番茄煤霉病生防融合子基因组RAPD分析鉴定
樱桃番茄种质资源遗传多样性的RAPD分析
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RAPD标记鉴定番茄杂交种子纯度的研究
第!"卷第#期云南农业大学学报$%&’!"(%’# )**#年+月,%-./0&%12-//0/34.56-&7-.0&8/59:.;57<=:>?)**#@3AB标记鉴定番茄杂交种子纯度的研究!朱海山!，张宏!，毛昆明!，李洪涛!，汪安云)（!?云南农业大学园林园艺学院，云南昆明CD*)*!；)?云南省烟草研究院，云南昆明CD*)**）摘要：应用@3AB标记鉴定番茄杂交种子纯度，从!C*条随机引物上筛选出E=)F#引物，能在杂交一代父母本中各自产生特异的@3AB标记，并且父母本的特异标记能在杂交一代中同时表现，从而利用一个引物便可将杂交一代及其父本、母本三者清楚地区分开，同时也能鉴别其它混杂种子。
结果表明：利用@3AB标记技术鉴定番茄杂交种子纯度有着快速和准确的优势，对于杂交种子生产具有广阔的应用前景。
关键词：番茄；杂交种子纯度；@3AB标记中图分类号：=C*#?C；=CG!?)文献标识码：3文章编号：!**G H#+*I（)**#）*#H*)F*H*#!"#$%&’(%(#)$*+%$,*,-.,)+%,/!0&1#$23((241&56!’7+#8(#4!"#"$%&’($)!，!"*+,"-).!，/*012)&3%).!，45"-).&6$-!，7*+,*)&82))（!?J%&&:4:%1K0/L;60>:0/L M%.756-&7-.:，2-//0/34.56-&7-.0&8/59:.;57<，N-/O5/4CD*)*!，JP5/0；)?Q/;757-7:%12-//0/R%S066%=65:/6:;，N-/O5/4CD*)**，JP5/0）614%#+9%：@3AB O0.T:.;U:.:0>>&5:L7%L:7:.O5/:7P:>-.57<%17%O07%V!P<S.5L;::L;U57P7%70&4:/%O56 B(35/7P5;;7-L<?RP:>.5O:.E=)F#U0;;6.::/:L%-7%1!C*0.S57.0.<!*H O:.%&54%/-6&:%75L:>.5O:.;，UP56P4:/:.07:L L5;75/6759:S0/L;S:7U::/O0&:，1:O0&:>0.:/7;0/L P<S.5L;?RP:;>:65156S0/L;%1>0.:/7;6%-&L S::W>.:;;:L5/V!P<S.5L;，O0&:，1:O0&:>0.:/7;0/L P<S.5L;6%-&L S:L5;75/4-5;P:L6&:0.&<S<%/: >.5O:.0/L%7P:.O5W:L;::L;6%-&L S:L:7:67:L7%%?RP:.:;-&7;;P%U:L7P07;-6P07:6P/5X-:U0;.0>5L，066-.07:0/L P0L0;54/51560/70>>&56075%/1-7-.:5/7P:>.%L-675%/%17%O07%P<S.5L:;::L;?:(&;,#24：7%O07%；>-.57<%1V!P<S.5L;::L；@3AB O0.T:.在作物育种和种子生产中，种子的纯度对质量控制及生产的经济效益是至关重要的，以往的种子纯度鉴定通常采用大田小区种植，通过形态学的观察来加以鉴定，这种方法不但耗费人力物力，需要相当长的时间，而且观察的结果往往受环境和一些人为因素的影响，严重地影响了农业生产和种子产业的发展，迫切需要建立一套能快速准确地鉴定种子纯度的技术体系，生物技术的发展为此提供了切实可行的方案［!Y G］。
利用RAPD技术快速鉴定番茄种子纯度
利用RAPD技术快速鉴定番茄种子纯度
戴修纯;王佛娇;谢伟平;张华
【期刊名称】《中国蔬菜》
【年(卷),期】2006(000)008
【摘要】种子质量是影响农作物品质和产量的重要因素，虽然我国已加入国际种子检验协会（ISTA），但由于种子检测设备、技术相对落后，至今仍未有通过ISTA认证的种子检测机构，使我国种子质量难以得到有效的保证。
为了防止假冒伪劣种子给农业生产造成危害，实现种子的产业化，加快与国际接轨的步伐，必须进一步完善种子质量尤其是种子纯度检测技术。
【总页数】2页(P23-24)
【作者】戴修纯;王佛娇;谢伟平;张华
【作者单位】广州市农业科学研究所,广州市新港东路151号510308
【正文语种】中文
【中图分类】S6
【相关文献】
1.应用RAPD技术快速鉴定樱桃番茄杂种纯度 [J], 温庆放;朱海生;林义章;康建坂;薛珠政
2.RAPD技术在粤星番茄种子纯度检测中的初步研究 [J], 王得元;李乃坚
3.利用RAPD技术快速鉴定番茄体细胞无性系变异 [J], 李继红
4.RAPD技术鉴定番茄一代杂种粤星种子纯度的研究 [J], 蒲汉丽;李乃坚;黄爱兴;
王得元;庄楚雄
