噬菌体检查
细菌的噬菌体分型
细菌的噬菌体分型实验二细菌的噬菌体分型第一部分肠杆菌科噬菌体的分离、纯化与增殖噬菌体广泛存在于自然界。
凡是有细菌存在的地方，一般都能找到相应的噬菌体。
例如，土壤、肥料、腐烂有机物、粪便和阴沟污水等常是各种细菌的栖息地，从中能分离到相应的噬菌体。
从自然界分离某一噬菌体需要经过以下步骤:培养宿主菌(或叫做敏感菌);采集含噬菌体的样品;噬菌体富集培养;制备噬菌体裂解液;验证噬菌体的存在;噬菌体的纯化;噬菌体的增殖;噬菌体的效价测定和保存。
下面以大肠杆菌噬菌体为例详细介绍噬菌体的分离和纯化方法。
1( 噬菌体的分离(1)制备菌悬液:取大肠杆菌斜面一支，加4ml无菌水洗下菌苔，制成菌悬液。
(2)增殖培养:于10ml三倍浓缩的肉膏蛋白胨液体培养基的三角烧瓶(1支5ml吸管)中，加入污水样品20ml(1支5ml吸管)与大肠杆菌悬液0.2ml(1支1ml吸管)，37?培养12h,24h以增殖噬菌体。
(3)制备裂解液:将以上增殖的混合培养液2500r/min离心15 min(1支5ml吸管)。
将上清液倒入无菌平皿，针管抽取液体，在针栓式滤器上过滤除菌。
所得滤液倒入灭菌瓶内，取少量滤液作无菌试验，即将它接入牛肉膏蛋白胨培养液中(1支5ml吸管、1支1ml吸管、1支无菌带帽华氏管)，置于37?培养过夜，以作无菌检查。
(4)噬菌体确证试验:滤液经37?培养过夜，若无细菌生长则表明已经彻底除菌。
需进一步证明噬菌体的存在。
于已烘干的肉膏蛋白胨琼脂平板(平皿1个)表面加一滴大肠杆菌悬液(1支1ml吸管)，再用灭菌玻璃涂布器将菌液涂布成均匀的一薄层。
放置数分钟，待琼脂表面干燥，在菌层的表面布点5个,7个，每点滴加上述滤液1小滴(1ml枪1把和枪头10个)，同时选择其中一点不加滤液只滴加一小滴生理盐水为对照，再放置数分钟，使液滴被琼脂吸干。
倒置平板，37?培养过夜。
次日观察结果，若平板上滴加滤液的部位出现噬菌斑，而在对照滴中处无噬菌斑，则表明该滤液中肯定含有大肠杆菌相应噬菌体。
必须注意沙门氏菌鉴定中的假阳性问题
必须注意沙门氏菌鉴定中的假阳性问题在全球各地的食物中毒事件中，沙门氏菌食品中毒经常占第一位或第二位。
沙门氏菌菌型繁多，已确认的沙门氏菌有两千多血型。
因此，沙门氏菌的检测鉴定一直是沙门氏菌研究的主要问题。
沙门氏菌鉴定根据生化特性归属，按照血清学鉴定到菌型，一般不难作出正确判断。
但日常工作中我们常遇到一些菌株个别生化发生变异，加上菌属间抗原关系交叉常使菌种鉴定工作陷入迷途。
如处理不当，一方面可能把新的菌型和生化变种漏检；另一方面作出沙门氏菌假阳性报告，这些情况常使我们感到困扰。
如何解决沙门氏菌鉴定中假阳性问题，对于基层单位工作者具有重要意义。
我们检验沙门氏菌常从ss平板上挑无色半透明中等大小或中心有黑点的菌落接种双管糖初筛（上海市防疫站产的肠杆菌科细菌综合发酵管），凡葡萄糖产酸、甘露醇阳性、尿素阴性、蔗糖阴性、硫化氢阳性、靛基质阴性、动力阳性的典型生化株用沙门氏菌a-f 多价诊断血清凝集后再种普通琼脂斜面复核。
对于普琼上的培养物也能与沙门氏菌a-f多价血清凝集的菌株报告沙门氏菌阳性。
但工作中我们发现有一部分菌株从双糖管上挑的培养物能与沙门氏菌a-f多价血清凝集，然后再转种到普琼上就不发生凝集了，我们称这部分菌株为“酸凝集株”，后经进一步鉴定为艾希氏菌属。
我们还发现另一部分菌株普琼培养物也能与沙门氏菌a-f多价血清发生凝集，且查出o抗原，但进一步做生化发现个别生化不典型，如蔗糖发酵株、靛基质阳性株，我们称这部分菌株为“交叉凝集株”，后经证实为柠檬酸杆菌或艾希氏菌。
一、酸凝集株这部分菌株能发酵葡萄糖产酸，我们测得糖斜面上ph为4.5~5.0左右，接近或达到细菌的等电点。
虽然从糖管上挑出来的培养物到了血清凝集时细菌所处的环境ph已达7.0左右。
但也改变不了细菌抗原在酸中经过处理产生的自凝现象造成酸凝集。
象这样的菌株，如果只根据双管糖生化反应符合就用沙门氏菌多价血清凝集，这样搞错的可能性很大。
因此，我们一定要避开糖的环境，凡初筛生化符合沙门氏菌的先不要急于从糖斜面上挑培养物来做凝集试验。
三、噬菌体与宿主关系
[三、噬菌体与宿主关系]三、噬菌体与宿主关系1、烈性噬菌体：凡能引起宿主细胞迅速裂解的噬菌体，三、噬菌体与宿主关系。
敏感细菌。
2、温和性噬菌体：噬菌体侵染宿主后，并不增殖，裂解，而与宿主DNA结合，随宿主DNA 复制而复制，此时细胞中找不到形态上可见的噬菌体，这种噬菌体称为温和性噬菌体。
含有温和性噬菌体的细菌称为溶源性细菌lysogenic bacteria温和性噬菌体存在状态1）游离具感染性的virion；2）前噬菌体（prophage）：附着或整合在宿主染色体上，一道复制；3）营养期噬菌体：指导合成。
3、溶源性细菌特性1）遗传性2）自发裂解3）诱发裂解：双氧水、UV、X、等。
4）免疫性5）复愈（消失溶源性）6）溶源转变溶源性菌株命名四、噬菌体分离检查与防治（一）分离检查（效价测定）怎样证实有噬菌体存在：宿主特异性；噬菌斑、液体培养变清等。
1、双层平板法2、单层平板法3、玻片快速法效价（titre），噬菌斑形成单位（pfu）（二）防治措施1、消灭phage，杜绝其依赖生存条件。
2、选育和使用抗phage菌株。
3、菌种轮换使用。
4、药物防治：加入某些金属螯合剂、表面活性剂。
五、亚病毒1、类病毒viroid：没有衣壳包裹的RNA分子。
2、拟病毒virusoids(类类病毒）：一类包括在植物病毒粒子中的类病毒，RNA。
3、朊病毒prion, virino：一类能侵染动物并在宿主细胞内复制的小分子无免疫性的疏水性蛋白。
艾滋病AIDS 获得性免疫缺陷综合征HIV专门侵犯淋巴细胞，造成免疫缺陷。
传播途径：血液、母婴、体液第二章：微生物营养和培养基了解不同微生物需要什么营养物，怎样吸收，起什么作用，如何为其配餐。
营养物：必须得到的细胞结构成分，必须得到的能量储存物质。
营养：把营养物从外界吸收至细胞内，复制出新细胞结构的过程。
