传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1基因的结构分析

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鸡传染性支气管炎病毒致病机理的研究进展

鸡传染性支气管炎病毒致病机理的研究进展余娟;刘兴友;王玲丽【摘要】鸡传染性支气管是由鸡传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病,由于病毒血清型较多,易于发生变异而难以免疫预防,成为养鸡业发展的重大阻力.文章就该病毒的致病机理方面的研究情况做一综述,为防制鸡传染性支气管炎提供科学依据.%Infectious bronchitis virus (IBV) is causative pathogen of infectious bronchitis (IB) , an acute, highly contagious respiratory disease in chickens, the infectious bronchitis virus has many serotypes and is easy to mutate, which has caused the difficulty for the disease's prevention, and impeded the development of poultry industry. This paper reviewed etiology, pathogenesis of the IBV in order to provide evidence for IB prevention and control.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(000)012【总页数】3页(P160-162)【关键词】传染性支气管炎病毒;病毒复制;致病机理【作者】余娟;刘兴友;王玲丽【作者单位】河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州 450002;河南科技学院动物科学学院,河南新乡 453003;河南科技学院动物科学学院,河南新乡 453003【正文语种】中文【中图分类】S852.65+9.6鸡传染性支气管炎（infectious bronchitis，IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）引起的一种急性、高度接触传染性呼吸道疾病。

