NADH氧化酶(NOX)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法

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碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。

绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。

细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。

本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。

本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。

细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。

谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。

在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。

但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。

如何检测NAD激酶的活性？

如何检测CheKine™NAD激酶（NADK）活性？细胞代谢是指发生在细胞内的所有有序化学变化的总称，简单理解就是指细胞里的所有化学反应。

细胞代谢活动的测量可作为细胞研究的一个重要指标，广泛应用基础研究和药品研发当中。

Abbkine CheKine™细胞代谢学产品线包括大量相关代谢物、酶、营养和代谢物定量检测试剂盒等。

那么今天我们来一起看看有关细胞代谢分析的相关研究，希望对大家有所帮助哦！一、CheKine™硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）检测试剂盒（比色法），#KTB1660TPX属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX 类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

TPX普遍存在于各种生物体内，如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。

TPX与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。

TPX的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。

CheKine™硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）检测试剂盒，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中硫氧还蛋白过氧化物酶活性。

TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇（DTT），通过测定240 nm（H2O2的吸收波长）吸光度的下降速率，用对照组减去过氧化氢酶（CAT）催化分解的H2O2，即可计算出TPX活性。

因此，本试剂盒可以同时测定样品TPX和CAT活性。

二、CheKine™丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒（比色法），#KTB1120PK（EC 2.7.1.40）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化糖酵解过程中的最后一步反应，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，也是产生ATP的关键酶之一，因此测定PK活性具有重要意义。

CheKine™丙酮酸激酶（PK）活性检测试剂盒，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中丙酮酸激酶活性。

乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法

乙酰辅酶A羧化酶（ACC）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC0410规格:50T/24S产品简介：乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase，ACC）在生物体内催化乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A，是脂肪酸和许多次生代谢产物合成的关键酶。

ACC的活性在一定程度上决定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

ACC能够催化乙酰辅酶A、NaHCO和ATP生成丙二酰辅酶A、ADP和无机磷，钼蓝与磷酸根生成660nm3有特征吸收峰的物质，通过钼酸铵定磷法测定无机磷的增加量来测定ACC活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、天平、低温离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、水浴锅、蒸馏水、冰盒、EP管。

产品内容：提取液一：液体60mL×1瓶，4℃保存；提取液二：液体0.6mL×1支，-20℃避光保存；试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前加入12.5mL试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前加入6mL双蒸水，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入15mL双蒸水，溶解后4℃保存一周；试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前加入15mL双蒸水，溶解后4℃保存一周；试剂六：液体15mL×1瓶，室温保存；标准品：10μmol/mL标准磷贮备液1mL×1支，4℃保存；提取液的配制：按提取液一：提取液二=990：10（V：V）的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用。

O：试剂四：试剂五：试剂六=2:1:1:1的比例配制，配好的工作液应为工作液（定磷剂）的配制：按H2浅黄色。

索莱宝 BC0310 辅酶Ⅰ NAD(H)含量检测试剂盒说明书

BC0310 -- 第 1 页，共 4 页辅酶Ⅰ NAD(H)含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号: BC0310规格: 50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件酸性提取液液体15 mL×1瓶2-8℃保存碱性提取液液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体20 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体6 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体16mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体3 mL×1瓶-20℃保存试剂五液体40 mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体75 mL×1瓶（自备）常温保存NAD 标准品粉剂×1支-20℃保存NADH 标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂三：需要严格避光；2、试剂六：72 mL乙醇和3 mL 蒸馏水混合，备用；3、NAD 标准品：临用前加入1.5 mL 蒸馏水，即2 µmol/mL ，将其稀释为1.25 nmol/mL 的NAD 标准溶液备用；4、NADH 标准品：临用前加入1.4 mL 蒸馏水，即2 µmol/mL ，将其稀释为1.25 nmol/mL 的NADH 标准溶液备用。

产品说明：辅酶I 包括还原型和氧化型两种形式，在生物氧化中起传递氢的作用。

氧化型辅酶I 又称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）是脱氢酶的辅酶，它在糖酵解、糖异生、三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。

