生物类似药中糖型、异构体在产业化中相似性检控及优化解析-杨嘉明-发布版
国家社会科学基金项目(1项)
年国家社会科学基金项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别徐同文地市城乡经济协调发展研究一般项目全国教育科学“十五”规划项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别韩延明东部欠发达地市高校在农村小康社会建设中的角色认知与机制创新研究教育部重点课题年山东省社科规划项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别李明军康雍乾时期的文化政策与文学的转型一般项目年山东省自然科学基金项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别徐宝峰新型酰化物的研究一般项目年山东省经贸委计划项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别冯尚彩大蒜成分分析及污水治理研究一般项目年山东省教育厅科技计划(项)主持人课题名称课题编号项目类别廉玉姬马铃薯新品种的引进及其种薯生产配套技术一般项目赵爱华藏药翼首三萜皂苷的合成工艺研究一般项目朱孔山临沂市旅游产品开发与旅游形象设计研究一般项目年山东省教育厅社科计划(项)主持人课题名称课题编号项目类别李同胜沂蒙山区中小学校长队伍现状调查及专业发展研究一般项目马静临沂方言研究一般项目年山东省教育厅教学研究项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别韩延明普通高中新课程传播与社会理解一般项目李中国新课程理念下的山东高中教师教育研究一般项目年山东省文化厅艺术科学项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别赵勇康德关于崇高的美学理论一般项目陈建国中西方音乐比较研究一般项目郑祖玉临沂汉画像石研究一般项目马铁骊中西方绘画风格比较研究一般项目任世忠蒙山地域天然材料与现代艺术设计一般项目绪红霞声乐教学中学生综合实践能力的培养一般项目潘金枝地方新上本科院校艺术档案管理研究一般项目朱桂云高校与地方图书馆资源共享模式研究一般项目年临沂市科技发展计划(项)主持人课题名称课题编号项目类别李玉增临沂市科技计划项目一般项目冯尚彩中药化学指纹图谱研究一般项目刘复义高速在线脉冲激光打标机一般项目年临沂师范学院科技基金项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别艾树涛铁电相变的热力学习与动力学研究一般项目井文倩无公害生猪生产新技术的研究与推广一般项目陈永亮沂蒙山区富集型野生植物及其土壤系统中人体有益微量元素研究一般项目王成永投资组合保险方法分析一般项目张如华临沂地区刺槐种质资源收集一般项目田洪云神经网络与专家系统集成研究一般项目廉玉姬马铃薯新品种的引进入其种薯生产配套技术一般项目林光哲花生磷脂及其生物活性研究一般项目陈成忠新课程标准与教师专业发展一般项目王和平生态混凝土用于微污染原水预处理一般项目胡其图新世纪基础化学课程与课件的构建一般项目杜玉奎以德治国”与干部道德建设一般项目李漠一种汽车防盗器一般项目金银来动力系统的定性理论与分支理论研究一般项目姜同松矩阵的表示理论及其应用一般项目江兆林适于循环矩阵有关算法的研究一般项目于兴修云蒙湖流域土地利用变化折面源污染效应研究一般项目宋兴良中药金银花指纹图谱研究一般项目陈列绒新型煤高温复合固硫剂的制备一般项目张杰绿色表面活性剂烷基多苷的色泽优化研究一般项目黄坤艳农杆菌法转化水稻一般项目雷琼茶园施钾库动态平衡及茶叶产量品质影响的研究一般项目张桂玲十字花科蔬菜自交不亲和性的鉴定方法一般项目于军香桑螟的生物防治研究一般项目胡顺波小波变换与图像处理一般项目翟继勇临沂市中小学体育教师继续教育现状调查及对策研究一般项目刘梅临沂市中小学教育信息化建设情况调查与分析一般项目李宏伟运动再学习技术对脑卒中患者上肢功能的影响一般项目王建勇广义凸函数及半可微多目标优化一般项目邢晋祎沂蒙黑山羊品种资源调查研究一般项目葛均青根域体积对日光温室黄瓜生长发育的影响一般项目李守伟模糊神经网络理论与应用一般项目刘富胜木业公司管理软件研究开发一般项目年临沂师范学院人文社会科学基金项目(项)主持人课题名称课题编号项目类别张根柱延安文学研究一般项目王倩英俄翻译中词汇与修辞风格的研究一般项目刘建云职务犯罪预防立法一般项目孙士玲当代中国共产党的马克思主义观研究一般项目姚建涛我国刑事诉讼中的人权保障一般项目陈玉峰全球化与文化发展一般项目孙中华我国当前的行政审批体制改革中存在的问题研究一般项目邱春林中国共产党人与农民问题理论一般项目王汉筠关于扩大临沂居民消费需求的实证研究一般项目黄福祥教师创造性及其培养一般项目孙百娥小学道德责任教育研究一般项目柏灵学生档案袋评价方法在我国中小学的应用研究一般项目陈宝军小学信息技术教学模式创新研究一般项目杨金花国内、国外师资建设发展比较研究一般项目魏本权近代沂蒙农村社会生态与社会变迁研究（）一般项目岳孝利中国传统家教文化研究一般项目杜平北美殖民地时期的宗教研究一般项目赵勇康德的崇高理论及其对中国美学的影响一般项目张思莉纪昀的民俗思想一般项目徐文静试论当代文学发展趋向一般项目颜震论唐宋词的雅化一般项目马芳《三国志》语词汇释一般项目邢斌《现代》期刊研究一般项目张国伟中学语言教师艺术素养的构成及培养策略一般项目王景波临沂市旅游支柱产业的培育研究一般项目傅新营唐宋诗学范畴研究一般项目赵光怀吏与秦汉政治一般项目王保彦可持续发展与社会主义政治文明一般项目崔茂中企业动态能力理论一般项目孙力军沂水县民营经济创新发展研究一般项目汪汉利从《赫索格》看索尔·贝娄的人文关怀意识一般项目刘宗棠临沭方音及方言词整理一般项目李淑慧旅游管理专业管理学课程教学改革研究一般项目卢中华中国顶级企业与世界级企业的竞争力比较研究一般项目李中国成人教育部在农村小康社会建设中的角色认知与机制创新研究一般项目陈令军品牌命名中的文化注入问题研究一般项目张爱宁区域城市居民主观幸福感的相关研究一般项目刘梅临沂市中小学教育信息化建设情况调查与分析一般项目王之波英语文学流派汇总一般项目苑朋欣清未山东农业组织机构一般项目胡雪梅美日人力资源管理模式比较研究一般项目李文玲儒家孝伦理及其在汉代的法律化一般项目陈兆河中国国际战略研究一般项目甄子朋超微结构的影响一般项目胡瑞欣邓小平共同富裕思想研究一般项目杜玉奎“以德治国”与干部道德建设一般项目高中玲我国民办中学学生心理健康、健康危险行为及身体锻炼的相关关系研究一般项目。
贝伐珠单抗生物类似药和原研药治疗非小细胞肺癌有效性、安全性和免疫原性的Meta分析
贝伐珠单抗生物类似药和原研药治疗非小细胞肺癌有效性、安全性和免疫原性的Meta 分析作者：陈海韬杨森森邓为上杨昌缘陈吉生来源：《中国药房》2022年第08期中图分类号 R979.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）08-1003-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.08.17摘要目的比较贝伐珠单抗生物类似药与贝伐珠单抗原研药治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的有效性、安全性和免疫原性，为临床用药提供循证参考。
方法计算机检索PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane图书馆、中国生物医学文献服务系统、中国知网、维普网、万方数据、和中国临床试验中心等数据库，检索时限均为建库起至2021年9月25日。
收集贝伐珠单抗生物类似药（试验组）对比贝伐珠单抗原研药（对照组）用于NSCLC的随机对照试验（RCT）。
筛选文献、提取资料并采用Cochrane系统评价员手册5.1.0推荐的偏倚风险评估工具对纳入的RCT进行质量评价后，采用RevMan 5.3软件进行Meta分析、敏感性分析和发表偏倚分析。
结果共纳入11项RCT，合计6 596例患者。