1节：营养物及其功能一、细胞化学组成整个生物界大体相同，主要是C、H、O、N（占干重90-97%），C（约50%），此外为各种无机元素，由这些元素再组成化合物。
病毒感染的实验诊断
病毒感染的实验诊断● 考点病毒的生物学性状病毒的实验室检查方法常见病毒的感染【内容讲解】第一节概述一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。
仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。
病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。
在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。
一、病毒的基本性状（一）形态结构1.大小和形状：大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。
形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。
2.结构（二）病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。
病毒的复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放6个阶段。
异常增殖：顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。
缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。
干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象。
（三）噬菌体以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。
噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。
噬菌体感染细菌后产生两种后果：溶菌周期和溶源性周期。
（四）非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。
朊粒个体微小，不含核酸，其主要成分是一种蛋白酶抗性蛋白，对各种理化作用的抵抗力强，具有传染性，是引起传染性海绵状脑病的病原体。
朊粒致中枢神经系统退化性病变，引起牛海绵状脑病（疯牛病）。
克雅病（CJD）和Kuru病被认为与朊粒感染有关。
二、病毒的分类与命名科、属、种3级或科、亚科、属、种4级。
DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。
按传播途径可分为呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。
按感染部位与症状特征可分为肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。
鼠疫实验室检测技术
吸水纸
C区：羊抗 小鼠Ig
免疫荧光技术(IFT)
标记物-荧光素(如异硫氰荧光素 Yersinia pestis 免疫荧光染色 FITC)
荧光素标记抗体检测相应抗原-直 接法：如FITC-FIMcAb为异硫氰 酸荧光黄标记鼠疫F1单克隆抗体。
方法：固定好的玻片标本用1%牛 血清PBS浸洗5分钟，流水冲洗。 用FITC-FIMcAb适量（0.2ml）荧 光染色，室温作用30分钟，流水 冲洗。干燥，荧光显微镜油镜观 察，鼠疫菌染上翠绿色荧光
鼠疫噬菌体试验
➢ 在培基上密集平行划线培养鼠疫菌，鼠疫噬菌体滴 于上端划线中部，直立平板，使噬菌体液垂直划线 自然流下，置20℃培养24h,有明显的噬菌带。
➢ 在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假 结核菌，具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异 性)，是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。
目标基因
引物序列
产物长度
fra 1F 5’-GGAACCACTAGCACATCTGTT-3’
249 bp
1R 5’-ACCTGCTGCAAGTTTACCGCC-3’ pla 2F 5’-ACTACGACTGGATGAATGAAAATC-3’ 456 bp
2R 5’-GTGACATAATATCCAGCGTTAATT-3’
鼠疫菌染色方法有革兰氏染色（菌体染成红 色）、美兰染色（菌体染成兰色，两极浓染明 显）、姬姆萨染色（菌体染成色，荚膜染成色）
鼠疫菌染色检查(脏器压印片)
革兰氏染色
美兰染色
鼠疫菌染色
鼠疫菌涂片的革兰氏染色
鼠疫菌染色检查
Wayson stain(魏申氏染 荚膜染色—墨汁负染色 色)呈现的两极浓染特 征
微生物学习题与答案3【精选文档】
第三章病毒和亚病毒A部分习题一、选择题1。
病毒的大小以( ）为单位量度。
A。
m B.nm C.mm2。
E。
coli T4噬菌体的典型外形是：（）A。
球形B。
蝌蚪形 C.杆状 D.丝状3. 类病毒是一类仅含有侵染性( ）的病毒。
A.蛋白质B。
RNA C。
DNA D.DNA和RNA。
4.病毒壳体的组成成份是：（）A.核酸B.蛋白质C.多糖D。
脂类5.病毒囊膜的组成成分是：( ）A.脂类B.多糖C。
蛋白质6. 病毒含有的核酸通常是：（）A。
DNA和RNA B.DNA或RNA C。
DNA D.RNA7.最先发现病毒的是:( )A。
巴斯德B。
柯赫C。
伊万诺夫斯基D。
吕文虎克8.CPV是( ）A。
颗粒体病毒B。
质多角体病毒 C.核多角体病毒9.NPV是( )A。
核多角体病毒 B.质多角体病毒 C.颗粒体病毒10.GV是:（）A.无包涵体病毒B。
颗粒体病毒 C.核多角体病毒11.噬菌体是专性寄生于（）的寄生物。