中间产物会将脱下的氢递给NAD ，使之成为NADH （还原型辅酶I ）。

而NADH 则会作为氢的载体，在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式，合成ATP 。

NAD(H)在机体内有重要的生理意义，与物质代谢、能量代谢、抗细胞衰老、抗氧化以及一些疾病的发生密切相关。

辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒说明书

辅酶ⅠNAD(H)含量试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。

糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。

NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。

较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。

此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。

另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。

测定原理：分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。

需自备的仪器和用品：酶标仪、台式离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：酸性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；碱性提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体10 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体3 mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃保存，用时加入3mL蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保存一周；试剂五：液体3.6mL×1瓶，4 ℃保存；试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存；试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。

NAD+和NADH的提取：1 血清（浆）中NAD+和NADH的提取：NAD+的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入1mL酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μL上清液，加入500μL碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。

活性氧（ROS）测定试剂盒说明书

3、荧光检测： ①、将上述收集好的细胞沉淀用 PBS 重悬，并用于检测；
②、波长设置：最佳激发波长 500(50015nm)，最佳发射波长 525 (53020 nm)。也可按照 FITC 荧光检
测条件检测。 ③、结果以荧光度值表示。
四、细胞样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度计测定）
二、试剂组成及保存： 1、0.1ml 10mM DCFH-DA in DMSO，20℃保存。 2、1ml 活性氧供氢体，4-8℃保存。
三、组织样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度计测定）
1、单细胞悬液制备：方法 1、采用单细胞悬液制备仪制备单细胞悬液。方法 2、酶消化法：方法 3、机械法（网搓法）：
本试剂盒仅用于科研实验
1、直接将探针加入培养液中： ①、直接将 DCFH-DA 探针加入无血清培养基中：一般按照 1 ：1000 用无血清培养液稀释 CFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于 6 孔板的一个孔加入稀释好的 DCFH-DA 不少于 1ml。 ②、取一份不加探针，只加入培养基的细胞设为阴性对照管。阳性对照管：取一份已加入探针的细胞，同时加入活性氧供氢体诱导细胞，推荐该试剂的工作浓度为 20～100µM。 ③、37℃孵育细胞 30min～几小时，通常为 30～60min 即可，孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA 浓度有关。一般阳性对照在刺激细胞 30 分钟左右，即可观察到明显的绿色荧光。 ④、吸去培养液，利用无血清培养液或者 0.01MPBS 反复吹打，肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成片)转为透明，细胞层几乎全部吹打到 PBS 中。 ⑤、将细胞悬液全部收集到 1.5ml 离心管中。用无血清培养液或者 PBS 洗涤 2 次，以充分去除未进入细胞内的 DCFH-DA。1000rpm/min，5min，吸净上清后加入 PBS 重新悬浮细胞进行测定。

苏州科铭试剂盒总清单-5.3

100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样
咨询 800 420 2300 1200 1000 520 1100 580 1550 800 1200 620
L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
L-半乳糖苷-1,4-内酯脱氢酶(Gal LDH)测试盒
抗坏血酸氧化酶（AAO）测试盒
抗坏血酸氧化酶（AAO）测试盒
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
微量法
紫外分光光度法
微量法
100管/48样 50管/24样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样 100管/96样 50管/48样
100管/96样
50管/48样
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒
丙酮酸脱羧酶（PDC）测试盒
醇脱氢酶（ADH）测试盒
醇脱氢酶（ADH）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）测试盒
乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒乙醛脱氢酶（ALDH）测试盒
烟酸含量测试盒
微量法可见分光光度法高效液相色谱法
微量法可见分光光度法
脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）测试盒
脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）测试盒

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC0090规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体0.33mL×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL 试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

POD 催化H 2O 2氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。

2、测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。

3、样本测定表试剂名称（µL）测定管样本15蒸馏水270试剂一520试剂二130试剂三135在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s 后的吸光值A2。