Meta分析结果显示，两组患者的总有效率[RR=0.97，95%CI（0.92，1.02），P=0.22]、总不良反应发生率[RR=1.00，95%CI（0.99，1.01），P=0.79]、严重不良反应发生率[RR=1.04，95%CI（0.96，1.13），P=0.38]、抗药抗体阳性率[RR=1.10，95%CI（0.88，1.36），P=0.41]及常见不良反应（除呕吐外）发生率（P>0.05）比较，差异均无统计学意义。
敏感性分析结果显示，所得结果稳健。
发表偏倚分析结果显示，本研究存在發表偏倚的可能性较小。
结论贝伐珠单抗生物类似药治疗NSCLC的有效性、安全性和免疫原性均与贝伐珠单抗原研药相当。
我国天麻研究态势问题分析及未来发展对策研究——基于２０_年专利数据为例
其药用部位为块茎ꎮ 现代药理学表明ꎬ 天麻具有抗氧
定局限性ꎬ 未能站在全国视角下对以天麻和天麻提取
化、 抗衰老、 抑菌抗炎、 抗惊厥、 抗抑郁、 增加血流
物为原料的相关专利进行解析ꎮ 众所周知ꎬ 天麻与蜜
量、 降血压等作用
[４ꎬ５]
ꎮ 除药用价值外ꎬ 天麻还有食
山西
４ ０９
其他省份
５ １５
４ ２４
３ ５１
河北
吉林
３６９
３３２
２６５
２４９
２２８
１９８
１８１
１７９
８３０
占总比例
/％
３ ２４
３ ２２
２ ９０
２ ３２
２ １８
１ ９９
１ ７３
１ ５８
１ ５６
７ ２５
２ ３ 申请人分析
通过统计分析申请人或申请机构ꎬ 可得知累积创
１９ 和 ２１ꎮ 西南林业大学涉及领域最广ꎬ 有 １４ 个 ＩＰＣ
———Ａ / 关键词 ( 标题、 摘 要、 权 利 要 求 组 合) 进 行
天麻相关专利检索ꎬ 专利时间跨度为公开日 ２００３ 年 １
月 １ 日—２０２３ 年 ６ 月 ２５ 日ꎬ 于 ２０２３ 年 ６ 月 ２６ 日进行
检索ꎬ 检索式为 ａ / 天麻 ａｎｄ ｉｓｄ / ( ２００３ － ２０２３０６２６) ꎻ
领域占据领先位置ꎻ 铜仁学院所涉及的 ＩＰＣ 小类有 １２
１ ２ 研究方法
Ｐａｔｅｎｔｉｃｓ 专利数据库具有可以储存以及分析的工
作空间ꎬ 将检索专利文献导入工作空间ꎬ 进行初步筛
我国天麻分布广泛ꎬ 据报道ꎬ 天麻主产区主要分
安徽、 湖北、 浙江等地ꎻ 东北、 甘肃、 西藏等地 [１８] ꎮ
主要食用植物油相关国际国内标准对比研究
主要食用植物油相关国际国内标准对比研究■ 祁潇哲 张 艳 王正友（国家粮食和物资储备局标准质量中心）摘 要：本文针对我国与国际食品法典（Codex）食用植物油相关标准的异同，采用比较研究的方法，对我国居民消费量最大的3种食用植物油（大豆油、棕榈油、菜籽油）相关的Codex标准及我国国家标准进行了比对。
从术语定义、质量及品质、食品添加剂、污染物、真菌毒素、农药残留等指标的分析结果看，我国国家标准与Codex标准在质量品质指标方面一致性较高，在食品安全指标上还存在一定的差异。
本文建议加快完善食用植物油产品标准，增加营养成分指标；加大对功能植物油产品的开发以及相应的标准研制；关注植物油中新的食品安全风险因子；积极参与油脂国际标准制定。
关键词：大豆油，棕榈油，菜籽油，国际食品法典标准，我国国家标准DOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2020.12.033Comparative Study on the National and Codex Standards of Main EdibleVegetable Oil ProductsQI Xiao-zhe ZHANG Yan WANG Zheng-you（Standards and Quality Center of National Food and Strategic Reserves Administration）Abstract: Aiming at the similarities and differences on the national and Codex Alimentarius (Codex) standards of edible vegetable oil products, this article compares the standards related to three edible vegetable oils (soya bean oil, palm oil, rapeseed oil), using a comparative research method. The three oils have the largest consumption in China. As a result of the analysis of the terms, quality, food additives, contaminants, mycotoxins, pesticide residues, the national standards and Codex standards have high consistency in quality indicators, and there are still certain difference in food safety indicators. This paper suggests on improving supplement nutrition index in China's vegetable oil standards, increasing the development of functional vegetable oil products and corresponding standards, focusing on new food safety risk factors in vegetable oils, and taking active part in the development of international standards on oils.Keywords: soya bean oil, palm oil, rapeseed oil, Codex standards, Chinese national standards标准比对食用植物油是百姓日常生活最重要的食品之一。
含硼药物的研究进展
学 报Journal of China Pharmaceutical University 2023，54（2）：159 - 171159含硼药物的研究进展杜丰华1，董正川2，陈乐园3，侯文彬3，李祎亮3*（1天津中医药大学，天津 301617；2天津红日药业股份有限公司，天津 301700；3中国医学科学院北京协和医学院放射医学研究所，天津市放射医学与分子核医学重点实验室，天津 300192）摘 要 近年来，关于含硼药物，尤其是硼酸类药物的研究逐渐增多。
含硼药物代表了药物化学家在研发领域开拓的一类新成果，这类药物在抗炎、抗菌、抗肿瘤等方面正扮演着愈发重要的角色。
目前，全球已有5个含硼药物获批上市，正处于临床试验阶段的含硼药物也不在少数，同时近几年在研新药的不断出现，极大地扩展了硼在药物研发领域的应用。
本文通过介绍硼元素的特性，并对处于各个研究阶段的代表性含硼药物的适应证，与靶点的结合机制，以及它们进入临床试验后的进展进行综述，以期为含硼药物的进一步研究提供参考。