A。
细菌 B.酵母菌C。
霉菌12.病毒的分类目前以（）为主。
A。
寄主B。
形态C。
核酸13.最先提纯的结晶病毒是：（）A。
烟草花叶病毒 B.痘苗病毒C。
疱疹病毒D。
流感病毒14.在溶源细胞中，原噬菌体以（）状态存在于宿主细胞中.A.游离于细胞质中B。
缺陷噬菌体C。
插入寄主染色体15.溶原性细菌对（)具有免疫性。
A.所有噬菌体B.部分噬菌体C.外来同源噬菌体D。
其它噬菌体二、是非题1. 原噬菌体即插入寄主染色体DNA上的噬菌体DNA。
( ）2. 溶源性细菌在一定条件诱发下，可变为烈性噬菌体裂解寄主细胞。
（）3. T4噬菌体粒子的形态为杆状.( ）4。
所有昆虫病毒的核酸都是ssRNA。
（)5. DNA病毒以双链为多，而RNA病毒以单链为多.（）6。
植物病毒的核酸主要是DNA，而细菌病毒的核酸主要是RNA。
（)7. 大肠杆菌噬菌体靠尾部的溶菌酶溶解寄主细胞壁后靠尾鞘收缩将DNA注入寄主细胞.( ）8.一种细菌只能被一种噬菌体感染。
医学微生物学课件：噬菌体
分子进化分析
研究噬菌体的分子进化，探讨其 进化和分类的关系。
生物信息学方法
生物信息学分析
利用生物信息学方法对噬菌体 基因组和蛋白质组进行分析，
揭示其结构和功能。
计算机模拟
利用计算机模拟噬菌体的感染和 复制过程，深入研究其生物学机 制。
数据挖掘和分析
通过数据挖掘和分析，寻找噬菌体 感染和复制过程中的关键蛋白质和 基因，为药物设计和治疗提供参考 。
01
02
03
耐药性问题
随着抗生素滥用，细菌耐 药性问题日益严重，而噬 菌体有望为解决这一问题 提供新思路。
生物安全性
噬菌体作为生物制剂，其 生物安全性需要进一步评 估和研究。
法规与伦理问题
噬菌体疗法的相关法规和 伦理问题也需要进一步探 讨。
对人类的贡献
疾病治疗
通过研究噬菌体，我们可 以发现新的疾病治疗方法 ，提高人类生命质量。
感染症状
噬菌体感染可引起发热、咳嗽、 呕吐等症状。
传播途径
噬菌体可通过空气、水和食物等传 播。
临床表现与诊断
临床表现
噬菌体感染可导致细菌性疾病 ，如肺炎、肠道感染等。
实验室检查
通过采集患者样本，进行噬菌 体分离培养及鉴定，以确诊感
染。
治疗
一般采用抗生素治疗，严重者 需采用噬菌体疗法。
03
噬菌体基因组与复制
基因组结构与功能
基因组构成
噬菌体基因组为DNA双链，通常包含多个基因，其中包括复 制、转录、翻译等必要基因。
基因组功能
噬菌体基因组编码其生命周期所需的各类蛋白，包括外壳蛋 白、复制酶、转录酶、翻译器等。
复制与表达
复制过程
噬菌体通过吸附至敏感宿主细胞表面，注入自身DNA，利用宿主细胞代谢和 能量系统进行自身DNA的复制和表达。
噬菌体的污染和防治
噬菌体的污染和防治在许多发酵生产中，如氨基酸发酵、丙酮-丁醇发酵和抗生素发酵中常常遇到噬菌体（b acteriaphage）污染，引起溶菌，并随之出现发酵迟缓或停止发酵等异常现象。
本节主要介绍噬菌体污染的特征，检查方法及防治措施。
一噬菌体污染的特征1 发酵液光密度上升缓慢，甚至下降，肉眼可见发酵液逐渐变清；2 耗糖速度缓慢或停止，产物生成量少或不增加，发酵液中残糖高；3产生大量泡末，发酵液呈粘稠状；4 菌体不规则，甚至出现畸形。
二噬菌体的检查方法1．双层琼脂平板法（1）双层琼脂平板的制备：先用7~8mL 2%的琼脂培养基作底层，凝固后，加入3~4mL 冷至45℃的1%琼脂上层培养基（其中含0.2mL发酵菌种悬液和0.1mL待检发酵液），让其平整凝固；（2）在发酵菌的适宜温度下培养，若是细菌，一般培养16~20小时。
（3）检查有无透明的噬菌斑。
2．液体培养检查法将培养基、发酵菌种及待检发酵液三者混合，培养后观察培养液是否变清。
3．斑点试验法先制备好涂布有发酵菌种的平板，再用接种环或无菌吸管取少许发酵液在平板上点种，培养后，观察是否有噬菌斑。
4．玻片快速法将发酵菌种、发酵液和少量琼脂培养基（含0.5~0.8%的琼脂）混匀后涂布于无菌载玻片上，经短期培养后，在低倍镜下观察是否有噬菌斑。
三噬菌体的防治发酵液中污染噬菌体，不外乎有两种原因。
1 菌种本身带噬菌体，特别是溶源性噬菌体，对这种菌种，一经发现，应立即弃去。
2 生产的环境中有噬菌体。
因此，可采取相应的预防措施：1 决不使用可疑菌种；2 清除周围环境中存在的噬菌体。
能灭菌的灭菌，能消毒的消毒，搞好清洁卫生工作；3 选育抗噬菌体菌株4 轮换使用菌株。
因为一个菌株用的时间一长，就有可能出现该菌种的噬菌体。
5 注意通气质量。
取风口应设在30~40米的高空，空气过滤器要保证质量；四发酵液污染噬菌体后的抢救措施如果一旦发现噬菌体污染，应及时采取补救措施1．若在发酵前期污染了噬菌体，因为此时耗糖还不多，常用以下措施（1）补加抗性种子，并根据发酵液中的营养多少，适当补加营养物质；（2）补加约50%的已培养至对数期的正常的发酵液，再进行发酵；（3）若噬菌体轻度污染，菌体仍能较正常地生长，并积累代谢产物，则可照常进行发酵，若污染严重，则用加热法（70~80℃）灭活噬菌体，放罐后重消毒。
农业植物调运检疫规程-最新国标
农业植物调运检疫规程1范围本文件规定了国内调运应施检疫的农业植物及植物产品的检疫程序和方法。
本文件适用于各级农业植物检疫机构在农业植物及植物产品调运过程中实施的检疫。
2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。
3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1调运检疫农业植物检疫机构依据植物检疫法规，对调运（包括托运、邮寄、自运、携带、销售等）的应施检疫的植物及植物产品和其他应检物品实施的检疫，并签发植物检疫证书的过程。
3.2植物产品植物检疫法规规定的未经加工的植物性材料（包括谷物）和虽经加工但其性质仍有可能造成农业植物检疫性有害生物传入和扩散危险的产品。
3.3目视检查通过肉眼、放大镜、显微镜（包括体视显微镜）等方式来查验有害生物。