5.利用RAPD技术快速鉴定番茄杂种纯度 [J], 栾雨时;苏乔;李海涛;安利佳;何孟元因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
番茄抗青枯病基因的克隆及高通量分子标记的开发
基于TRBW-Marker的多态性分析结果，该标记有望应用于番茄抗青枯病育种中，提高育种效率 和准确性。
抗青枯病基因功能验证
TRBW基因过表达载体构建
构建TRBW基因过表达载体，并转化至感病番茄品种中，获得转基因植株。
TRBW基因过表达对番茄抗青枯病能力的影响
高通量分子标记技术应用
分子标记辅助育种
高通量分子标记技术可用于快速、准确 地检测抗病基因，提高育种效率。通过 分子标记辅助育种，可以将多个抗病基 因聚合到一个品种中，育成具有持久抗 性的番茄新品种。
VS
基因定位与克隆
高通量分子标记技术可用于抗病基因的定 位和克隆。通过构建高密度遗传图谱和关 联分析，可以精确地定位抗病基因，并克 隆其编码序列，为深入研究抗病机理和开 发新型抗病策略提供基础。
02
实验材料与方法
实验材料来源及准备
1 2
3
番茄品种选择
选用具有抗青枯病性状的番茄品种作为实验材料。
DNA提取
采集番茄叶片，利用CTAB法提取高质量DNA，用于后续实 验。
病原菌准备
从青枯病病区采集病原菌，进行分离、纯化和扩增，用于接 种实验。
基因克隆技术流程
目的基因筛选
利用生物信息学方法，从已知抗 病基因数据库中筛选候选目的基 因。
分布与危害
番茄青枯病广泛分布于世界各地番茄产区，尤其在温暖潮湿地区发病严重。该病害可导致番茄减产甚 至绝收，给农业生产造成巨大损失。
抗青枯病基因研究现状
抗病基因鉴定
目前，已有多个与番茄抗青枯病相关的基因被鉴定出来，如Pto、Prf等。这些 基因通过不同的机制赋予番茄对青枯病的抗性。
番茄煤霉病生防融合子的鉴定及拮抗性研究的开题报告
番茄煤霉病生防融合子的鉴定及拮抗性研究的开题报告一、研究背景和意义番茄煤霉病是危害十分严重的一种病害，不仅能直接影响番茄的产量和品质，还可引起田间病害的传播，其防治常常具有一定的困难。
为了解决这一问题，目前常用的主要是化学农药进行病害的防治，但长期使用会对环境、健康等方面造成一定的影响，因此急需开发安全、高效的生物防治方法。
近年来，越来越多的研究表明，生物制剂可以很好地进行作物病害的防治，且对环境和人体均无毒害性。
生物防治技术中的拮抗根际微生物是一种重要的防治手段，具有良好的生物安全性和环境适应性，能够有效地控制若干种作物病害，极大地推动了农业的可持续发展。
因此，本研究旨在从拮抗根际微生物的角度出发，分离并鉴定番茄煤霉病生防融合子，并研究其与番茄煤霉病病原菌之间的拮抗性，为番茄煤霉病的防治提供一种新思路和方法，同时也可为拮抗根际微生物的研究提供参考价值。
二、研究内容和方法本研究的主要内容为从番茄健康根区分离得到拮抗番茄煤霉病的根际微生物，并通过生理生化及 molecular 生物学鉴定其种属和亲缘关系。
同时，利用发酵和筛选等方法，从众多菌株中筛选出拥有优良拮抗作用的生防融合子，并研究其拮抗性能。
主要方法如下：1.分离根际微生物:采取分层萃取法、平板分离法对番茄健康根区中的细菌群进行分离、筛选出拥有良好生防效果的细菌种类。
2.菌种的鉴定: 采用生理生化指标和 molecular 生物学技术，对分离得到的菌株进行鉴定，明确其种属和亲缘关系。
3.生防融合子的培养:利用不同培养基，对拮抗细菌株的生防融合子进行大量培养，获取高活性菌种。
4.拮抗性能研究:采取 in vitro 筛选和 in vivo 田间拮抗实验相结合的方式，探究生防融合子与番茄煤霉病病原菌之间的拮抗关系。
三、研究预期成果本研究预期获得的成果有如下几个方面：1.从番茄健康根区中分离并鉴定得到一系列拮抗根际微生物；2.筛选得到拥有优良拮抗作用的生防融合子；3.研究拮抗根际微生物和煤霉病病原菌之间的拮抗性能；4.探讨生防融合子的使用方法和应用效果，推广应用到番茄生产中。
番茄属基因组DNA遗传多样性RAPD分析
第 ３ １卷 第 ２期 ２０ ０ ２年பைடு நூலகம்６月
番 茄属基 因组 Ｄ Ａ遗传 多样 性 Ｒ Ｐ Ｎ Ａ Ｄ分析
赵 凌 侠 “ ，李 景 富 。 唐 克 轩 许 向 阳 ， 国银 。 ， ， 开
（． １ 复旦 太学生命 科 学学 院遗传 工程 国 家重点 实验 室 ， 海 ２ ０ ３ ；、 上 ０ ４ ３ ２ 东北农 业 大 学 目艺学 院 ， 龙 江 哈 黑 尔滨 １ ０ ３ ￣ ． 建农 林 大学 生物技 术 中 ， 建 福 州 ３ ０ ０ ） ５００ ３福 福 ５ ０ ２