禽传染性支气管炎病毒 S1 基因植物表达载体的构建

浙江大学学报(农业与生命科学版)　27(3):293～296,2001Journa l of Zheji a ng Un i versity (A gric.&L ife Sci .) 收稿日期:2000212215基金项目:国家自然科学基金资助项目(30070570)作者简介:吴建祥(1968-),男,浙江诸暨人,硕士,讲师,主要从事免疫学和分子生物学研究Λ文章编号:100829209(2001)0320293204禽传染性支气管炎病毒S 1基因植物表达载体的构建吴建祥,周继勇,程丽琴,沈行燕,丁红梅(浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州310029)摘　要:以含传染性支气管炎病毒(ZJ 971毒株)S 1基因的质粒PBS 为模板,根据其序列设计引物进行PCR 扩增,得到1.7kb 左右的S 1基因产物;用XbalI 和BamH I 酶切纯化,并在T 4DNA 连接酶的作用下,定向克隆到植物表达载体PB I 121中,PCR 及酶切鉴定表明,质粒经三亲交配已导入根癌农杆菌中Λ关　键　词:禽传染性支气管炎病毒;S 1基因;植物表达载体中图分类号:S 858.3;Q 782 文献标识码:AW U J ian 2x iang ,ZHOU J i 2yong ,CH EN G L i 2qin ,SH EN X ing 2yan ,D I N G Hong 2m ei (Institu te of P reven 2tive V eterinary M ed icine ,Z hej iang U niversity ,H ang zhou 310029,Ch ina )The con structi on of plan t expressi on vector of S 1gene of av i a n i n fecti ous branch itis v i rus .Journal of Zhejiang U n iversity (A gric.&L ife Sci .),2001,27(3):293～296Abstract :T he S 1gene of avian infecti ous bronch itis virus (ZJ 971strain )w as amp lified by po lym erase chain reacti on w ith s pecial p ri m ers con tain ing XbalI and BamH I .T he purified PCR p roduct w as digested by the restricted enzym e XbalI and BamH I.T he digested and purified S 1gene of infecti ous bronch itis virus w as cl oned in to p lan t exp ressi on vecto r pB I 121.T he result show s that pB I 121w ith S 1gene w as success 2fully tran sferred in to A g robacterium tum e f aciens (A otum ef aciens )w ith m ethods of PCR and restricted en 2zym es.Key words :avian infecti ous bronch itis virus ;S 1gene ;p lan t exp ressi on vecto r 禽传染性支气管炎病毒(A vian Infecti ousB ranch itis V irus ,I B V )属冠状病毒科冠状病毒属,因I B V 抗原性的漂变可引起呼吸型、肾型、腺胃型、肌肉型等不同病变类型的鸡传染性支气管炎,对养禽业危害极大,是最重要的传染病之一[1]Λ该病毒属单股正链RNA 病毒,具有S 、M 和N 三种结构蛋白ΛS 蛋白是由S 1和S 2组成的寡聚蛋白,S 1和S 2均为糖蛋白多肽,其分子量分别为90kD 和84kD ,用酶去除寡糖后S 1和S 2的分子量分别为64kD 和61kD [2,3]ΛCavanagh[4]确证S 1蛋白是宿主的主要保护性抗原,能诱导机体产生中和抗体和血凝抑制抗体,继而使机体得到保护,在免疫学方面起着重要作用的S 1基因一直是世界各国研究该病毒的热点Λ自20世纪90年代以来,国内外对I B V 的研究取得了长足进展,已有关于I B V S 1基因在昆虫杆状病毒、痘苗病毒等载体中进行表达的报道[5,6],但尚无在植物中表达的报道Λ为探讨植物表达家禽病毒基因的可能性,我们利用已获得的禽传染性支气管炎病毒S1基因成功地构建了植物表达载体系统Λ1　材料与方法1.1　菌种及质粒大肠杆菌DH5Α,根癌农杆菌EHA105,植物表达载体PB I121,含辅助质粒PBK2013的HB101和含I B V S1基因的PBS质粒取自本所[7]Λ1.2　酶及试剂所有酶均购自P rom ega公司,PCR纯化K it和割胶回收K it均为德国Q I A GEN公司产品,所有抗生素均为国产分析纯试剂Λ1.3　PCR引物设计与合成参照已发表的I B V2ZJ971株基因组序列设计[7],并作适当改进:为了便于与PB I121质粒的多克隆位点相连接,在引物5’端引入XbalI酶切位点,在引物3’引入Ba mH I酶切位点ΛPCR引物由上海生物工程公司合成Λ引物的具体序列如下: 5’端引物为52GCTCTA GAA T2 GT T GGTAA CA CCTCT T23’ 3’端引物为5’2CGGGA TCCT TAA2 TAA CTAA CA TAA GGGCA23’1.4　PCR扩增的禽传染性支气管炎病毒S1基因在PCR反应管中依次加入下列试剂10×T aq P lus I PCR buffer10ΛL,25mmo l L M gC l26ΛL,10mmo l L d N T P混合物2ΛL, 20Λmo l L5’、3’端引物各1ΛL,含S1基因的pBS质粒1ΛL,灭菌M illi Q水78.5ΛL,T aq P lusI(5u ΛL)0.5ΛL,混匀后在表面加入2滴液体石腊Λ然后在PCR仪上94℃预变性2 m in,94℃45s,53℃45s,72℃2m in,共计30个循环进行扩增,最后一个循环后,72℃延伸10m inΛ1.5　禽传染性支气管炎病毒S1基因植物重组表达载体的构建与鉴定用PCR产物纯化K it纯化PCR产物Λ纯化的I B V S1基因PCR产物用XbalI和Ba mH I 在37℃酶切2h;pB I121质粒用XbalI和Ba mH I在37℃酶切5hΛ酶切产物用Q I A GEN 公司的Gel Ex tracti on K it割胶回收Λ两种酶切产物在16℃条件下用T4DNA L igase连接过夜Λ连接产物全部转化DH5Α感受态细胞,在含卡那霉素50Λg mL的LB固体培养基上挑取单菌落接种,碱法提取重组质粒,用PCR、XbalI 和Ba mH I双酶切来鉴定重组质粒(图1)Λ图1　S1基因植物表达载体的构建F ig.1　The constructi on of p lant exp ressi onvecter of S1gene1.6　禽传染性支气管炎病毒S1基因的植物重组表达载体转化根癌农杆菌受体农杆菌EHA105于液体YEP培养基中28℃振摇培养,将含帮助质粒pR K2013的菌株HB101和含目的质粒的菌株DH5Α接种于LB培养基上,37℃振摇培养Λ三种菌长到对数生长期时等体积混合,离心弃上清.50ΛL LB 悬浮,涂布于LB固体平板上培养过夜;用少量培养基洗下菌落,以适当倍比稀释后,涂布于含R if、Km和Sm的LB固体平板上培养,24h后长出的菌落按常规的碱法提取质粒,进行PCR 鉴定(图2)Λ492 浙江大学学报(农业与生命科学版)　第27卷　图2　三亲交配示意图F ig .2　T ri parental m ating2　结　果2.1　传染性支气管炎病毒S 1基因的PCR 产物鉴定 PCR 扩增后,取10ΛL 产物经1%琼脂糖电泳,可观察到一条约1.7kb 的片段,与预期的S 1基因大小一致(图3)Λ3,8,12,19为重组质粒,CK 为非重组质粒(PB I121质粒),S1为S1基因PCR 扩增产物;M 为1kb 的DNAM arker图3　S 1基因扩增及植物重组质粒Xba l I 和Bam H I 酶切鉴定结果F ig .3　Amp lificati on of I BV Sigene and digesti on identi 2ficati on of recom binant p las m id w ith Xba and Ba mH I2.2　传染性支气管炎病毒S 1基因植物重组表达载体的构建和鉴定将酶切纯化的PCR 产物经Xba 和Ba mH I 进行双酶切后定向插入到经相同酶切过的PB I 121载体上,构建成含S 1基因的中间载体Λ在含Km (50Λg mL )的培养基上筛选重组子,经PCR 和双酶切后的电泳分析表明,植物中间表达载体中确实插入了1.7kb 左右的S 1基因(图3,4).3、7、8、12、19为重组质粒,M 为1kb 的DNA M arker ,CK 为非重组质粒PB I 121质粒图4　重组质粒S 1基因PCR 扩增产物F ig .4　PCR p roduct of S 1gene of recom binant p las m id3、7、8、12、19为转化子;1为S1基因;M 为1kb DNA M arker图5　转化子的PCR 鉴定F ig .5　Identificati on of transfor m ant by PCR2.3　根癌农杆菌的转化与鉴定以pR K 2013为辅助质粒,通过三亲交配的方式转化农杆菌Λ在R if (100Λg mL )的LB 培养基上筛选转化子,挑取20个单菌落接种,用592　第3期　吴建祥,等禽传染性支气管炎病毒S 1基因植物表达载体的构建碱法抽提质粒,并以该质粒为模板,以S1基因的特异引物进行PCR扩增Λ结果表明:大多数转化子1,3,7,8,12,19均能扩增出与S1基因大小相同的1.7kb片段(图5)Λ3　讨　论 20世纪80年代以来,植物转基因工程在植物改良上取得了许多成就(如抗病水稻,抗虫棉等)[8,9],在生物医药方面作为生物反应器,也有巨大的潜在优势Λ1992年,M as on等[10]就乙肝表面抗原在转基因植株中表达一文中,提出了用转基因植物生产疫苗的概念ΛT ubo ly等在转基因烟草中表达了猪传染性胃肠炎病毒S蛋白基因并研究了其表达产物的免疫原性[11]Λ与常规疫苗及其他新技术疫苗相比,转基因植物疫苗具有生产简单、安全、廉价及保存和运输方便等优点,是目前世界各国新型疫苗研究的热点之一Λ我们利用禽传染性支气管炎病毒的S1基因成功构建了植物表达载体,并转化了根癌农杆菌,为进一步分析转基因马铃薯所表达的I B V S1基因产物的免疫原性及禽传染性支气管炎植物疫苗的研究打下了基础Λ虽然转基因植物疫苗存在外源蛋白的免疫原性、表达水平低及糖基化等问题,但用植物生产外源蛋白质则是安全廉价的生产系统,很有吸引力ΛReferences:[1]　Y I N Zhen,L I U jing2hua(殷震,刘景华).A ni m al V irolo2gy(动物病毒学)[M],2nd ed.Beijing:Science P ress,1997.(in Chinese)[2]　Cavanagh D.Coronavirus I BV:Structural characteriza2ti on of the s p ike p rotein[J].J.Gen.V irol.,1983.8632869.[3]　Cavanagh D,Phili p J D.Evoluti on of A vian Coronavirusinfecti ous bronchitis virus:Sequence of the m atrix glyco2p rotein gene and intergenic regi on of several serotypes[J].J.Gen.V irol,1988,69:6212629.[4]　Cavanagh D,D avis P J,Coronavirus P J.I BV:re movalof s p ike glycopolypep tide S1by urea abolishes infectivityand hae m agglutinati on but not attachm ent to cells[J].J.Gen.V irol,1986,67:144321448.[5]　Song C S,L ee Y J,L ee C W,et al.Inducti on of p rotec2tive i m m unity in chickens vaccinated w ith infecti ousbronchitis virus S1glycop rotein exp ressed by a recom bi2nant bacul ovirus[J].J Gen V irol,1998,79:7192723.[6]　L I AO M ing,X I N Chao2an,WAN G L in2chuan(廖明,辛朝安,王林川).P reli m inary study on exp ressi on of S1gene of A vian B ronchitis V irus in insect cell[J].ChineseJ ournal of V eterinary S cience(中国兽医学报),1997,17(6):5392543.(in Chinese).[7]　ZHOU J i2yong(周继勇).Structural analysis of the S1gene of P roventriculus2pathogenic Infecti ons B ronchitisV irus(ZJ971)and it’s structural p roteins[J].ChinesJ ournal of V eterinary S cience(中国兽医学报),2000,20(5):4292433.(in Chinese)[8]　FU Rong2zhao,S UN Yong2ru,J I A Shi2rong(傅荣昭,孙勇如,贾士荣).T echnology m anual of p lant genetictransf or m ation(植物遗传转化技术手册)[M].Beijing:Chinese Scientific and Technol ogic P ress,1994.(inChinese)[9]　WAN G Guan2lin,FAN G Hong2yun(王关材,方宏筠).T he P rincip les and T echnology of P lant Gene E ng ineer2ing(植物基因工程原理与技术)[M].Beijing:ScienceP ress,1998.(in Chinese)[10]　M as on H S,L a m D M K,A rntzen C J,et al.Exp res2si on of hepatitis B surface antigen in transgenic p lants[J].P roc N atl A cad S ciU SA,1992,89:11745211749.[11]　Tuboly T,Yu W,Bailey A,et al.I mm unogenicity ofporcine trans m issible gastroenteritis virus s p ike p roteinexp ressed in p lants[J].V accine.2000,18:202322028.692 浙江大学学报(农业与生命科学版)　第27卷　。