3.4除害处理为防止农业植物检疫性有害生物传播、扩散采取的药剂处理、高温（低温）处理、辐照处理等灭虫、灭菌措施。
4应施检疫的植物及植物产品4.1调出县级行政区的农业植物种子、苗木和其他繁殖材料。
4.2从发生疫情县级行政区调出的应施检疫的农业植物及植物产品。
5目标有害生物5.1全国农业植物检疫性有害生物。
5.2调入地所在省的省级补充农业植物检疫性有害生物。
6程序调运检疫程序见图1。
图1农业植物调运检疫程序6.1申请调运单位或个人应当向调出地所在的农业植物检疫机构提出调运检疫申请。
提交《农业植物调运检疫申请书》（见附录A），申请调运物的相关检疫证明。
6.2受理申请调运物属于应施检疫的农业植物及植物产品，申请材料齐全、符合法定形式的，农业植物检疫机构应予以受理；申请材料不齐全或不符合法定形式的，农业植物检疫机构应一次性告知申请人，材料修改补充齐全后予以受理。
申请调运物不属于应施检疫的农业植物及植物产品，申请单位或个人被列入国家有关部门严重失信单位名单并限制其取得行政许可的，或其他不应受理的情况，农业植物检疫机构应不予受理。
6.3实施6.3.1查验相关检疫证明农业植物检疫机构查验申请调运物的相关检疫证明。
噬菌体展示[3篇]
![噬菌体展示[3篇]](https://img.taocdn.com/s3/m/762c57bef424ccbff121dd36a32d7375a417c61d.png)
噬菌体展示[3篇]以下是网友分享的关于噬菌体展示的资料3篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
噬菌体展示（一）测定噬菌体滴度只有当噬菌体的感染复度MOI (噬菌体数/细菌数)值远低于1时（即细菌过量时），噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。
正因如此，建议检测噬菌体贮液的滴度时，在感染前进行稀释，而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。
低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序列。
1. 接种ER2738单菌落于5-10 ml LB培养基中，摇床培养至对数中期（OD600 ~0.5）。
2. 细胞生长时，微波炉融化上层琼脂，分成3 ml等份于灭菌试管中，每个噬菌体稀释度一管。
保存于45℃备用。
3. 37℃预温LB/IPTG/Xgal平板，每个噬菌体稀释度取一个平板备用。
4. 在LB中准备10倍系列稀释的噬菌体。
建议稀释范围：扩增的噬菌体培养物上清：108-1011；未扩增的淘选洗脱物：101-104。
每个稀释度换一新鲜吸头，建议使用带滤芯吸头以避免交叉污染。
5. 当菌体培养物达对数中期，分成200 μl等份于微量离心管中，每个噬菌体稀释度一管。
6. 每管加入10 μl不同稀释度的噬菌体，快速震荡混匀，室温温育1-5 min。
7. 将感染细胞加入45℃预温的上层琼脂培养管中，每次一管，快速混匀，立即倾注于37℃预温的LB/IPTG/Xgal平板上。
适当倾斜平板将上层琼脂均匀铺开。
8. 待平板冷却5 min后，倒置于37℃培养过夜。
9. 检查平板，计数有~102个噬菌斑的平板上的斑数。
然后用此数目乘以稀释因子即得到每10 μl噬菌体的空斑形成单位（pfu）滴度。
淘选程序最简单直接的淘选方法有：直接将靶分子包被于塑材表面（通过非特异的疏水作用或静电相互作用），洗去过量的未吸附分子，然后将噬菌体库覆盖在已包被的靶分子的表面。
根据靶分子的不同，直接包被法偶尔会导致配体结合位点难以进入，这或许是由于分子的立体封阻或许是由于靶分子表面的部分变性而引起。
发酵生产中杂菌的检查与防治
第一节发酵生产中杂菌的检查与防治一染菌的检查与判断凡是在发酵液或发酵容器中侵入了非接种的微生物统称为杂菌污染，与早发现杂菌，与早采取相应措施，对减少由杂菌污染造成的损失至关重要。
因此检查的方法要求准确、快速。
目前发酵生产上常用的检查方法有下列几种：1．显微镜检查一般单染色后用油镜观察，凡是从视野中发现有形态与生产菌株不同的菌体都可认为是污染了杂菌。
优点：简便、快速，能与时检查出杂菌。
缺点：（1）对固形物多的发酵液检查较困难；（2）对含杂菌少的样品不易得出正确结论，应多检查几个视野；（3）由于菌体较小，本身又处于非同步状态，应注意区别不同生理状态下的生产菌与杂菌，必要时可用进行革蓝氏染色、芽孢染色等辅助方法进行鉴别。
2．平板检查若怀疑发酵液被细菌污染，可取少量待检发酵液涂布在肉汤平板上，在适宜条件下培养，若出现与生产菌株形态不一的菌落，就表明可能被杂菌污染；若要进一步确证，可配合显微镜形态观察，若个体形态与菌落形态都与生产菌相异，则可确认污染了杂菌。
优点：（1）适于固形物多的发酵液；（2）形象直观，肉眼可辩，不需仪器。
缺点：（1）所需时间较长，至少也需8小时；（2）无法区分形态（包括细胞形态与菌落形态）与生产菌相似的杂菌，如啤酒生产中污染野生酵母时，由于啤酒酵母与野生酵母很难从形态上加以区分，只能借助生理生化试验进行确认。
（3）检查过程需严格执行无菌操作技术。
3．肉汤培养检查法此法主要用于空气过滤系统和液体培养基的无菌检查。
具体方法是将葡萄糖酚红肉汤培养基（牛肉膏0.3%，蛋白胨0.8%，葡萄糖0.5%，氯化钠0.5%，1%酚红溶液0.4%，pH7.2）装在吸气瓶中，经灭菌后，置37 ℃培养24小时，若培养液未变浑浊，表明吸气瓶中的培养液是无菌的，就可用于空气过滤系统的杂菌检查。
把过滤后的空气引入吸气瓶的培养液中，经培养后，若培养液变混，表明过滤后的空气中仍有杂菌，说明过滤系统有问题，若培养液未变混，说明空气无菌。
噬菌体抗体库的构建与初步鉴定
