转基因相关药品配制
植物生物学试验有关试剂配制
植物生物学试验有关试剂配制组织培养实验有关试剂的配制：1升储备液用量每升培养基取用量（mg）（ml） 20*储备液1（大量元素）NH4NO3 KNO3 33000 CaCl2.2H2O 38000 50 MgSO4.7H2O 8800 KH2PO4 7400 3400 200*储备液2（微量元素） KI H3BO3 166 MnSO4.4H2O 1240 ZnSO4.7H2O 4460 5 Na2MoO4.2H2O 1720 CuSO4.5H2O 50 CoCl2.6H2O 5 5 200*储备液3（铁盐）FeSO4.7H2O 5560 5 Na2.EDTA.2H2O 7460 200*储备液4（有机成分）肌醇烟酸20000 盐酸吡哆醇 100 5 盐酸硫胺素 100 甘氨酸 20 400 次氯酸纳消毒液：取30ml次氯酸纳溶液，用蒸馏水定容至100ml。
现配现用。
75%的酒精：75ml的95%的酒精加水定容至95ml。
0.2％的升汞溶液：称取HgCl2 20克，加蒸馏水至4000ml。
1N 盐酸：取8.25ml的浓盐酸，加蒸馏水定容至100ml。
1N NaOH：称8g NaOH，用蒸馏水定容至200ml。
0.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。
0.1mg/ml 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250ml。
MS培养基储备液的配制成分遗传转化与GUS基因检测的试剂配制LB培养基的配制：将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨酵母提取物氯化钠10g 5g 10g 如果需要用1N NaOH（10～15ml）调整pH至7.0，再补足水至1L10ml 的10mmol/l的AS（乙酰丁香酮）母液（100x）配制：称19.6mg的AS，先溶于少量甲醇中，然后慢慢加蒸馏水定容至10ml，过滤除菌，分装成200ul/管（每组1管），使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。
医学实验技术用到的试剂配制方法
实验中用到的试剂配方
一、WB实验
1.电转液（PH=8.3）
甘氨酸 14.5g
Tris 2.9g
甲醇 200ml
蒸馏水至 1000ml
先用蒸馏水溶甘氨酸，最后加甲醇，室温保存，2-3次可用，最好4度保存，可配制成2x转移缓冲液，稀释后可用。
2.TBS缓冲液
1mol/L Tris-HCL （PH=7.5） 10ml
NaCl 8.8g
蒸馏水至 1000ml
可配制成10x转移缓冲液，稀释后可用。
3.TBST缓冲液
20%Tween 1.65ml
TBS 700ml
混匀后即可使用，最好现用现配。
二、免疫染色相关实验
5.多聚甲醛溶液（4%）
多聚甲醛 40g
1×PBS 定容至1L
6.柠檬酸盐抗原修复液（1×）
柠檬酸三钠 3g
柠檬酸 0.4g
dH2O 定容至1L
PH调至6.0
7.盐酸酒精（1%）
浓盐酸 2.5ml
75%乙醇定容至250ml
8.氨水（1%）
氢氧化铵 2.5ml
dH2O 定容至250ml
三、其他
4.红细胞裂解液
NH4CL 2g
KHCO3 0.25g
ddH2O 250ml
0.5M EDTA 250ul
最后用除菌过滤器过滤，待用。
CTAB法大量提取水稻DNA
实验步骤
1)将3g黄化苗材料在液氮中磨碎
2)加入18ml预热的CTAB，65℃水浴，1h，每5min摇匀一次
3)10000rpm/min离心7min，回收上清液16ml，弃去沉淀
4)加入25:24:1 16ml，上下颠倒几次，静置10min（可用24：1替代）
5)12000rpm/min离心10min，小心吸取上清14ml
6)加入24:1 14ml，上下颠倒几次，静置10min
7)12000rpm/min离心10min，小心吸取上清13ml
8)加入1/10上清体积的3Mol/LNaAC，1-2倍上清体积的-20℃无水乙醇，-20℃静置1h
9)轻轻振荡晃动管子，使DNA缠绕在一起，用干净的针头将絮状DNA挑入1.5ml EP管，加入70%乙醇洗涤几次至DNA白色
CTAB法大量提取水稻DNA
药品配制
1.CTAB配制
药品名
终浓度
CTAB
2%（V）
NaCl
1.4Mol/L
EDTA
0.02Mol/L
TrisBasic
0.1Mol/L
pH=8.0
2.NaAC3Mol/LpH5.2
3.氯仿：异戊醇=24:1
4.Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1
5.70%乙醇
转基因遗传体系建立的步骤
第一步植物取材1.实验准备：培养基：MS+6-BA1.0+IAA0.5+3%Su+0.6%Ag (PH调至6.0) 培养皿（每皿含滤纸4张）2.实验步骤：取出半夏，用解剖刀、镊子等处理，得到叶柄、叶片及块茎。
将它们分开培养。
注意：叶柄长度约为1~1.5cm，块茎切片厚约1mm，叶片四周切出切口。
