离体组织与器官水平药物筛选
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•背景知识
世界卫生组织调查表明，我国有80%的人患有不同程度胃肠病居世 界首位。近年来，功能性胃肠病已受到广泛的关注，如功能性消化 不良、肠胃激综合征、功能性便秘等，，西方国家人群患病率为5% ～24%，每年花费高额的医疗费用，患者的生存质量亦受到不同程度 的影响。在最常见造成工作、学习缺勤的疾病中，肠易激综合征的 发病率仅次于普通感冒.目前主要采用解痉剂治疗，但只能缓解腹痛 ，不能治疗便秘。而缓泻剂能缓解便秘，但不能缓解腹痛、腹胀， 而且不能长期服用。因此，研究开发新的调节胃肠动力的药物有重 要的社会效益和广阔的市场前景。
离体组织与器官水平药 物筛选
2020年4月29日星期三
•目的
1．了解离体器官试验特点及注意事项，掌握离体 器官试验的基本技术。
2．学习利用离体器官进行药物筛选的方法，观察 受试物对离体胃、肠平滑肌的影响。
3．了解科研课题设计原则，科研课题立项需阐述 的相关内容。
4．了解科研论文写作规范（包括图表制作技巧等 ）。
•pH影响：人工生理盐水中pH一般要求为中性，对于哺乳动物心脏冠状动脉，酸性生 •理深夜可使平滑肌松驰；碱性则可使节律加快，振幅缩小。 •其它条件：葡萄糖提供组织活动所需能量，临用时再加入，以防变质；有的离体 •器官需要氧气，如离体子宫、离体兔心、乳头肌等。而离体肠管通以空气就可以了。
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•本资料来源
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•试验方法及步骤
•（二）试验步骤 •1．对大鼠离体胃平滑肌正常张力的影响试验。 •（1）制备胃肌条标本：断头处死，立即剖取胃底部浸泡于台氏液液中， •制备成“Z”型，长约2.5cm、宽约0.4cm的胃肌条标本。 •（2）冲洗浴槽，并在其中加入台氏液30ml（标线处），加热，维持水温在37℃～ •38℃。调节通气泵，缓慢通入气泡，并调节1～2个气泡/秒。 •（3）取标本，两端对角处用丝线结扎。一端挂在通气钩上，放入浴槽，另一端从张力 •换能器的弹簧片小孔中穿出并挂上1g砝码（给予负荷），打开计算机，进入生物信号 •采集系统，选择“张力通道”，观察活动曲线。待其平衡后，用丝线将挂砝码的丝线牢 •牢固定于弹簧片上，除去砝码。 •（4）待标本在浴槽内稳定10min左右，记录一段正常活动曲线，然后用注射器依次向浴 •槽中滴加药液0.2ml。每加一组药时立即标记，并观察、记录2min频率及收缩幅度。每 •次药物作用后，用温暖的台氏液冲洗2～3次，待张力恢复基线（约5min）后再试验其他 •药物。 •（5）停止记录曲线，保存数据。断电断气，取出回肠，冲洗• 浴槽。
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•试验方法及步骤
•（一）试验材料 • 1．动物：大鼠（220～280g/只），雄性。 • 2．器材：恒温平滑肌槽1台、通气泵1个、铁支架1个、止水夹2个，生物信号 采集处理系统，张力换能器，1ml注射器4个，培养皿1个，50ml烧杯1个，组织 剪、眼科剪各1把，止血钳两个，镊子两个，丝线若干，移液器一个，砝码一个。 • 3．试剂：台氏液。 • 4．受试药：0.5%胃复安溶液；0.1%西沙必利溶液；20%百合水提取物；10% 乌药水提取物；15%帜实水提取物；15%虎杖水提取物；15%四药合并的水提取 物。
•试验方法及步骤
•2．对大鼠离体胃平滑肌正常张力的影响试验。打开腹腔，找到回盲部，在离其2～3cm •的回肠处剪断，取出回肠，置于盛有台氏液的培养皿中，沿肠壁分离并剪去肠系膜，将 •肠管剪成数段，轻轻冲出肠内容物，最后将肠管剪成2～3cm的小段备用。加样顺序与操 •作同上。
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•试验结果的原始记录
0.5%胃复安溶液
•表1 药物对大鼠胃或肠平滑肌作用测定原始数据
给药前 1min内 的平均值
频率 振幅
给药后 第1min内 的平均值
频率 振幅
给药后 第2min内 的平均值
频率 振幅
0.1%西沙必利溶液
20%百合水提物
10%乌药水提物
15%帜实水提物
15%虎杖水提物
15%四药合并水提物
•渗透压：要等渗，但不同动物对同一物质的等渗浓度要求不同。如生理盐水溶液，冷血 •动物用0.6～0.75%；温血动物用0.8%～0.9%。
