不同培养基及不同温度对体外培养泡球蚴原头节的影响

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不同组分培养基及培养温度对安祖花叶片愈伤组织诱导率的影响

ｏｌｕｓｏｔｒｕｆＣａｌｆＡｎｈｕｉｍＬｅｆａ
ＹＮｉ —ｉｇＨＯｈｎ —ａｇ，ＩｊｇＡＧＸａｌ，ＵＺｅｇｆｎ３Ｊｉ，ＣＩＳａ—ｉ，ＮａｇｏｎｎＵｈｏｊ．ｅＷＡＧＧｎｍ
中图分类号：６２１￥８．４文献标识码：Ａ文章编号：ｌ０一７０２０）ｌ０ｌ — ４００ｌ０（０８０－０５０
ＥｆｅｔｏｌｕｅＭｅｉｍｎｍｐｒｔｒｎｔｅＲａｉｆｃｆＣｕｔｒｄｕａｄＴｅｅａｕｅｏｈｔｏ
ｆ１．ＣｅｓｙＥｇｎｅｉｇＣｌｇ，ｂｇｉｕｔｒｌＢｏｅｇｎｅｉｇＣｌｇ，Ｔａｊｎｖｒｉ，Ｔａｊ００２ｈｎ；ｈｍｉｒｎｉｅｒｏｌｅ．Ａｒｌａｉ－ｎｉｅｒｏｌｅｉｎｉＵｉｅｓｙｉｎｉ３０７，Ｃｉａｔｎｅｃｕｎｅｎｔｎ
Ａｂｔａｔｎｈｕｉｍｙｕｇｌａｓｓｄｓｓｒｃ：ＡｔｒｕｏｎｅｆｗａｕｅａｍａｅｉｌｔｆｄｕｈｅｔｒｉｇｅｉｎｆｃｌｒｍｅｉｍｎｔｅｐｒｐｉｔｔｒａｏｉｏｔｔｅｂｔｎｒｄｅｔｏｕｔｅｎｅｕｄｕａｄｈａｐｏｒｅａｔｍｐｒｔｒｏｔｃｌｓｉｄｃｎＴｅｆｅｕｎｙｏｅｆｃｌｓｗａｉｆｅｃｄｂｈａｉｔｆＡｎｈｒｍ．ｔｅｃｎｅｔｏ一ｅｅａｕｅｆｒｉａｌｎｕｉｇｈｒｑｅｃｆＬａａｌｓｎｕｎｅｙｔｅｖｒｙｏｔｕｉｓｕｕｌｅｕｈｏｔｎｓｆ６ＢＡ．ＮＨ４ＣＣ１ｎｔｅｃｌｒ — ｄｕａｄｔｅｃｌｒ — ｅｅａｕｅｈｅｕｔｈｗｅｔａｔｅｖｒｔａｈｓｍｐｒＮＯａ，ｉｈｕｔｅｍｅｉｍｎｈｕｔｅｔｍｐｒｔｒ．Ｔｅｒｓｌｓｏｄｈｔｈａｉｙｗｓｔｅｍｏｔｕｕｓｅｉｏ — ｔｎｆｃｏｏｅｆｃｌｓｉｄｃｎＷｈｎｈｃｎｅｔｏ一Ａａ０５ａｔａｔｒｔｌａａｌｎｕｉｇｕｅｔｅｏｔｎｆ６Ｂｗｓ．ｍｇ・～ｔｅｙｕｇｌａａｂｔｒａｉｔｏｏｒｃｌｓＬ．ｈｏｎｅｆｈｄｅｔｂｌｙｔｆｍａｌｅｉｕＷｈｌｏｌｔｅｏｔｎｆＮＨ４ｒｄｃｄｏａｆｉｈＭＳｉｅｎｙｈｃｎｅｔｏＮ０ｅｕｅｔｈｌｎｔｅｍｅｉｍ．ｎｈｎｅｄｕｏｃａｇｗａｆｕｄｓｏｎ．ＢｕｂｔｏｏｔｎｏＨ４ｔｏｈｆｃｎｅｔｆＮＮ０ａｄＣａ１ｅｅｒｄｃｄｔｈｌｉｈｍｅｉｍ．ｔｅｆｅｕｎｙｆｌａａｌｓｗｓｒｉｅＡｉｌｈｎｅｆｔｍｐｒｔｒｕ－ｎＣ，ｗｒｅｕｅｏａｆｎｔｅＭＳｄｕｈｒｑｅｃｏｅｒｃｌａａｓｄｌｔｃａｇｏｅｅａｕｅｄｒｕｔｅ