线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。

其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。

产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。

其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。

复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。

基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。

NAD-NADH比率检测试剂盒说明书

NAD/NADH比率检测试剂盒关键词：NADH，NAD+，Nicotinamide adenine dinucleotide，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原态，还原型辅酶Ⅰ。

N指烟酰胺，A指腺嘌呤，D 是二核苷酸。

葡萄糖代谢时直接经代谢所产生的ATP是十分的少的，而代谢产生的NADH 或FADH2经由一个电子传递与氧化磷酸反应可产生大量的ATP。

NADH分子是线粒体中能量产生链中的控制标志物。

NADH水平的上升指示代谢失衡的出现。

监视NAD/NADH的氧化还原状态是表征活体内线粒体功能的最佳参数。

紫外光可以在线粒体中激发NADH产生荧光，用来监测线粒体功能。

一般来说，涉及到氧化还原的反应都用得到，比如呼吸作用，光合作用，等等氨会抑制呼吸过程中的电子传递系统，尤其是NADH。

因此NAD/NADH水平的监控是能量传递、细胞核组织氧化还原态等研究的主要兴趣点。

有没有一款可以同时检测，NAD+,NADH，以及NAD+/NADH比率，这三个指标的试剂盒呢？艾美捷科技特向您推荐，已被广泛使用，发布文章不计其数的高品质试剂盒。

*样品通过NAD萃取，同时检测（NAD+NADH）与（NAD）的结果，相减计算得出NADH 含量，以及NAD/NADH的比率。

原理：Amplite 比色法NAD/NADH 比率试剂盒，提供一个比色法原理的检测培养细胞的总NAD/NADH，和NAD/NADH ratio的方法。

在这个实验中，裂解液中NAD可以被NAD萃取液提取，通过酶反应被转化为NADH，然后利用NADH探针反应，产生黄色染料，此染料可以在460nm处测吸收峰，或者加入增强剂后，可以检测635nm吸收峰。

染料产生颜色与细胞裂解液中NAD 或者NADH的浓度呈正比。

《卓越的标准曲线》《发表文章结果：Ren, T., et al. Oncogene 36.42(2017).》引用文献Norisoboldine, a natural AhR agonist, promotes Treg differentiation and attenuates colitis via targeting glycolysis and subsequent NAD+/SIRT1/SUV39H1/H3K9me3 signaling pathwayAuthors: Qi Lv, Kai Wang, SimiaoQiao, Ling Yang, Yirong Xin, Yue Dai, Zhifeng WeiJournal: Cell death & disease (2018): 258Stochastic expression of lactate dehydrogenase A induces Escherichia coli persister formationAuthors: Naoki Yamamoto, RinoIsshiki, Yuto Kawai, Daiki Tanaka, TetsushiSekiguchi, Shinya Matsumoto, Satoshi TsunedaJournal: Journal of Bioscience and Bioengineering (2018)Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun WangJournal: European Journal of Pharmacology (2017): 124--133Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine FermentationAuthors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L InglisJournal: Fermentation (2017): 61Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing YeJournal: Cell & Bioscience (2017): 27MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cellsAuthors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H YangJournal: Oncogene (2017)Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferaseAuthors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, MitsuguAkagawaJournal: Biochemistry (2017)Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratioAuthors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping HaoJournal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL,AND MECHANISTIC ASPECTSAuthors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, GaganPaudel, Elena Tarakhovskaya, NadezhdaFrolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain TissierJournal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621--7636AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevationAuthors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie ZhangJournal: Aging cell (2016): 416—427艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系，目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理，主要包括：Abbkine、Merck Millipore、Origene、AAT Bioquest、Cayman Chemical、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Trevigen、Alomone Labs、Epigentek、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、Caisson Labs等，可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。

GENMED心肌黄酶活性染色试剂盒产品说明书(中文版)

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS80039.1 v.A GENMED细胞NADH心肌黄酶活性染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED细胞NADH心肌黄酶活性染色试剂是一种旨在使用人工电子受体染料二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（MTT），受到NADH心肌黄酶催化还原，产生不溶性蓝黑色色素沉淀，来细胞中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心改良传统方法、成功实验证明的。

