空心莲子草正丁醇部位提取物对荷瘤小鼠血清细胞因子水平的影响

世界最新医学信息文摘 2016年 第16卷 第92期5·论著·空心莲子草正丁醇部位提取物对荷瘤小鼠血清细胞因子水平的影响黄莉，涂福平，叶建明，郭蒸，王祥财，廖家华，何苗（赣南医学院第一附属医院 肿瘤科，江西 赣州 341000）摘要：目的初步研究空心莲子草正丁醇部位提取物对荷瘤小鼠血清细胞因子水平的影响。

方法提取空心莲子草正丁醇部位，并构建小鼠肉瘤S180移植性肿瘤模型，采用灌胃方式给予空心莲子草正丁醇部位提取物治疗，治疗10d 后，眼眶取血，酶联免疫吸附测定法检测血清白介素-2（interleukin-2，IL-2）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、白介素-8（interleukin-8，IL-8）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。

结果空心莲子草正丁醇提取物能显著抑制小鼠肉瘤S180生长，各剂量实验组的平均瘤重显著轻于对照荷瘤组，差异具有统计学意义（P<0.05）。

并且能明显升高荷瘤小鼠血清中IL-2、IL-6、IL-12和TNF-α的水平。

结论空心莲子草正丁醇提取物有体内抗肿瘤活性，其抗肿瘤机制可能与升高机体细胞因子水平有关。

关键词：心莲子草；S180；细胞因子中图分类号：R749.053 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1671-3141.2016.92.002Effect of N-butanol Extract of Alternanthera Philoxeroides on Serum CytokineLevel of Tumor Bearing MiceHuang Li，Tu Fu-ping，Ye Jian-ming，Guo Zheng，Wang Xiang-cai，Liao Jia-hua，He Miao(Department of Oncology, Gannan Medical College the First Affiliated Hospital, Ganzhou, Jiangxi 341000) ABSTRACT：Objective carry on primary study of effect of N-butanol extract of alternanthera philoxeroides on serum cytokine level of tumor bearing mice. Methods extract N-butanol of alternanthera philoxeroides, and construct transplanted tumor model of mice sarcoma S180 and treat it with gavage of alternanthera philoxeroides n-butanol extract, after 10d treatment, draw orbital blood, detect serum interleukin-2 (IL-2), interleukin-6 (IL-6) and interleukin-8 (IL-8) and tumor necrosis factorα(TNF-α) level with enzyme-linked immunosorbent assay. Results alternanthera philoxeroides N-butanol extract could significantly inhibit growth of mice sarcoma S180, average tumor weight of each dosage experimental group was significantly lighter than control tumor group, difference showed statistical significance(P<0.05), and can significantly increase level of IL-2, IL-6, IL-12 and TNF-αin serum of tumor bearing mice. Conclusion alternanthera philoxeroides N-butanol extract has anti-tumor activity in vivo, and antitumor mechanism may be related to elevation of cytokines level.KEY WORDS：Alligator alternanthera；S180；Cytokine0　引言空心莲子草Alternanthera philoxeroides（Mart.） Griseb是苋科莲子草属多年生宿根草本植物，又名空心苋、螃蟆菊、水花生、喜旱莲子草、革命草等。

由于其具备极强繁殖能力，现已遍及我国20多个省、自治区和直辖市，生长于各类水体环境之中，对农作物生长和水上交通造成较大的危害。

但是其干燥全草，性寒、味苦；具有清热、凉血、解毒等功效；临床上用于治疗麻疹、流行性感冒、乙型脑炎、流行性出血热等病毒性疾患[1]。

空心莲子草提取物主要成分为植物甾醇类、黄酮类、三萜类、有机酸类等，其中黄酮类、三萜类等有效成分，已被证实具有抗流感病毒、乙肝病毒等多种病毒的作用[2]。

此外，研究证实空心莲子草的正丁醇提取物有效成分具备抗肿瘤药理活性。

方进波等[1]对空心莲子草的各提取部位的细胞毒筛选结果提示，各提取物均有较强的抑制癌细胞生长作用。

其中各单体化合物筛选结果表明大部分化合物具有明确的细胞毒作用。

目前针对空心莲子草的医学方面的研究主要是着重于抗病毒、肝损伤的防治等方面，关于抗肿瘤方面的研究相对较少。

本研究旨在探讨空心莲子草正丁醇提取物能否影响荷瘤小鼠免疫功能，能否提高肿瘤小鼠体内血清中相关细胞因子的水平进而起到抗肿瘤作用。

1　材料1.1　药品与试剂。

江西省赣州市郊采摘空心莲子草茎叶，经赣南医学院中医研究所鉴定为苋科植物空心莲子草；RPMI-1640 培养基（Sigma公司）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；DMSO（Sigma公司产品）；小鼠IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α ELISA试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供，其他试剂均为国产分析纯。