第二步摇菌1.实验准备：YEB液体培养基（500ml）配置每升培养基，应在900ml去离子水中加入：蛋白胨5g酵母抽提物1g牛肉浸膏5gMgS O4.7H2O 0.493g 调PH至7.0左右，去离子水补至1000ml后分装，高压灭菌卡那霉素（Km）储藏浓度50mg/ml 培养基浓度50ug/ml 利福平（Rif）储藏浓度50mg/ml 培养基浓度50ug/ml 2.试验步骤：1）向YEB液体培养基中加入Rif和Km，使其在培养基中的浓度为50ug/ml，摇匀后分装至小三角瓶中，约25ml//瓶。
2）取出已处于对数期的农杆菌，吸取1ml菌液加入YEB内，然后放在160r的摇床上，设定时间为99h3）培养36h后，菌体处于生长对数期，取1ml做为保留的菌种。
第三步36h后侵染1.实验准备：50ml离心管、1.5ml离心管、无纸培养皿、培养皿（一个皿中含很多滤纸）、无菌水、MS固体培养基、甘油（须灭菌）MS液体培养基：MS+6-BA1.0+IAA0.5+3%Su PH调至6.0乙酰丁香酮（配方：先用DMSO溶解，再加等体积的无菌水，过滤除菌，配成10mg/ml。
DMSO：二甲基亚砜）2.实验步骤：1）保留菌种将细菌过夜培养物在无菌条件下分装于1.5ml灭菌离心管中，每管700ul，然后加入300ul 50%的无菌甘油，颠倒混匀，写好日期和菌种名，液氮速冻后-70℃长期保存。
2）离心将摇至对数期的菌液倒入50ml的离心管内，于5000r/min离心6~8min。
同时倒平板（含Km、Rif各50ug/ml,乙酰丁香酮80ug/ml）3）悬浮将离心管内的上清液去掉，加入MS液至50ml 悬浮，吸取10ml至空离心管中，稀释5倍，测其吸光值，一般OD 值达到0.5时为宜。
水稻转基因实验技术手册
水稻转基因实验技术手册遗传工程实验室Genetic Engineering Laboratory Discipline of Crop Genetics and BreedingFujian agricultural and Forestry University目录第一章DNA提取与纯化第二章引物设计与PCR第三章感受态细胞制备与转化（E. coli & 农杆菌）第四章电泳技术、琼脂糖凝胶DNA回收第五章质粒回收第六章RT-PCR第七章构建载体互补实验过量表达GFPGUSRNAi第八章水稻组织培养第九章原位杂交第十章石蜡切片技术第十一章扫描电子显微镜附录：第一章SDS-DNA微量提取法1、取新鲜叶片5cm 左右于1.5ml 离心管中，加入液氮研磨（电钻）。
2、加入700μl 预热至65℃的SDS 抽提液，迅速搅匀后置于65℃水浴30min 。
3、加入200μl 5M KAc ，颠倒混匀，-20℃冰浴30min 后，10,000rpm 离心5min ，将上清夜倒入另一新的1.5ml 离心管中。
注：若溶液中仍有植物组织，可进行二次离心。
4、加入等体积的异丙醇（700 μl ），-20℃冰浴30min ，11,000rpm 离心5min 。
5、弃上清，加入70%乙醇清洗液晾干。
6、将风干的DNA 溶于100 μl TE 溶液中，55℃水浴溶解1h ，再室温放置1d 。
实验准备：溶液配制：SDS-抽提液：1M Tris-HCl ：100ml 5M NaCl ：100ml 0.5M EDTA ：100ml 10% SDS ：125mlTE （pH8.0）：1M Tris-HCl （pH8.0）：5ml 0.5M EDTA （pH8.0）：1ml第二章 PCR定容至1000ml定容至500mlPrimeSTAR HS DNA Polymerase with GC Buffer & TaKaRa LA Taq with GC BufferPCR体系和程序第四章琼脂糖凝胶DNA回收*第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇1、在长波紫外下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽力切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。
水稻转基因实验操作手册整理解析
水稻转基因实验操作一、水稻愈伤组织的诱导（以水稻成熟胚为试材诱导愈伤组织）1．消毒：取水稻成熟种子，人工或者机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子，按以下步骤消毒：1）将种子放入100ml无菌三角瓶中，倒入70%酒精消毒1分钟；2）倒去酒精，加入100ml 3 %次氯酸钠（NaClO）溶液（次氯酸钠：水（V/V）=9:21），放入摇床振荡60分钟；3) 倒去次氯酸钠溶液，用无菌蒸馏水清洗种子4-5遍，最后一遍浸泡30分钟。
2．诱导与继代培养：（以下步骤需无菌操作）1）种子放在无菌滤纸上吸干，置成熟胚于诱导培养基中，每皿10颗；2）操作完毕用封口膜封好培养皿，在26℃培养箱，（光）暗培养10-15天；3）在超净工作台上打开培养皿，用镊子挑取自然散落的胚性愈伤组织（淡黄色，致密呈球状），在26℃光（暗）培养箱，继代培养2周（继代两次）。
(没有脱落的可在原培养基上继续培养7天，次数多了效果会减弱)二、预培养将继代两次的状态较好的愈伤颗粒，接种到预培养基26℃暗培养4天。
预培养基碳源为20克蔗糖+20ml 50% 葡萄糖（115度灭菌30min）。