不同培养基体外培养旋毛虫新生蚴成活率分析

维普资讯
２００２年
９月
ห้องสมุดไป่ตู้
首都医科大学学报
Ｊｕａｆｐｔ［ｉｅｓｙｏｄｃｌｃｅｃｓｏｒｌｉａＵｎｖｒｉｆＭｅｉａｉｎｅｎｏＣａｔＳ
Ｓｐ０２ｅ．２０Ｖ０．３Ｎｏ．１２３
维普资讯
月至９月，采用４种不同的培养基对新生蚴进
行体外培养，对其成活率进行分析，一步总并进结各种方法的优缺点，希望为新生蚴的体外培
养总结经验，以后的研究工作打下基础。为
１材料和方法
肌肉期幼虫的分离：采用断颈椎法，将感染黑龙江猪源旋毛虫（室保种）０ｄ的Ｓ本４Ｄ大鼠（都医科大学实验动物中心提供）死后，首处去
皮及内脏，碎肌肉，组织匀浆器进一步打剪用碎，配成４胃蛋白酶（性１３００一％盐酸％活：０）１
在洁净工作台中，将孵育液用２０目纱网过滤，０
应用ＳＳＰＳ统计分析软件，用双因素方采差分析对表１中的数据进行分析，出Ｆ＝得
１１８，１．４Ｐ＝００。说明３组之间新生蚴存活．０
第２卷３
第３期
不同培养基体外培养旋毛虫新生蚴成活率分析
首都医科大学寄生虫学教研室张帆黄松姜洪杰

二甲基亚砜对泡状棘球蚴原头节的影响

二甲基亚砜对泡状棘球蚴原头节的影响目的探讨溶媒二甲基亚砜对体外培养泡状棘球蚴原头节的毒性作用，为药物实验筛选合适的助溶剂浓度。

方法观察不同浓度的DMSO干预下的泡状棘球蚴原头节的存活生长情况，记录原头节的存活率。

结果DMSO低浓度组（0.10、0.50、1.00 g/ml）几乎无细胞毒性。

DMSO浓度≥2.00g/ml时，随浓度和作用时间的加长，泡球蚴原头节存活率下降。

2.00g/ml组作用8d时；4.00g/ml组作用6d、8d时；8.00g/ml组作用4d、6d时，与空白组有显著差异（P＜0.05）。

作用8d时，8.00g/ml组原头节全部死亡。

结论对泡状棘球蚴原头节进行体外药物干预实验时，浓度小于等于1.0g/ml的DMSO可用作助溶剂，该浓度泡球蚴原头节毒性作用小。

标签：泡状棘球蚴；二甲基亚砜；原头节泡型棘球蚴病（alveolar echinococcosis，AE）是由多房棘球绦虫（Echinococcosis multaloculuras，Em）幼虫寄生于人体所致的一种致死性的寄生虫病。

泡型棘球蚴病可发病于机体多个部位，以肝脏发病最多见。

目前，肝泡型包虫病的手术治疗相对肝囊型包虫病（Echinococcosis granulosa，EG）要困难，且并非所有患者初诊时都能施行根治性手术，有些患者不能耐受手术或已经失去手术时机，对于这些患者，药物治疗则成为最佳治疗手段。

但是目前包虫病的药物治疗效果仍不理想[1]，部分患者无法耐受且可引起不良反应[2，3]，因此，有效的、副作用小的抗包虫药物制剂是包虫病防治研究的重要课题之一。

抗包虫新药的研发过程中，首先要进行药物的体外实验，部分药物样品水溶性较差，需要加入有机溶剂或表面活性剂对其进行溶解，而有机溶剂或表面活性剂本身都有不同程度的细胞毒性或能够影响细胞生长，不同的溶剂间和不同细胞间存在着差异。

二甲基亚砜（DMSO）是常用的助溶有机化合物，DMSO对许多药物具有溶解性、渗透性，能增加药物吸收和提高疗效，常作为细胞冷冻保护剂用于骨髓、脐血的超低温长期保存[4]。

温度对球孢白僵菌生物学特性的影响

温度对球孢白僵菌生物学特性的影响研究了不同温度对球孢白僵菌生长的影响，结果表明在22～26℃温度范围内球孢白僵菌落个数随温度的升高而逐渐增多，在26℃时达到最大。

随后随着温度的升高菌落个数逐渐降低。

标签：球孢白僵菌；时间；温度球孢白僵菌（Beauveria bassiana）属于链孢霉科，寄生于家蚕幼虫体内（可寄生于60多种昆虫体上），使家蚕病死。

干燥后的尸体称为僵蚕。

入药能祛风、镇惊等。

由于加强防治。

近年来白僵菌对家蚕的感染大为减少，为解决僵蚕的药源问题，以蚕蛹为原料，接入白僵菌，所得蚕蛹可代僵蚕用。

实验材料与方法：（1）材料：高孢菌粉、0.1%吐温-80、液体培养基、PDA固体培养基。

（2）方法：a.球孢白僵菌孢子萌发率测定：将球孢白僵菌菌株用0.1%吐温-80无菌水分别配制成浓度为1×115个/ml的分生孢子悬浮液，然后接种于液体培养基SDY中，25℃振荡培养（200 r/min），分别在14h、16h、18h、20h。

镜检稀释至每个视野有20～30个孢子，每次镜检5个视野，不少于200个孢子，孢子已萌发的标准是当可见芽管长度等于或大于孢子直径长度的情况下为准，统计孢子萌发率。

b.球孢白僵菌孢子产孢量测定：用同样的方法和浓度配制分生孢子悬浮液，在PDA 固体平板培养基上接种400μL，用灭菌玻璃棒涂布均匀，在RH=90%，25℃条件下培养10d，用直径为0.8cm的打孔器在菌落中央到边缘的中点处取出一定面积的菌落，移于加入定量0.1%吐温-80无菌水的小三角烧瓶中，充分振荡使孢子均匀分散最后配成孢子悬浮液。