关键词含硼化合物；上市药物；共价抑制；药物靶标；临床试验中图分类号R914 文献标志码 A 文章编号1000 -5048（2023）02 -0159 -13doi：10.11665/j.issn.1000 -5048.20221101002引用本文杜丰华，董正川，陈乐园，等.含硼药物的研究进展［J］.中国药科大学学报，2023，54（2）：159–171.Cite this article as：DU Fenghua，DONG Zhengchuan，CHEN Leyuan，et al. Research progress of boron-containing drugs［J］.J China Pharm Univ，2023，54（2）：159–171.Research progress of boron-containing drugsDU Fenghua1, DONG Zhengchuan2, CHEN Leyuan3, HOU Wenbin3, LI Yiliang3*1Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 301617; 2Tianjin Chase Sun Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin 301700; 3Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College Institute of Radiation Medicine, Tianjin Municipal Key Laboratory of Radiation Medicine and Molecular Nuclear Medicine, Tianjin 300192, ChinaAbstract In recent years, the research on boron-containing drugs, especially boric acid drugs, has been increas‑ing gradually.Boron-containing drugs, which have been a new area of research for pharmaceutical chemists in the development of new drugs, play an increasingly important anti-inflammatory, antibacterial, and anti-tumor role.At present, five boron-containing drugs have been approved, many are under clinical trials, and more are under investigation around the world, which has greatly expanded the application of boron in the research of new drugs.This paper introduces the characteristics of boron, and reviews the indications of representative boron-con‑taining drugs in various research stages, their binding mechanisms with targets, and their progress after entering clinical trials, aiming to provide reference for further research on boron-containing drugs.Key words boron-containing compound; approved drug; covalent inhibition; drug target; clinical trialThis study was supported by the Youth Project of National Natural Science Foundation of China (No.82104012); and the Major Col‑laborative Innovation Project of Medical and Health Science and Technology Innovation Project of the Chinese Academy of Medical Sciences (No.2021-I2M-1-042)收稿日期2022-11-01 *通信作者Tel：************E-mail：liyiliang@基金项目国家自然科学基金青年项目资助（No.82104012）；中国医学科学院医学与健康科技创新工程重大协同创新项目资助（No.2021-I2M-1-042）学 报 Journal of China Pharmaceutical University 2023，54（2）：159 - 171第54 卷近年来，在药物研发领域，经过科学家们对含硼化合物的不断探索，基于硼元素设计的药物体现出了令人期待的治疗潜力。
DNA甲基化调控植物组织培养过程的分子机制研究进展
第４７卷㊀第６期２０２３年１１月南京林业大学学报（自然科学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．４７，Ｎｏ．６Ｎｏｖ．，２０２３㊀收稿日期Ｒｅｃｅｉｖｅｄ：２０２３⁃０２⁃１８㊀㊀㊀㊀修回日期Ａｃｃｅｐｔｅｄ：２０２３⁃０６⁃２１㊀基金项目：国家自然科学基金项目（３２１７１８２６）；江苏省自然科学基金项目（ＢＫ２０２２０４１１）㊂㊀第一作者：国颖（ｙｉｎｇｇｕｏ＠ｎｊｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ），讲师，负责论文撰写与修改；杨港归（ｙｇｇ＠ｎｊｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ），负责文献收集与整理㊂∗通信作者：薛良交（ｌｘｕｅ＠ｎｊｆｕ．ｅｄｕ．ｃｎ），教授㊂㊀引文格式：国颖，杨港归，吴雨涵，等．ＤＮＡ甲基化调控植物组织培养过程的分子机制研究进展［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２０２３，４７（６）：１－８．ＧＵＯＹ，ＹＡＮＧＧＧ，ＷＵＹＨ，ｅｔａｌ．ＲｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙ⁃ｌａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄｉｔｉｏｎ），２０２３，４７（６）：１－８．ＤＯＩ：１０．１２３０２／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２００６．２０２３０２０２０．ＤＮＡ甲基化调控植物组织培养过程的分子机制研究进展国㊀颖，杨港归，吴雨涵，何㊀杰，何玉洁，廖浩然，薛良交∗（林木遗传育种全国重点实验室，南方现代林业协同创新中心，江苏省杨树种质创新与品种改良重点实验室，南京林业大学林草学院，江苏㊀南京㊀２１００３７）摘要：植物细胞具有全能性，创伤和外源激素能够诱导已分化细胞的重编程来再生新的植株，发展的植物组织培养技术已广泛应用于植物快速繁殖㊁种质保存和性状改良等多个方面㊂然而，对植物组织培养过程中细胞如何保持分化状态和发育可塑性的分子调控机制仍知之甚少，尤其是在表观遗传学水平上㊂ＤＮＡ甲基化是一种进化上保守的表观遗传修饰，能够复杂地协调植物细胞全能性建立和影响其命运转变㊂在此，以组织培养过程中的愈伤组织形成㊁体细胞胚发生为切入点，总结了ＤＮＡ甲基化参与植物再生过程的最新进展㊂首先，分析了不同植物再生过程中全基因组ＤＮＡ甲基化变化模式，认为外植体类型和再生阶段均会对ＤＮＡ甲基化水平产生影响；其次，重点研究了甲基化转移酶（ＭＥＴ１）等在植物再生过程中的作用，以及ＤＮＡ甲基化调控再生基因表达的分子机制，包括ＢＢＭ（ｂａｂｙｂｏｏｍ），ＷＯＸ（ｗｕｓｃｈｅｌ⁃ｒｅｌａｔｅｄｈｏｍｅｏｂｏｘ），ＷＩＮ（ｗｏｕｎｄｉｎｄｕｃｅｄｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）等基因，最后，讨论了ＤＮＡ甲基化在植物再生领域的未来研究方向，指出组织培养与基因工程的结合将为农作物和经济㊁用材林木的高效繁殖和精准培育提供机遇㊂关键词：植物组织培养；ＤＮＡ甲基化；愈伤组织；体细胞胚胎发生中图分类号：Ｑ９４３；Ｓ７２２㊀㊀㊀㊀㊀文献标志码：Ａ开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：文章编号：１０００－２００６（２０２３）０６－０００１－０８ＲｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅＧＵＯＹｉｎｇ，ＹＡＮＧＧａｎｇｇｕｉ，ＷＵＹｕｈａｎ，ＨＥＪｉｅ，ＨＥＹｕｊｉｅ，ＬＩＡＯＨａｏｒａｎ，ＸＵＥＬｉａｎｇｊｉａｏ∗（ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＴｒｅｅＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，Ｃｏ⁃ＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｆｏｒＳｕｓｔａｉｎａｂｌｅＦｏｒｅｓｔｒｙｉｎＳｏｕｔｈｅｒｎＣｈｉｎａ，ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＰｏｐｌａｒＧｅｒｍｐｌａｓｍＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔａｎｄＶａｒｉｅｔｙＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＧｒａｓｓｌａｎｄ，ＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００３７，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｘｅｒｔｉｎｇｒｅｍａｒｋａｂｌｅｃｅｌｌｔｏｔｉｐｏｔｅｎｃｅ，ｐｌａｎｔｓａｒｅａｂｌｅｔｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｔｉｓｓｕｅｓ／ｏｒｇａｎｓａｎｄｅｖｅｎｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄｃｅｌｌｓａｃｔｉｖａｔｅｄｂｙｗｏｕｎｄｓｔｒｅｓｓａｎｄ／ｏｒｈｏｒｍｏｎａｌｃｕｅｓ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｔｈｅｏｒｙｏｆｐｌａｎｔｃｅｌｌｔｏｔｉｐｏｔｅｎｃｙ，ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｏｆｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｈａｖｅｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｒａｐｉｄｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ，ｇｅｒｍｐｌａｓｍｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ａｎｄｐｌａｎｔｂｒｅｅｄｉｎｇａｓａｔｙｐｅｏｆｃｏｎｓｅｒｖｅｄｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｈｏｗｐｌａｎｔｃｅｌｌｓｒｅｔａｉｎｂｏｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄｓｔａｔｕｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｐｌａｓｔｉｃｉｔｙｉｓｓｔｉｌｌｏｂｓｃｕｒｅ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙａｔｔｈｅｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｌｅｖｅｌ．ＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｓａｎｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙｃｏｎｓｅｒｖｅｄｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｈａｔｃａｎｉｎｔｒｉｃａｔｅｌｙｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｃｅｌｌｆａｔｅｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｎｄｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｐｒｏｃｅｓｓ．Ｉｎｔｈｅｗｏｒｋ，ｔｈｅｒｅｃｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｗａｓｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ，ｓｔａｒｔｉｎｇｆｒｏｍｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｃａｌｌｕｓａｎｄｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｄｕｒｉｎｇｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｔｈｅｃｈａｎｇｅｐａｔｔｅｒｎｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ，ｓｈｏｗｉｎｇｔｈａｔｂｏｔｈｅｘｐｌａｎｔｓｔｙｐｅａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｈａｓｅｈａｄａｎｅｆｆｅｃｔｏｎＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓ．ＴｈｅｒｏｌｅｏｆｓｏｍｅＤＮＡ南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｉｎｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ，ｓｕｃｈａｓＤＮＡＭｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１（ＭＥＴ１），ｗｈｏｓｅｄｅｌｅｔｉｏｎｃａｎｌｅａｄｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｄＷＵＳｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ＲＮＡ⁃ｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ（ＲｄＤＭ）ｉｓｔｈｅｍａｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｈｗａｙｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｄｅｎｏｖｏＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎａｌｌｃｏｎｔｅｘｔｓａｎｄｉｓｂｅｌｉｅｖｅｄｔｏｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｗｅａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｇｅｎｅｓ，ｓｕｃｈａｓＢＢＭ（ｂａｂｙｂｏｏｍ），ＷＯＸ（ｗｕｓｃｈｅｌ⁃ｒｅｌａｔｅｄｈｏｍｅｏｂｏｘ），ＷＩＮ（ｗｏｕｎｄｉｎｄｕｃｅｄｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ），ｅｔｃ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｗｅｄｉｓｃｕｓｓｅｄｔｈｅｆｕｔｕｒｅｒｅｓｅａｒｃｈｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｏｆｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｗｉｌｌｐｒｏｖｉｄｅｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓｆｏｒｅｆｆｉｃｉｅｎｔｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｅｃｉｓｅｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄｆｏｒｅｓｔｒｙｃｒｏｐｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒ，ｔｈｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ⁃ｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｒｅｐｏｒｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗｉｌｌｐｒｏｖｉｄｅｃａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｇｅｎｅｔｉｃａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ；ＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ；ｃａｌｌｕｓ；ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ㊀㊀植物组织㊁甚至单个植物细胞都具有强大的脱分化和再分化能力，可以将细胞从分化状态恢复为多能性状态；然后，通过创伤或外源激素诱导重新进入细胞周期，并增殖以建立的芽或根顶端分生组织，最终形成新的器官或植株［１］㊂基于这种全能性，植物组织培养技术已在快繁与工厂化育苗㊁细胞培养生产次生代谢产物及基因工程育种等方面得到广泛应用，并在基础生物学㊁农业㊁园艺和林业等领域展现出可观的应用前景［２］㊂然而，对植物细胞如何保持分化状态和发育可塑性的分子调控机制仍知之甚少㊂在植物细胞命运重塑过程中，表观遗传修饰的动态变化影响着植株的再生能力㊂ＤＮＡ甲基化是一种重要的㊁进化上保守的表观遗传学标记，调控植物的许多生物学过程㊂研究表明ＤＮＡ甲基化通过多种途径调控再生基因的表达，进而在植物组织培养过程中发挥重要作用［３］㊂笔者综述了ＤＮＡ甲基化在植物组织培养过程中的调控作用和分子机制，并对通过调节ＤＮＡ甲基化提高植株再生效率的策略进行展望㊂１㊀ＤＮＡ甲基化与愈伤组织的诱导形成１．１㊀外植体类型对愈伤组织ＤＮＡ甲基化的影响ＤＮＡ甲基化（ＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）通常指在ＤＮＡ甲基转移酶的催化下，通过共价键结合的方式，获得Ｓ⁃腺苷甲硫氨酸上甲基基团的过程［４］㊂ＤＮＡ甲基化主要包括３种类型，即５⁃甲基胞嘧啶（５⁃ｍＣ）㊁６⁃甲基腺嘌呤（６⁃ｍＡ）及７⁃甲基鸟嘌呤（７⁃ｍＧ），其中５⁃ｍＣ占主要类型㊂在全基因组背景下，胞嘧啶序列有３种存在形式：ＣＧ㊁ＣＨＧ（对称型）和ＣＨＨ（非对称型，Ｈ为Ａ㊁Ｔ或Ｃ）㊂植物胞嘧啶甲基化可以发生在所有的胞嘧啶序列中［５］，是介导基因转录沉默的一种稳定机制，调控愈伤组织发生和形态建成［６］㊂植物愈伤组织是指在组织培养过程中将外植体脱分化所形成的未分化致密细胞结构［７］㊂在离体培养下，植物细胞会发生大规模的全基因组染色质重塑，从而导致植物ＤＮＡ序列变异和ＤＮＡ甲基化水平改变［８］㊂各种类型外植体产生的愈伤组织（如叶片愈伤组织㊁茎段愈伤组织等）与相应外植体的ＤＮＡ甲基化图谱存在差异㊂对草莓（Ｆｒａｇａｒｉａｖｅｓｃａ）［９］㊁蓝莓（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｔｅｎｏｐｈｙｌｌｕｍ）［１０］和烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）［１１］叶片组织和叶片愈伤组织的比较研究发现，叶片愈伤组织在全基因组上具有更高的ＤＮＡ甲基化水平㊂然而，由毛果杨（Ｐｏｐｕｌｕｓｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ）［１２］茎段形成的愈伤组织与其外植体茎段组织和再生植株相比，茎段愈伤组织的ＤＮＡ甲基化水平最低㊂根据愈伤组织再生能力的不同可将其分为胚性和非胚性愈伤组织［１３］㊂Ｋａｒｉｍ等［１４］对凹唇姜（Ｂｏｅｓｅｎｂｅｒｇｉａｒｏ⁃ｔｕｎｄａ）研究发现，再生能力更强的胚性愈伤组织的ＤＮＡ甲基化水平要低于非胚性愈伤组织，以及再生植株和叶片等其他外植体形成的愈伤组织㊂不同类型外植体的生理状况和脱分化能力存在差异，因此诱导愈伤组织过程中也伴随着不同ＤＮＡ甲基化水平介导的转录调控㊂１．２㊀愈伤组织形成阶段中ＤＮＡ甲基化水平变化细胞的脱分化过程由遗传和表观遗传机制共同调控，共包括３个阶段：诱导㊁愈伤组织形成和多能性建立，多种植物在脱分化过程中出现全基因组低甲基化［１５－１６］㊂在水稻（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）愈伤组织形成过程中ＤＮＡ甲基化水平显著降低，ＤＮＡ甲基化差异区域主要富集在基因启动子周围的序列上［１７］㊂尽管ＤＮＡ甲基化水平降低是主要趋势，但局部ＤＮＡ超甲基化对多能细胞状态的形成与维持至关重要㊂对拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）研究发现，编码丝裂原活化蛋白激酶１２（ＭＡＰＫ１２）㊁谷胱甘肽Ｓ⁃转移酶ＴＡＵ１０（ＧＳＴＵ１０）和β⁃羟化酶１（ＢＸＬ１）基因的启动子序列在愈伤组织细胞中发生高度甲基化并抑制基因表达，从而促进全能细胞２㊀第６期国㊀颖，等：ＤＮＡ甲基化调控植物组织培养过程的分子机制研究进展团的形成㊂ＭＥＴ１和ＤＲＭ２等ＤＮＡ甲基转移酶在愈伤组织形成过程中受到广泛的转录控制，这与ＤＮＡ甲基化水平变化的调控功能相一致［１８］㊂愈伤组织的分化程度随着组织培养时间的延长而增加，长期培养的愈伤组织中转座子㊁核糖体ＤＮＡ和端粒重复序列发生大规模转移和扩增［６］，从而导致其ＤＮＡ甲基化水平不稳定㊂Ｍａ等［１９］对木薯（Ｍａｎｉｈｏｔｅｓｃｕｌｅｎｔａ）的茎尖分生组织以及腋芽的松散型胚性愈伤组织进行研究，结果表明随着松散型胚性愈伤组织培养时间的延长，ＤＮＡ甲基化水平从５０％降至２７％；而Ｚｅｎｇ等［２０］的研究表明，白桦（Ｂｅｔｕｌａｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ）早期愈伤组织（诱导后２０ｄ）的ＤＮＡ甲基化水平最低（１１．９２％），随着愈伤组织诱导时间的延长，在４０ｄ时ＤＮＡ甲基化水平升至１４．５％㊂ａ．ＤＮＡ甲基化在基因体中分布模式及其对愈伤组织形成的影响：褐色圆圈代表高甲基化水平抑制基因表达而导致愈伤组织褐化；绿色圆圈代表低甲基化水平促进基因表达进而促进愈伤组织生长ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｇｅｎｅｂｏｄｉｅｓａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｃａｌｌｕｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｂｒｏｗｎｃｉｒｃｌｅｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔｈｉｇｈｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｔｈａｔｉｎｈｉｂｉｔｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｌｅａｄｔｏｃａｌｌｕｓｂｒｏｗｎｉｎｇ，ｇｒｅｅｎｃｉｒｃｌｅｓｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｌｏｗｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｔｈａｔｅｎｈａｎｃｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｏｐｒｏｍｏｔｅｃａｌｌｕｓｇｒｏｗｔｈ；ｂ．ＤＮＡ甲基化对转座元件表达影响：蓝色矩形颜色由深至浅表示ＤＮＡ甲基化水平由高至低的变化；灰色矩形颜色由深至浅表示转座子表达由高至低的变化ｅｆｆｅｃｔｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｐｏｓａｂｌｅｅｌｅｍｅｎｔｓ（ＴＥｓ）．ＢｌｕｅｒｅｃｔａｎｇｌｅｃｏｌｏｒｓｆｒｏｍｄａｒｋｔｏｌｉｇｈｔｉｎｄｉｃａｔｅｃｈａｎｇｅｓｉｎＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＴＥｆｒｏｍｈｉｇｈｔｏｌｏｗ，ｇｒａｙｒｅｃ⁃ｔａｎｇｌｅｃｏｌｏｒｓｆｒｏｍｄａｒｋｔｏｌｉｇｈｔｉｎｄｉｃａｔｅｃｈａｎｇｅｓｉｎＴＥｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆｒｏｍｈｉｇｈｔｏｌｏｗ．图１㊀ＤＮＡ甲基化动态变化影响愈伤组织生长模式Ｆｉｇ．１㊀ＤｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｆｆｅｃｔｃａｌｌｕｓｇｒｏｗｔｈｐａｔｔｅｒｎ１．３㊀愈伤组织中ＤＮＡ甲基化在全基因组上的变化模式㊀㊀在全基因组水平上，植物ＤＮＡ甲基化在不同物种间存在广泛的差异㊂其中，ＣＧ序列甲基化是愈伤组织形成过程中主要的ＤＮＡ甲基化类型㊂例如，在草莓［９］㊁菠萝（Ａｎａｎａｓｃｏｍｏｓｕｓ）［２１］㊁葡萄（Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ）［２２］及拟南芥［２３］等植物的研究中均发现其愈伤组织中ＣＧ甲基化水平最高（不同物种中占比范围为３５％ ７０％），ＣＨＧ甲基化位于中间水平（２０％ ４５％），而ＣＨＨ甲基化水平最低（３％２０％）㊂对６个菠萝样本的研究表明愈伤组织ＤＮＡ甲基化在基因区的启动子（上游２ｋｂ）㊁转录终止子（下游２ｋｂ）㊁外显子以及内含子等区域变化模式不同［２１］㊂愈伤组织在启动子位点的ＤＮＡ甲基化变化随着时间增加会出现上升趋势㊂烟草中的研究表明，愈伤组织培养早期启动子区域的ＤＮＡ甲基化会出现部分缺失，但在培养阶段后期则发生缓慢的超甲基化［２４］㊂对草莓及菠萝的叶片愈伤组织研究发现，全基因组ＤＮＡ甲基化水平在内含子（２０％ ２５％）和启动子（２５％ ３３％）区域最高，而在外显子（１５％ ２０％）中ＤＮＡ甲基化水平较低［９，２１］（图１ａ）㊂此外，对草莓［９］㊁烟草［１１］㊁菠萝［２１］及葡萄［２２］等研究都表明愈伤组织中ＤＮＡ甲基化水平在转录起始位点以及转录终止位点附近比在外显子等区域显著降低㊂在ＣＧ和ＣＨＧ序列３南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷背景下，葡萄的愈伤组织在转座子序列的甲基化率要高于叶片组织的甲基化率，然而在ＣＨＨ序列背景下愈伤组织的甲基化率则低于叶片组织［２２］㊂拟南芥的愈伤组织和叶片组织之间也具有相似的甲基化变化趋势［２３］㊂当大部分植物中的转座子区域具有整体较高水平的ＤＮＡ甲基化时，会导致转座子沉默的出现［２５］，转座子区域的甲基化水平在愈伤组织形成过程中相对稳定（图１ｂ）㊂２㊀ＤＮＡ甲基化与体细胞胚胎发生２．１㊀ＤＮＡ甲基化参与体胚发生相关基因的表达调控㊀㊀体细胞胚胎发生（ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ，ＳＥ）是指体细胞或营养细胞在特定诱导条件下再生为胚胎进而具有发育成为独立植株的能力㊂体细胞可以通过直接途径或历经愈伤组织的间接途径形成体细胞胚，其发生过程涵盖复杂的转录调控机制，其中表观遗传修饰也是影响体胚发生的重要调控方式㊂研究表明，ＤＮＡ甲基化能够引起特定参与细胞分化基因的沉默，从而在体胚发生中发挥作用㊂在对板栗（Ｃａｓｔａｎｅａｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ）的研究中发现，ＭＡＤＳ⁃ｂｏｘ转录因子家族基因ＣｍＡＧＬ１１在球状胚胎中特异性积累，与愈伤组织相比，球状体细胞胚胎中ＣｍＡＧＬ１１启动子处的甲基化水平显著降低㊂ＣｍＡＧＬ１１启动子甲基化比率的降低促进了该基因的表达，进而将加快体细胞胚的发育速度［２６］㊂菠萝体细胞胚诱导研究指出，经甲基化抑制剂处理５ｄ后，体胚发生相关类受体蛋白激酶基因ＡｃＳＥＲＫ１在非胚性愈伤组织中的表达量显著提高，从而有效提高菠萝体细胞胚的发生能力［２７］㊂此外，研究发现在拟南芥中超表达一些体胚发生的关键基因，如ＬＥＣ（ｌｅａｆｙｃｏｔｙｌｅｄｏｎ）㊁ＢＢＭ（ｂａｂｙｂｏｏｍ）㊁ＷＵＳ（ｗｕｓｃｈｅｌ）等，可以在不添加激素的情况下提高体胚胎发生诱导效率，而ＤＮＡ甲基化通过影响这些基因的表达进而在一定程度上调控体细胞胚胎的发生［２８］㊂２．２㊀体细胞胚胎发生过程中ＤＮＡ甲基化水平的变化㊀㊀体胚发生需要经过脱分化㊁细胞分裂㊁再分化等多个步骤，在不同发育阶段ＤＮＡ甲基化水平也发生变化㊂油棕（Ｅｌａｅｉｓｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ）离体培养前的叶片外植体细胞的细胞核表现出较强的ＤＮＡ甲基化水平，研究发现随着在高浓度生长素培养基中培养９０ｄ后，叶肉细胞和非反应性维管束细胞中的５⁃ｍＣ免疫荧光信号显著降低［２９］㊂在龙眼（Ｄｉｍｏ⁃ｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎ）胚性愈伤组织㊁不完全致密的胚前培养物及球状胚中，ＣＧ甲基化的全基因组水平远高于ＣＨＧ和ＣＨＨ，且在胚性愈伤组织中存在更高水平的ＤＮＡ甲基化［３０］㊂在棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕ⁃ｔｕｍ）体胚发生去分化过程中也观察到总体ｍＣＧ水平占比最高，这种趋势在外显子㊁内含子㊁转录起始位点上下游２ｋｂ的范围内及其上下游区域都很一致㊂同时棉花早期体胚发生过程中，ＣＧ位点的甲基化水平具有基因型特异性，而ＣＨＨ位点的甲基化水平具有分化阶段特异性［３１］㊂在对可可（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ）的研究中发现，体细胞胚比合子胚具有更高比例的高甲基化ＣＧ位点［３２］㊂此外，植物体胚发生过程中还存在ＤＮＡ甲基化水平早期显著升高后又降低的现象㊂例如，对椰子（Ｃｏｃｏｓｎｕｃｉｆｅｒａ）体细胞胚胎发生相关研究发现，ＤＮＡ甲基化水平在培养第３天迅速升高（１０．８４％ ２２ ９９％），随后在第１５天下降至１１．６９％，在培养第１２０天后增加至３９．６３％［３３］；对龙眼的研究表明，胚性愈伤组织㊁不完全致密的胚前培养物和球状胚的５⁃ｍＣ含量分别为２４．５９％㊁１９．６５％和１９．７４％，表明从胚性愈伤组织到不完全致密的胚前培养物的ＤＮＡ甲基化在全基因组范围内先呈下降，之后略有上升的趋势［３１］㊂２．３㊀ＤＮＡ甲基化调节剂对体胚发生的影响㊀㊀ＤＮＡ甲基化修饰是可逆的，当ＤＮＡ复制过程中甲基转移酶活性偏低时，合成新链中甲基化的胞嘧啶位点未发生甲基化从而造成ＤＮＡ被动去甲基化；基因组上的５⁃ｍＣ受ＲＯＳ１（ｒｅｐｒｅｓｓｏｒｏｆｓｉｌｅｎｃｉｎｇ１）／ＤＭＥ（ｄｅｍｅｔｅｒ）家族蛋白剪切，并由ＤＮＡ修复系统介导的胞嘧啶修复完成ＤＮＡ主动去甲基化［３４］㊂ＤＮＡ去甲基化可以将基因从沉默状态激活，已有证据表明ＤＮＡ甲基化抑制剂在调控植物体胚发生过程中具有较高的应用潜力㊂５⁃氮杂胞苷（５⁃ａｚａＣ）作为一种常见的ＤＮＡ甲基化抑制剂，能够在代谢过程中与ＤＮＡ甲基转移酶结合以降低酶的活性，进而阻碍ＤＮＡ甲基化进程并调控体胚发生相关基因的表达㊂在龙眼体胚发生研究中发现，５⁃ａｚａＣ的外源施加降低了胚性愈伤组织的ＤＮＡ甲基化水平并促进了球状胚的形成㊂与未经５⁃ａｚａＣ处理的龙眼比较发现，处理后的龙眼有关体胚发生的基因表达明显上调，结果表明５⁃ａｚａＣ处理对龙眼早期体胚发生具有促进作用［３５］㊂而在蒺藜苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ）的研究中发现，５⁃ａｚａＣ处理诱导的去甲基化终止了胚性细胞系产生４㊀第６期国㊀颖，等：ＤＮＡ甲基化调控植物组织培养过程的分子机制研究进展体胚的能力［３６］㊂除ＤＮＡ甲基化抑制剂之外，生长素处理拟南芥能够在一定程度上调节编码ＲＯＳ１㊁ＤＭＬ２（ｄｅｍｅｎｔｅｒ⁃ｌｉｋｅｐｒｏｔｅｉｎ２）等去甲基化酶的基因［３７－３８］㊂此外，研究发现低温诱导［３９］㊁高温诱导㊁辐射［４０］，以及铜㊁银离子处理［４１］等都会降低ＤＮＡ甲基化水平从而提高植物体胚发生的能力㊂３㊀ＤＮＡ甲基化调控植物再生的分子机制３．