传染性支气管炎病毒广西分离株S1基因克隆与序列分析

１材料与方法
１．１材料
性、高度接触性传染病，主要侵害呼吸系统、消化系统和泌尿生殖系统。ＩＢＶ由于其特殊的复制机制和ＲＮＡ聚合酶校对机制，使得病毒基因组极易发生基
１．１．１毒株
大量研究表明［５］，ｓ１蛋白可诱导血凝抑制抗体和
中和抗体，血清特异性抗原决定簇也主要针对Ｓ１蛋
白，所以Ｓ１蛋白与ＩＢＶ的免疫原性关系最密
１．１．３主要试剂ＡｘｙＰｒｅｐ体液病毒ＤＮＡ／ＲＮＡ
鸡传染性支气管炎（Ｉｎ｛ｅｃｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ，ＩＢ）
是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性支气管炎病毒
（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓｖｉｒｕｓ，ＩＢＶ）引起的一种急
损失。为及时了解传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的变异情况，从而进行更有效的防控，本研究对２０１２年分离自广西的８株ＩＢＶ的ｓ１基因进行了序列测定与分析。参考ＮＣＢＩ上的ＩＢＶｓ１基因序列，设计合成了一对
ＧＸ１一ＧＸ８分离株，均由广东温氏食
品集团股份有限公司技术中心禽病室于日龄的肉鸡中，经ＲＴ — ＰＣＲ

鸡传染性支气管炎活疫苗(D971p株)的研究

（ｎｔ Ⅲ ｓ∞ ｌｌｔ０ＣＡ．ｈ‰ ，１０．｝ｎＹｅｍＳｅｆＡＳ｝ｍ１１１ｏ５１
Ａｂｈｓ吐：ＡｐｏｅｔｃｄｓｔｅｏｆｉｎｉｅｔｕｒｎｈｉｉｓｗｉｌｔｄｆｏｄｅｓｄｃｉｋｎｎＣｉａＡｎａｔａｅｌｔｉ舾ｒｖｎｒｔｕｐｆｗａｒｃｉｓｂｏｃｉｓｖｕ舶ｓａｅｒｍｉａｅｈｃｅｓｉｈｎ．ｔｉｙｌｆｏｔｒｏｓ￣ｕｔｃｓｒｎｗａｄｖｌｅ，盯１０ｐｓ５ｏＰｈｃｅｍｂｙｓａｄｄｇａｅｌｉ７ｐＬｖａｃｅｂｓｄＯ１７Ｐｗ阻ｐｏｕｅｎｖｌａ－ｅｅ叩ｄ２ａｓｎＳＦｃｉｋｎｅｒｏｎ￣ｉｔＳｒｎＤ９１．ｉｅｖｃｉａｅ１Ｄ９１ｎｄａｎｒｄｃｄａｄｅａｕｔ
１１毒．
种
ＩＶＤ７ｐ株弱毒，Ｂ．９１经检纯净，对雏ＩＶＤ７ｊ由本所提供。Ｂ．９１株，
鸡安全，ｍ ≥ １ｏＩｌＥ０／．ｍ。
１２检验用强毒．
１利亚动物卫生研究所惠赠；ＶＭ１，Ｉ．４株由中国兽医药品Ｂ
ｅ．ｄ
ｓｆａｄｅｉｃａ￣ｎｅｙｔｅ￣ｃｎ
ｅｈｔｈ ∞ ｄｔｔｅａ
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Ｌｖ．ａｃｎｉｖｃｉｅｅ
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Ｋｅｒｓｎｅ６ｕｒｎｈｔ；ｙｗｏｄ：Ｉｆｅｏｓｂｏｃｉｓｉ
出１ＶＩ７ｐＢ —）１弱毒株。用设毒株制备活疫苗，Ｙ经安全、效力等试验证明具有较高的免疫保护率和安全性，能有效的预防腺胃型、肾型鸡传染性支气管炎。关键词：鸡传染性支气管炎；嗜腺胃型；活痤苗中国分类号：８８３．￥５．Ｌ文献标识码：Ａ文章编号：ｌｏ＿５９２）２ｌ０∞ ｏ８Ｂ（∞２ｏＪ４．Ｏ０

传染性支气管炎含图解

传染性支气管炎（IB）是鸡的一种急性、高度接触传染的病毒性呼吸道和泌尿生殖道疾病。

其特征是咳嗽、喷嚏、气管啰音和呼吸道黏膜呈浆液性卡他性炎症。

如发生肾病变型传染性支气管炎还会出现病鸡肾肿大、肾小管和输尿管内有尿酸盐沉积等病理变化。

雏鸡通常表现流鼻液、呼吸困难等呼吸道症状，有时会发生死亡；产蛋鸡则以产蛋量减少和蛋白品质下降较为常见。

历史与分布本病于1930年春在美国北达科他州首先发现。

1931年由Schalk和Hawn正式报道。

1936年Beach和Schalm确定了该病的病原，1937年Beaudette和Hudson首次利用鸡胚培养该病毒。

1956年Jungherr等证明IB的病原不只一个血清型。

1962年Winterfield和Hitchner发现了肾病变型传染性支气管炎（IB-nephrosis form）。

目前，该病在世界上大多数养鸡地区都有发现。

我国于1972年由邝荣禄教授在广东首先报道了IB的存在。

此后北京、上海等地相继有报道，现该病已蔓延至全国大部分地区，给养鸡业造成了巨大的经济损失。

本病病原是传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV），属于冠状病毒科冠状病毒属，是该属的代表种。

