高压下进行，设备要求耐腐蚀、耐高温、 耐高压，副反应多，对原料要求严格，淀粉颗粒不宜 过大，淀粉乳浓度不能过高。
2、酶解法：（双酶水解法） 定义：用淀粉酶将淀粉水解为葡萄糖的过程。一般 分为两步：第一步是利用α－淀粉酶将淀粉液化转为 糊精及低聚糖，使淀粉的可溶性增加，这个过程称为
高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)
可溶性淀粉20克 KNO31克 K2HPO40.5克 MgSO40.5克 NaCl 0.5克 FeSO40.01克水1000毫升琼 脂15～20克pH7.4～7.6
察氏培养基(培养霉菌用) 蔗糖 20克 NaNO33克 K2HPO41克 KCl1克 MgSO40.5克 FeSO40.01 克 琼脂20克 水1000毫升自然pH 无氮培养基(培养自生固氮菌用) 葡萄糖 10克 NaCl0.2克 KH2PO40.2克 CaSO4· 2H2O0.1克 MgSO40.2 克 CaCO35克 琼脂 20克水1000毫升自然pH
功能：生长、繁殖需要；
碳酸气 2.碳源 淀粉水解糖、糖蜜、亚硫酸盐纸浆废液等 石油、正构石蜡、天然气 醋酸、甲醇、乙醇等石油化工产品
功能：提供能量、构成菌体、代谢产物的物 质基础；
有机氮：黄豆饼粉、花生饼粉、玉米浆、蛋白胨、 3.氮源 酵母粉、鱼粉、发酵菌丝体、酒糟水等
无机氮： 尿素、硫酸铵、氨水、硝酸盐
2）、促进剂：指那些既不是营养物又不是前
体，但却能提高产量的添加剂。
比如在酶制剂发酵过程中，加入诱导物、表明活性剂及其它一些 产酶促进剂（比如吐温80、植酸、洗衣粉等）
3）、抑制剂：在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代
谢途径的进行，同时会使另外一些代谢途径活跃，从
而获得人们所需要的某种产物或使正常代谢的某一代 谢中间物积累起来。
1）、前体：指某些化合物加入到发酵培养基中， 能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物
分子中去，而其自身的结构没有多大的变化，
但产物的产量却因加入前体而有较大的提高。
如：在青霉素生产中加入玉米浆，青霉素产量可从20u/mL增加 到100u/mL，研究发现玉米浆中的苯乙胺被有限结合到青霉素分 子中，从而提高了青霉素G的产量。
功能：构成菌体、含氮代谢物；
磷酸盐、钾盐、钙盐等矿物盐 4.无机盐
铁、锰、钴等微量元素
功能：构成菌体，参与酶的组成，维持酶活 性，调节渗透压，调节pH值，维持氧化还原 电位；
5.特殊生长因子：硫胺素、生物素、对氨基苯
甲酸、肌醇等
功能：酶的辅助部分，维持生命活动；
6．发酵的促进剂与抑制剂 发酵培养基中某些成分的加入有利于调节产物 的形成，而并不促进微生物的生长，这些物质 包括前体、促进剂和抑制剂
伊红-美蓝培养基(检查肠道细菌用)
蛋白胨 10克 K2HPO42克乳糖10克琼脂25克，水1000毫升，pH7.6 2％伊红水溶液2毫升0.5％美蓝水溶液2毫升将乳糖、伊红、美蓝分别 灭菌后，加入灭菌的培养基中摇匀，倒平板。
四、原料转换及意义 1、节约原料，减低单耗，提高发酵单位和总 收率； 2、开拓新的原料资源和微生物资源：野生植 物淀粉、植物纤维、木屑水解物、石蜡、醋酸、 乙醇