主要适用于各种动物细胞的心肌黄酶活性定性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景心肌黄酶（Diaphorase），又称为硫辛酰胺脱氢酶（lipoamide dehydrogenase），黄递酶，二氢硫辛酰胺脱氢酶（dihydrolipoamide dehydrogenase），二氢硫辛酸脱氢酶（dihydrolipoyl dehydrogenase）等。

因早期从猪心肌中提取，产品又呈现荧光的黄绿色蛋白质，故被称为心肌黄酶。

分子量102000至110000。

NADH心肌黄酶直接和黄素蛋白（Flavoprotein）反应，释放出氢原子，将氧化型黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）还原为还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（FADH2），传递氢原子给氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD），而形成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH），作为电子供体，还原人工电子受体，例如染料四氮唑兰（tetrazolium）化合物，包括硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），产生不溶性甲暨色素，由此用于鉴别内脏神经细胞等各种动物细胞。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED固着液（Reagent B）毫升GENMED染色液（Reagent C）毫升GENMED反应液（Reagent D）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent C）和GENMED反应液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备2毫升离心管：用于配制染色工作液15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液培养箱：用于反应孵育光学显微镜：用于切片染色后观察分析实验步骤操作一、25cm2细胞培养瓶染色染色开始前，将 ℃冰箱里的试剂置于室温下融化；移取毫升GENMED染色液（Reagent C）到新的毫升离心管，加入微升GENMED反应液（Reagent D），混匀后，标记为GENMED染色工作液，置于冰槽里，避免光照。

抗氧化酶活性等测定方法

叶绿体的提取一、试剂配置1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl（0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO4（200×0.0005=0.1g）；使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）;2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）；3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；实际配制：PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）二、提取步骤1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）2、快速研磨，使叶片碎成绿豆粒大小，4层纱布过滤，去除残渣（注意过滤时不可用力挤压，以免叶绿体膜破碎）3、滤液2000g 3min，小心倒出上清液，将离心管放入离心机后，使离心机的加速很快上升到预定值(水平转头，加速度调到9)，约经30s后很快使其下降停止，整个离心持续大约2-3min左右完成；4、沉淀用1ml提取液漂洗表面悬浮物；5、用1ml悬浮液（50mM HEPES pH 7.6，含0.33 mM山梨糖醇，10mM NaCl，2mM MgCl2，2mM EDTA，0.5 mMKH2PO4，2mM ASA-Na，ASA-Na使用前现配现加）将沉淀悬浮，在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷，或者用手握住离心管在冰块之间搅动，使叶绿体由于震动分散开来，不要用棉球吸滤，以防被膜压破。

索莱宝（Solarbio）线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm）活性检测试剂盒说明书

线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm ）活性检测试剂盒说明书微量法货号: BC2165规格: 100T/48S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液一液体60 mL×1瓶4℃保存提取液二液体600 μL×2支-20℃保存提取液三液体40 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶常温保存试剂三液体10 mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五液体5 mL×1瓶常温保存试剂六液体15 mL×1瓶常温保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液二：易挥发试剂，用完后盖紧盖儿后及时放回-20℃保存；2、试剂一：临用前加入5 mL 试剂三，充分溶解待用；3、试剂二：临用前加入5 mL 试剂三，充分溶解待用；4、试剂四：临用前加入0.375 mL 双蒸水，充分溶解待用；5、标准品：10 mg α-酮戊二酸。

临用前加入684 μL 蒸馏水，配成100 μmol/m L 标准液；6、工作液的配制：临用前根据用量将试剂一、试剂二按1:1比例混合，现配现用。

产品说明：线粒体异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase ，ICDHm ），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，与线粒体基因表达及线粒体其他的功能有关。

异柠檬酸脱氢酶在生物体内有两种存在形式，以NAD 为辅酶的NAD-依赖型异柠檬酸脱氢酶，和以NADP 为辅酶的NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶。

异柠檬酸脱氢酶的主要功能，是在体内三羧酸循环中，催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，将NAD 还原成NADH ，通过测定α-酮戊二酸的生成量，可以计算出线粒体异柠檬酸脱氢酶活力高低。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