摘 要 ： 番 茄 属 ９个 种 的 ４ 对 ３份 材 料 进 行 了 Ｒ Ｄ 分 析 ， ２ ＡＰ 用 ６条 随 机 引物 （ ０ 基 ） 检 测 到 １ ９ 位 点 ， 中多 态 位 点 １碱 共 ９个 其 １６个 ， 总 扩 增 位 点 的 ７ ６ ｔ 此 进 行 聚 类分 析 将 番 茄 属 分 为 ４个 类 群、 传 丰 度 、 ４ 占 ３３ 依 遗 遗传 离 散 度 、 因杂 台 度 和 Ｓ ａ — 基 ｈ ｈ ｎ ｎ表 型多 样 性 指 数 分 析 结 果 显 示 ， ｏ 遗传 多 样性 均 有 野 生 类 群大 于 普 通 番 茄类 群 的 趋 势 ， 明野 生 类 群 中 存 在 着 更 为 丰 富 说 的 可用 于番 茄 遗 传 改 良遗 传 变 异 类 型、 美 键 词 番 茄 属 ； ＲＡＰ 遗 传 多 样 性 Ｄ； 中圈 分 类 号 ￥ ４ 、 ６ １２ 文 就标 识 码 Ａ 文 章编 号 ：０ ６７ １ （０ ２ ０ —２ ８０ １ ０—８ ７ Ｚ ０ ） ２０ ２．６
番茄亲本与F1的RAPD分析及相关性分析的开题报告
番茄亲本与F1的RAPD分析及相关性分析的开题报告1. 研究背景番茄（Solanum lycopersicum）是一种重要的经济作物，在全球都有广泛的种植。
为了提高番茄产量和品质，育种学家一直在努力研究和选育高产、抗病、耐旱、优质等的新品种。
而RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）技术，是一种常用的分子生物学工具，可以用来研究不同品种之间的遗传差异，因此可以用来辅助选育番茄新品种。
2. 研究目的本项目旨在研究不同番茄亲本和F1的RAPD分析结果，以及相关性分析，从中探索番茄遗传差异、亲缘关系和杂种优势等问题，为番茄育种提供有益的信息和参考。
3. 研究内容与方法本研究将选取不同种类的番茄亲本和其杂交子代F1，使用RAPD技术进行分析。
首先，从不同番茄品种中提取DNA，然后根据RAPD技术对样本进行扩增，得到一系列随机扩增的DNA片段。
接着，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对扩增产物进行分离，得到一个长度不同、具有多态性的DNA条带图谱。
最后，根据DNA条带之间的相似性进行相关性分析，以探究不同番茄亲本的遗传关系及其与杂交子代之间的遗传距离。
4. 预期结果本项目预计可以研究出不同番茄亲本的遗传差异和相关性，并通过与F1的比较来探究杂种优势和亲缘关系。
同时，还可以为番茄选育提供更多遗传信息和分子生物学基础数据。
5. 研究意义及应用前景本研究可以为番茄育种提供科学的遗传背景和参考依据，为选育高产、抗病、优质的新品种提供有益的信息和参考。
同时，该研究方法也具有参照性和普适性，未来可以应用到其他作物的育种研究中。
番茄抗性基因Ty-2和Ph-3多重PCR的检测应用
番茄抗性基因Ty-2和Ph-3多重PCR的检测应用番茄是一种重要的蔬菜作物，全球范围内都受到广泛种植。
番茄在生长过程中容易受到多种病毒、细菌和真菌的侵袭，严重影响了生产产量和质量。
为了提高番茄植株的抗病能力，科研人员一直在寻找与番茄抗性相关的基因。
Ty-2和Ph-3是两种非常重要的抗性基因，它们在番茄植株的抗病过程中发挥着重要的作用。
Ty-2基因是番茄中一种重要的抗病基因，它能够提高番茄对卷叶病毒的抗性。
卷叶病毒是一种常见的番茄病毒病害，会导致番茄植株生长迟缓、叶片卷曲等严重症状。
而Ty-2基因的发现为番茄的抗病育种提供了重要的基因资源。
Ph-3基因是另一种重要的抗病基因，它主要参与了对番茄晚疫病菌的抗性反应。
晚疫病是一种致命的番茄病害，经常导致番茄植株大面积的凋亡，给番茄生产带来了严重的影响。
对这两种抗性基因进行检测和研究对于番茄抗病育种具有非常重要的意义。
近年来，随着分子生物学和生物技术的发展，PCR技术成为了一种常用的分子生物学技术。
PCR技术通过扩增DNA片段的方法可以快速、准确地研究特定基因的变化。
多重PCR 技术可以同时检测多个基因的存在，具有高效、经济的特点。
利用多重PCR技术对番茄抗性基因Ty-2和Ph-3进行检测具有非常重要的应用前景。
多重PCR技术可以快速、准确地对番茄中的Ty-2和Ph-3基因进行检测。
利用多重PCR 技术，可以在同一反应中同时扩增多个基因，缩短检测的时间，并且能够准确地检测基因的存在与否。
这对于育种工作者来说非常重要，可以帮助他们快速地筛选出抗病的番茄品种，为番茄抗病育种提供有力的支持。
多重PCR技术具有高通量、经济的特点。
在同一反应中同时检测多个基因，不仅可以节约时间，还能够减少实验成本。
这对于大规模的番茄遗传标记和抗病基因筛选研究来说非常重要，可以有效地提高研究的效率，并且降低研究的成本，加快抗病品种的培育进程。
多重PCR技术还可以进行单倍体鉴定和遗传多样性分析。
运用PCR法对番茄杂交种子纯度和真实性鉴定的研究
运用PCR法对番茄杂交种子纯度和真实性鉴定的研究
王汝宝
【期刊名称】《种子科技》
【年(卷),期】2001(019)001
【摘要】运用PCR方法,利用随机核苷酸序列做引物,扩增番茄基因组DNA的随机片断,再进行琼脂凝胶电泳测定,就可根据种间的谱带差异确定番茄种子的真实性和纯度.