每个培养皿按三角形3点取样，每菌株5次重复，用血球计数板测定孢子数量，最后统计换算成每株菌株平均产孢量（个/cm2）。

c.球孢白僵菌菌落生长速率测定：将球孢白僵菌菌株接种到PDA 斜面培养基上，培养条件（25℃、RH=90%）时间10～15d后，取分生孢子以0.1%吐温-80无菌水配制成浓度为1×115个/ml的分生孢子悬浮液，用微量移液器吸取浓度为1×115个/ml的分生孢子悬浮液5 μL接种于PDA固体培养基中央，最后置于RH=90%、25℃条件下培养，用游标卡尺十字交叉测量培养第3天后3～10d的菌落生长直径，计算出平均生长速率（mm/d）。

不同培养温度对大曲微生物种群变化影响的研究

不同培养温度对大曲微生物种群变化影响的研究作者：常强,昊再节,孙伟,刘翠兰,韦孝宇来源：《现代食品》 2019年第12期◎ 常?强,吴再节,孙?伟,刘翠兰,韦孝宇(安徽文王酿酒股份有限公司,安徽?临泉?236400)Chang?Qiang, Wu Zaijie, Sun?Wei, Liu Cuilan, Wei Xiaoyu(Anhui Wenwang Wine Co., Ltd., Linquan?236400, China)摘?要:以不同顶温培养下的中温曲和中高温曲为样品,对其培养温度、感官理化指标以及培养和贮存微生物进行了分析。

结果表明:中高温曲挺火长,曲香好,但糖化力和发酵力低;培养过程中高温曲细菌数量多于中温曲,但酵母菌和霉菌低于中温曲,贮存过程中变化趋势相近。

关键词:中温曲;中高温曲;细菌;酵母菌;霉菌Abstract:The moderate-temperature daqu and moderate-high-temperature daqu in different top temperature culture were used as samples, as well as culture temperature, sensory and physiochemical index, microbe in culture and storage stage were analyzed. The results indicated that moderate-high-temperature daqu last for a long time, stronger aroma, but saccharifying power and fermenting power was low. Bacterial of moderate-high-temperature daqu was higher than that of moderate-temperature daqu in culture period, while less than moderate temperature in mold and yeast. The change tendency was similar in storage stage.Key words:Moderate-temperature daqu; Moderate-high-temperature daqu; Bacteria; Yeast; Mold中图分类号:TS261.1传统大曲生产过程,实质上是富集环境微生物进行自然接种的过程。

温度对辣椒(Capsicum annuum L.)小孢子培养的影响

温度对辣椒(Capsicum annuum L.)小孢子培养的影响【摘要】对辣椒小孢子培养的主要影响因素之一的温度因素进行了深入探讨，包括低温和高温以及高低温交替变换。

文章对各个时期不同国家研究者所做的相关实验进行了罗列与比对，并对温度影响的可能原因进行探讨。

【关键词】辣椒单倍体小孢子低温高温预处理培养引言 (1)一、低温预处理 (1)二、低温培养 (2)三、高温预处理 (3)四、变温处理 (4)五、温度影响小孢子培养机理的探讨 (4)参考文献 (5)辣椒(Capsicum annuum L.)是世界上热带和温带的重要蔬菜种植作物，其果实营养丰富，深受人们喜爱。

在中国栽培面积就早已达到130多万公顷，为世界之最，是世界主要的生产和出口国。

辣椒产量的提高是目前较为热门的科研题目，但常规育种手段从现有的辣椒品中选出高抗、优质的品种难度大、耗时长，而且会造成作物遗传多样性的下降和优良基因的遗失。

早在1973年，王玉英[1]、George&Narayanswamy[1]报道了通过花药培养获得辣椒单倍体植株，以后辣椒离体培养作为快速繁殖的手段，具有杂交优势固定、优良品种快繁、突变体保存利用以及定向改变性状等优势，广泛应用于辣椒品种的繁殖与生产。