乙酰丁香酮（AS）浓度为100 μM (每毫升培养液中加入100 mM的AS 1微升)三、农杆菌（工程菌）培养把-70℃保存的菌种首先用含125 mg/L壮观霉素、50 mg/L利福平的YEB液体培养基，在26-28℃，150 r/min振荡培养16-18 h，活化转入打靶载体的农杆菌。
在预培养的第2天，用含125 mg/L壮观霉素、50 mg/L利福平的YEB固体培养基划线接种农杆菌菌株，28 ℃静止培养2-3 d。
3 d后将单菌落农杆菌刮入农杆菌悬浮液体培养基或者AAM培养基，28 ℃振荡培养3～4 h。
分光光度计测定菌液浓度，并将其浓度调至0.5-1.0 OD600四、感菌与共培养1）将预培养后的愈伤组织接入100 mL三角瓶,中，加入调制好的农杆菌悬浮液侵染30分钟，期间摇动数次；2）倒去菌液，将愈伤组织取出，置于无菌的滤纸上吸干表面菌液（30-40分钟）；3）将愈伤组织置于共培养基上(共培养基上面垫上一层9cm无菌滤纸)。
水稻转基因方法及培养基配放个
根癌农杆菌介导的转化方法将水稻成熟种子去壳。
仔细剔除有霉菌点籽粒，取饱满清亮籽粒先用７０％乙醇浸泡（表面消毒）1min ，再用含2%活性氯含量的NaClO溶液（加1-3滴Tween20）浸泡30min以上（最长可至1小时左右），并不断摇动，然后用无菌水冲洗4-5次；将灭菌后的成熟种子置于无菌滤纸上吸干多余水分，直接接种于N2D6培养基上，于24-26ｏC暗培养7-10 天，诱导出初生愈伤组织；将上述从成熟胚诱导的初生愈伤组织直接用于与农杆菌的共培养转化；农杆菌的准备是在含有50mg/mL km的LB 平板上划线，培养含有重组质粒的农杆菌，28ｏC培养36h。
挑取活化的单个农杆菌菌落，在28ｏC于3mL 含km 的LB培养基中振荡培养过夜，第2天按1.5/50（V/V）接种量在AB液体培养基中培养，培养程度以稍早于生长对数期为宜（OD600约为0.6-0.8 ）。
离心回收新鲜培养的农杆菌，并重悬于约1/2-1/3体积的AAM（含100-400mol·L-1乙酰丁香酮）液体培养基中，至OD600约为0.8-1.0左右为宜；将愈伤组织切下，立即投入含农杆菌的AAM重悬液中，浸泡15-20分钟，并不断摇动。
将感染后的愈伤组织置于无菌滤纸上吸干多余的菌液，转入共培养基N6D2C上培养3天（26ｏC，暗培养）。
转入筛选培养基N6D2S1上与24-26ｏC 暗培养条件下筛选2周。
新鲜长出的抗性愈伤组织或不褐化的愈伤组织转入筛选培养基N6D2S2上，继续筛选培养2次，每次2周。
将抗性愈伤组织转入MSPR培养基上进行预分化处理14天，其中先在暗条件下培养7天，然后转入光条件下培养7天；经预分化处理的愈伤组织转入MSR培养基分化再生，在光下培养；再生的小苗在1/2MS0培养基上生根壮苗。
农杆菌介导转化水稻所用培养基-1-1 626蔗糖，2mg·L-1 2,4-D, 2.5g·L-1Phytagel( sigma) ,pH5.8N6D2S1N6D2，25mg·L-1潮霉素B（Roche），500mg·L-1头孢霉素（cefotaxime）N6D2S2N6D2，50mg·L-1潮霉素B，300mg/mL头孢霉素2424442 150mg·L-1KCl, 10mg·L-1CaCl2, 2.5mg·L-1FeSO4·7H2O, 5g·L-1葡萄糖，pH7.0AAM AA（Toriyama和Hinata，1985）盐分和氨基酸，MS（Murashige和Skoog 1962）维生素，0.5g·L-1酪蛋白水解物，36g·L-1葡萄糖，68.5g·L-1蔗糖，100-400µmol·L-1乙酰丁香酮，pH5.2N6D2C N6D2, 10g·L-1葡萄糖，100-400µmol·L-1乙酰丁香酮（用时现加），pH5.2预分化与分化再生MSPR MS（Murashige和Shog，1962）盐分和维生素，0.5g·L-1酪蛋白水解物，50g·L-1蔗糖，2mg·L-16-BA，1mg·L-1NAA, 5mg·L-1ABA ，3.0g·L-1Phytagel, pH 5.8，50mg·L-1潮霉素B，200mg·L-1头孢霉素。
生物实验中常用的化学试剂配制方法
生物实验中常用的化学试剂配制方法1．乳酸苯酚固定液乳酸10g, 结晶苯酚10g, 甘油20g, 蒸馏水10mL。
2. 1.6%溴甲酚紫溴甲酚紫1.6g溶于100mL乙醇中，贮存于棕色瓶中保存备用。
用作培养基指示剂时，每1000mL培养基中参加lmL 1.6%溴甲酚紫即可。
3. V.P.试剂CuSO4 1g，蒸馏水l0mL，浓氨水40mL，10% NaOH 950mL。
先将CuSO4溶于蒸馏水中，然后加浓氨水，最后参加10%NaOH。
4. 0.02%甲基红试剂甲基红0.1g，95% 乙醇760mL，蒸馏水100mL。
5. 吲哚反响试剂对二甲基氨基苯甲醛8g, 95%乙醇760mL，浓HCl160mL。
6. Alsever’s血细胞保存液葡萄糖2.05g, 柠橡酸钠0.8g, NaCl 0.42g，蒸馏水l00mL。
以上成分混匀后，微加温使其溶解后，用柠檬酸调节pH 6.1，分装于三角瓶中(30～50mL/瓶), 113℃湿热灭菌15min，备用。