IBV多数呈圆形或椭圆形，直径约120nm，病毒粒子有囊膜，表面有长约20nm的杆状纤突。

各毒株在蔗糖溶液中的浮密度不同，峰值常在（1.15～1.18）g/ml之间，离心时为避免丢失病毒纤突，离心力最好不要超过100 000g。

IBV的基因组核酸为不分段的正链单股RNA，具有感染性，全长约27 000个核苷酸。

主要编码3种病毒特异性结构蛋白，即纤突糖蛋白（S）、膜蛋白（又称基质糖蛋白，M）、核衣壳蛋白（N）。

其中S蛋白合成后会裂解为S1和S2两条糖多肽亚单位。

研究表明，血凝抑制抗体和大多数病毒中和抗体都是由S1诱发的，病毒的组织嗜性也与S1有密切关系。

由于IBV的基因组核酸在复制过程中易发生突变和高频重组，所以IBV的血清型众多。

当前鸡腺胃炎发生的原因与分析

.当前鸡腺胃炎发生的原因与分析摘要鸡腺胃炎是一种以腺胃肿大为主要特征的新发生的传染病。

表现为病鸡精神沉郁，饮食减少，体重逐渐下降，发病中后期病鸡极度消瘦、苍白，最后因衰竭而死。

剖检发现，腺胃肿大且乳头变硬或腺胃乳头扁平甚至消失，腺胃黏膜出血溃疡，部分病例伴随肌胃糜烂、角质层出现火山口样溃疡等病理变化。

随着该病的进一步流行，对本病的研究具有重大的理论意义和应用价值。

本文从该病的流行特点、临床症状、病理变化、病因分析和防治措施进行论述。

旨在为研究鸡腺胃炎提供理论基础。

关键词：鸡；腺胃炎；致病因素；防治措施AbstractChicken gland gastritis is a glandular stomach enlargement as the main characteristics of new infectious diseases.Depressed of ill chicken spirit,diet to reduce weight gradually decline,mid and late onset disease chicken extremely thin,pale,finally died of exhaustion.the pathological changes such as sample ulcer corneas layer in the crater of the volcano.Due to the particularly high diseased chicken group feed conversion ratio,investment return small,caused greatly economic loss to poultry breeding.Therefore,with the popularity of the disease,the study of this disease is of great theoretical significance and application value.In production to reduce the risk of the chicken happened gland gastritis,improve crop rate and economic benefit.In this paper,from the prevalence of the disease,clinical symptoms,pathological changes,the cause analysis and prevention and control measures are discussed.Aims to offer a theoretical basis for the study of chicken gland gastritis.Key words:Chicken;Gland gastritis;Pathogenic factors;Control measures鸡腺胃炎是一种以家禽生长不良、消瘦、整齐度差，粪便过料等外观症状及腺胃肿大或腺胃乳头扁平甚至消失，腺胃黏膜溃疡、脱落，肌胃内金和肌胃粘膜面火山口样溃疡、肌胃糜烂为主要特征的流行病。

应关注的肉鸡主要疾病

AIV-H5变异速度快，有效疫苗研发明显滞后。疫病已经发生两年，RE-4疫苗由7.1基因群毒株升级为7.2基因群毒株(RE-7)今年7月才获批临床使用。
今年以来，蛋鸡、肉鸭AI发病较多，死亡率高，分离病毒为 H5N2，H5N8
与RE-5、RE-6疫苗交差免疫效果不好。最近实验：免疫过Re-6+Re-7的鸡群，能很好地抵抗目前
因之一。
现状
2011年，检测77份来自全国各地的饲料和原料样品。其中饲料35份，玉米 32份，酒糟饼粕10份。
送检玉米样品阳性率检测结果：黄曲霉毒素13％，呕吐毒素88％，玉米赤霉烯酮69％，烟曲霉毒素80％，赭曲霉毒素6％.
送检饲料样品阳性率检测结果：黄曲霉毒素17％，呕吐毒素92％，玉米赤霉烯酮70％，烟曲霉毒素70％，赭曲霉毒素11％。
1、同属于基因I型的16个分离株与疫苗株中和试验结果并不一致。
2、3个疫苗株阳性血清对分离株的中和价均低于同源血清中和效价。
3、部分IBV分离株同时具有 491、H120和MA5中和性抗原表位。
4、部分毒株（007、339、356
）与3个疫苗株均无共同的中和性抗原位点。
IBV分离株与疫苗株抗原相关系数和S1基因同源性比较
我国1995-2009共174个IBV流行株可分为9个基因型，优势基因型为LX4-type(即QXIBV)，119/174.
刘胜旺等，2010.
山东省2006-2012IBV流行株遗传进化分析：优势基因型为QXIBV：16/19
19个IBV分离株S1基因遗传进化树
19个山东IBV分离株与3个常用疫苗株中和试验
9
产蛋鸡和种鸡
多在160-300日龄发病，临床一般表现： 2-3天（呼吸道症状，采食量下降） 3-4天（产蛋开始下降） 7-9天（产蛋下降20-40%），持续1—2W 2W-7W恢复正常（？%）

腺胃型传染性支气管炎病毒的分离鉴定

腺胃型传染性支气管炎病毒的分离鉴定魏昆鹏;陈立功;张诚;白晓;高磊;李玉荣;王学静;刘聚祥【摘要】One virus was isolated from swollen proventriculus of diseased chicken in Hebei province, and named CK/CH/HBHS/07F. The virus was identified by SPF chicken embryo passage, hemagglutination assay, interference with NDV, membrane protein (M) gene sequence analysis of IBV and artificial infection test. The allantoic fluid of chick embryo of the i-solated strain had no direct hemagglutination activity, but the allantoicfluid after pancreatin treatment was positive for hemagglutination test. Its hemagglutination activity can be inhibited by the positive serum of IBV. After third passage of chicken embryo, the virus could cause chicken embryo death or dwarf embryo. Sequence analysis showed that the nucleotide and amino acid sequence homology between the M gene ofthe virus and 18 strains of different pathogenic IBV strains were 82.8~94.1% and 82.4~97.4%, respectively. The virus had the highest homology with the CK/CH/LJL/04I of the proventriculus type strain. The pathological changes reproduced by the IBV isolate were similar to those of the natural case. The results showed that CK/CH/HBHS/07F was a proventriculus type IBV.%从河北病鸡肿大腺胃中分离到1株病毒(命名为CK/CH/HBHS/07F株),经鸡胚传代、血凝特性测定、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)干扰试验、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)膜蛋白(membrane protein,M)基因序列分析、人工感染试验等方法对该病毒进行了鉴定.该分离毒株感染鸡胚的尿囊液没有直接血凝活性,经胰酶处理后可凝集鸡红细胞,其血凝活性可被IBV阳性血清所抑制;经鸡胚传至第3代时,可致死鸡胚或出现侏儒胚;序列分析结果表明,该病毒M 基因与18株不同致病型IBV毒株间的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为82.8%~94.1%、82.4%~97.4%,与腺胃型毒株CK/CH/LJL/04I同源性最高,该分离株能人工复制出与自然病例相似的病理变化.初步证实CK/CH/HBHS/07F株为腺胃型IBV.【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2017(040)006【总页数】6页(P83-87,92)【关键词】传染性支气管炎病毒;腺胃型;分离鉴定【作者】魏昆鹏;陈立功;张诚;白晓;高磊;李玉荣;王学静;刘聚祥【作者单位】河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定071001;石家庄市畜牧水产局,河北石家庄050000;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定071001;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定071001;迁安市农业畜牧水产局,河北迁安064400;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定071001;河北省畜牧兽医研究所,河北保定071000;河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站,河北保定071001【正文语种】中文【中图分类】S852.3传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的鸡的急性、高度传染性并具有重大经济意义的疾病，主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统以及泌尿生殖系统，以气管啰音、咳嗽、打喷嚏、腺胃炎、肠炎、产蛋数量和质量下降等为特征[1]。