1.2　实验动物与瘤株。

SPF级昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重（20±2.0）g，由赣南医学院实验动物中心提供；瘤株：小鼠S180荷瘤细胞株，由南方医科大学医学院细胞中心提供。

2　方法2.1　样品的制备。

取空心莲子草水生干燥全草，切成一小段，以乙醇回流提取两次倍量，合并提取液，回收乙醇，浓缩至每浓缩液含生药，将空心莲子草干品（茎叶部分）500g，粉碎成粗粉，置渗媲桶内，加50%乙醇适量浸泡12h后，收集渗流液，回收乙醇后，加蒸馏水至500mL（200%，1mL相当于2g）。

浓缩液以正丁醇萃取，回收溶剂，得到正丁醇提取物。

装入100mL瓶中高压灭菌，备用。

2.2　小鼠S180荷瘤细胞混悬液制备。

选取腹腔接种S180荷瘤7d左右的荷瘤小鼠，所有操作均在超净工作台上完成，颈椎脱臼处死小鼠，局部消毒皮肤后抽取腹水，按1：l比例用生理盐水稀释，调整细胞数，制成S180荷瘤细胞混悬液备用。

2.3　模型的建立、分组及给药。

每只小鼠腋窝消毒后皮下注射基金项目：江西省卫计委中医药课题资助项目（2014A117）。

作者简介：黄莉，女，学历：在读博士，从事恶性肿瘤综合治疗研究。

World Latest Medicne Information (Electronic Version) 2016 Vo1.16 No.92 60．2mLS180荷瘤细胞混悬液。

接种成功后，随机分为生理盐水对照荷瘤组，空心莲子草正丁醇部位提取物高、中、低剂量组（400、200、100mg/kg），每组10只。

对照荷瘤组均给予等量生理盐水；其余各组按上述给药剂量连续给药10d。

2.4　一般指标观察。

记录小鼠一般情况。

于末次给药后24小时称重后摘眼球取血，颈椎脱臼法迅速处死小鼠，取瘤体称重并计算抑瘤率，抑瘤率=（对照荷瘤组平均瘤重-治疗组平均瘤重）/对照荷瘤组平均瘤重×100%。

2.5　ELISA法检测细胞因子水平。

荷瘤小鼠摘眼球取血后收集血液，放置4小时后离心，留取血清放于-20℃备用。

严格按照ELISA检测试剂盒说明书步骤操作，测定细胞因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α的水平。

2.6　统计学处理。

数据用（—χ—±s）表示，采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析。

以P<0.05为差异有统计学意义。

4　结果4.1　空心莲子草正丁醇提取物对小鼠移植性肿瘤生长的作用。

实验小鼠均成功造模，实验中无死亡。

对照荷瘤组瘤体生长快，小鼠一般情况差，饮食少；空心莲子草正丁醇提取物各剂量组瘤体生长缓慢，活动较好，一般情况较好；空心莲子草正丁醇提取物能显著抑制小鼠肉瘤S180生长，各剂量实验组的平均瘤重显著轻于对照荷瘤组，差异具有统计学意义（P<0.05）。

高、中、低剂量组抑瘤率分别为66.23%、61.69%、39.61%。

表1　空心莲子草正丁醇提取物对S180荷瘤小鼠瘤重的影响组别瘤重（g）抑瘤率（%）对照荷瘤组 1.54±0.21a-高剂量组0.52±0.24a66.23%中剂量组0.59±0.31a61.69%低剂量组0.93±0.26a39.61%注：与对照荷瘤组比较：a P<0.05。

4.2　细胞因子测定。

灌胃给予空心莲子草正丁醇部位提取物10d后，明显升高小鼠血清中IL-2、IL-6、IL-12和TNF-α的水平，结果见表2。

5　讨论空心莲子草曾收录于《中华人民共和国药典》（1977年I部），具有多种生物学活性，目前研究主要着重于其抗病毒、抑菌、免疫调节和保肝等作用，已证实其效果良好，具有广阔地临床应用前景[3-4]。

已有研究证实其具有抗肿瘤作用，但相关方面研究仍较少，目前抗肿瘤方面的研究也主要集中在免疫调节及体外细胞毒性的研究。

本研究建立了小鼠肉瘤S180移植性肿瘤模型，进而检测空心莲子草正丁醇部位提取物的体内抗肿瘤活性。

采用ELISA 法检测空心莲子草正丁醇部位提取物对荷瘤小鼠血清中IL-2、IL-6、IL-12和TNF-α水平的影响。

在国内外首次对空心莲子草正丁醇提取部位体内抗肿瘤活性及免疫调节作用进行探讨研究。