目前辣椒单倍体植株离体培养的主要影响因素为供体植株基因型、培养基、取材时间和培养条件等。

其中，培养条件中的温度因素包括高温预处理、低温预处理和不同培养温度等对于小孢子培养胚状体的形成和发育均有不同程度的影响。

孢子体胚胎形成需要在一定压迫条件下。

为了提高孢子配子体到孢子体胚胎阶段的诱导频率，一般会应用一些物理手段如高低温、渗透胁迫，或是生理手段如饥饿处理。

花蕾和花药对温度的反应各不相同。

在花药培养中，培养温度对诱导愈伤组织或培状体的形成十分重要，它的作用表现在整个过程之中。

有些物种花药培养对温度的反应很敏感，培养温度只要有2~3℃之差就可导致花粉愈伤组织的产量发生大幅度的甚至成倍的提高或降低，也能导致花粉遇上组织质量的明显改变。

细粒棘球绦虫——原头蚴在两种细胞培养液中体外培养的初步观察

维普资讯
１６
ＪｕｎｌｆｍｍａＳｉｎｅａｄＶｔｒａｄｉｏｒａｏＡｌｃｃｎｅｉｒＭｅｉｎｅｅｎｙｃｅ
Ｖ１２ｏ．７
Ｎ．ｏ５
２００８
细粒棘球绦虫原头蚴在两种细胞培养液中体外培养的初步观察
ＡｂｔａｔＴｐｉｎｃｌｒｌｃｎｉｏｓｆｒｃｌｖｔｎｏｒｔｓｏｅｅｆＥｈｎｃｃｕｎｏｏｓｒｅｔｅｒｇｏｔｎｅｅｏ．ｓｒｃ：ｏｏｔｏｕｔａｏｄｔｎｏｕｔａｉｆｐｏｏｃｌｃｓｏｃｉｏｏｃｓａｄｔｂｅｖｈｉｒｗｈａｄｄｖｌｐｕｉｉｏ
，
（．ｅｒａｙＲｓａｃｎｉｔ，ｉａｇＡａｅｙｏｎｍｌｃｎｅ１１ｅｍｙＥｓＲｄ，ｒ／８００Ｃｉ）１ＶｔｉｒｅｒｈｉｔｅＸｎｎｃｄｍｅｎｅｔｕｉｆｆＡｉａｉｃ，５Ｋ／ａ／ａｔｏｅＵｕ，３００，ｈｎＳｅａｍｑａ
Ｉｖｔｏｃｌｉａｉｎｒｔｓｏｅｅｆｔｒｔｓｉｅｆｎｉｒｕｔｖｔｏｐｏｏｃｌｃｓｏｈｅｐｏｏｌｓｏｃ

ＥｃｉｏｏｃｓｇａｕｏｕｎｍｅｉｍｈｎｃｃｕｒｎｌｓｓｉｄｕＲＰＭＩ一１４ｎＥＭ０ａｄＭ６
ｉｏｍｄａＲＭＩ６０ａｄＭＥｉｒｉｏｔｅａｃｌｓ１ｍ（Ｃ）ＴｅｃｔａｏａｂｅｖｄｕｉｇａＯｌｐｃｉｎｔｅｉｓ。Ｐ一１４Ｍｗｔｏｔｕｔａ％ｗｎｈｗｈｆｌｆｅｌＦＳ．ｈｕｉｔｎｗｓｓｒｅｓＩｌｏｔａｍ．ｌｖｉｏｎｎＴａｉｌｌ

不同温度和不同培养基对滑菇分生孢子产生的影响

子的产生是影响出菇的重要因素］针对这一情况，，本着寻找出滑菇产生分生孢子的原因，以便使菇农在生产
第一作者简介：桂云（９１）女，授，从事食用菌教学及赵１５一，教现
培工作。
氢钾和石膏，搅拌均匀，分装并尽量使其成斜面，２１１Ｃ灭
收稿日期：０００ — ２２１－５０
ＳｌｔｎｏｎｔｅＦｒｌｏｎｉａｎｒｕａｍｉｕｕｉｌｒｍｉｄｅｃｉｆｏｍｕａｆｔｔｉｇｆｔｓｎｍｎｄｆｏｕＬｎｌｅｏｏｈＡｓｌｏＣＪ
北方园艺２０８１～００（）９２１１：９０
・用菌・食
不同温度和不同培养基对滑菇分生孢子产生的影响
赵桂云，刘
，
岩，王伟功。
（．丹江师范学院生命科学与技术学院，龙江牡丹江１７１；．棱市第一中学，龙江穆棱１７０１牡黑５０２２穆黑５５０
麸皮１，０酵母膏０２，脂粉１６。配方Ｃ：麦，．琼．小
磷酸二氢钾０２，．石膏１。配方Ｄ：玉米，磷酸二氢钾０２，膏２。配方Ｅ：屑９，皮５，萄糖．石木３麸葡１，石膏１。各配方均自然ｐＨ值。１２培养料配制．配方Ａ常规方法制作。配方Ｂ的配制是先将马铃
薯与麦麸同煮１ｎ过滤留汁，液中加入其它成分，３ｍｉ，滤

《动物细胞培养技术及其应用》知识清单

《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的概念动物细胞培养技术是指从动物体内取出细胞，在体外模拟体内的生理环境，使其生长、分裂、增殖，并维持其结构和功能的一种技术。

二、动物细胞培养的基本条件1、无菌环境细胞培养必须在无菌条件下进行，以防止微生物的污染。

这包括对实验器材的严格消毒、实验操作在超净工作台中进行等。

2、合适的培养基培养基提供了细胞生长所需的营养物质，包括氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。