噬菌体抗体库的构建与初步鉴定目的运用噬菌体展示技术构建抗人β淀粉样肽(Aβ)特异性单链抗体的抗体库并进行初步鉴定.方法从Aβ免疫的BALB/c小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA，分离纯化mRNA，经逆转录合成其总cDNA.以PCR方法分别扩增出抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因片段，再经重组PCR将两基因片段由编码十五肽(Gly4Ser)3的接头连在一起，克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中，转化至大肠杆菌TG1，经辅助噬菌体M13KO7超感染后回收全部重组噬菌体，构建噬菌体抗体库，SDSPAGE鉴定纯度.结果经琼脂糖凝胶电泳分析，RTPCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350bp和325bp，与预期VH，VL基因片段理论值相符.经重组PCR得到大小约750bp的ScFv基因片段.ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体，回收后构建成库容量为1.1108的噬菌体抗体库，经SDSPAGE鉴定，得到Mr约为30000ku，纯度较好的ScFv抗体.结论成功构建了库容量大的特异性噬菌体抗体库，为抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定、临床实验诊断方法建立和治疗应用打下基础.噬菌体展示技术;单链抗体;阿尔茨海默病;β淀粉样肽0引言阿尔茨海默病(alzheimersdisease,AD)，又称早老性痴呆症，是一种以记忆丧失、行为失常、人格改变、思维能力下降和认知功能障碍等为特征的中枢神经系统退行性疾病.有研究报道β淀粉样肽(βamyloidpeptide,Aβ)与AD的发病直接相关[1-2].目前国内仅有制备Aβ42多克隆抗体的相关工作，有关建立良好的血液标志物检测方法的研究报道还较少见.本实验通过噬菌体抗体库技术[3-4]构建抗Aβ的单链抗体库，为检测血液或脑脊液中Aβ水平并用于诊断AD[5-6]和抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定以及临床治疗应用打下基础.1材料和方法1.1材料雌性BALB/c纯系小鼠20只，6～7wk龄(中山大学实验动物中心);cDNA第一链合成回收试剂盒(美国Fermentas公司);鼠ScFv噬菌体抗体展示系统(瑞典Amershampharmacia公司);Trizol试剂(美国Gibco公司);DNA 多聚酶，QIAquickPCR纯化试剂盒(荷兰Qiagen公司);SfiI内切酶，NotI内切酶(美国NEB公司);T4DNALigase(美国Invitrogen公司);Aβ(美国Americanpeptide公司).1.2方法1.2.1动物免疫将0.5mL的Aβ42(150mg/L)与等量的完全福氏佐剂混合乳化，直到油包水的状态，取5只小鼠用Aβ42进行免疫.第一次基础免疫每只小鼠自后足垫注射0.1mL.基础免疫后2wk再按上述方法用等量的抗原与不完全福氏佐剂乳化后进行加强免疫，每只小鼠腹腔注射0.1mL，共加强免疫2次.45d后引颈法处死免疫小鼠，取其脾脏.1.2.2总RNA抽提与mRNA的纯化用TRIzol试剂抽提小鼠脾细胞的总RNA，并立即纯化mRNA，紫外分光光度计测定其浓度及纯度.1.2.3cDNA第一链的合成取两个灭菌的0.5mL的离心管，在每一管中依次加入mRNA2μL，Oligo(dT)18引物1μL，去RNase水9μL，混匀，置于70℃水浴5min，立即置于冰中，在冰上再加入5倍稀释缓冲液4μL，核糖核酸酶抑制剂1μL，dNTP(10mmol/L)mix2μL，混匀，室温静置5min后再加入MMuLV逆转录酶(2108U/L)1μL，总反应体积为20μL.42℃水浴60min，70℃水浴10min灭活，立即置于冰中5min，完成cDNA第一链的合成.1.2.4PCR扩增抗体的重链和轻链可变区片段取两个灭菌的0.5mL的离心管，在轻链PCR扩增管中分别依次加入cDNA 模板20μL，轻链引物2μL，dNTP(10mmol/L)5μL，10倍稀释缓冲液10μL，DNA聚合酶1μL，ddH2O62μL.重链PCR管cDNA模板20μL，重链引物1∶2μL，重链引物2∶2μL，dNTP(10mmol/L)5μL，10倍稀释缓冲液10μL，DNA聚合酶1μL，ddH2O60μL.95℃热启动5min后，进行如下循环94℃30s，53℃45s，72℃60s，共30个循环，最后一个循环结束后，72℃延伸10min，然后取5μLPCR产物琼脂糖凝胶电泳，同时加DNA分子量标准，用紫外分析仪检测电泳结果，鉴定PCR产物片段大小.1.2.5重链和轻链可变区片段与Linker的连接扩增出的抗体重链(VH)和轻链(VL)的PCR产物按Qiagen公司的QIAquickPCR纯化试剂盒中的说明书进行回收纯化.用琼脂糖凝胶电泳，纯化后的VH和VL与标准浓度的VHmarker分别按1∶1和1∶2稀释后上样电泳进行比较定量，根据条带的亮度来估计基因片段的含量.以相同和接近等摩尔浓度的抗体VH和VL基因混合进行重组PCR反应，按Pharmacia公司的重组噬菌体抗体库系统(RPAS)操作手册进行与Linker的连接PCR反应.然后在PCR产物加上酶切位点后，取5μLPCR产物用15g/L的琼脂糖凝胶电泳，同时加DNA分子量标准，用紫外分析仪检测电泳结果，鉴定PCR反应产物片段的大小.1.2.6连接片段的克隆取一灭菌的0.5mL的离心管，在每一管中依次加入纯化的PCR产物17μL，SfiI1μL，10倍稀释缓冲液2μL，50℃温育2h，酶切产物胶回收纯化.