实验常用试剂,缓冲液的配制方法

实验常用试剂、缓冲液的配制方法

Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml

□组份浓度100mg/ml Ampicillin

□配制量50mL

□配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

Kan（卡那霉素）50mg/ml

□组分浓度50mg/ml卡那霉素

□配制量50mL

□配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。

2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。

3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml

□组份浓度24mg/L IPTG

□配制量50mL

□配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

X- Gal 20mg/m

□组份浓度20mg/L X-Gal

□配制量50mL

□配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。

2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解，

定容至50mL。

3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。

LB培养基

□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl

□配制量1L

□配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

Tryptone（胰化蛋白胨）10g

Yeast Extract（酵母提取物）5g

NaCl（氯化钠）10g

2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。

4.加去离子水定容至1L。

5.高温高压灭菌后，4℃保存。

注：1. LB固体培养基每100ml LB培养基加入1.5g琼脂粉。

2. 5N NaOH新配后溶液加入需要重新测定。

3.待培养基温度降至50℃时，以手不烫为准，按比例加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。

50×TAE Buffer (pH8.5)

□组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA

□配制量100m L

□配制方法 1.称量下列试剂，置于200mL烧杯中。

Tris 24.2 g

Na2EDTA·2H2O 3.72 g

2.向烧杯中加入约80 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加入5.71 ml的冰乙酸，充分搅拌。

4.加去离子水将溶液定容至100mL后，室温保存。

注：1xTAE的稀释（如500ml1xTAE即10mL 50xTAE稀释于490mL的去离子水）。

1％琼脂糖凝胶（核酸电泳用）

□组份浓度1％琼脂糖凝胶

□配制量100m L

□配制方法 1.称量1g琼脂糖置于200mL锥形瓶中。

2.加入100ml1×TAE Buffer，摇动混匀。

3.放入微波炉加热2min至琼脂糖完全溶化。

4.插入梳子，等温度降下来，倒胶。

1.M Tris-HCl

□组份浓度 1 M Tris-HCl（pH6.8）

□配制量100mL

□配置方法 1.称量12.11gTris 置于200mL 烧杯中。

2.加入约80mL 的去离子水，充分搅拌溶解。

3.加入11mL的浓盐酸。

4.定容至100mL，室温保存。

1.5M Tris-HCl

□组份浓度 1.5 M Tris-HCl（pH8.8）

□配制量100L

□配置方法 1.称取18.17gTris置于200mL烧杯中。

2. 加入约80mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调pH值至8.8。

4. 将溶液定容至100mL。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH 值。

5 N NaOH

□组份浓度5N NaOH

□配制量100mL

□配置方法 1. 量取80mL 去离子水置于100～200mL 塑料烧杯中

2. 称取20g NaOH 逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌以放热。

3. 待NaOH完全溶解后，定容至100mL。

4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

注：NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂。

2.5 N HCl

□组份浓度 2.5 N HCl

□配制量100mL

□配置方法 1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸

（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

25xPB Buffer

□组份浓度25xPB Buffer

□配制量100mL

□配制方法 1. 称量下列试剂，置于100 ML烧杯中。

Na2HPO4 (磷酸氢二钠) 2.74g

NaH2PO4（磷酸二氢钠）0.79g

2. 向烧杯中加入约80 ML去离子水，充分搅拌溶解。

3. 定容至100 ML。

1xPBS Buffer

□组份浓度1xPBS Buffer

□配制量100mL

□配制方法 1. 称量8.5g Nacl置于100 ML烧杯中。

2. 向烧杯中加入40 ML 25xPB Buffer搅拌溶解。

3. 滴加5N NaoH调节PH值至7.2，将溶液定容至1L.

4. 高温灭菌后，室温保存。

注：PBST的配制:1L 1xPBS加1ml吐温-20。

10%（W/V）过硫酸铵

□组分浓度10%（W/V）过硫酸铵

□配制量10mL

□配制方法 1.称取1g过硫酸铵；

2.加入10ml的去离子水后搅拌溶解，

3.贮存于4℃。

注：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。