•各种离子：一定比例的不同电解质离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、H+、OH-等是维持 •组织器官功能所必须。组织器官不同，对生理溶液中离子的成份和浓度要求亦不同。
5．掌握试验数据统计、处理方法。
•
•背景知识
离体器官试验常 用的离体器官有 心脏、血管、肠 段、子宫及神经 肌肉标本，用离 体标本可比较直 观地观测药物的 作用。不同的动 物标本用于测定 不同类的药物作
用。
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•本资料来源
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•背景知识
在离体器官法中，不同动物的不同器官都要求最适宜的营养 环境，因此各种动物的人工生理溶液成份和配制都有区别。 在离体器官研究中应特别引起重视。
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•教学试验安排
•（一）教学分组 •在一个教学单元内，根据学生人数，将学生分为8组，每组2～5人，并分成上 下两班，4组/班。 •（二）试验方案 •1．上半班采用胃平滑肌作为试验材料，建议受试物：百合、或乌药、或 帜实、或 虎杖、或四药合并的水提取物，也可采用各教学单位自行提取的物质，用于筛选。西 药对照：胃复安、西沙必利。 •2．下半班采用肠平滑肌作为试验材料，建议受试物：百合、或乌药、或帜实、或虎 杖、或四药合并的水提取物，也可采用各教学单位自行提取的物质，用于筛选。西药 对照：胃复安、西沙必利。
•它对整个胃肠道包括 •从食管到肛门括约肌 •均有促动力作用，能 •增强生理反应，恢复 •正常的动力模式。
•最突出的特点在于标 •本兼治 ，但作用机制 •不明确，组方尚缺少 •现代药理学研究的支 •持。通过离体胃肠平 •滑肌试验，探讨药物 •作用机制、组方依据 •，为新药提供线索。
•临床常用促动力药
•
•背景知识
•第一代
•第二代
•第三代
•中药
•甲氧氯普胺
•多潘立酮
•西沙比利
•百合、乌药பைடு நூலகம் •帜实、虎杖
•它可作用于胃肠道 •和中枢神经系统， •兼有促动力和止吐 •的功效。可增加食 •管下端括约肌的张 •力，使其压力增加
•加强胃内固体和液 •体的排空，还可协 •调胃窦和十二指肠 •运动，对肠道无明 •显作用
•背景知识
世界卫生组织调查表明，我国有80%的人患有不同程度胃肠病居世 界首位。近年来，功能性胃肠病已受到广泛的关注，如功能性消化 不良、肠胃激综合征、功能性便秘等，，西方国家人群患病率为5% ～24%，每年花费高额的医疗费用，患者的生存质量亦受到不同程度 的影响。在最常见造成工作、学习缺勤的疾病中，肠易激综合征的 发病率仅次于普通感冒.目前主要采用解痉剂治疗，但只能缓解腹痛 ，不能治疗便秘。而缓泻剂能缓解便秘，但不能缓解腹痛、腹胀， 而且不能长期服用。因此，研究开发新的调节胃肠动力的药物有重 要的社会效益和广阔的市场前景。
离体组织与器官水平药 物筛选
2020年4月29日星期三
•目的
1．了解离体器官试验特点及注意事项，掌握离体 器官试验的基本技术。
2．学习利用离体器官进行药物筛选的方法，观察 受试物对离体胃、肠平滑肌的影响。
3．了解科研课题设计原则，科研课题立项需阐述 的相关内容。
4．了解科研论文写作规范（包括图表制作技巧等 ）。
•pH影响：人工生理盐水中pH一般要求为中性，对于哺乳动物心脏冠状动脉，酸性生 •理深夜可使平滑肌松驰；碱性则可使节律加快，振幅缩小。 •其它条件：葡萄糖提供组织活动所需能量，临用时再加入，以防变质；有的离体 •器官需要氧气，如离体子宫、离体兔心、乳头肌等。而离体肠管通以空气就可以了。
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•本资料来源
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•试验方法及步骤
•（二）试验步骤 •1．对大鼠离体胃平滑肌正常张力的影响试验。 •（1）制备胃肌条标本：断头处死，立即剖取胃底部浸泡于台氏液液中， •制备成“Z”型，长约2.5cm、宽约0.4cm的胃肌条标本。 •（2）冲洗浴槽，并在其中加入台氏液30ml（标线处），加热，维持水温在37℃～ •38℃。调节通气泵，缓慢通入气泡，并调节1～2个气泡/秒。 •（3）取标本，两端对角处用丝线结扎。一端挂在通气钩上，放入浴槽，另一端从张力 •换能器的弹簧片小孔中穿出并挂上1g砝码（给予负荷），打开计算机，进入生物信号 •采集系统，选择“张力通道”，观察活动曲线。待其平衡后，用丝线将挂砝码的丝线牢 •牢固定于弹簧片上，除去砝码。 •（4）待标本在浴槽内稳定10min左右，记录一段正常活动曲线，然后用注射器依次向浴 •槽中滴加药液0.2ml。每加一组药时立即标记，并观察、记录2min频率及收缩幅度。每 •次药物作用后，用温暖的台氏液冲洗2～3次，待张力恢复基线（约5min）后再试验其他 •药物。 •（5）停止记录曲线，保存数据。断电断气，取出回肠，冲洗• 浴槽。