另取一灭菌的0.5mL的离心管，在每一管中依次加入SfiI酶切后的ScFv片段40μL，NotI1μL，BAS0.5μL，10倍稀释缓冲液5μL，ddH2O4.5μL，37℃温育3h，酶切产物胶回收纯化.1.2.7质粒的转化与筛选取4个灭菌0.5mL的离心管，在每一管中依次加入纯化的酶切后ScFv40μL，pCANTAB5E质粒5μL，ATP(10mmol/L)5μL，T4DNA连接酶1μL，5倍稀释缓冲液6μL，ddH2O3μL，24℃温育1h，每个连接产物分别进行回收纯化.1.2.8感受态细菌的制备用划线法将大肠杆菌TG1接种于基本培养基平皿上，于37℃倒置培养过夜，再用无菌牙签挑取一个单菌落至5mL的培养液中，37℃振荡(250r/min)过夜培养.次日取菌液1mL接种至含有100mL培养液的500mL烧瓶中，37℃振荡培养至吸光度(A600nm)达到0.4～0.5时(约需2～3h)，4℃，2500r/min离心15min，弃上清液，再加10mL 预冷的TSS重悬菌体，完成制备感受态大肠杆菌，2～3h内进行转化.1.2.9质粒的转化将4种纯化连接产物分别按以下方法进行转化，转化后收集的噬菌体抗体合并到一起组成噬菌体抗体库.在无菌状态下分别取1mL新鲜感受态大肠杆菌TG1至两个预冷的50mL离心管中，置于冰中.其中一个加入50μL纯化的连接产物，另一个加入500pg未经酶切的pUC18质粒，轻轻旋转以混合内容物.冰浴45min.将试管置于42℃水浴2min使细胞热休克，然后立即置于冰中，转化后，用质粒pUC18来检查其转化效率.取100μL转化后至含有900μL的LBG(含20mol/L葡萄糖的LB培养液)的试管中，37℃振荡(250r/min)培养1h，分别取100，10，1μL的培养物在SOBAG琼脂板(含100mg/L氨苄青霉素和2g/L葡萄糖的SOB培养基)上铺盘，同样方法另取100μL未进行转化的感受态大肠杆菌TG1在SOBAG平板上铺盘作为对照组.37℃倒置培养过夜，次日计算菌落数.1.2.10噬菌体抗体库的扩增取900μL转化的大肠杆菌至一无菌的50mL试管中，加入9.1mL含10g/L葡萄糖培养液，37℃振荡(250r/min)培养1h后，再加50μL的20g/L氨苄青霉素和的M13KO7辅助噬菌体，37℃振荡(250r/min)培养1h，1000g离心10min，弃去上清，用10mL的不含葡萄糖的培养液重悬，37℃振荡(250r/min)培养过夜.1000g离心20min，将含有重组噬菌体的上清液转入一无菌的50mL离心管中，0.45μm 过滤后分装保存于2℃～8℃备用，此浓缩后的噬菌体抗体库可用于富集筛选、纯化和鉴定.1.2.11ScFv基因噬菌体抗体库表达抗体的初步鉴定纯化后的单链抗体用SDSPAGE电泳鉴定其纯度，同时设分子量标准电泳，考马斯亮蓝R250染色.2结果2.1总RNA的提取及mRNA的纯化从Aβ免疫后小鼠脾细胞中抽提总RNA，经紫外分光光度计测得总RNA浓度为5.16g/L，纯化后的mRNA的A260nm/A280nm为1.90，浓度为1.28g/L.2.2抗体VL和VH基因的扩增结果显示，VH基因片段约为350bp，VL基因片段约为325bp，与预期VH，VL基因片段理论值大小相符(图1).M1:VHmarker;M2:DNAmarker;1:VHPCR产物;2:VLPCR产物.图1VH和VL基因片段的琼脂糖凝胶电泳分析(略)2.3ScFv基因的连接结果如图2所示，可见约750bpPCR 扩增产物，大小符合预期结果，没有明显的非特异性条带，表明加入VH，VL和Linker引物的浓度准确，并引入了用于在噬菌粒载体pCANTAB5E中进行克隆的限制性内切酶SfiI和NotI 位点.M1:ScFvmarker;M2:DNAmarker;S:ScFvPCR产物.图2ScFv基因片段的琼脂糖凝胶电泳分析(略)2.4抗体ScFv基因的克隆及噬菌体抗体库的构建酶切后抗体ScFv基因片段经琼脂糖凝胶与标准浓度的ScFvmarker比较，ScFv的浓度约20mg/L.在连接反应中，插入的ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E的量为3∶1效果最理想.ScFv 基因片段通过连接反应成功定向克隆至pCANTAB5E噬菌粒载体的SfiI和NotI位点中.噬菌体载体成功转化至大肠杆菌TG1，经过两次培养，收集所有重组噬菌体，成功构建的噬菌体抗体库，合并计算，噬菌体抗体库的库容量达1.1108.2.5抗体ScFv基因的噬菌体抗体库表达抗体的初步鉴定浓缩提取的ScFv，经蛋白质L琼脂糖亲和纯化得到Mr约为30ku，紫外分光光度计检测结果显示，纯化后单链抗体的表达量约为1.1mg/L，还原性SDSPAGE结果显示纯度较好的ScFv(图3).1:浓缩上清培养液;M:marker;2:纯化ScFv.图3纯化ScFv的SDSPAGE(略)3讨论目前已知Aβ蛋白在人类大脑中的沉积和神经纤维缠结的产生是AD的主要组织病理学标志[2]，并揭示了细胞内Aβ在大脑内沉积的现象以及Aβ具有毒性的作用机制[7-8].由于临床对AD诊断较为困难，尤其是发病早期，采用血标本进行检测的方法还没有完全建立起来.因此建立新的临床试验诊断方法，尤其是检测血液中的标记物，并且能够区分AD和正常衰老以及其它痴呆的试验方法已成为热点.噬菌体抗体库技术的建立是基因工程抗体研究领域的一次重大突破，使传统的mAb的制备完全改观，为重组抗体的设计、筛选及生产等方面的不断革新及改进提供了高效、可靠的技术和方法，极大地推动了重组抗体在科研、临床诊断及治疗等方面的应用[10-11].此方法简单、快速，而杂交瘤技术从脾细胞融合到获得稳定的单克隆细胞株至少需数月[12].噬菌体抗体库技术可以绕过运用杂交瘤细胞免疫制备抗体，在大肠杆菌中分泌表达，通过发酵大量生产，具有大规模生产、成本低等特点，克服了杂交瘤细胞通过mAb腹水或大规模细胞培养制备抗体的局限性，同时能够保存和传代稳定性，避免了杂交瘤细胞株在传代过程中明显的不稳定性，我们的研究结果显示，直接利用人外周血淋巴细胞构建天然抗体库，筛选出目的噬菌体抗体，使制备全人抗体，尤其是制备自身抗原和其他弱免疫原性抗原的抗体具有独到的优势[13]，并可以对抗体基因进行改造.在体外通过基因突变、链更替等技术，进一步提高抗体的亲和力和稳定性.用于制备mAb，并对抗体库进行筛库时，能够得到多克隆重组噬菌体抗体，将该多克隆抗体用于临床试验诊断可提高敏感度，用于治疗可提高疗效，也可以作为分子识别、抗原表位研究的理想工具.综上所述，本实验利用基因工程方法和噬菌体表面展示技术成功构建了免疫小鼠库容量为1.11 08的噬菌体抗体库，为抗人Aβ特异性抗体的筛选、生物活性鉴定、临床实验诊断方法建立以及治疗应用打下基础.。