传染性支气管炎病毒S1蛋白基因的克隆与原核表达

ＰＣＲ．ａｎｄｔｈｅｎｓｕｂｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＧＥＸ—ＫＧｉｎｔｈｅｆｏｒｍｏｆｖｅｃｔｏｒｐＧＥＸ—Ｓ１ａｆｔｅｒｓｉｎБайду номын сангаас ｇｌｐｅｐｔｉｄｅｓｗｅｒｅ
２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｉｒｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｐｕｂｌｉｓｈｅｄＳ１ｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓｖｉｒｕｓ（ＩＢＶ）ｉｎＧｅｎｂａｎｋ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｉｒｍｅｒｓ
该序列全长１６８５ｂｐ，编码５３８个氨基酸。为便于表达，对其进行弃信号肽克隆，然后定向连接到表达载体中获得重组表达质粒ｐＧＥＸ－ＳＩ，转入受体菌，经诱导成功的表达了重组蛋白ＧＳＴ — Ｓ１。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，该蛋白约为８ＯｋＤ，占菌体

鸡传染性支气管炎的流行现状及防控

·238·畜牧兽医农业开发与装备 2018年第8期摘要：鸡传染性支气管炎属于家禽常见的呼吸系统疾病，且流行毒株呈现出多样性，控制难度较大，严重损害了养殖户的经济利益，阻碍了养鸡行业健康发展。

当期，我国鸡传统性支气管炎在不同省份呈现出地方性的流行基本特点，需要相关人员加强研究，及时采取防控措施，保障相关行业的稳定发展。

关键词：鸡传染性支气管炎；流行显著；防控0 引言鸡传染性支气管炎主要是由冠状病毒引发的疾病，这种病毒能够引发人类与家禽呼吸系统发生病变，在20世纪30年代，美国科学家首先发现了这种病毒，引起了人们的高度关注。

鸡传染性支气管炎属于急性、病毒性和高度接触性的传染病，在我国诸多养鸡行业密集发展的省份呈现出地方性流行的趋势，严重阻碍了养鸡行业的持续发展。

1 鸡传染性支气管炎的流行现状鸡传染性支气管炎属于我国养鸡业的主要病原，在全国各个省份呈现出地方性流行的趋势。

相关机构研究显示，鸡传染性支气管炎病毒分离株主要的类型是LX4型和Mass型，这两种类型已经成为主要流行的基因类型。

目前，对鸡传染性支气管炎病毒流行的原因正在研究中，尚没有明确的结论，通常认为不同种类的亲本病毒之间发生重组导致多种结构的LX4型病毒流行，在其进化的过程中，一些不适合在鸡体内存活和繁殖的病毒逐渐被淘汰，少数适宜鸡体内环境的病毒大量繁殖，最终使传染性支气管炎在养鸡也广泛流行[1]。

研究发现，LX4型病毒在发病率和死亡率上存在较大差异，多数属于肾型毒株，能够引起肾脏病变。

在养鸡行业普遍使用的H120型疫苗不能完全预防该类疾病，因此需要研制更为有效的疫苗来解决此类问题。

2 鸡传染性支气管炎的主要类型和症状2.1 肾型肾型主要发生在雏鸡中，通常为20～50日龄。

在发病初期出现较为轻微的呼吸道症状，包括咳嗽、喷嚏等，在持续1～4天后呼吸道症状逐渐消失，但其他鸡群会突然发病，并其在3天内症状加剧，主要表现包括精神不振、口渴、厌食、粪便呈现水样白色、由于透水引发体重减轻、全身肤色灰暗，产蛋量下降并且出现畸形蛋。

保定地区传染性支气管炎病毒S1 基因遗传变异分析

第44卷第4期2021年7月河北农业大学学报JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL UNIVERSITYVol.44 No.4Jul.2021保定地区传染性支气管炎病毒S1基因遗传变异分析段淇凡1，丁芳1，陈立保1，穆英丽1，刘聚祥1,2，王学静3，陈立功1,2（1.河北农业大学动物医学院，河北保定 071001；2.河北省兽医生物技术创新中心，河北保定071001；3.河北省畜牧兽医研究所，河北保定 071000）摘要：为了解传染性支气管炎病毒S1基因遗传变异情况，用鸡胚传代、血凝特性检测、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)膜蛋白（Membrane，M）基因检测等方法对保定地区鸡群分离的9株病毒进行了鉴定，并对其S1蛋白基因进行了遗传变异分析。

结果表明：9株分离毒接种鸡胚尿囊液直接血凝均为阴性，间接血凝和IBV M基因检测均呈阳性。

9株IBV分离毒S1蛋白基因编码区长1608/1611/1620 nt，分别编码536/537/540个氨基酸；与27株IBV参考毒株间的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为59.8%～99.3%和49.2%～98.9%。

9株分离毒S蛋白裂解位点模式为HRRRR/HRRKR/HRHRR。

9株分离毒均属于Ⅰ群中的LX4型IBV，与疫苗毒YX10 D90 vaccine株亲缘关系较近，与疫苗毒LDT3-A、4/91 vaccine、Ark99、J9、Connecticut vaccine、H120株等亲缘关系较远，与疫苗毒Georgia 1998 Vaccine株亲缘关系最远。