不同类型的细胞可能需要不同成分和比例的培养基。

3、适宜的温度和气体环境一般来说，细胞培养的温度在 37℃左右，同时需要一定的气体环境，如 5%的二氧化碳用于维持培养基的酸碱度平衡。

4、合适的培养容器常见的培养容器有培养瓶、培养皿、多孔培养板等。

三、动物细胞培养的基本过程1、取材从动物体内选取合适的组织或器官，如肝脏、肌肉、皮肤等。

2、原代培养将取得的组织用酶解法或机械法分散成单个细胞，然后接种在培养瓶中进行培养，这称为原代培养。

3、传代培养当原代培养的细胞生长到一定密度后，需要将其分成若干份，重新接种到新的培养瓶中继续培养，这就是传代培养。

4、细胞株和细胞系的建立经过多次传代培养后，细胞的特性相对稳定，就可以建立细胞株。

如果细胞发生了遗传物质的改变，具有无限增殖能力，就形成了细胞系。

四、动物细胞培养技术的应用1、生物制药利用动物细胞培养技术可以大规模生产生物制品，如疫苗、抗体、蛋白质药物等。

例如，通过培养特定的细胞株来生产乙肝疫苗、胰岛素等。

2、基因工程在基因工程中，动物细胞可以作为受体细胞，用于表达和生产重组蛋白。

通过将目的基因导入细胞，使其表达出所需的蛋白质。

3、细胞治疗细胞治疗是一种新兴的治疗方法，如利用免疫细胞（如 CART 细胞）治疗癌症。

通过对患者自身的免疫细胞进行改造和培养，然后回输到患者体内，以达到治疗疾病的目的。

4、基础研究动物细胞培养为细胞生物学、发育生物学、遗传学等领域的研究提供了重要的实验模型。

温度、盐度对皱纹盘鲍“97”选群生长发育的影响

温度、盐度对皱纹盘鲍“97”选群生长发育的影响皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino),自然分布于我国的辽东及山东半岛,是最具经济价值的贝类养殖品种之一。

自20世纪80年代以来,我国皱纹盘鲍养殖业发展迅猛,养殖区域由黄海北部逐步南扩至福建沿海、广东东部沿海等地。

养殖范围的大幅扩增及“南北调养”模式的不断发展,使皱纹盘鲍面临环境变化的几率急剧增加。

即使在同一海域,受暴雨、潮汐、大陆径流等影响,海水的温度、盐度等因子常处于大幅变动之中。

温度和盐度是海洋中的重要环境因子,它们不仅限制海洋生物的地理分布和养殖范围,还影响其存活、生长、表观遗传修饰等重要生物学过程。

本文以“97”选育群体为实验材料,系统研究了温度、盐度对皱纹盘鲍生长发育的影响,确立了各发育阶段的适宜温盐范围,以期为人工养殖提供生态学参考;同时还探索了不同温盐条件下幼鲍DNA甲基化的变化模式,旨在揭示皱纹盘鲍响应温盐胁迫的表观遗传学机制,并为其抗逆品种的培育提供表观遗传学依据。

1.温度、盐度对皱纹盘鲍精子活力和受精率的影响利用计算机辅助精子分析(computer-assisted sperm analysis,CASA),检测了不同盐度下皱纹盘鲍的精子活力;同时,以受精率为评价指标,确定了受精阶段的适宜温度、盐度范围。

结果表明,盐度对皱纹盘鲍的精子活力具有极显著影响(P<0.01)。

5~50内,随着盐度的升高,皱纹盘鲍的精子活率、(A+B)级精子比例、直线运动速度、曲线运动速度和平均路径速度均呈现先升高后降低的趋势。

综合上述指标,确定皱纹盘鲍精子的适宜盐度为26~40。

该范围内,精子活率大于90%,(A+B)级精子比例大于85%,精子直线运动速度高于80μm/s,曲线运动速度高于100μm/s,平均路径速度高于95μm/s。

温度、盐度对皱纹盘鲍受精率的影响极显著(P<0.01)。

14~28oC内,皱纹盘鲍均可受精,20oC时,受精率最高,为94.84%;28oC时,受精率最低,为14.39%。

不同贮存温度、培养基及四环素对培菲康胶囊活菌数的影响

培菲康胶囊（Live Combined Bifidobacterium, Lactobacillus and Enterococcus Capsules）作为一种复合微生态制剂，包含长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌和粪肠球菌三种主要益生菌，可通过补充这些益生菌促进宿主肠胃增殖新生益生菌，从而在重建宿主肠道菌群、保证肠道微生态平衡、提高机体免疫力、促进宿主健康中发挥着重要作用。它在临床广泛应用于儿童腹泻、儿童功能性便秘、新生儿黄疸、肠易激综合征等疾病的治疗，对儿童厌食症、肝硬化、幽门螺旋杆菌感染、儿童单纯性肾病综合征等也有很好的疗效。
* 作者简介：徐爱国（1984—），男。主要从事药品生产、技术、质量、管理工作。E-mail: xag800@
活菌数作为一种可有效考察微生态制剂有效性的质量控制指标，也是稳定性考察的重要指标。目前研究表明保藏温度、 [1-4] 保藏时间、 [5-6] 培养基类型 [5-6]、pH[2,4] 及抗生素添加 [4,7] 是影响微生态制剂活菌数的主要因素。为了对培菲康三元复合制剂中长双歧杆菌进行准确计数，排除嗜酸乳杆菌和粪肠球菌的干扰，需要在培养基中添加四环素抑制其他两种菌的生长，而长双歧杆菌对四环素不敏感；尽管培菲康推荐保藏温度为 4 ℃，但考虑到患者用药的实际情况，我们还考察 25、30、37 ℃条件下短期保存的活菌数变化情况，以便准确判断以上因素对微生态制剂活菌数的影响，为进一步优化微生态制剂的生产工艺，提高制剂中的活菌数及产品稳定性提供有效依据 [8]。
on the number of living bacteria in Bifico capsules
XU Aiguo* (SPH Sine Pharmaceutical Laboratories Co., Ltd., Shanghai 201206, China) ABSTRACT The factors affecting the number of viable bacteria in Bifico capsules were studied, including storage temperatures, media and tetracycline. The results showed that the number of live bacteria of Bifidobacterium longum, Lactobacillus acidophilus and Enterococcus faecalis in each capsule were all more than 1×107 CFU when they were incubated for 7 days at 25, 30 and 37 ℃. The number of the living bacteria and their survival rates were the highest when capsules were stored under 25 ℃. The number of B. longum was significantly higher when cultured on blood medium than the other media tested, which indicated that the blood medium was more suitable for the growth of B. longum. KEY WORDS Bifico capsules; storage temperature; medium