噬菌体
第七节噬菌体phage非细胞生物真病毒euvirus：至少含有核酸和蛋白质两种组分亚病毒subvirus类病毒viroid：只含具单独侵染性的RNA组分拟病毒virusoid：只含不具单独侵染性的RNA组分朊病毒prion：只含蛋白质一种组分真病毒的定义一类超显微的非细胞生物，每种病毒只含有一种核酸；它们只能在活细胞内营专性寄生，靠寄主代谢系统的协助来复制核酸、合成蛋白质等组分，然后进行装配而得以增殖；在离体条件下，它们能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性。
病毒的分类依据宿主范围——植物病毒、动物病毒、微生物病毒噬菌体是感染细菌和放线菌的病毒。
病毒的化学组成与构造化学组成——核酸( DNA 或 RNA)、蛋白质构造基本构造——核衣壳：核酸、衣壳非基本构造——包膜、刺突第六节噬菌体 Bacteriophage, phage噬菌体是一类感染细菌或放线菌的病毒。
一、噬菌体的特点1、无细胞结构，仅含一种核酸；2、不能进行独立的代谢作用；3、严格的活细胞寄生；4、个体极小，能通过细菌滤器二、噬菌体的形态与构造1、形态噬菌体的基本形态有蝌蚪形、微球形和丝状三种。
噬菌体的类型2、构造E. coli T4构造：头部（正二十面体）；颈环；尾鞘、尾髓；基片、刺突、尾丝3、大小T4：头部 65 ×95nm，尾部20 ×95nm f2：f20~25nm4、化学组成：蛋白质；核酸：dsDNA, dsRNA, ssDNA, ssRNA三、噬菌体的生长和繁殖1、吸附 adsorption噬菌体的吸附器官与受体细胞的特殊位点的接触与结合吸附的专一性：寄主专一性；位点专一性：T3、T4、T7----脂多糖；T2、T6----脂蛋白；雄性专一噬菌体----性纤毛。
过程：尾丝散开，刺突固着于特异性位点T4吸附对于T类噬菌体的吸附器官是尾丝和刺突，尾丝首先触及寄主细胞表面，然后刺突固定。
2、侵入penetration ——噬菌体核酸物质进入受体细胞•T4：尾部的酶水解细菌细胞壁肽聚糖层产生一小孔,尾鞘收缩,尾髓伸入细胞中,头部的核酸被压进细菌细胞,蛋白质外壳留在细胞外。
细菌噬菌体应该如何检测
细菌噬菌体应该如何检测噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极为微小，用常规微生物计数法无法测得其数量。
当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引发灵敏细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有灵敏菌的悬液由混浊慢慢变清，或在含有灵敏细菌的平板上显现肉眼可见的空斑──噬菌斑。
了解噬菌体的特性，快速检查、分离，并进行效价测定，对在生产和科研工作中避免噬菌体的污染具有重要作用。
检样能够是发酵液、空气、污水、土壤等(至于无法采样而需检查的对象，能够用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品)。
为了易于分离可先经增殖培育，使样品中的噬菌体数量增加。
采纳微生物测定法进行噬菌体检测，约需12h左右，因此不能及时判定是不是有噬菌体污染。
通过快速检测可大致确信是不是有噬菌体污染，以采取必要的防治方法。
根据正常发酵(培育)液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清亮;而侵染有噬菌体的发酵(培育)液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因此在光线照射下显现丁达尔效应而不清亮。
此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判定亦较准确。
但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培育液也往往不适用。
噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。
效价的测定一样采纳双层琼脂平板法。
由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一样一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可依照必然体积的噬菌体培育液所显现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。
此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清楚度高，故计数比较准确，因此被普遍应用。
检测材料1.菌种灵敏指示菌(大肠杆菌)、大肠杆菌噬菌体(从阴沟或粪池污水中分离)2.培育基两倍肉膏蛋白胨培育液，上层肉膏蛋白胨半固体琼脂培育基(含琼脂%，试管分装，每管mL)，基层肉膏蛋白胨固体琼脂培育基(含琼脂2%)，1%蛋白胨水培育基。
噬菌体的快速检测与防治讲解学习
噬菌体快速检测方法一、目的要求1.定期检测生产车间空气中和二级种子罐培养液中的噬菌体污染度，观察噬菌斑的形态和大小。
2.学会快速检查发酵液中是否被噬菌体污染的方法。
二、基本原理噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物细胞的病毒，某种噬菌体往往只能感染一种或与它相近的某种细菌。