7. Hank’s液(l)贮存液A 液：(I)NaCl80g, KCl4g, MgSO4·7H2O1g，MgCl2·6H2O1g，用双蒸馏水定容至450mL：(II)CaCl2 1.4g (或CaCl2·2H2O 1.85g) 用双蒸馏水定容至50mL。
将I和II液混合，加氯仿1mL即成A液。
(2)贮存液B液：Na2HPO4·12H2O 1.52g，KH2PO4 0.6g, 酚红0.2g, 葡萄糖10g,用双蒸馏水定容至500mL，然后加氯仿1mL，酚红应先置研钵内磨细，然后按配方顺序一一溶解。
(3)应用液：取上述贮存液的A和B液各25mL，加双蒸馏水定容至450mL，113℃湿热灭菌20min。
置4℃下保存。
使用前用无菌的3% NaHCO3调至所需pH。
注意：药品必须全部用A.R试剂，并按配方顺序参加，用适量双蒸馏水溶解，待前一种药品完全溶解后再参加后一种药品，最后补足水到总量。
核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法
核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法20×SSC20×SSPE Buffer50×Denhardt’s溶液■组份浓度 3.0 M NaCl，0.3 M 柠檬酸钠■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
NaCl 175.3 g柠檬酸钠·2H2O 88.2 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加14 N HCl，调节pH值至7.0后，加去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
■组份浓度 3.0 M NaCl，0.2 M NaH2PO4，0.02 M EDTA■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
NaCl 175.3 gNaH2PO4·H2O 27.6 gNa2EDTA·2H2O 7.4 g2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 加NaOH调节pH值至7.4（约6.5 ml的10 N NaOH）。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
■组份浓度1%（W/V） Ficoll 4001%（W/V） Polyvinylpyrrolidone1%（W/V） BSA■配制量 500 ml■配制方法 1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
Ficoll 400 5 gPolyvinylpyrrolidone 5 gBSA 5 g2. 加去离子水约400 ml，充分搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。
4. 用0.45 μm滤器过滤后，分装成每份25 ml。
5. -20℃保存。
0.5 M磷酸盐BufferSalmon DNA (鲑鱼精DNA)DNA变性缓冲液■组份浓度 0.5 M Na2HPO4■配制量 1 L■配制方法 1. 称量134 g Na2HPO4·7H2O置于1 L烧杯中。
DNA提取药品配置方法
药品配置方法
1. 3Mol/L NaAc PH=5.2
①40.8g NaoAc·3H2O 置于100-200ml烧杯中，加入40ml去离子水搅拌溶解；
②加入冰醋酸调节PH置5.2；
③加去离子水定容到100ml；
④高温高压灭菌，室温保存。
2. 5 Mol/L NaCl
①称292.2g NaCl于一升烧杯中，加入8ml去离子水后搅拌溶解；
②加去离子水定容到1L；
③高温高压灭菌，4℃保存。
3. 10% SDS（W/V）
①称10g SDS（十二烷基硫酸钠）于100-200ml烧杯中，加入80ml去离子水，68℃加热溶解；
②滴加浓盐酸PH调节7.2；
③定容到100ml，室温保存。
4. 0.5M EDTA PH=8.0
①称186.1g Na2EDTA.2H2O,于1L烧杯中；
②加入约800ml去离子水，充分搅拌；
③NaoH调节PH至8.0（约20g NaoH）（PH=8.0时EDTA才能完全溶解）；
④加入去离子水定容到1L；
⑤高温高压灭菌后分装；
⑥室温保存。
5. 1 M Tris Hcl PH=8.0
①称121.1g Tris 于一升烧杯中；
②加800ml去离子水，充分搅拌溶解；
③加入浓Hcl调节到PH；
④定容1L；
⑤灭菌，室温保存。
6.TE
10mmol/L Tris Hcl （PH=8.0） 1mmol/L EDTA （PH=8.0）
7.TAE 50X
242g Tris碱、57.1ml冰乙酸、100ml 0.5Mol/L EDTA （PH=8.0）、1000ml去离子水。
注射用P-转移因子所用试液配制操作规程
注射用P-转移因子所用试液配制操作规程目的：建立注射用P-转移因子所用试液配制标准操作规程，保证检验结果的准确性。
