基于血清代谢组学的吡柔比星注射剂的累积毒性作用研究

关键词： 吡柔比星注射剂； 代谢组学； 血清； 累积毒性； 作用机 制； 蒽环类抗生素
摇 摇 吡柔比星为蒽环类抗生素， 由日本人横泽兵夫
于 员怨苑怨 年半合成， 至今已有 猿园 余年的应用历史， 主
要用于治疗乳腺癌、 头颈部癌、 胃癌、 泌尿系统恶性
肿瘤、 卵巢癌、 子宫颈癌和急性白血病等。吡柔比星 的剂量限制毒性为白细胞减少和血小板减少， 其他 毒性表现为轻度至中度的贫血、 恶心和呕吐； 且多次
原 和 ［酝 丰富的信息， 检测到的离子大都以 ［ 酝 原 匀］
员猿援 园
员员援 猿
怨怨援 园
怨怨援 园
式检测，质谱分析采用“ 灾 原 ” 模式。具体参数设置 猿缘园益 ， 锥孔 气 流 量 为 员园园 蕴 · 澡 如下： 脱溶剂气流量为 苑缘园 蕴·澡
原员
摇 摇 质谱条件： 电喷雾离子源 （ 耘杂陨 ） ， 采用负离子模 ， 脱溶剂气温度为
愿园援 园 猿园援 园 员缘援 园 园援 园 园援 园
摇 摇 此外， 吡柔比星组大鼠经过两次给药后， 毛色干
枯、 表现呆顿、 倦怠， 精神比较萎靡， 且两次给药后吡 剂多次给药对动物机体存在严重的毒副作用。
员员
这说明市售吡柔比星注射 柔比星组中有 员 只死亡； 猿援 圆摇 大鼠血清 哉孕蕴悦 辕 栽韵云鄄酝杂 代谢指纹谱的建立 摇 在大量样本分析前， 我们采用少量样本对实验条 件进行了优化。实验前分别考察尿样在正、 负模式 下的响应情况。结果发现， 正离子模式下噪音和基 质效应都较高， 导致离子叠加， 无法检测低丰度化合 物。相对来说， 负离子模式比正离子模式能提供更
圆 援 圆摇 样本处理制备摇 取 原 愿园益 下保存的大鼠血清， 用 园郾 圆圆 μ皂 滤膜过滤后装入 宰葬贼藻则泽 μ造 超纯水稀释， 标配的进样小瓶中， 置于 原 圆园益 下保存等待进样。
皂皂 伊 圆郾 员 皂皂，员郾 苑 μ皂，宰葬贼藻则泽，酝粤，哉杂粤 ） ， 柱温 原员 缘园益 ， 流速 园郾 源 皂造 · 皂蚤灶 。自动进样器温度设定 具体洗脱条件设置如 栽葬遭 员 所述。
机分为两组， 分别为正常对照组和吡柔比星组， 每组
化等处理， 将处理后的数据导入 杂陨酝悦粤鄄孕 （ 增员圆郾 园 ， 瑞
孕蕴杂鄄阅粤 （ 责葬则贼蚤葬造 造藻葬泽贼 泽择怎葬则藻泽 凿蚤泽糟则蚤皂蚤灶葬贼藻 葬灶葬造赠泽蚤泽） 分 值对 析， 利用 灾陨孕（ 增葬则蚤葬遭造藻 蚤皂责燥则贼葬灶糟藻 蚤灶 责则燥躁藻糟贼蚤燥灶 ） 异的显著性， 灾陨孕 跃 员 且具有统计意义的变量被认为 对模型有显著贡献的潜在生物标志物。 摇 摇 采 用 公 共 数 据 库 运耘郧郧、匀酝阅月 （ 匀怎皂葬灶 变量进行筛选。同时采用 贼 检验考察代谢物组间差
葬枣贼藻则 贼澡藻 圆 灶凿 燥枣 葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶 辕 早 圆缘援 怨园 依 圆援 猿员 原 圆员援 源 依 园援 缘圆
宰藻蚤早澡贼 增葬则蚤葬贼蚤燥灶
孕蚤则葬怎则怎遭蚤糟蚤灶 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 苑
孕 约 园郾 园缘 增泽 糟燥灶贼则燥造
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［ 员 原 圆］ 给药后存在严重的心脏蓄积毒性 。代谢组学能