本研究结果可为传染性支气管炎防控提供有益参考。

关键词：鸡；传染性支气管炎病毒；S1蛋白；序列分析中图分类号：S852.5开放科学（资源服务）标识码（OSID）：文献标志码：AGenetic variation analysis of S1 gene of infectious bronchitisvirus in Baoding areaDUAN Qifan1, DING Fang1, CHEN Libao1, MU Yingli1, LIU Juxiang1,2,WANG Xuejing3, CHEN Ligong1,2(1.College of Veterinary Medicine, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China; 2.Hebei VeterinaryBiotechnology Innovation Center, Baoding 071001, China; 3.Hebei Animal Husbandry and VeterinaryResearch Institute, Baoding 071000, China)Abstract: To investigate the genetic variation of infectious bronchitis virus S1 gene, 9 isolates isolated from Baodingarea were identified by methods such as chicken embryo passage, hemagglutination characteristics detection, and IBVmembrane protein gene detection. The genetic variation of IBV S1 protein gene was analyzed. The results showedthat the chicken embryo allantoic fluid of the 9 isolates was negative for direct hemagglutination assay, while waspositive both for indirect hemagglutination assay and IBV M gene detection. The full length of coding region of theS1 protein gene of the isolates comprised of 1608/1611/1620 nucleotide, which encoding 536/537/540 amino acids,respectively. The result of sequence alignment of S1 gene showed that the nucleotide and amino acid homology收稿日期：2021-04-06基金项目：河北省现代农业产业技术体系蛋肉鸡创新团队(HBCT2018150205、HBCT2018150210).第一作者：段淇凡（1997-），男，河北三河人，硕士研究生，主要从事动物疫病发病机理研究. E-mail：dqf9527@ 通信作者：王学静（1977-），女，河北保定人，硕士，研究员，主要从事家禽科学研究.E-mail：wangxuejing771226@ 陈立功（1977-），男，河北唐山人，硕士，副教授，主要从事动物疫病发病机理研究.E-mail：clg01@ 本刊网址：http: //hauxb. hebau. edu. cn文章编号：1000-1573(2021)04-0089-07DOI：10.13320/ki.jauh.2021.007190第44卷河北农业大学学报between 9 isolates and 27 reference strains were 59.8%-99.3% and 49.2%-98.9%, respectively. The S protein cleavage recognition sites of the isolates were HRRRR, HRRKR and HRHRR. The results of phylogenetic analysis of 9 isolates and 27 reference strains showed the isolates all belonged to IBV of LX4 type in group I. The isolates were closely related to vaccine strain YX10 D90, and had relatively far evolutionary relationship with vaccine strain e.g. LDT3-A, 4/91 vaccine, Ark99, J9, Connecticut vaccine, and H120. The genetic relationship between the isolates and Georgia 1998 Vaccine strain was the most distant. The results of this study can provide a useful reference for the prevention and control of infectious bronchitis.Keywords: chicken; infectious bronchitis virus; S1 protein; sequence analysis1.2 主要试剂TrizoL 提取试剂盒、随机引物、dNTP 、RNasin 、M-MLV 反转录酶、Taq 酶、DNA Marker (DL 2000)等分子生物学试剂均购自宝生物工程（大连）有限公司。

猪传染性胃肠炎病毒结构蛋白基因克隆及特征分析

猪传染性胃肠炎病毒结构蛋白基因克隆及特征分析猪传染性胃肠炎病毒结构蛋白基因克隆及特征分析引言：猪传染性胃肠炎病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）是一种严重影响猪类生产的病毒性疾病。

该病毒主要通过粪口途径传播，感染幼猪引起急性腹泻，导致高死亡率和生产效益下降。

为了更好地了解PEDV的病原性和传播机制，本文旨在对PEDV的结构蛋白基因进行克隆，并进行特征分析。

一、病毒结构蛋白基因克隆1.1 病毒样品提取和RNA提取从受感染猪肠道组织中提取病毒样品，并使用RNA提取试剂盒提取病毒RNA。

采用A260/A280值检测RNA纯度和A260值测定RNA浓度。

1.2 病毒结构蛋白基因扩增设计特异性引物并进行PCR扩增，以扩增PEDV的结构蛋白基因。

反应条件为：95℃预变性5分钟，然后循环35次：95℃变性30秒，退火温度60℃退火30秒，延伸72℃1分钟。

1.3 基因克隆将PCR产物通过电泳分离后提取，然后进行酶切，将目的片段连接到克隆载体中。

将克隆子转化到大肠杆菌中，通过筛选获得白色克隆子，并进行测序验证。

二、特征分析2.1 结构蛋白基因序列分析使用DNAman和NCBI BLAST软件对序列进行分析，包括比对、同源性分析和变异位点分析。

2.2 翻译和氨基酸组成分析采用软件工具将基因序列翻译成蛋白质序列，并进行氨基酸组成分析。

2.3 结构蛋白功能预测通过NCBI Conserved Domain Database和Swiss-Model软件进行结构蛋白功能预测和功能域分析。

2.4 二级结构预测使用软件工具Predator和Gor4对结构蛋白的二级结构进行预测。

2.5 拓扑结构分析利用软件软件工具TMHMM和TOPO2进行结构蛋白的跨膜结构预测和亚细胞定位分析。

2.6 保守区域分析采用ClustalW和Bioedit软件对结构蛋白进行保守区域分析。

总结：本文成功克隆了PEDV的结构蛋白基因，并对其进行了特征分析。

肾型鸡传染性支气管炎病毒DQ株S1基因结构分析

肾型鸡传染性支气管炎病毒DQ株S1基因结构分析何永强;吴建祥【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2001(013)005【摘要】选用Trizol试剂抽提肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)DQ株基因组RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增其S1基因cDNA,克隆入pBluescript质粒载体中,作测序分析.结果表明,DQ株S1基因全长为1 731 nt ,编码一条576个氨基酸组成的多肽,其核苷酸与IBV-4/91,Gray,D41,Beijing,ZJ971,Beaudette,H120,M41毒株的同源性为78.4%～82.73%,氨基酸同源性为74.41%～78.96%.DQ株不同于其它血清型IBV的主要特征为:在S1基因核苷酸序列上,第278-299位之间插入了一段新的序列,第423-431位碱基缺失,有许多点突变;二级结构上表现为第2-22位氨基酸区域、第92-98位氨基酸区域亲水性增强,第74-76位氨基酸区域疏水性增强,最大亲水峰改变.S1分子进化系统分析显示,DQ株与其它各毒株的亲缘关系较远.【总页数】6页(P266-271)【作者】何永强;吴建祥【作者单位】浙江省农业科学院病毒实验室;浙江大学生物技术研究所【正文语种】中文【中图分类】S858.31【相关文献】1.肾型鸡传染性支气管炎病毒J株S1基因克隆和序列分析 [J], 陆国权2.鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定 [J], 祁贤;叶向阳;张婉华;朱永军;步志高;刘思国3.嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒W93疫苗株S1基因的克隆与序列测定 [J], 王文成;赵宝华;尹广东;李尚波;卫广森;许崇波4.鸡肾型传支病毒黑龙江省分离株Mk株、K株和Mg株S1基因的克隆与序列分析 [J], 宋佰芬;曹宏伟;马金柱;崔玉东;朱战波5.肾型鸡传染性支气管炎病毒X株S1基因序列的测定及同源性分析 [J], 赵宝华;李尚波;王文成;尹广东;卫广森;许崇波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