2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部辽宁省药品标准3.范围：本标准适用于注射用P-转移因子所用的试液。
4.职责：QC室主任、配制人、复核人对本标准的实施负责。
5. 程序：5.1. 各种试液名称及配制规程：5.1.1. 20%磺基水杨酸溶液：取20g磺基水杨酸加水使溶解成100ml，即得。
5.1.2. 无钙镁汉格氏（Hanks）储备液：取0.3%磷酸二氢钾(KH2PO4) 溶液40ml，0.76%磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)40ml，2%氯化钾溶液40ml，20%氯化钠溶液80ml及葡萄糖2g，用水稀释至1000ml，并用3.5%碳酸氢钠溶液调pH至7.20~7.25，即得。
5.1.3. 汉格氏溶液：取无钙镁汉格氏储备液稀释一倍,调pH至7.20~7.25即得（临用时配制）。
5.1.4. 磷酸盐缓冲液(PBS)：取氯化钠17.0g，磷酸二氢钾0.27g,磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)2.86g,用水溶解成200ml 备用，临用时取此液50ml，加水稀释至500ml，调pH至7.1~7.2。
5.1.5. 肝素溶液：取肝素钠用PBS 液配成每1ml约含65单位，即得。
5.1.6. 阿氏（Alsevers）液：取氯化钠4.2g，枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H2O）7.66g，枸橼酸（C6H8O7·H2O）0.55g，葡萄糖（C6H12O6·H2O）20.5g，加水溶解至1000ml，分装、灭菌，即得。
5.1.7. 固定液：取25%戊二醛溶液，35%碳酸氢钠溶液及汉格氏溶液，依次按1:1:38的比例混合，即得（临用时配制）。
5.1.8. 姬姆萨储备液：取姬姆萨染料0.5g，置研钵中加甘油33ml，研磨，在55~60℃水浴中不断搅拌二小时使其溶解，再加不含丙桐的甲醇33ml，混匀即成储备液。
植物转基因常用培养基配方
MS培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。
MS培养基的配制包括以下步骤。
培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。
这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。
现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。
大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
基因定位实验各种试剂介绍和配制方法
丙烯酰胺英文名:Acrylamide 分子式:CH2=CHCONH2分子量: 71.08丙烯酰胺是一种不饱和酰胺，别名AM，其单体为无色透明片状结晶，沸点125℃(3325Pa)，熔点84~85℃，密度1．122g/cm3。
能溶于水、乙醇、乙醚、丙酮、氯仿，不溶于苯及庚烷中，在酸碱环境中可水解成丙烯酸。
丙烯酰胺单体在室温下很稳定，但当处于熔点或以上温度、氧化条件以及在紫外线的作用下很容易发生聚合反应。
当加热使其溶解时，丙烯酰胺释放出强烈的腐蚀性气体和氮的氧化物类化合物。
一、丙烯酰胺的合成1. 硫酸水合法丙烯腈和水在硫酸存在下水解成丙烯酰胺的硫酸盐，然后用液氨中和生成丙烯酰胺和硫酸铵：CH2＝CHCN+H2O+H2SO4——CH2＝CHCONH2·H2SO4CH2＝CHCONH2·H2SO4+2NH3——CH2＝CHCONH2+(NH4)2SO4此法的缺点是副产大量价值低廉、肥效不高的硫酸铵，又存在严重的硫酸腐蚀和污染等问题。
2. 催化水合法丙烯腈与水在铜系催化剂的作用下，于70～120℃、0.4MPa压力下进行液相水合反应。
CH2＝CH-CN+H2O→CH2＝CHCONH2反应后滤去催化剂，回收未反应的丙烯腈，丙烯酰胺水溶液经浓缩、冷却得丙烯酰胺结晶。
该法工艺流程简单，丙烯酰胺的选择性和收率可达98％以上。
二、丙烯酰胺毒性1. 急性毒性急性毒性试验结果表明，大鼠、小鼠、豚鼠和兔的丙烯酰胺经口LD50为150-180 mg/kg，属中等毒性物质。
2. 神经毒性和生殖发育毒性大量的动物试验研究表明丙烯酰胺主要引起神经毒性；此外，为生殖、发育毒性。
神经毒性作用主要为周围神经退行性变化和脑中涉及学习、记忆和其他认知功能部位的退行性变；生殖毒性作用表现为雄性大鼠精子数目和活力下降及形态改变和生育能力下降。
3. 遗传毒性丙烯酰胺在体内和体外试验均表现有致突变作用，可引起哺乳动物体细胞和生殖细胞的基因突变和染色体异常，如微核形成、姐妹染色单体交换、多倍体、非整倍体和其他有丝分裂异常等，显性致死试验阳性。