【总页数】3页(P41-43)
【作者】王汝宝
【作者单位】农业部玉米种子监督检验测试中心,辽宁,沈阳,110034
【正文语种】中文
【中图分类】S641.203.7
【相关文献】
1.RAPD标记鉴定番茄杂交种子纯度的研究 [J], 朱海山;张宏;毛昆明;李洪涛;汪安云
2.玉米蛋白质PAGE法与田间鉴定法测定杂交玉米种子纯度的相关性研究 [J], 张金波;刘素萍;刘玉双;刘玉柱
3.蛋白质凝胶电泳法鉴定杂交玉米种子纯度与田间种植鉴定法的相关性研究 [J], 王洁;闫米格
4.改进的盐溶蛋白电泳法鉴定玉米品种农大108种子纯度及品种真实性 [J], 张文玲
5.番茄杂交种子纯度种植鉴定技术 [J], 范新有;裴卓强
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栽培番茄与秘鲁番茄种间杂种的DNA指纹鉴定
栽培番茄与秘鲁番茄种间杂种的DNA指纹鉴定于拴仓;柴敏;赵泓;姜立纲【期刊名称】《分子植物育种》【年(卷),期】2005(3)1【摘要】本研究在胚珠培养获得秘鲁番茄与栽培番茄的种间杂种的基础上,利用分子标记技术从DNA水平上分析亲本及杂交后代间的遗传差异性和相似性。
通过2个随机引物的RAPD指纹分析发现4个胚培养植株具有一致的RAPD指纹,杂种继承了双亲的特征谱带。
利用19个随机引物、2对RGA引物和1对SRAP引物进行分子标记分析,共产生了319个标记位点,这些标记在双亲及杂种中的分布表现了6种模型,统计分析表明种间杂种整合了栽培番茄和秘鲁番茄的遗传信息,杂种的230个位点中包含了30.4%的栽培番茄特有信息、20.9%秘鲁番茄特有信息、46.5%共有信息;种间杂种与母本栽培番茄的基因组相似性达72.5%,而与秘鲁番茄的基因组相似性为50.8%,杂种明显偏向母本栽培番茄。
【总页数】5页(P61-65)【关键词】番茄;栽培;种间杂种;茄种;母本;随机引物;胚珠培养;双亲;鉴定;基因组【作者】于拴仓;柴敏;赵泓;姜立纲【作者单位】北京市农林科学院蔬菜研究中心【正文语种】中文【中图分类】S641.2;S436【相关文献】1.栽培番茄与野生秘鲁番茄杂交胚胎发育的细胞学研究 [J], 吴梅珍;吴定华2.秘鲁番茄与栽培番茄回交一代的获得及其染色体片段分析 [J], 赵鹤;王孝宣;杜永臣;高建昌;国艳梅3.野生种多毛、醋栗番茄与栽培种番茄的指纹图谱分析 [J], 吴玉辉;杨建平;李君明;刘磊4.普通番茄与秘鲁番茄杂种后代的形态、亲和性及抗性表现 [J], 徐鹤林;余文贵;龙明生;陆春贵;杨荣昌;吴鹤鸣;陆维忠;余建明;周邗扬5.胚珠培养获得秘鲁番茄与栽培番茄种间杂种具有非温敏抗根结线虫基因Mi-3 [J], 赵泓;柴敏;于栓仓;刘凡;姜立纲;毛爱军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
番茄灰霉病菌的鉴定及系统发育树分析
参考文献
Ｅ １ ３ 张 权炳 ． 矿物 源农 药在 柑桔 等 果树 病虫 害 无公 害 防 治 中 的应 用 （ 一） ［ Ｊ ］ ． 中 国南方 果树 ， ２ ０ ０ ５ ， ３ ４ （ ５ ） ： ７ ７ — ７ ８ ．
Ｅ ２ ３ 韩盛 ， 杨渡 ， 徐万里 ， 等． ８种生物源和矿物源农药防治加工番茄细菌
中图分类号 ： Ｓ ４ ３ ６ ． ４ １ ２ ． １ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ Ｏ Ｏ １ 一Ｏ Ｏ Ｏ ９ 《 ２ Ｏ １ ３ ） Ｏ ６ 一Ｏ １ ２ ７ 一Ｏ ５ 灰 葡 萄孢 （ Ｂ ｏ ｔ ｒ ｙ ｔ ｉ ｓ ｃ ｉ ｎ ｅ ｒ ｅ ａ ） 属半 知 菌亚 门丝孢 纲
北方 园艺 ２ ０ １ ３ （ ０ ６ ） ： １ ２ ７ ～ １ ３ １
・植物保护 ・
番茄灰霉病菌的鉴定及 系统发育树分析
王 瑞 虎 ，关 鑫 ，陈 秀 玲 ，王 傲 雪 。
（ １ ． 东北 农业 大 学 园 艺学 院 ， 黑 龙江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ３ ０ ； ２ ． 东 北农 业 大学 生 命科 学 学院 ， 黑龙 江 哈 尔滨 １ ５ Ｏ ０ ３ ０ ）
摘
要： 从感染番茄灰 霉病 的病果上分 离并纯化得 到 菌株 ｔ ０ ８ ０ １ ６ ｂ ， 其形 态学特征 与灰葡 萄
孢属极 其相似 。通过扩增菌株 ｔ ０ ８ ０ １ ６ ｂ的 １ ８ Ｓ ｒ Ｄ Ｎ Ａ 及 内转录间隔 区（ Ｉ Ｔ Ｓ ） 序列， 对其进行 分子 鉴定和分类。结果表 明： 该 茵的 １ ８ Ｓ ｒ Ｄ ＮＡ序列与 Ｂ ｏ ｔ ｒ ｙ ｏ ｔ ｉ ｎ ｉ ａ ｆ ｕ ｃ ｋ ｅ ｌ ｉ ａ ｎ ａ （ Ｅ Ｆ １ １ ０ ８ ８ ７ ． １ ） 的 同源性
10个加工番茄品种的分子鉴别