１㊀ＤＮＡ甲基化调控植物再生关键基因的表达组织培养过程中，器官发生主要受ＷＵＳ㊁ＬＥＣ㊁ＷＯＸ（ｗｕｓｃｈｅｌ⁃ｒｅｌａｔｅｄｈｏｍｅｏｂｏｘ）及ＷＩＮ（ｗｏｕｎｄ⁃ｉｎ⁃ｄｕｃｅｄ）等基因的调控［４２－４４］，研究发现这些基因的表达受到ＤＮＡ甲基化特异性调控（表１）㊂表１㊀植物组织培养发育过程中ＤＮＡ甲基化对植物再生关键基因影响Ｔａｂｌｅ１㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｎｋｅｙｇｅｎｅｓｏｆｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ序号Ｎｏ．基因名称ｇｅｎｅｓｙｍｂｏｌ功能ｆｕｎｃｔｉｏｎ物种ｓｐｅｃｉｅｓ１ＡＲＲ３（ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｒｅｓｐｏｎｓｅｒｅｇｕｌａｔｏｒ３）参与细胞分裂素调节；５⁃ａｚａＣ处理后基因表达上调，发生低甲基化促进桃叶片愈伤组织诱导桃Ｐｒｕｎｕｓｐｅｒｓｉｃａ［４５］２ＢＢＭ（ｂａｂｙｂｏｏｍ）影响体细胞胚胎发生；表达量升高，甲基化水平降低促进胚胎发生（胚性愈伤组织中高表达）凹唇姜Ｂｏｅｓｅｎｂｅｒｇｉａｒｏｔｕｎｄａ［１４］３ＣＲＹ１（ｃｒｙｐｔｏｃｈｒｏｍｅ１）调节细胞分裂素信号，促进芽再生器官的新生拟南芥Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ［４６］４ＣＣＤ１（ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｃｌｅａｖａｇｅｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅｓ１）降解类胡萝卜素；５⁃ａｚａＣ处理导致全基因组去甲基化，类胡萝卜素含量降低柑橘Ｃｉｔｒｕｓｐａｒａｄｉｓｉ［４７］５ＣＭＴ２／ＣＭＴ３（ｃｈｒｏｍｏｍｅｔｈｙｌａｓｅ２／ｃｈｒｏｍｏｍｅｔｈｙｌａｓｅ３）参与ｍＣＨＧ维持；５⁃ａｚａＣ处理抑制了叶外植体愈伤组织的形成和不定芽再生草莓Ｆｒａｇａｒｉａｖｅｓｃａ［９］６ＣＭＴ３（ｃｈｒｏｍｏｍｅｔｈｙｌａｓｅ３）维持ＤＮＡ甲基化；５⁃ａｚａＣ处理后基因表达显著下调，ＤＮＡ甲基化降低促进桃叶片愈伤组织诱导桃Ｐ．ｐｅｒｓｉｃａ［４５］维持ＤＮＡ甲基化；表达量升高ＤＮＡ甲基化水平降低，促进体细胞胚胎的发生和再生凹唇姜Ｂ．ｒｏｔｕｎｄａ［４８］７ＤＲＭ２（ｄｏｍａｉｎｓｒｅａｒｒａｎｇｅｄｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）维持ＣＨＨ甲基化毛果杨Ｐｏｐｕｌｕｓｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ［４９］表达量升高ＤＮＡ甲基化水平降低，促进体细胞胚胎的发生和再生凹唇姜Ｂ．ｒｏｔｕｎｄａ［４８］８维持ＣＧ甲基化；低甲基化，ｍｅｔ１⁃３突变体芽再生能力更高拟南芥Ａ．ｔｈａｌｉａｎａ［４６］ＭＥＴ１（ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１）维持ＤＮＡ甲基化；表达量升高ＤＮＡ甲基化水平降低，促进体细胞胚胎的发生和再生凹唇姜Ｂ．ｒｏｔｕｎｄａ［４８］维持ＤＮＡ甲基化；幼苗和嫩叶中偏好表达柑橘Ｃ．ｐａｒａｄｉｓｉ［４７］９ＲＯＳ１（ｒｅｐｒｅｓｓｏｒｏｆｓｉｌｅｎｃｉｎｇ１）ＤＮＡ甲基化水平降低，促进球状胚形成龙眼Ｄｉｍｏｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎ［３０］１０ＳＥＲＫ（ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｒｅｃｅｐｔｏｒ⁃ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ）影响体细胞胚胎发生；表达量升高，甲基化水平降低促进胚胎发生（胚性愈伤组织中高表达）凹唇姜Ｂ．ｒｏｔｕｎｄａ［１４］１１ＷＩＮ（ｗｏｕｎｄ⁃ｉｎｄｕｃｅｄ）诱导细胞去分化和增殖；发生去甲基化，基因表达上调促进愈伤组织形成草莓Ｆ．ｎｉｌｇｅｒｒｅｎｓｉｓ［５０］１２ＷＯＸ（ｗｕｓｃｈｅｌ⁃ｒｅｌａｔｅｄｈｏｍｅｏｂｏｘ）参与顶端分生组织发生；发生去甲基化，基因表达上调促进愈伤组织形成草莓Ｆ．ｎｉｌｇｅｒｒｅｎｓｉｓ［５０］１３ＷＵＳ（ｗｕｓｃｈｅｌ⁃ｒｅｌａｔｅｄｈｏｍｅｏｂｏｘ）调控植物再生；低甲基化激活了生长素和ＷＵＳ相关基因表达，提高植物再生能力棉花Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍ［５１］影响体细胞胚胎发生；表达量升高，甲基化水平降低促进胚胎发生（分生组织中表达最高，其次是胚性愈伤）凹唇姜Ｂ．ｒｏｔｕｎｄａ［１４］㊀㊀Ｓｈｅｍｅｒ等［４２］对拟南芥根外植体再生能力的研究发现，在野生型拟南芥中ＷＵＳ启动子的两个ＣＨＧ位点高度甲基化；而在甲基转移酶基因ｃｍｔ３的突变体中，ＣＨＧ甲基化的减少促进了ＷＵＳ在芽诱导培养基下的表达，这些启动子区域的甲基化变化对ＷＵＳ基因转录具有关键调节作用［５２］㊂Ｌｉ５南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷等［５３］认为，在拟南芥从头芽再生的过程中，ＷＵＳ基因在甲基转移酶功能缺失突变体（ｍｅｔ１）中发生去甲基化，导致ＷＵＳ基因表达上调㊂值得注意的是，ＤＮＡ甲基化对ＷＵＳ基因的表达调控是发生在芽诱导的早期阶段，同时ＭＥＴ１介导的芽再生受细胞分裂素诱导的细胞周期所调节［５４］㊂Ｇａｏ等［５０］研究发现，黄毛草莓（Ｆｒａｇａｒｉａｎｉｌｇｅｒｒｅｎｓｉｓ）愈伤组织的诱导过程中有大量基因ＤＮＡ甲基化水平出现改变，如与伤口反应相关基因ＷＩＮ㊁顶端分生组织相关基因ＷＯＸ㊁体细胞胚胎形成相关基因ＡＧＬ（ａｇａｍｏｕｓ⁃ｌｉｋｅ）㊁细胞周期相关基因ＣＤＫ（ｃｙｃｌｉｎ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ）和ＣＫＸ（ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ／ｏｘｉｄａｓｅ）均发生了去甲基化，表明这些基因的上调表达对愈伤组织的形成至关重要㊂而在黄毛草莓不定芽诱导阶段，愈伤组织阶段发生去甲基化的基因又重新获得甲基化，如ＬＥＣ２㊁与细胞周期进程相关的ＣＫＸ㊁生长素活化酶基因ＩＬＲ１（ＩＡＡ⁃ａｍｉｎｏａｃｉｄｈｙｄｒｏｌａｓｅＩＬＲ１⁃ｌｉｋｅ４）和ＬＥＡ（ｌａｔｅｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓａｂｕｎｄａｎｔ）等基因，表明这些基因的甲基化修饰对于芽的形成至关重要㊂３．２㊀ＤＮＡ甲基转移酶在植物再生中的作用植物ＤＮＡ甲基化维持由胞嘧啶序列环境和ＤＮＡ甲基化调控酶活性共同决定㊂ＤＮＡ甲基化调控酶主要包括甲基转移酶（ＭＥＴ１）㊁染色质域甲基转移酶（ｃｈｒｏｍｏｍｅｔｈｙｌａｓｅ，ＣＭＴ）㊁结构域重排甲基转移酶（ｄｏｍａｉｎｓｒｅａｒｒａｎｇｅｄｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＤＲＭ）和ＤＮＭＴ３（ＤＮＡｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ３）４个家族［５５］㊂ＭＥＴ１主要维持ＣＧ位点的甲基化，ＣＭＴ３和ＣＭＴ２主要负责ＣＨＧ背景下的ＤＮＡ甲基化，ＣＨＨ环境中的甲基化由ＣＭＴ２或ＤＲＭ２通过ＲＮＡ介导的ＤＮＡ甲基化（ＲＮＡ⁃ｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ，ＲｄＤＭ）途径维持［８］㊂拟南芥中，ＭＥＴ１依赖的ＣＧ甲基化与植株再生有关，与野生型相比，ｍｅｔ１⁃３突变体表现出更高的芽再生能力［４６］㊂ＤＮＡ甲基转移酶基因在华东黄杉（Ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｇａｕｓｓｅｎｉｉ）体胚发生的不同阶段表达量发生变化，例如ＣＭＴ㊁ＭＥＴ１⁃１和ＭＥＴ１⁃３的表达量下降，ＭＥＴ１⁃２的基因表达量大幅增加，而ＤＲＭ１和ＤＲＭ２的表达无明显变化［５６］㊂凹唇姜离体培养过程中，ＭＥＴ１㊁ＣＭＴ３和ＤＲＭ２的甲基化水平降低与基因表达水平升高促进了体胚发生和再生［４８］㊂而对龙眼早期体细胞胚胎发生的研究发现，ＤＮＡ甲基化水平的降低受ＤＮＡ甲基转移酶基因和ＤＮＡ去甲基化酶基因ＲＯＳ１的调控［３０］㊂对更多植物再生体系进行研究，将有助于理解不同ＤＮＡ甲基化调控酶在再生过程中的调节作用㊂３．