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转基因相关药品配制stock solution●MSmax stock solution（10×）NH4NO316.5gKNO319gKH2PO4 1.7gMgSO4·7H2O 3.7gCaCl2·2H2O 4.4g or CaCl2 3.32gDissolve them one by one .Then add H2O to1000ml.●MSmin stock solution (100×)KI 0.083gH3BO30.62gMnSO4·4H2O 2.23g or MnSO4·H2O 1.69gZnSO4·7H2O 0.86gNa2MoO4·2H2O 0.025gCuSO4·5H2O 0.0025gCoCl2·6H2O 0.0025gNote：Na2MoO4must be dissolve independently and then mix with the other composition .Add H2O to 1000ml and store at room temperature.●N6max stock solution（10×）KNO3 28.3gKH2PO4 4g(NH4)2SO4 4.63gMgSO4·7H2O 1.85gCaCl2·2H2O 1.66g or CaCl2 1.25gDissolve them one by one .Then add H2O to1000ml and store at room temperature.●N6min stock solution (100×)KI 0.08gH3BO3 0.16gMnSO4·4H2O 0.44g or MnSO4·H2O 0.3335gZnSO4·7H2O 0.15gAdd H2O to1000ml and store at room temperature.●Fe2+–EDTA stock solution (100×)2.78g FeSO4·7H2O in a bottle containing 300ml H2O，3.73g Na2EDTA·H2O in anther bottle containing 300ml H2O and heat to 70℃，after they both dissolved，mix together and keep at 70℃for 2 hours, then add H2O to1000ml and store at 4℃.●Vitamin stock solution (100×)Nicotinic 0.1gPyridoxine HCl（VB6）0.1gThiamine HC l（VB1）0.1gGlycine 0.2gInositol 10gAdd H2O to1000ml and store at 4℃.●AAmax stock solution（10×）KCl 29.5gNaH2PO4 1.5g or NaH2PO4·2H2O 1.95gMgSO4·7H2O 2.5gCaCl2·2H2O 1.5g or CaCl2 1.13gAdd H2O to1000ml and store at room temperature.●AAmin stock solution (100×)MnSO4·H2O 1gH3BO3 0.3gZnSO4·7H2O 0.2gKI 0.075gNa2MoO4·2H2O 0.025gCuSO4·5H2O` 0.0025gCoCl·6H2O 0.0025gNote：Na2MoO4must be dissolve independently and then mix with the other composition add H2O to 1000ml and store at room temperature.●A stock solution （10×）NH4NO3 16.5gKNO3 19gKH2PO4 1.7gMgSO4·7H2O 3.5gCaCl2 3gAdd H2O to1000ml and store at room temperature.●B stock solution (100×)MnSO4·H2O 10gH3BO3 3gZnSO4·7H2O 2gKI 0.75gNa2MoO4·2H2O 0.25gCuSO4·5H2O` 0.0389gCoCl·6H2O 0.025gNote：Na2MoO4must be dissolve independently and then mix with the other composition add H2O to 1000ml and store at room temperature.●2,4-D stock solution(1mg／ml)2,4-D 100mgAdd 1ml 1N KOH and shake for 5min ,and add 10ml H2O and shake till 2,4-D is dissolved ,then add H2O to100ml and store at 4℃.●6-BA stock solution(1mg／ml)6-BA 100mgAdd 1ml 1N KOH and shake till 6-BA is dissolved, then add H2O to100ml and store at 4℃.●KT stock solution(1mg／ml)KT 100mgAdd 1ml 1N KOH and shake till KT is dissolved, then add H2O to100ml and store at 4℃.●NAA stock solution(1mg／ml)NAA 100mgAdd 1ml 1N KOH and shake till NAA is dissolved, then add H2O to100ml and store at 4℃.●IAA stock solution(1mg／ml)IAA 100mgAdd 1ml 1N KOH and shake till IAA is dissolved, then add H2O to100ml and store at 4℃.●1N KOH stock solutionKOH 5.6gDissolve with 100ml H2O and store at room temperature.●100mM AS stock solutionAS 0.196gDMSO 10mlAliquot to1.5ml eppendorf tube and store at 4℃.●1N KOH stock solutionKOH 5.6gDissolved with 100mL H2O and store at room temperature.●50% Glucose stock solutionGlucose 50gDissolve with H2O to100ml，autoclave.MediumsNote：All mediums should be freshly prepared before use.●Induction medium (for japonica rice)N6max stock solution（10×）100mLN6min stock solution（100×）10mLFe2+–EDTA stock solution（100×）10mLVitamin stock solution（100×）10mL2,4-D stock solution 2.5mLProline 0.3gCasein Enzymatic Hydrolysate 0.6gSucrose 30gPhytagel 3gAdd H2O to 600-700mL and use 1N KOHadjust pH to 5.9. Boll and add H2O to 1000mL. Aliquot it to 50mL flask (25mL/flask). Seal with sealfilm and autoclave them.●Subculture medium (for japonica rice)N6max stock solution（10×）100mLN6min stock solution（100×）10mLFe2+-EDTA stock solution（100×）10mLVitamin stock solution（100×）10mL2,4-D stock solution 2.0mLProline 0.5gCasein Enzymatic Hydrolysate 0.6gSucrose 30gPhytagel 3gAdd H2O to 900mL and use 1N KOH,adjust pH to 5.9. Boll and add H2O to 1000mL. Aliquot it to 50mL flask (25mL/flask). Seal with sealfilm and autoclave them.●Precultivation medium (for japonica rice)N6max stock solution（10×）12.5mLN6min stock solution（100×） 1.25mLFe2+-EDTA stock solution（100×） 2.5mLVitamin stock solution（100×） 2.5mL2,4-D stock solution 0.75mLCasein Enzymatic Hydrolysate 0.15gSucrose 5gAgarose 1.75gAdd H2O to 250mL andadjust pH to 5.6 using by 1N KOH,seal with sealfilm and autoclave it.Before use ,melt the medium and add 5mL Glucose stock solution（50% Glucose stock solution autoclaved）and 250μL AS stock solution,then aliquot to plates（25mL medium per plate）●Cocultivation medium (for japonica rice)N6max stock solution（10×）12.5mLN6min stock solution（100×） 1.25mLFe2+-EDTA stock solution（100×） 2.5mLVitamin stock solution（100×） 2.5mL2,4-D stock solution 0.75mLCasein Enzymatic Hydrolysate 0.2gSucrose 5gAgarose 1.75gAdd H2O to 250mL adjust pH to 5.6 using by 1N KOH,seal with sealfilm and autoclave it. Before use ,melt the medium and add 5mL Glucose stock solution（50% Glucose stock solution autoclaved）and 250μL AS stock solution,then aliquot to plates（25mL medium per plate）.