10个加工番茄品种的分子鉴别于拴仓;柴敏;姜立纲【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2005(014)001【摘要】采用RAPD、RGA和SRAP分子标记技术对10个加工番茄品种进行了分子鉴别的研究.12个RAPD随机引物扩增后共产生了23个多态性位点;2对RGA 引物产生了11个多态性位点;1对SRAP引物产生了7个多态性位点.分析单引物的品种鉴别能力发现,RGA和SRAP标记具有较高的鉴别效率.通过双引物组合分析发现,双引物组合S391和em1+me1或PK1+PK2和em1+me1可用于10个加工番茄品种的分子鉴别,并获得了各品种独特的核酸指纹.【总页数】6页(P17-22)【作者】于拴仓;柴敏;姜立纲【作者单位】国家蔬菜系统工程技术研究中心,北京,100089;国家蔬菜系统工程技术研究中心,北京,100089;国家蔬菜系统工程技术研究中心,北京,100089【正文语种】中文【中图分类】S641.2;Q789【相关文献】1.4个加工番茄新品种SSR指纹图谱的构建与品种鉴定 [J], 王柏柯;余庆辉;杨生保;帕提古丽;杨涛2.普通小麦-十倍体长穗偃麦草衍生新品种抗赤霉病基因的分子鉴别 [J], 刘新伦;王亚娟;田增荣;吉万全;王超;牛丽华;刘志立;张录德;陈春环;张荣琦;张宏;王长有3.利用基因组SSR分子标记对老芒麦品种(种质)鉴别和品种纯度鉴定 [J], 雷云霆;赵闫闫;喻凤;李媛;窦全文4.两个桂热甘蔗品种(系)的简单重复序列间扩增(ISSR)分子鉴别 [J], 程琴;庞新华;吕平;周全光;谭秦亮;金刚;朱鹏锦;欧克纬5.基于SSR分子标记的桃品种鉴别及指纹图谱构建 [J], 王淋;敖敦;包文泉;张淑宁;陈俊兴;李凤鸣;孟繁庆;杨钰莹;白玉娥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
番茄假尾孢煤霉病的显微镜检识别与综合防治
番茄假尾孢煤霉病的显微镜检识别与综合防治作者：王迪轩李丽蓉贺铁桥周铭张有民李光波来源：《长江蔬菜·技术版》2017年第11期番茄煤霉病（Tomato cercospora leaf mold）是番茄生产中的一种普通病害，南方普遍发生，一般发病率10%～20%，病情发展迅速，严重时100%，影响叶片的光合作用，叶片变黄枯萎，致早春番茄提早罢园。
主要为害叶片，也能未害茎和叶柄。
2017年早春，笔者调查发现，其在赫山区和资阳区几个蔬菜基地均有发生，个别地区由于对病害未及时识别和防治，导致植株提早衰败，产量大幅度降低，应在来年引起高度重视。
1 发病症状叶片发病：发病叶片正面或叶背产生淡黄绿色近圆形、长圆形或不定形淡褐色至褐色病斑，边缘不明显（图1），病斑上有褐色茸毛状霉（图2），即病菌分生孢子梗及分生孢子。
霉层扩展迅速，可覆盖整个叶背，叶正面出现淡黄色至黄色、周边明显的病斑（图3），后期病斑变为褐色，病部常破裂穿孔，严重时病叶变黄枯萎（图4）。
叶柄和茎发病：病斑上也常长出褐色茸毛状霉层。
其与叶霉病的区别在于初生的霉斑即褐色，看不到由白至褐的过程。
2 病原Pseudocercospora fuliginea，称煤污假尾孢，属半知菌亚门真菌。
分生孢子褐色，生于叶背，呈铺展状。
分生孢子梗（图5）2～7枝成束，稍弯曲，粗短，淡灰褐色，末端钝圆，渐收缩呈尖突，有隔膜2个，大小（25～27）μm×（3.5～5.0）μm。
分生孢子（图6）倒棍棒状至圆柱状，基部稍大，末端细小，无色，有隔膜3～5个，大小（15～120）μm×（3.5～5.0）μm。
3 发病规律及传播途径病原主要以菌丝体及分生孢子随病残体在地面上越冬。
遇适宜条件时菌丝体产出分生孢子形成初侵染。
病部产出的分生孢子，借气流或雨水传播，再侵染。
病菌生长适温27℃，最高37℃，属高温高湿病害。
5～7月当气温高于25℃，雨日多、持续时间长、长时间闷热或湿气滞留易发病或流行。
番茄SSR，RAPD体系优化Tm2nv基因SCAR鉴定
扬州大学２００６届硕士学位论文３２图１ＣＴＡＢ法ＳＤＳ法提取ＤＮＡ在琼脂糖凝胶上的检测结果泳道：１－９为ＣＴＡＢ法提取；１０—１８为ＳＤＳ法提取：５０，７５，１００，１２５代表＾ＤＮＡ浓度（ｎｇ．ｕＬ．１）Ｆｉｇ．１．ＴｈｅｃｈｅｃｋｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅＤＮＡｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅａｇｒｏｓｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｂｙｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｏｆＣＴＡＢａｎｄＳＤＳＬａｎｅ：１－９ＲｅｐｒｅｓｅｎｔｆｏｒｗｉｔｈＣＴＡＢ；１０－１８ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｆｏｒｗｉｔｈＳＤＳ；５０，７５，１００，１２５ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｆｏｒｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｘＤＮＡ（ｎｇ．ｕＬ’１、表８ＣＴＡＢ法与ＳＤＳ法提取ＤＮＡ在紫外分光光度计上的浓度检测结果Ｔａｂｌｅ８ｔｈｅＲｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅＤＮＡｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅＵＶ／ＶｉｓＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒｂｙｍｅｔｈｏｄｓｏｆＣＴＡＢａｎｄＳＤＳ３．３番茄ＳＳＲ扩增反应条件的优化３．３．１Ｍｇ”浓度对ＳＳＲ扩增结果的影响Ｍ９２＋浓度对ＰｃＲ扩增的特异性和产量有显著的影响，由图２可见，当Ｍ９２＋浓度在１．５，２．０，２．５Ｎ３．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１时均有扩增产物；但是Ｍ矿＋浓度在１．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，塑尘兰重堑！！垦：坠！里堡墨垡些墨！翌：！：：董旦塑！里垒垦些塞里产物量较少，条带比较模糊；Ｍ９２＋浓度在３．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１时条带清晰且稳定。