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•试验方法及步骤
•（一）试验材料 • 1．动物：大鼠（220～280g/只），雄性。 • 2．器材：恒温平滑肌槽1台、通气泵1个、铁支架1个、止水夹2个，生物信号 采集处理系统，张力换能器，1ml注射器4个，培养皿1个，50ml烧杯1个，组织 剪、眼科剪各1把，止血钳两个，镊子两个，丝线若干，移液器一个，砝码一个。 • 3．试剂：台氏液。 • 4．受试药：0.5%胃复安溶液；0.1%西沙必利溶液；20%百合水提取物；10% 乌药水提取物；15%帜实水提取物；15%虎杖水提取物；15%四药合并的水提取 物。
•试验方法及步骤
•2．对大鼠离体胃平滑肌正常张力的影响试验。打开腹腔，找到回盲部，在离其2～3cm •的回肠处剪断，取出回肠，置于盛有台氏液的培养皿中，沿肠壁分离并剪去肠系膜，将 •肠管剪成数段，轻轻冲出肠内容物，最后将肠管剪成2～3cm的小段备用。加样顺序与操 •作同上。
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•试验结果的原始记录
0.5%胃复安溶液
•表1 药物对大鼠胃或肠平滑肌作用测定原始数据
给药前 1min内 的平均值
频率 振幅
给药后 第1min内 的平均值
频率 振幅
给药后 第2min内 的平均值
频率 振幅
0.1%西沙必利溶液
20%百合水提物
10%乌药水提物
15%帜实水提物
15%虎杖水提物
15%四药合并水提物
•渗透压：要等渗，但不同动物对同一物质的等渗浓度要求不同。如生理盐水溶液，冷血 •动物用0.6～0.75%；温血动物用0.8%～0.9%。
•各种离子：一定比例的不同电解质离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、H+、OH-等是维持 •组织器官功能所必须。组织器官不同，对生理溶液中离子的成份和浓度要求亦不同。
5．掌握试验数据统计、处理方法。
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•背景知识
离体器官试验常 用的离体器官有 心脏、血管、肠 段、子宫及神经 肌肉标本，用离 体标本可比较直 观地观测药物的 作用。不同的动 物标本用于测定 不同类的药物作
用。
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•本资料来源
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•背景知识
在离体器官法中，不同动物的不同器官都要求最适宜的营养 环境，因此各种动物的人工生理溶液成份和配制都有区别。 在离体器官研究中应特别引起重视。
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•教学试验安排
•（一）教学分组 •在一个教学单元内，根据学生人数，将学生分为8组，每组2～5人，并分成上 下两班，4组/班。 •（二）试验方案 •1．上半班采用胃平滑肌作为试验材料，建议受试物：百合、或乌药、或 帜实、或 虎杖、或四药合并的水提取物，也可采用各教学单位自行提取的物质，用于筛选。西 药对照：胃复安、西沙必利。 •2．下半班采用肠平滑肌作为试验材料，建议受试物：百合、或乌药、或帜实、或虎 杖、或四药合并的水提取物，也可采用各教学单位自行提取的物质，用于筛选。西药 对照：胃复安、西沙必利。
•它对整个胃肠道包括 •从食管到肛门括约肌 •均有促动力作用，能 •增强生理反应，恢复 •正常的动力模式。
•最突出的特点在于标 •本兼治 ，但作用机制 •不明确，组方尚缺少 •现代药理学研究的支 •持。通过离体胃肠平 •滑肌试验，探讨药物 •作用机制、组方依据 •，为新药提供线索。
•临床常用促动力药
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•背景知识
•第一代
•第二代
•第三代
•中药
•甲氧氯普胺
•多潘立酮
•西沙比利
•百合、乌药பைடு நூலகம் •帜实、虎杖
•它可作用于胃肠道 •和中枢神经系统， •兼有促动力和止吐 •的功效。可增加食 •管下端括约肌的张 •力，使其压力增加
•加强胃内固体和液 •体的排空，还可协 •调胃窦和十二指肠 •运动，对肠道无明 •显作用