不用调●Agrobecterium suspension（100ml）N6max stock solution（10×）5mLN6min stock solution（100×）0.5mLFe2+-EDTA stock solution（100×）0.5mLVitamin stock solution（100×）1mL2,4-D stock solution 0.2mLCasein Enzymatic Hydrolysate 0.08gSucrose 2gAdd H2O to 100mL and adjust pH to 5.4 and aliquot to two 100mL bottle（50mL per bottle）.Seal with sealfilm and autoclave them.Before use add 1mL Glucose stock solution（50% Glucose stock solution autoclaved）（per 50mL）and 100μL AS stock solution（per 50mL）.●Selection medium (for japonica rice)N6max stock solution（10×）25mLN6min stock solution（100×） 2.5mLFe2+-EDTA stock solution（100×） 2.5mLVitamin stock solution（100×） 2.5mL2,4-D stock solution 0.625mLCasein Enzymatic Hydrolysate 0.15gSucrose 7.5gAgarose 1.75gAdd H2O to 250mL andadjust pH to 6.0；Seal with sealfilm and autoclave it. After autoclaved,add hygromycin 50μg/mL.5.20phBefore use,melt the medium and add 250μL Hn and add 500mg Cn per 1L，then aliquot to plates（25mL medium per plate）.●Prepegeneration medium (for japonica rice)MS max stock solution（10×）25mLMS min stock solution（100×） 2.5mLFe2+-EDTA stock solution（100×） 2.5mLVitamin stock solution（100×） 2.5mL6-BA stock solution 0.5mLKT stock solution 0.5mLNAA stock solution 50μLIAA stock solution 50μLCasein Enzymatic Hydrolysate 0.15gSucrose 7.5gAgarose 1.75gAdd H2O to 250mL andadjust pH to 5.9，seal with sealfilm and autoclave it. Before use,melt the medium and add 250μL Hn and 200ppm Cn（国产），then aliquot to plates （25mL medium per plate）.●Regeneration medium (for japonica rice)MS max stock solution（10×）100 mLMS min stock solution（100×）10 mLFe2+-EDTA stock solution（100×）10 mLVitamin stock solution（100×）10 mL6-BA stock solution 2 mLKT stock solution 2 mLNAA stock solution 0.2mLIAA stock solution 0.2mLCasein Enzymatic Hydrolysate 1 gSucrose 30 gPhytagel 3gAdd H2O to 1000mL and adjust pH to 6.0 using by 1N KOH，then boil them and aliquot them in 100mL flask（50mL medium per flask）.Seal with sealfilm and autoclave them. Add 500mg/L 头孢（国产）。