辅酶 NAD(H)Ⅰ含量试剂盒使用说明

辅酶NAD(H)Ⅰ含量试剂盒使用说明产品简介：NAD是糖酵解和TCA循环的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD。

糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。

NAD(H)含量和NADH/NAD比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。

较高的NAD(H)及NADH/NAD比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态，NADH/NAD 比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。

另外，NAD降解产物具有非常重要的调控作用。

NAD和NADH在254nm下有吸收峰，利用高效液相色谱法在相应波长下测定其含量。

试验中所需的仪器和试剂：高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22µm）、滤膜（水系和有机系各2个，0.45µm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、乙腈（120mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水注：若用自动进样器，需要样品瓶，测定时将不少于1mL的样品或标准品加入样品瓶中。

无自动进样器，需手动进样时，不需要样品瓶，用进样针将不少于20ul的样品或标准品打入进样阀。

产品内容：试剂一：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，形成NAD和NADH提取液（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净），4℃保存3个月；试剂二：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，粉剂3×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1、粉剂2和粉剂3溶解后倒入容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃保存3个月。

试剂三：NAD标准品5mg×1支，-20℃保存。

一氧化氮(NO)含量检测试剂盒.96S

一氧化氮（NO）含量检测试剂盒说明书(货号：NM-W-0132 微量法100T/96S)一、产品简介：一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一种气态分子自由基，在生物体内作为重要的信使分子和效应分子，参与调节血管形成、神经传递、免疫调控及肿瘤生长等多种生理及病理过程。

此外，NO是植物的主要生物活性分子，在植物的生长发育和对胁迫的反应过程中参与了多种生理活动，如种子萌发、叶扩展、根生长、花器官发生、气孔运动的调节以及植物的抗逆反应等。

NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-。

在酸性条件下，NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。

酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、超声细胞破碎仪、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、冰和蒸馏水。

四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备℃ 组织样本：称取0.2g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆后，10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为2~5：10的比例进行提取。

℃ 细菌/细胞样本：建议1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间5min），10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为1000~2000：1的比例进行提取。

℃ 血清（浆）等液体样本：直接测定。

若液体有浑浊则离心取上清测定。

2、标准溶液的配制：把10μmol/mL标准品母液用蒸馏水稀释成1.25μmol/mL的标准溶3、预实验上机操作：℃ 酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm。

4、正式实验：℃ 若预实验∆A 测定小于0.005，可以增加样本量后再进行测定；如果∆A测定大于1.5，建议将样本上清用稀释液适当稀释后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；℃ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；℃ 正式实验按照预实验操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。

NADH氧化酶

性质
NOX 大部分为同源二聚体, 单个亚基相对分子质量一般46~56 kDa, 全酶相对分子质量为92~112 kDa pH 值为5.0~ 9.0. 最适pH 值在 6.0~7.5 温度范围为20~ 50 . Cu2+ , Hg2+ , Zn2+等重金属离子能够强烈抑制NADH 氧化酶的酶活, 甚至使其完全失活。
NADH氧化酶
主讲：*** 班级：***
来源
许多微生物中存在NADH氧化酶，它在调控微生物代谢方面有重要作用。NOX由于其反应物氧不需另行加入，产物结构简单，并且对主产物分离纯化无影响，因此在辅酶NAD＋再生应用中表现了巨大的潜力。
产NOX的细菌可以分为需氧菌及厌氧或兼性厌氧菌两类，前者的产物主要为H2O2 ，且NOX多存在于膜上或胞内；而另一类大部分是乳酸菌，产物主要是 H2O，且NOX存在于胞内。
。
生产
菌种:乳酸菌【泡菜中筛选】有氧发酵 30 ℃ 150rpm 酶活：
NADH在波长340nm之间有特殊吸收峰，而在 NADH氧化酶的氧化酶的氧化作用下，其产物NAD+ 却没有吸收峰。因此，测定在340nm波长处样品的吸光值，通过计算25℃下反应物溶液在340nm处吸光度的减少量，可以得到NADH氧化酶粗酶酶活。酶活定义为25℃时每分钟氧化1µ molNADH所需要的酶量。