所以Ｍ９２＋浓度确定为３．０ｍｍｏｌ·Ｌ～。
图２Ｍｇ”浓度Ｘ｝ＳＳＲ．ＰｃＲ反应体系的影响Ｍ，代表ＤＧＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；１．０，１．５，２．０，２．５，３．０代表Ｍ９２＋浓度ｍｍｏｌ·Ｌ。
１从左到右引物分别为７４，７７，１８８。
Ｆｉｇ．２．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｒｉｅｓｏｆＭｇ‘’ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅＳＳＲａｎａｌｙｓｉｓＭ，ＲｅｐｒｅｓｅｎｔｆｏｒＤＧＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；１．０，１．５，２．０，２．５…３０ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｆｏｒｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＭｇ”ｍｍｏｌ。
利用RAPD、SSR及ISSR鉴定西葫芦种质资源亲缘关系的研究的开题报告
利用RAPD、SSR及ISSR鉴定西葫芦种质资源亲缘关系的研究的开题报告一、研究背景西葫芦属于葫芦科，是我国的重要蔬菜之一。
其果实肉质肥厚、口感鲜美，含有多种维生素和矿物质，是消费者较为喜爱的蔬菜之一。
因此，其品种选育及种质资源的鉴定和利用，对于推动我国蔬菜产业的发展和提高蔬菜品质具有重要意义。
RAPD、SSR和ISSR是基于DNA分子的PCR技术，可以用来快速识别遗传多样性和亲缘关系。
这些技术已广泛应用于植物遗传研究中。
二、研究目的本研究旨在利用RAPD、SSR和ISSR技术对不同西葫芦种质资源的遗传多样性和亲缘关系进行分析，为西葫芦种质资源的鉴定和选育提供信息基础。
三、研究内容1. 收集西葫芦种质资源，并进行形态特征分析。
2. 设计RAPD、SSR和ISSR引物，并进行PCR扩增。
3. 对扩增产物进行聚合物酶链式反应 (PCR) 产物的多态性分析。
4. 利用聚类分析等统计方法对不同种质资源进行遗传多样性和亲缘关系分析。
四、研究意义通过RAPD、SSR和ISSR技术鉴定西葫芦种质资源的亲缘关系，可以深入了解西葫芦的遗传背景，为种质资源的收集、保护、利用和管理提供依据。
同时，也可为西葫芦的品种改良和选育提供参考，加快新品种的推广和应用。
五、研究方法1. 材料：收集不同种类的西葫芦种质资源；2. 方法：通过形态特征、RAPD、SSR和ISSR技术对不同种质资源进行分析。
六、研究进度安排1. 前期调研和文献阅读：1个月。
2. 西葫芦种质资源的收集和形态特征分析：2个月。
3. RAPD、SSR及ISSR引物的设计和PCR扩增：3个月。
4. PCR产物的多态性分析及聚类分析：2个月。
5. 结论与论文撰写：1个月。
七、预期结果通过研究RAPD、SSR和ISSR在西葫芦遗传多样性研究中的应用，可以对不同西葫芦种质资源的遗传多样性和亲缘关系进行准确、科学的鉴定。
同时，也可以为西葫芦品种改良和资源利用提供参考，促进西葫芦产业的发展和蔬菜的优质化、高效化、可持续发展。
应用RAPD技术对香菇融合菌株进行遗传鉴定
应用RAPD技术对香菇融合菌株进行遗传鉴定
陈明杰;谭琦;汪昭月
【期刊名称】《食用菌学报》
【年(卷),期】1997(004)004
【摘要】本文应用ＲＡＰＤ技术与聚类分析方法，对香菇细胞融合菌株Ｆ及亲本Ｓ１、４６５进行遗传分析。
根据ＤＮＡ扩增的指纹图谱，估算融合子与亲本的ＤＮＡ相似系数并构建遗传相关性聚类图。
结果表明，ＲＡＰＤ技术与聚类分析方法可应用于香菇细胞融合菌株的遗传鉴定。
【总页数】4页(P17-20)
【作者】陈明杰;谭琦;汪昭月
【作者单位】上海市农业学院食用菌研究所;上海市农业学院食用菌研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S646.210.3
【相关文献】
1.利用RAPD技术对拟青霉属菌株进行分类鉴定 [J], 黄勃;于春秀;陈晓琳;樊美珍;李增智
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3.应用拮抗、ITS和RAPD技术进行香菇属菌株分类 [J], 王锦锋;张健;林占熺
4.应用性遗传模式选育香菇优良菌株——中香68杂交菌株选育报告 [J], 黄秀治;罗凤来;蔡衍山
5.利用RAPD技术对不同地区的有害疣孢霉菌株进行遗传分析 [J], 谭琦