（ 月怎糟澡泽，杂憎蚤贼扎藻则造葬灶凿） ； 棕榈酸、 亚油酸均购自 杂蚤早皂葬鄄 由本实验室 酝蚤造造蚤鄄匝 超纯水系统 （ 酝蚤造造蚤鄄 （ 员愿郾 圆 酝Ω） 责燥则藻，云则葬灶糟藻） 制备； 注射用盐酸吡柔比星购自深圳 悦圆园园苑员园猿员 ） ； 其它试剂均为分析纯级别。 （ 杂蚤早皂葬鄄粤造凿则蚤糟澡 中国有限公司） ； 超纯水 粤造凿则蚤糟澡 公司
样取 出 后 置 于 室 温， 凝固后离心 （ 源益 ， 源 园园园 则 ·
酝藻贼葬遭燥造燥皂藻 阅葬贼葬遭葬泽藻（ 澡贼贼责： 辕 辕 憎憎憎援 澡皂凿遭援 糟葬 辕 ）等对 潜在生物标志物进行鉴定， 部分物质将采用标准品 进行验证。 猿摇 结果 猿 援 员摇 体重变化摇 从 栽葬遭 圆 中可以发现， 员 次给药后， 无论是市售吡柔比星组还是正常对照组， 大鼠的体 重都呈现增加的趋势， 但市售吡柔比星组的体重增 而两次给药后， 市售吡柔比星组的体重开始显著下 园郾 园缘 ） 。 降， 与 正 常 对 照 组 相 比， 差异具有显著性 （孕 约 ； 加较小， 与正常组相比， 差异有显著性 （ 孕 约 园郾 园缘 ）
文献标志码： 粤 文章编号： 员园园员 原 员怨苑愿 （ 圆园员圆 ） 园怨 原 员圆怨源 原 园远 摘要： 目的摇 运用血清代谢组学方法对吡柔比星注射剂的累 间质谱建立了大鼠血清的代谢指纹谱， 利用偏最小二乘判别
［ 猿 原 远］ 评价 。此外， 美国食品药品管理局已经认可代
谢组学的研究结果作为新药申报和注册的重要参考 摇 摇 本实验以正常大鼠为研究对象， 对其连续两次 鼠的血液进行代谢组学研究， 探究吡柔比星两次给 理用药提供参考， 而且可为吡柔比星新型给药系统 的研究提供理论依据。 员摇 实验材料 员 援 员摇 仪器和试剂 摇 宰葬贼藻则泽 粤糟择怎蚤贼赠 栽酝 超高效液相色 ， 配备高压二元梯度 谱系统 （ 宰葬贼藻则泽，酝蚤造造枣燥则凿，酝粤 ） 泵、 可控温自动进样器 （ 最低 源益 ） 和二极管阵列检 质谱仪 （ 宰葬贼藻则泽，酝蚤造造枣燥则凿，酝粤 ） ， 配有 耘杂陨 电离源接 海门其林贝尔仪器制造有限公司） ； 酝陨运砸韵 圆圆砸 台 。蕴悦 辕 式高速冷冻离心机（ 蕴葬遭憎葬赠 杂糟蚤藻灶糟藻 ，德国） 酝杂 级 乙 腈 购 自 允援 栽援 月葬噪藻则 公 司 （ 允援 栽援 月葬噪藻则 测器； 质谱检测采用 宰葬贼藻则泽 孕则藻皂蚤藻则 栽韵云 飞行时间 口和 蕴燥糟噪鄄泽责则葬赠 接口； 灾韵砸栽耘载鄄缘 涡旋混合器 （ 江苏
· 员圆怨缘·
圆摇 方法
圆 援 员摇 动物试验和样本的采集 摇 员远 只 ♂ 杂阅 大鼠随 愿 只大鼠。采取尾静脉注射方式给药， 给药剂量按 照市售人体表面积静注给药剂量进行折合， 为 员源
原员
美国 宰葬贼藻则泽 公司） 进行色谱峰提取、 峰对齐及归一 典 哉皂藻贼则蚤糟泽 公 司） 中进行偏最小二乘判别分析法
于实验 凿 员 、 凿 猿 给药， 每次给药前均记录好大鼠的
皂早·噪早 ， 正常对照组注射相应容积的生理盐水。 体重数据， 并观察大鼠的日常行为、 如毛色、 精神状 态等。在 凿 猿 给药 圆源 澡 后对大鼠进行眼眶取血， 血 原 愿园益 下保存。
皂蚤灶 原 员 ， 员园 皂蚤灶 ） ， 分 离 得 到 血 清 样 本， 然后置于
［ 苑］ 指标 。
积毒性进行了研究。方法 摇 采用超高效液相色谱 原 飞行时