温度控制对培养流感病毒细胞的影响

温度控制对培养流感病毒细胞的影响摘要】目的：探讨温度控制对培养流感病毒细胞的影响。

方法：选取分离、富集的流感病毒细胞在不同温度下培养，观察贴壁、存活情况，分析温度控制的效果。

结果：40℃、37℃、33℃下均能看到流感病毒细胞贴壁、存活，37℃流感病毒细胞贴壁最多，相比40℃、33℃存在显著统计学差异，P＜0.05；33℃流感病毒细胞贴壁率显著高于40℃，P＜0.05。

结论：温度控制对体外培养流感病毒细胞有显著影响，37℃最适宜于体外培养，温度越高则培养效果越差，低于37℃时流感病毒细胞贴壁、存活时间有所缩短。

【关键词】温度控制；狗肾细胞；流感病毒细胞；体外培养；存活当前人们为了有效预防流感以及治疗流感，正在研究一系列的流感病毒体外培养的方法。

要保证流感病毒细胞在体外正常繁殖生长，就必须保证培养的各个环节正常进行。

体外培养流感病毒在与体内培养病毒的方式存在明显不同[1]。

在体外条件下，大多数的流感病毒受到的温度影响较大。

因此本文对温度控制对流感病毒细胞的体外培养进行研究，从而获得最佳的温度控制范围，提高流感病毒细胞的培养水平。

1资料与方法1.1一般资料选择某医院作为监测观察点，该地区流感爆发疫情的对象做为研究对象。

纳入标准：体温≥38摄氏度，咽喉疼痛，有咳嗽症状，采集流感病毒发作3天之内、未服用抗病毒药物的流感样患者的咽拭子。

1.2方法将采集的咽拭子放置在3毫升的Hank氏液中，保存设置温度为4~8摄氏度，在24小时内送检。

病毒分离与鉴定：准备75%~90%的成片细胞，用40倍镜对细胞的生长状态进行观察，将处于对数生长的MDCK细胞倒出，用1毫升的Hank氏液清洗细胞1~2遍，加入2μ克/毫升的TPCK-胰酶生长液[2]。

细胞培养管接种：送检24h内进行流感病毒分离，利用无菌滤膜吸管吸取200μL的样品放置在细胞的培养管中，分明设置37摄氏度、33摄氏度、40摄氏度的培养温度，对细胞的病变情况进行培养观察，24小时内出现CPE是因为标本中非特异性成分引起毒性反应。

研究温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用

研究温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用摘要：【目的】探讨不同温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用。

【方法】将4株临床分离菌株分别接种于SDA、PDA、BHI、50 mg/kg 羊血BHI及5 mg/kg GSBHI 5种培养基平皿上，每种培养基接种5个平皿，分别置于25 ℃、35 ℃、36 ℃、37 ℃及38 ℃含体积百分数为5%CO2的恒温箱中培养。

观察菌落生长情况并计算酵母细胞转化率。

【结果】在38 ℃，平皿转化率为25%(只有1株菌发生了转化);在35 ℃和37 ℃时，平皿转化率分别是60%和85%;而在36 ℃时平皿转化率仅为45%。

使用50 mg/kg羊血BHI和%GSBHI培养基培养，65%培养皿上的菌株发生了酵母相转化，使用BHI培养基培养，45%培养皿上的菌株发生了酵母相转化，而使用SDA和PDA培养基培养，只有20%培养皿上的菌株发生了酵母相转化。

37 ℃时，有3株菌在BHI、50 mg/kg羊血BHI和5 mg/kg GSBHI培养基上的酵母细胞转化率均达到90%，1株菌在SDA、PDA和BHI 培养基上的转化率均低于10%。

【结论】温度是影响申克孢子丝菌酵母相转化的关键因素，培养基的营养成分亦是影响转化效果的重要因素。

关键词：申克孢子丝菌; 酵母相转化; 温度; 培养基申克孢子丝菌属于双相型真菌，在自然界或室温培养为菌丝相，在体内或37 ℃培养为酵母相。

申克孢子丝菌感染可导致孢子丝菌病，不仅可以引起皮肤组织的病变，还可侵犯内脏器官引起系统性病变，严重危害着人类的健康[1-2]。

酵母相是申克孢子丝菌的致病相，申克孢子丝菌在体内从菌丝相到酵母相的转化是致病的一个关键步骤[3-4]。

目前关于酵母相转化的研究多集中在基因水平[5-6]，而对于与致病性同样紧密相关的生化特点研究较少。

本文研究了不同温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用。

1 材料与方法实验菌株菌株SUMS0382、SUMS0383、BMU02035和BMU00471经形态学和分子生物学鉴定为申克孢子丝菌。

温度控制对培养流感病毒细胞的影响

温度控制对培养流感病毒细胞的影响从机体中取出组织或细胞，模拟机体内的生理条件在体内外进行培养，使之生存和生长，称之为组织培养［1］。

因近来发现，用组织培养细胞所分离到的流感病毒，其抗原性和基因特性要比用鸡胚分离到的更接近原始采集的标本，故世界卫生组织号召大家寻找合适的细胞来制备流感病毒疫苗，来代替鸡胚制备疫苗［2］。