按其感染细菌的过程分两类：大多数烈性噬菌体侵染细菌后迅速引起敏感细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，因而可在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的噬菌斑如图1。
温和噬菌体侵染细菌后呈原噬菌体（或称前噬菌体）状态，一般不引起细菌裂解，使宿主成为溶源性细菌。
在肉膏蛋白胨双层琼脂平板上产生透明噬菌斑中心的菌落，即为溶源性细菌。
了解噬菌体的特性，快速检查噬菌体，在生产和科研工作中防止噬菌体污染具有重要作用。
图1 敏感细菌的平板上出现肉眼可见的噬菌斑空气中和二级种子罐培养液中的噬菌体污染度是预防噬菌体的一个措施。
在连续使用特定菌株进行赖氨酸发酵时，首先是空气中的噬菌体浓度增加，数月后种子罐的噬菌体浓度也急剧增加，随之主发酵罐发酵液中的噬菌体检出浓度也就增加；当空气中的噬菌体浓度上升到每个平板达10～20PFU/ml（噬菌斑生成单位）时，二级种子罐的噬菌体浓度为40～50 PFU/ml；之后迅速增加，达到102 PFU/ml的程度，终于在主发酵罐发生溶菌。
经常检测赖氨酸分厂环境中，特别是空气中与种子罐二级种子液中的噬菌体数，就能知道环境的噬菌体污染程度，也就能预知主发酵罐中会不会发生噬菌体的污染。
噬菌体是病毒的一种，是一种极其微小的生物，体积是细菌的1/1000左右，它可以通过细菌过滤器，只有在电子显微镜下才能看到。
噬菌体具有非常专一的寄生性，只能在特异性寄主细胞中增殖。
由于噬菌体缺乏独立代谢的酶体系，不能脱离寄生而自行生长繁殖，因而噬菌体的繁殖必须依存于寄生菌的繁殖，只能在活的正在繁殖阶段的细胞中进行增殖。
在死的、衰老的、处于休眠状态的细胞中以及在代谢产物或培养基上都无法繁殖。
烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段
二、病毒的基本形态和大小
1．牛痘苗病毒 2．传染性脓疱皮炎病毒 3．腮腺炎病毒 4．T-偶数噬菌体 5．疱疹病毒 6．大蚊病毒 7．流感病毒 8．烟草花叶病毒 9．腺病毒 10．多瘤病毒 11．脊髓灰质炎病毒
图3-1 几种病毒的形状
大多数病毒的直径在 10nm～300nm之间（图 3-2）。病毒大小悬殊， 较大的病毒如痘病毒为 300nm，较小的病毒如 口蹄疫病毒10nm，所以， 不能用普通光学显微镜 观察其形态，必须用电 子显微镜放大几千倍、 几万倍，甚至十几万倍 才能看到其基本形态。
有些较大型病毒在核衣壳外面有一层膜状结构，称为包膜， 也叫囊膜，如麻疹病毒、腮腺炎病毒。大多数有包膜病毒 呈球形（如流感病毒），但痘病毒呈砖形，狂犬病毒呈弹 形。 包膜由脂质、蛋白质和糖类组成。包膜表面形成包膜突起， 称为刺突，嵌附在包膜脂质中，它是多糖与蛋白质的复合 物（糖蛋白）。刺突因病毒的种类不同而异，可作为鉴定 的依据。 当包膜受到破坏时，包膜病毒也丧失吸附和侵入宿主细胞 的能力，从而丧失感染性。
溶源性细菌的自发裂解的机率极低，只有极少数溶源性细 菌中的噬菌体大量复制而导致细菌裂解，释放噬菌体粒子， 使溶源性细菌变成非溶源性细菌，这个过程称为溶源性细 菌非溶源化。如果在低剂量的紫外线照射或其他物理、化 学方法影响下也能诱发这种现象。 温和噬菌体对于敏感细菌所形成的噬菌斑是浑浊的，这是 因为中央有溶源性细菌生长的缘故。
四、噬菌体的监测方法
双层平板法
单层平板法 载片快速检测法 气体样品的检查法 液体培养检查法
五、噬菌体与发酵工业的关系
（一）噬菌体的危害
1．丙酮、丁醇发酵与噬菌体污染 2．食品工业的噬菌体污染 3．抗生素发酵与噬菌体污染
发酵工业和食品工业被噬菌体污染表现两个方面： 一是发酵周期明显延长，影响产品的产量和质量； 二是污染生产菌种，使发酵液变清，不积累发酵产物，严 重时无法继续发酵，甚至停产。 其原因可能有两个方面： 一是生产菌种本身可能携带有噬菌体，或使用的生产菌种 是溶源性菌； 二是生产环境存在噬菌体，没有做好消毒与灭菌工作。
噬菌体MS2作为水中肠道病毒指示生物的特征及其影响因素
噬菌体MS2作为水中肠道病毒指示生物的特征及其影响因素胡琼之;张景林;刘伟【摘要】噬菌体MS2作为潜在的水中肠道病毒指示生物,已逐渐成为回用水微生物学安全评价指标的主要研究方向之一。
在此,阐述噬菌体MS2作为水中肠道病毒指示生物的主要特征,并介绍噬菌体MS2作为水中肠道病毒指示生物应用的影响因素。
%Bacteriophage MS2,as the potential enteroviruses indicators,has become one of the most important research directions about the microbiological safety evaluation system for reuse water.In this paper,the status of study on bacteriophage MS2 as enteroviruses indicators in water was summarized,and affecting factors to apply bacteriophage MS2 as enteroviruses indicators in water was introduced.【期刊名称】《四川环境》【年(卷),期】2011(030)004【总页数】3页(P132-134)【关键词】噬菌体MS2;肠道病毒;指示生物;污水回用【作者】胡琼之;张景林;刘伟【作者单位】陕西省环中圣环境科技发展有限公司,西安710054;陕西省环中圣环境科技发展有限公司,西安710054;中山大学环境科学与工程学院,广州510275【正文语种】中文【中图分类】X1721 前言污水的再生回用是改善生态环境、解决城市缺水问题的有效途径。
由于污水中含有大量的致病微生物，如果消毒不彻底，将威胁人们的健康。
直接检测水中肠道病毒的操作复杂、安全性差、需要专门的技术和设备，因此需要寻找合适的指示生物，以实现对水中肠道病毒的及时检测和风险评价。