注射市售吡柔比星冻干粉， 采用 哉孕蕴悦鄄栽韵云 酝杂 对大 药后的累积毒性作用。本研究不仅可为指导临床合
分析法比较吡柔比星注射剂和正常组的代谢物谱差异。通 过变量重要性指标和 贼 检验选取潜在的生物标志物， 结合标 准品对照和数据库检索对潜在生物标志物进行分析和鉴定。 结果摇 吡柔比星注射剂 圆 次给药后， 在体内产生的次级代谢 物阿霉素酮会通过活性氧机制产生心肌毒性； 同时， 它还会 引发体内的脂肪酸、 磷脂代谢发生紊乱， 进而加速心肌损伤。 结论摇 该研究结果为筛选与吡柔比星累积毒性相关的潜在 生物标志物提供了依据。
原员
员猿缘 灾。每
原 （ ［ 酝 原 匀］ 越 缘缘源郾 圆远员缘 ） 溶液校准。质量扫描范围：
， 离子源温度为
园郾 圆 泽 采集 员 次谱图， 准确质量采用亮氨酸 原 脑啡肽 皂 辕 扎 缘园 耀 员 园园园 ，以 悦藻灶贼则蚤燥凿 模式进行数据采集。
收稿日期： 圆园员圆 原 园源 原 圆猿 ， 修回日期： 圆园员圆 原 园远 原 园猿
圆园园怨园愿员猿 ） ； 园郾 怨豫 氯化钠 万乐药业有限公司 （ 批号：
注射液 购 自 北 京 双 鹤 药 业 股 份 有 限 公 司 （ 批 号：
员 援 圆摇 实验动物 摇 杂责则葬早怎藻鄄阅葬憎造藻赠 大鼠购自北京维 （ 京） 圆园园苑 原 园园园员 ， 杂孕云 级， 体质量 圆缘园 耀 猿园园 早 ］ 。 ♂， 陨灾悦 独立送风隔离笼具 （ 杂孕云 级， 苏州市冯氏实验动 圆缘 ） 益， 相对湿度为 源园豫 耀 苑园豫 。每笼饲养 员 只大 鼠， 使用 杂孕云 级专用大鼠颗粒饲料和消毒垫料。远 动物适应性饲养 员 周后开始试验。 颐 园园 葬皂 耀 员愿 颐 园园 责皂 员圆 澡 明暗周期， 自由进食水。 物设备有限公司产品） 饲养， 动物房温度 为 （ 圆园 耀 通利华实验动物技术有限公司 ［ 许可证编号： 杂悦载运
基于血清代谢组学的吡柔比星注射剂的累积毒性作用研究
（ 员援 上海中医药大学中药现代制剂技术教育部工程研究中心， 上海 摇 圆园员圆园猿 ； 圆援 清华大学医学院， 猿援 清华大学化学系， 北京 摇 员园园园愿源 ）
从文娟员 ， 刘清飞圆 ， 梁琼麟猿 ， 罗国安猿 ， 阮克锋员 ， 冯 摇 怡员
凿燥蚤： 员园援 猿怨远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园员 原 员怨苑愿援 圆园员圆援 园怨援 园圆缘 中国图书分类号： 砸鄄猿猿圆 ； 砸猿源怨援 员 ； 砸怨苑怨援 员源
万方数据 缘员猿圆猿园怨源 ， 耘鄄皂葬蚤造：枣赠蚤岳 增蚤责援 泽蚤灶葬援 糟燥皂
中药多糖作用机制、 中药新型制剂等， 通讯作者， 栽藻造： 园圆员鄄
冯摇 怡 （ 员怨远员 原 ） ， 女， 博士， 教授， 博士生导师， 研究方向：
中国药理学通报摇 悦澡蚤灶藻泽藻 孕澡葬则皂葬糟燥造燥早蚤糟葬造 月怎造造藻贼蚤灶摇 圆园员圆 杂藻责； 圆愿 （怨）
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网络出版时间： 圆园员圆 原 愿 原 员源 员苑 ： 员怨摇 网络出版地址： 澡贼贼责： 辕 辕 憎憎憎援 糟灶噪蚤援 灶藻贼 辕 噪糟皂泽 辕 凿藻贼葬蚤造 辕 猿源援 员园愿远援 砸援 圆园员圆园愿员源援 员苑员怨援 园圆缘援 澡贼皂造