资料与方法材料：生长成片的MDCK细胞。

T-75细胞培养瓶，颈口有倾角。

D-MEM 培养液：青、链霉素母液(10000U/ml青霉素G；10000μg/ml硫酸链霉素)，分装后保存于-20℃。

HEPES缓冲液，1M母液。

胎牛血清，40nm滤过。

EDTA-胰酶(005%胰酶；053mM EDTA 4Na)，分装后保存于-20℃，牛血清白蛋白组分V，75%溶液。

1ml、10ml无菌移液管。

70%～75%的酒精。

待测毒株：红细胞悬液(鸡、豚鼠，由于“O”相毒株不能凝集鸡红细胞，所以在对该类病毒进行鉴定时应使用豚鼠红细胞)。

磷酸缓冲液(PBS)，001M，pH 74(Sigma P 3813)。

多道及单道可调加样器单通道可调加样器量程20～200μl、200～1000μl，8通道或12道可调加样器量程20～200μl。

孔微量板：鸡红细胞选择“V”型或“U”型底微量板；豚鼠红细胞选择“U”型底微量板。

其他耗材，200μl、1000μl滴头、试管、加样槽等。

方法：①细胞的传代：这里以T-25细胞瓶单层培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。

用于细胞培养的培养基、胰酶等，37℃回温后，用70%～75%酒精擦拭后放于生物安全柜内［3］。

弃培养液，加1ml预先37℃温浴的EDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料表面分离(5～10分钟)。

必要时可以摇动或吹打来分离细胞。

加10ml完全型D-MEM，轻轻上下移动移液管来分散细胞团。

一般情况下，1瓶细胞传3瓶，每2～3天需传1代。

培养基类型和培养温度对引进番茄品种花粉活力的影响

２．１不同培养基对番茄花粉活力的影响
酸＋７ｍｇ／ＬＧＡ３＋０．５ｍｇ／Ｌ硫胺素＋１％琼脂，以Ｍ４表示；
（５）１００ｇ／Ｌ蔗糖＋１２０ｍｇ／Ｌ硼酸＋７ｍｇ／ＬＧＡ３＋０．４ｍｇ／Ｌ硫胺素＋１％琼脂，以Ｍ５表示。将配制好的培养基，用玻璃棒蘸取２—３滴滴于载玻片中
同温度处理下８个美国引进品种番茄花粉活力的差异及其对
番茄属植物，是全球范围内广泛栽培的重要蔬菜作物。番茄采用有性繁殖，在有性繁殖中花粉作为遗传物质的载体，花粉活力的有无及大小决定遗传物质传递的成败，并与坐果率、
种子发育及果实生长有密切的关系。因此在进行番茄授粉受精、胚胎发育、遗传育种和花粉学研究之前，都要检测花
ＮＴ一１６３、ＮＴ一１６８、ＮＴ一１８１、ＮＴ一１８２、ＮＴ一１８３、ＮＴ一１８６、
高，在５种培养基上的发芽率范围为５８．６６％～６６．０７％；以
试验于２０１２年４ — ８月在南京农业大学园艺学院进行。
番茄种子经浸种、催芽后播种于７２孔穴盘中，育苗基质为泥
震，教授，博士生导师，主要从事蔬菜栽培生理与生物
通信作者：吴
炭、蛭石、珍珠岩按２：１：１比例（体积比）配制的复合基质。
粉的活力。
花粉活力的检测通常分为萌发测定和不萌发测定。萌发

植物细胞培养生产次级代谢产物的影响因素与对策

植物细胞培养生产次级代谢产物的影响因素与对策植物细胞培养技术是将植物体的某一部分经过无菌处理，置于人工培养基上使其细胞增殖，进而按需要进行培养的技术。

利用植物细胞培养技术生产有用代谢产物，已成为继微生物技术以后当代生物技术重要的发展领域。

据不完全统计，我国已对400多种植物建立了组织和细胞培养体系，并从中分离出600多种代谢产物。

1外植体的影响同一植株不同部位的组织进行培养时，其产物或产物积累量不同。

银杏叶来源的愈伤组织黄酮含量为1.5%，茎段来源的愈伤组织为1.0%，而子叶来源的愈伤组织仅为0.3%。

Mischenko等[3]在茜草愈伤组织培养过程中发现，来源于叶柄和茎的愈伤组织蒽醌累积量比来源于茎尖和叶的愈伤组织高。

徐咏梅等对杜仲乔林与叶林2种栽培模式下树皮中次生代谢物的含量差异研究发现，乔林树皮中杜仲醇、总黄酮和杜仲胶的含量均比叶林树皮中的高，而叶林树皮中绿原酸、京尼平甙酸和桃叶珊瑚甙比乔林树皮中的高。