传染性支气管炎病毒TY1株结构蛋白基因部分片段的表达

传染性支气管炎病毒TY1株结构蛋白基因部分片段的表达贾鸿莲;孙效彪;杨子森【期刊名称】《中国兽医科学》【年(卷),期】2006(36)2【摘要】根据已报道的传染性支气管炎病毒S基因序列设计了1对引物,利用从传染性支气管炎病毒TY1株中提取的RNA,经PCR扩增获得了300 bp的产物;序列测定与分析表明,所扩增产物是传染性支气管炎病毒结构蛋白基因的部分片段。

将扩增片段插入pET32a构建表达载体,并于大肠埃希氏菌BL21中进行表达;结果表明,该片段在大肠埃希氏菌中成功表达,产物为30 ku、以可溶性形式存在的蛋白。

Western-blotting分析表明,该蛋白可与传染性支气管炎病毒TY1株阳性血清发生反应。

【总页数】4页(P103-106)【关键词】传染性支气管炎病毒;结构蛋白基因;表达【作者】贾鸿莲;孙效彪;杨子森【作者单位】山西省家畜疫病防治站;山西省畜禽繁育工作站【正文语种】中文【中图分类】S852.65;Q786【相关文献】1.一株重组鸡传染性支气管炎病毒的分离及结构蛋白基因变异和血清型分析 [J], 吴翠兰;何怡宁;李和鸣;孙新宽;谭渝才;韦天超;磨美兰;韦平2.鸡传染性支气管炎病毒广西流行株3种主要结构蛋白基因的遗传变异分析 [J], 磨美兰;李孟;韦平;范文胜;黄柏成;郎亚辉;陈秋英;侯金莲;韦天超3.共表达传染性支气管炎病毒S1基因和鸡干扰素-γ基因的重组鸡痘病毒部分生物学特性测定 [J], 王云峰;石星明;王玫;刘胜旺;童光志;崔红玉;木古丽;徐灵龙;何来;贺笋;葛俊伟;李一经4.一株鸭源传染性支气管炎病毒的分离鉴定及结构蛋白基因和血清型分析 [J], 范文胜;唐宁;董志华;陈基明;张文;赵长润;韦天超;磨美兰;韦平5.传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1基因的结构分析 [J], 周继勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒D971毒株S1基因的序列测定与分析

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒D971毒株S1基因的序列测定与分析荣骏弓;崔尚金;李建伟【期刊名称】《中国兽医科技》【年(卷),期】2002(32)7【摘要】采用RT PCR方法扩增了鸡传染性支气管炎病毒D971毒株预期的 1636bp的S1全基因DNA片段 ;以Sanger’s双脱氧末端终止法测定出其核苷酸序列 ,推导出了氨基酸序列 ,并用有关软件构建了S1基因进化树。

结果表明 ,IBVD971毒株与国内外AF14 0 3 5 2 (山东农业大学 )、AF15 4841(山东农业大学 )、AF193 43 2 (青岛动物检疫所 )、AY0 43 3 12 (中国农业大学 )、AF3 975 2 8(四川农业大学 )、AY0 43 2 2 1(浙江农业大学 )、AF3 5 2 3 12 (浙江农业大学 )、U2 95 2 2 (澳大利亚 )和M2 1883 (英国 )毒株的核苷酸同源性分别为 99%、99%、95 %、94%、87%、86%、88%、82 %和 80 % ,氨基酸序列同源性依次分别为93 %、93 %、87%、86%、83 %、83 %、82 %和 80 %。

【总页数】4页(P3-6)【关键词】腺胃病变型;D971毒株;S1基因;序列测定;鸡传染性支气管炎病毒;RT-PCR;序列分析【作者】荣骏弓;崔尚金;李建伟【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.659.6【相关文献】1.鸡传染性支气管炎病毒D41株S1基因序列测定及分析 [J], 廖明;辛朝安;王林川2.鸡传染性支气管炎病毒沈阳分离株S1基因序列测定及同源性分析 [J], 刘明春;江国托;康丽娟;刘思国;赵玉军3.腺胃病变型鸡传染病支气管炎病毒分离株（IBV—D971）对SPF？… [J], 荣骏弓;吴东来4.腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒强毒株的培育 [J], 荣骏弓;吴东来;谷守林;王丽滨;尹训南;胡守萍5.传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1基因的结构分析 [J], 周继勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株(X株)核衣壳基因的克隆和序列分析

禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株(X株)核衣壳基因的克隆和序列分析张德勇;周继勇;陈吉刚;丁红梅;沈行燕【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2002(22)6【摘要】根据已发表的禽传染性支气管炎病毒 (IBV) Beaudette株核衣壳基因序列 ,设计了 1对特异性引物 ,采用 RT-PCR方法 ,克隆了禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株 (X株 )的核衣壳基因 ,并测定了其序列。

X株 IBV与来自 Gen Bank的其他10株 IBV相比 ,共存在 136个点突变 ,其中有 15处是连续突变区域 ,这些点突变总体呈散在分布。

X株与其他毒株的核衣壳蛋白同源性在 90 .2 %～ 99.0 %之间 ,X株 IBV与同为肾型的 N株同源性最高。

【总页数】4页(P529-532)【关键词】嗜肾霉素;序列分析;禽传染性支气管炎病毒;X株;核衣壳基因;基因克隆【作者】张德勇;周继勇;陈吉刚;丁红梅;沈行燕【作者单位】浙江大学动物预防医学研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.659.4【相关文献】1.新变异的禽传染性支气管炎病毒ZJ 971毒株S基因克隆及序列分析 [J], 周继勇;沈行燕;程丽琴;丁红梅;吴建祥2.鸡传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971)核衣壳蛋白基因的克隆* [J], 丁红梅;周继勇;沈行燕;吴建祥;程丽琴;于涟3.鸡传染性支气管炎病毒分离株核衣壳基因克隆、序列分析和真核表达 [J], 焦红梅;潘志明;孟松树;田华荣;耿士忠;焦新安4.嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒W93疫苗株S1基因的克隆与序列测定 [J], 王文成;赵宝华;尹广东;李尚波;卫广森;许崇波5.鸡传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971)株S2基因的克隆及序列分析 [J], 沈行燕;周继勇;丁红梅;吴建祥;严庆丰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因分析及与标准强毒株同源性比较