从高级结构来说，乳酸菌与其他来源的 NADH氧化酶各异，有包含3、4、6甚至12 个亚基的，且辅基数目也不尽相同。虽然来源不同，但NADH氧化酶分子的氨基酸序列具有普遍类似性，都有NADH结合区域和黄素蛋白FAD结合区域

底物偏好
NADH氧化酶催化反应的底物之一，是反应的电子供体，可以为β-NADH或α NADH，但对目前发现的NADH氧化酶而言，其最适底物是β-NADH。另外在一些研究中， NADPH也可做为底物被该酶催化氧化。。

碧云天活性氧检测试剂盒 S0033S S0033M 说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号活性氧检测试剂盒产品编号产品名称包装 S0033S 活性氧检测试剂盒 >100次 S0033M活性氧检测试剂盒>500次产品简介：活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit ，也称ROS Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA 进行活性氧检测的试剂盒。

DCFH-DA 本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH 。

而DCFH 不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。

细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH 生成有荧光的DCF 。

检测DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。

本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup ，以便于活性氧的检测。

Rosup 是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml 。

本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

本试剂盒S0033S 包装可以测定100-500个样品，S0033M 包装可以测定500-2500个样品。

包装清单：产品编号产品名称包装 S0033S-1 DCFH-DA (10mM)0.1ml S0033S-2 活性氧阳性对照(Rosup, 50mg/ml)1ml —说明书1份产品编号产品名称包装 S0033M-1 DCFH-DA (10mM)0.5ml S0033M-2活性氧阳性对照(Rosup, 50mg/ml)5ml —说明书1份保存条件：-20ºC 保存，一年有效。

注意事项：探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

酶活试剂盒原理

酶活试剂盒原理悄悄地告诉你一个小秘密：酶活试剂盒是生物学实验中常用的一种工具，它能够帮助科研人员快速、准确地检测酶的活性。

那么，酶活试剂盒是如何实现这一目标的呢？让我们来了解一下酶的活性是什么意思。

酶是一类特殊的蛋白质，它们在生物体内发挥着催化反应的作用。

而酶的活性则是指单位时间内酶能够催化的反应物数量。

酶活试剂盒的原理就是利用一种特殊的底物和检测方法来测定酶的活性。

酶活试剂盒中的底物通常是一种与酶特异性反应的物质，可以被酶催化产生某种可测定的产物。

例如，对于乳酸脱氢酶活性的检测，底物就是乳酸和辅酶NAD+，而产物则是产生的丙酮酸和还原的辅酶NADH。

通过测定产生的NADH的光密度或荧光强度，就可以间接地测定酶的活性。

在实验过程中，科研人员将待测酶样品与特定底物和辅酶混合，然后加入试剂盒中提供的试剂，如缓冲液、显色剂等。

这些试剂能够在一定条件下，与产生的产物发生化学反应，形成可以测量的信号。

通过测量这些信号的强度，就可以推断出酶的活性。

酶活试剂盒的优势在于其快速、准确、灵敏的特点。

与传统的酶活性测定方法相比，酶活试剂盒不仅操作简便，而且能够在短时间内完成试验，并且结果可靠。

这使得科研人员能够更加高效地进行实验研究，提高实验数据的可信度。

当然，酶活试剂盒也有一些限制。

首先，由于底物的选择受到限制，所以只有特定酶的活性可以被测定。

其次，酶活试剂盒的结果受到许多因素的影响，如温度、pH值等。

因此，在使用酶活试剂盒时，科研人员需要严格控制这些因素，以确保实验结果的准确性。

酶活试剂盒通过特定底物和检测方法，可以快速、准确地测定酶的活性。

它为科研人员提供了一种便捷而可靠的实验工具，促进了生物学研究的发展。

在未来，酶活试剂盒将继续发挥重要的作用，助力科学家们更好地理解和探索生命的奥秘。