因此，利用植物细胞培养生产次生代谢物时，选择能诱导出疏松易碎、生长快速且具有较高次生代谢物合成能力的愈伤组织的外植体非常重要。

2培养基的影响2.1培养基种类在细胞培养中，愈伤组织生长和次生代谢物产生的最佳培养基一般是不一致的。

钟青平等研究不同培养条件下的栀子愈伤组织生长和栀子黄色素的产生时发现，B5、MG-5基本培养基有利于愈伤组织生长；M-9基本培养基有利于黄色素合成。

甘烦远等认为MC培养基对红花愈伤组织生长和生育酚的形成最有效。

因此在组织培养时可以采用二步培养法，根据生长及代谢的需要，调整基本培养基。

2.2培养基组分2.2.1碳源不同的培养细胞适合生长和次生代谢物积累的碳源种类不同。

郑穗平等，在研究玫瑰茄细胞生长和花青素生成时发现，蔗糖作为碳源，细胞的生长量高，葡萄糖作为碳源，细胞花青素的含量高。

赵德修等研究发现，5%蔗糖+1%葡萄糖组合对雪莲愈伤组织生长不仅有利，而且细胞中总黄酮的含量也最高。

【微生物鉴定】影响微生物鉴定结果的主要因素

【微生物鉴定】影响微生物鉴定结果的主要因素1、检测前因素1.1 培养基的影响对于MALDI-TOF MS微生物鉴定系统来说，不同培养基培养导致菌株肽质量谱有所变化。

某些菌种的肽质量谱对不同成分的培养基较为敏感，肽质量谱会有较大差异，尤其是采用直接涂抹法会影响鉴定率。

大多数的菌种对不同成分的培养基产生肽质量表达谱变化没有特异性，不影响菌种的鉴定。

培养基对鉴定结果的影响，主要在于菌体蛋白样本制备过程中是否混杂有培养基的成分(主要为盐离子)，导致离子抑制，降低了检测灵敏度，样本谱图采集困难(激光强度需提高，谱图叠加数量增加)、信号噪音大、峰数目少，难于鉴定。

因此，培养基的物理性质，即固体、半固体、液体是微生物质谱鉴定所需要关注的。

不同物理形态的培养基培养后，菌株的前处理方式不同。

固体表面培养的菌株，按乙醇/甲酸法制备样本即可;液体及半固体培养基培养的微生物，洗涤菌体是有效降低培养基成分影响的有效途径。

洗涤不充分，培养基残留成分会影响质谱峰图;多次洗涤尽管可以去除杂质，但费时、影响检测效率。

洗涤一次后离心处理，即可获得理想的肽指纹图谱。

因此，液体、半固体培养的微生物，采用PBS洗涤一次后预提取蛋白，即可完全可以达到质谱检测的要求。

1.2 培养环境因生长速度不同，菌株培养时间的选择应根据培养经验，选择菌株菌落生长最为茂盛时，比如分枝杆菌3d、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌为1d，室温存储或微需氧培养时间过长，严重影响鉴定结果;4℃条件，存放8d不影响菌株识别。

每次培养都保持一定的pH MALDI-TOF MS值及固定的生长率是很难实现的，不同pH值的培养基会影响菌株的生长速率、影响菌株的细胞形态，但对用于种、属鉴定的肽质量谱，即用于菌株识别的高丰度蛋白无影响。

不同的培养温度(26℃～37℃)会影响菌株的表型特征，高温范围32~37℃的肽质量谱非常相似，不影响鉴定;低温范围26℃，肽质量谱会有较大差异。

建议待鉴定菌株的培养温度与建库菌株的培养温度保持一致。

影响培养基灭菌效果的因素

影响培养基灭菌效果的因素培养基灭菌是否彻底，直接影响科研检测数据，影响培养基灭菌的因素很多，除了培养基内杂菌的种类和数量，灭菌时间长短和温度高低，还取决于以下几点：1. 营养成分的保持湿热灭菌时，微生物被杀死的同时，培养基的营养成分也遭到了一定的破坏，特别是氨基酸和维生素。

如在121℃，仅20min，就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏，蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。

在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应，造成培养基中原有营养成分的数量变化，因而影响培养基质量。

2. 微生物的耐热性细菌芽孢的热阻较大，灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。

3. pH值pH值对微生物的耐热性影响很大。

pH值介于6.0~8.0时，微生物最不易死亡。

pH<6.0时，微生物比较容易死亡，此时PH很容易渗入微生物的细胞，从而改变细胞的生理反应，促使其死亡。

所以培养基的pH越低，所需的时间也越短。

4. 培养基的成分油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式一层薄膜、影响热的传导。

而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性，灭菌较易。

例如：大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡，在30%糖液中需30分钟才死亡。

一般糖类含量较多的时候最好选用115℃，30分钟；一般的培养基可选择121℃20分钟。

5. 泡沫泡沫中的空气形成隔热层，使热量难以渗透进去，杀死其中的杂菌，从而影响培养基灭菌效果。

6. 颗粒颗粒小，容易灭菌，颗粒大，则难灭菌。

对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基，可用粗滤的方法（不应影响培养基质量）予以除去，培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。

7. 灭菌锅内空气是否排净这个是影响培养基灭菌是温度和压力比例关系的要点，同样达到了相同的压力的情况下，如果空气未能排净，也就是说不是纯蒸汽灭菌，此时的温度不一定能达到目的要求，会严重影响培养基灭菌效果。

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