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番茄煤霉病生防融合子基因组RAP D分析鉴定张蓓蓓,吕淑霞3,肖 冰(沈阳农业大学生物科学技术学院,辽宁沈阳 110161)摘 要 RAP D分子标记以其快速、简便等优点,克服了传统的标记手段和形态分类学的缺点,在亲本和杂交种的鉴别以及在基因克隆与分离和遗传图谱的建立等研究中都起着重要的作用。
以番茄煤霉病生防菌株木霉菌T223和链霉菌A的融合子为实验材料,比较和研究了真菌融合子基因组DNA的提取。
并用20个随机引物对亲本及其融合子进行RAP D分析。
结果表明,S DS2CT AB法提取的基因组DNA OD260/OD280为1.909, DNA浓度约为42.0ng/μL,可以满足分子生物学实验的需要;融合子是双亲融合的产物,但从双亲获得的遗传信息不等,融合子在DNA水平上更接近链霉菌。
关键词 RAP D分析;融合子;基因组DNA提取;木霉菌中图分类号 Q75 文献标识码 A 文章编号 1005-7021(2007)04-0035-05 RAPD Ana lysis and Study of B i ocon trol eff i cacy on Fus an tsaga i n st To ma to Cercospora leaf m oldZHANG Bei2bei,LU Shu2xia,X I A O B ing(College of B ioscience and Technology Shenyang Agricultural U niversity Shenyang110161)Abstract RAP D molecular marker was widely app lied t o the studies of s pecies and parental strain identificati on,ge2 netic diversity,gene cl one,gene is olati on and the constructi on of gene linkage map due t o its rap idity,si m p licity and econo my.Pr ot op last fusants were conducted fr om the strain of S treptonyce A and the strain of Trichoder m a harzianum T223.I n the study,three methods were used t o extract g DNA of fusants in order t o find the best method of DNA ex2 tracti on.The results showed that S DS2CT AB method was fit f or extracting g DNA of fusants and the extracti on could be directly used in RAP D2PCR a mp lificati on without any further purificati on.The OD260/OD280value of the DNA is 1.909,concentrati on of the DNA is42.0ng/μL.The result illustrated thatmolecular bi ol ogical evidence of p r ot op last fusi on was obtained in bi ocontr ol fungi by RAP D method in this experi m ent f or the first ti m e,we suggested that RAP D molecular marker is a valuable genetic marker f or fungi study.Keywords RAP D Analysis;Pr ot op last fusants;extracti on methods of g DNA;Trichoder ma 番茄煤霉病(Tomat o Cercos pora leaf mold)为番茄上的一种真菌病害,近年来在保护地番茄生产中发病率有上升的趋势,该病原菌为番茄煤污尾孢霉(Cercos pora fuligenae Rold)[1]。
随着人们对食品安全要求的提高和对环境保护认识的加强,发展和应用低毒、高效、无残留的生物农药已成为一种趋势。
采用木霉菌(Trichoder m a)作为生物农药已逐渐用于蔬菜及水果的病害防治,是国内外植物病害生防制剂中应用得较多的一种[2]。
另一种研究较深入的生防菌—链霉菌,在目前的病虫害防治中也取得较好的效果。
为了得到理想的生防菌株,本实验室以具有高产抗生素能力的链霉菌菌株A和竞争作用强的哈茨木霉菌T223为出发菌株,通过原生质体融合技术实现了远缘 收稿日期:2007-03-05 作者简介:张蓓蓓 女,硕士。
研究方向为微生物生物化学与分子生物学。
基金项目:辽宁省科学技术基金博士启动基金项目(20021042) 3通讯作者53微生物学杂志 2007年7月第27卷4期 JOURNAL OF M I CROB I O LOGY July2007Vol.27No.4菌株属间原生质体的融合,得到了性状优良的高抗性生防融合子[3]。
为了对菌株进行分子生物学方面的研究,本文探索了一种快速、高效的适合融合真菌基因组DNA的提取方法,优化了RAP D 反应体系,比较了亲本菌株的种属差异,并试图用RAP D方法对融合子进行分子水平的鉴定,以探讨体细胞杂交后的基因重组规律,为基因工程育种工作中的基因定位和分子克隆提供可靠的分子标记依据。
RAP D最初是由W illia m s[4]和W elsh[5]两个研究小组发展起来的,至今已被广泛应用于生物学各个领域,但仅多见于植物和食用真菌[6～9]多样性分析的研究,在生防菌鉴定中的的应用,尚少见报道。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试菌株及来源 链霉菌菌株A Strep t o2 myce A(属龟裂链霉菌的一个变种),初步鉴定为金色类群[10],为本实验室保存菌种,以下简称L2 A;哈茨木霉菌T223(Trichoder m a ha rzianum,T2 23),由沈阳农业大学生物农药工程中心提供,以下简称T223;链霉菌菌株A和木霉菌T223通过属间原生质体融合得到的融合子F1、F2、F3、F4、F5、F6,为本实验室保存菌种。
1.1.2 培养基 P DA(马铃薯浸汁固体培养基); P DB(马铃薯浸浸汁液体培养基);链霉菌菌丝培养基:牛肉膏3g,蛋白胨5g,葡萄糖10g, NaCl5g,蔗糖250g,蒸馏水1000mL,pH7.2。
1.1.3 主要试剂 CT AB(十六烷基三甲基溴化铵,分析纯)、S DS(十二烷基磺酸钠)、氯化苄(PhCH2Cl,分析纯);琼脂糖(美国BB I公司); PCR相关试剂购自宝生物工程(大连)有限公司; 10碱基引物OP A201～20为美国Oper on公司随机引物,由宝生物工程(大连)有限公司合成; Marker200bp DNA Ladder购自TI A NGEN公司。
1.2 方法1.2.1 菌丝的获得 菌种接种于液体培养基中, 28℃振荡培养48～72h,延长培养时间有助于菌丝得率,但极易产生大量色素。
融合子和亲本的发酵液用布氏漏斗真空抽滤,分别依次用无菌生理盐水、蒸馏水各洗涤1次,得到干净的菌丝体。
加入液氮快速将菌丝研磨成干粉,于-20℃保存备用。
1.2.2 基因组DNA的提取方法和比较 ①S DS2 CT AB法[11]:每25mg菌丝干粉加入500μL提取缓冲液(5mmol/L Tris2HCl,pH8.0;150 mmol/L NaCl;100mmol/L EDT A)混匀;加入50μL10%的S DS,37℃温育1h;加入75μL5mol/L NaCl和65μL CT AB/NaCl(10% CT AB/0.7mol/L NaCl)溶液,65℃温育20m in;等体积酚氯仿抽提2次,13000r/m in离心10m in;取上清,异丙醇沉淀DNA,13000r/m in 离心10m in,弃上清;乙醇洗涤沉淀,TE缓冲液回溶保存;②改进CT AB法[12,13]。
每25mg菌丝粉末加入100μL预热的22巯基乙醇(2%体积比)/ CT AB抽提液,混匀,65℃保温45～60m in;等体积酚¬氯仿¬异戊醇(25¬24¬1)抽提,10000～13000r/m in离心20～30m in;取上清;冰冷的异丙醇沉淀,4℃放置20m in,10000r/m in离心10m in;去上清,70%乙醇洗涤沉淀,用适量TE缓冲液回溶;加入等体积冰预冷的5mol/L L i Cl, 10000r/m in离心10m in;取上清,冰冷的异丙醇沉淀,4℃放置20m in,10000r/m in离心10m in;70%乙醇洗涤沉淀,TE缓冲液回溶保存;③氯化苄法[14]:每25mg菌丝体加125μL提取液(100mmol/L Tris2HCl,pH9.0,40mmol/L E DT A,pH8.0),混匀;加入25μL10%S DS、75μL氯化苄,剧烈振荡至乳状,50℃保温1h,每10m in振荡1次;加入75μL3mol/L Na Ac (pH5.2)混匀,冰水浴15m in,6000r/m in4℃离心15m in;取上清,加入等体积异丙醇室温沉淀20m in;10000r/m in离心15m in,沉淀用70%乙醇洗1次,吹干后溶于TE缓冲液保存;④L2A的DNA提取:亲本L2A的DNA提取参照徐平[15]的放线菌基因组DNA提取法;⑤三种方法提取的基因组DNA比较:a.纯度的检测:将提取的DNA样品适当稀释后,紫外分光光度计法检验DNA的纯度;b.浓度的检测:用λDNA(购自宝生物工程大连有限公司)作标准,稀释成不同的浓度20、30、50ng/μL,琼脂糖凝胶电泳法(0.8%)检测DNA浓度。
1.2.3 DNA的纯化 用RNA酶(10μL/mL)处理,37℃温育30m in,并对样品进行稀释,使其终浓度为20～30ng/μL。
63 微 生 物 学 杂 志 27卷1.2.4 RAP D 扩增 ①反应体系:反应体积为25μL,Taq 酶1U (宝生物);1×PCR buffer;d NTP 20μmol/L;引物0.3μmol/L;MgCl 21.5mmol/L;模板DNA 20～30ng;②扩增程序[16]:94℃预变性5m in,92℃变性1m in,36℃退火1m in,72℃延伸2m in,共进行45个循环,最后72℃保温10m in,终止温度为4℃,每一引物均设阴性对照;③PCR 扩增产物:在1×T BE 电泳缓冲体系中,用1.5%的琼脂糖凝胶电泳分离DNA 扩增片段,以Marker 为分子量对照,80V 稳压电泳90m in,在紫外凝胶成像仪上观察并照相。