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因分析及与标准强毒株同源性比较凌雯;钱建飞;李银;张则斌;潘杰彦;陈溥言【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2002(22)2【摘要】根据已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus,IBV) Beau株、M41株的核苷酸序列 ,设计并合成 1对引物。

应用该引物 ,通过 RT- PCR扩增出 IBV金坛分离株 (JT株 )的核蛋白基因 (N基因 ) ,片段大小为 82 8bp,与设计相符。

对 JT株的 N基因进行序列测定 ,并与标准毒株 KB85 2 3、CU - T2、Beau和 M41的 N基因进行同源性比较 ,结果表明 ,JT株与 KB85 2 3、CU- T2、Beau和 M41毒株的 N基因同源性分别为 87%、87%、86 %和 85 %,说明 JT株与标准毒株在 N基因上存在一定的差异。

【总页数】3页(P111-113)【关键词】鸡传染性支气管炎病毒;核蛋白基因;序列测定;同源性;鸡腺胃型;标准强毒株【作者】凌雯;钱建飞;李银;张则斌;潘杰彦;陈溥言【作者单位】江苏省农业科学院畜牧兽医研究所农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室;南京农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.鸡腺胃型传染性支气管炎病毒山东分离株S基因的克隆及序列分析 [J], 王玉东;刘俊辉;郑增忍;王君玮;王永玲;王晓燕;王树双;牛钟相2.传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1基因的结构分析 [J], 周继勇3.鸡传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971)株S2基因的克隆及序列分析 [J], 沈行燕;周继勇;丁红梅;吴建祥;严庆丰4.鸡传染性支气管炎病毒华南分离株核蛋白基因的序列测定及同源性分析 [J], 刘思国;江国托;康丽娟;刘忠贵;卢景良;刘明春5.鸡腺胃型传染性支气管炎病毒金坛分离株核蛋白基因的克隆和测序 [J], 凌雯;钱建飞;张则斌;李银;唐余华;罗涵禄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

传染性支气管炎病毒山西分离株的分离鉴定及其S1基因分子特征分析

传染性支气管炎病毒山西分离株的分离鉴定及其S1基因分子特征分析王旭贞;程宇;谭仕明;马海利;梁立滨【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2022(44)3【摘要】鸡传染性支气管炎(IB)是目前对养禽业造成严重危害的疫病之一,其病原为传染性支气管炎病毒(IBV)。

IBV由于其基因组的特点而易于发生变异和重组,从而产生新的变异株。

为了解山西地区IBV的流行及变异情况,本研究采集山西省晋中市疑似发生呼吸道病毒感染的肉鸡组织病料样品,通过PCR鉴定、鸡胚接种及测序,分离鉴定到1株IBV,命名为CK/Shanxi-01/2021。

在该分离株S1基因测序的基础上,与NCBI数据库中不同基因型IBV代表株进行序列比对,并构建系统进化树。

遗传演化分析结果显示本研究所分离到的IBV为GI-19基因型。

将CK/Shanxi-01/2021株的S1基因序列与IBV常用疫苗株H120、M41、H52、4/91及LDT3-A等进行序列比对分析,结果显示分离株与目前常用疫苗株核苷酸序列的同源性为78.1%~85.2%,氨基酸序列同源性为75.2%~78.4%,与以往GI-19基因型病毒株相比其S1蛋白高变区(HVR)出现了V68I、S120A、A271T、N282T、N291S等突变。

由此可见,加强IBV流行病学监测,及时掌握目前流行的IBV基因型及其变异特点,对于IB疫情防控具有重要意义。

本研究为山西省地区IB疫情防控提供了参考依据。

【总页数】5页(P320-324)【作者】王旭贞;程宇;谭仕明;马海利;梁立滨【作者单位】山西省畜牧兽医学校;山西农业大学动物医学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.鸡传染性支气管炎病毒ck/CH/HN/1205株的分离鉴定及S1基因的分子特征2.鸡传染性支气管炎病毒地方-分离株S1基因克隆和基因型鉴定3.我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株S1基因的分离及初步鉴定4.鸡传染性支气管炎病毒HH06分离株的鉴定及其S1基因的分子特征5.新疆1株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白MHCⅠ分子限制性T细胞表位的鉴定

畜牧兽医学报 2016，47(3)：559-565A c t aV e t e r i n a r i ae tZ o o t e c h n i c aS i n i c a d o i ：10.11843/j .i s s n.0366-6964.2016.03.019鸡传染性支气管炎病毒S 1蛋白MH C Ⅰ分子限制性T 细胞表位的鉴定朱凤珠1，2，鲁梅3，黄庆华1，杨少华1，黄艳艳1，吴家强1，谭刘刚2，张秀美1，崔言顺2，许传田1*(1.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南250100；2.山东农业大学动物科技学院，泰安271018；3.山东潍坊工程职业学院，青州262500)摘要：利用生物结构技术预测传染性支气管炎S 1蛋白的1条细胞毒性T 淋巴细胞(C T L )表位，并合成相应的候选多肽(S p 6)。

为了确定S 1蛋白中确实存在该T 细胞表位，并鉴定这条T 细胞表位的正确性，构建了含有S 1基因的重组质粒p CAGG S -S 1，通过间接免疫荧光和We s t e r nb l o t 确定该重组质粒可以在真核细胞表达后，将该重组质粒免疫S P F 鸡，间接E L I S A 检测血清中的抗体。

采集免疫鸡的脾淋巴细胞并用合成的候选多肽刺激，通过实时荧光定量P C R 检测脾淋巴细胞中I F N -γ的分泌量以及流式细胞术检测C D 8＋T 淋巴细胞的增殖情况，初步确定该候选肽的正确性。

间接免疫荧光、We s t e r nb l o t 和间接E L I S A 试验结果表明，S 1蛋白能够在293T 细胞中获得表达并能够引起机体的体液免疫，说明S 1蛋白具有反应原性，为进一步验证T 细胞表位打下了基础；荧光定量P C R 结果显示S p 6刺激后的鸡的脾淋巴细胞中I F N -γ的分泌量明显增加；流式细胞检测发现经S p 6和不相关多肽N P 89-97刺激后及空白对照，C D 8＋T 淋巴细胞增殖分别为34.8%、2.6%、0。