３㊀ＲＮＡ介导的ＤＮＡ甲基化对植物再生的影响ＲＮＡ介导的ＤＮＡ甲基化（ＲｄＤＭ）是重要的基因调控机制，主要通过双链小ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）介导相近序列的从头甲基化发挥作用［５７］㊂在植物中，ＲｄＤＭ参与各种生物学过程，如生物和非生物胁迫反应㊁抑制转座子活性以及再生过程中甲基化模式的形成［７］㊂在棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍ）体胚发生过程中，ＲｄＤＭ通路介导非ＣＧ甲基化，并防止基因转录从而影响再生相关基因的表达［５６］㊂而在大豆胚性细胞培养中，ＲｄＤＭ途径是全基因组ＣＨＨ高甲基化的关键驱动因素㊂连续多年的组织培养使ＤＮＡ甲基化减少，导致细胞胚性丧失，从而影响大豆的再生能力［５８］㊂值得注意的是，高活性ＲｄＤＭ的缺失可以解释ＣＨＨ甲基化的减少，但不会导致ＣＧ和ＣＨＧ甲基化的丢失㊂４㊀展㊀望近年来，ＤＮＡ甲基化在植物组织培养中的研究主要集中在模式植物拟南芥㊁农作物（水稻㊁玉米等）和一些园艺植物中，而在林木中的研究相对滞后㊂通常木本植物具有生长缓慢㊁寿命长㊁自交不亲和及高度杂合的特性，其快速再生受到限制，尤其是在气候变化的背景下［５９］㊂过度分泌酚类物质㊁玻璃化㊁芽端坏死㊁生根困难是林木组织培养过程中常见的限制因素［６０］，阻碍了经济树种的规模化繁殖与遗传改良㊂在木本植物细胞中，再生相关基因的表达同样受到表观遗传学机制的严格调控㊂因此，揭示林木细胞的脱分化和再分化过程的ＤＮＡ甲基化调控机制是提升组培繁殖效率的重要路径，有助于建立更有效的林木再生分子工具㊂尽管ＤＮＡ甲基化调控再生基因表达方面的研究取得了相当大的进展，但二者之间的关联机制还存在争议㊂一般认为，特定基因座的ＤＮＡ甲基化水平升高可能通过沉默基因阻碍再生，而全基因组低甲基化通过激活转录而增强再生㊂例如，在ＤＮＡ甲基转移酶的功能缺失突变体ｍｅｔ１中，ＷＵＳ调控区的ＤＮＡ甲基化缺失，导致该基因表达增加以提高芽再生效率［５３］㊂然而，最近研究表明，ＤＮＡ甲基化也可以与基因转录呈现显著的正相关关系，且ＤＮＡ甲基化对基因表达的调控既可以是主动的，也可以是被动的［６１］㊂识别不同激素环境下以及不同再生阶段的植物细胞中ＤＮＡ甲基化与基因表达之间复杂的调控关系，将进一步加深对植物再生过程中表观遗传调控作用的理解㊂６㊀第６期国㊀颖，等：ＤＮＡ甲基化调控植物组织培养过程的分子机制研究进展基于前期研究结果，ＤＮＡ甲基化在植物组培中的研究可集中在以下４个方面：①加强组织培养过程中ＤＮＡ甲基化与多组学的关联研究，结合单细胞测序等多维组学技术，精确解析再生调节基因的表观遗传调控机制；②开发多种甲基化抑制剂，通过定向调控甲基化酶活性，以引起组织培养过程中的去甲基化和再生相关基因的再激活；③深入解析生长素和细胞分裂素在细胞重编程过程中对甲基化水平的调控机制，为提高组培再生效率提供潜在的靶点；④应用ＣＲＩＳＰＲ／ｄＣａｓ９靶向去甲基化技术，对再生调节基因的甲基化水平进行设计改造，全面提高植物再生效率，并为提高顽抗树种的再生能力提供技术支撑㊂参考文献（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）：［１］赵翔宇．植物组织培养在林木遗传育种中的应用［Ｊ］．河南农业，２０２２（１１）：５１－５２．ＺＨＡＯＸＹ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌ⁃ｔｕｒｅｉｎｆｏｒｅｓｔｇｅｎｅｔｉｃｂｒｅｅｄｉｎｇ［Ｊ］．ＡｇｒｉｃＨｅｎａｎ，２０２２（１１）：５１－５２．ＤＯＩ：１０．１５９０４／ｊ．ｃｎｋｉ．ｈｎｎｙ．２０２２．１１．０１１．［２］巩振辉，申书兴．植物组织培养［Ｍ］．３版．北京：化学工业出版社，２０２２：１２－１７．ＧＯＮＧＺＨ，ＳＨＥＮＳＸ．Ｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ［Ｍ］．３ｒｄｅｄ．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＰｒｅｓｓ，２０２２：１２－１７．［３］ＳＩＶＡＮＥＳＡＮＩ，ＮＡＹＥＥＭＳ，ＶＥＮＫＩＤＡＳＡＭＹＢ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃａｎｄｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｍｏｄｅｓｏｆｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ：ａｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＢｉｏｌＦｕｔｕｒ，２０２２，７３（３）：２５９－２７７．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ４２９７７－０２２－００１２６－３．［４］樊龙江．植物基因组学［Ｍ］．北京：科学出版社，２０２０：６８－６９．ＦＡＮＬＪ．Ｐｌａｎｔｇｅｎｏｍｉｃｓ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：ＳｃｉｅｎｃｅＰｒｅｓｓ，２０２０：６８－６９．［５］ＨＥＸＪ，ＣＨＥＮＴＰ，ＺＨＵＪＫ．ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｓａｎｄａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．ＣｅｌｌＲｅｓ，２０１１，２１（３）：４４２－４６５．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｃｒ．２０１１．２３．［６］ＬＥＥＫ，ＳＥＯＰＪ．Ｄｙｎａｍｉｃｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｃｈａｎｇｅｓｄｕｒｉｎｇｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉ，２０１８，２３（３）：２３５－２４７．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｔｐｌａｎｔｓ．２０１７．１１．００９．［７］ＺＨＡＮＧＨＭ，ＬＡＮＧＺＢ，ＺＨＵＪＫ．ＤｙｎａｍｉｃｓａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ，２０１８，１９（８）：４８９－５０６．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１５８０－０１８－００１６－ｚ．［８］ＬＥＥＫ，ＰＡＲＫＯＳ，ＳＥＯＰＪ．ＪＭＪ３０⁃ｍｅｄｉａｔｅｄｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆＨ３Ｋ９ｍｅ３ｄｒｉｖｅｓｔｉｓｓｕｅｉｄｅｎｔｉｔｙｃｈａｎｇｅｓｔｏｐｒｏｍｏｔｅｃａｌｌｕｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪ，２０１８，９５（６）：９６１－９７５．ＤＯＩ：１０．１１１１／ｔｐｊ．１４００２．［９］ＬＩＵＤＣ，ＭＵＱ，ＬＩＸＹ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｃａｌｌｕｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆｓｔｒａｗｂｅｒｒｙｌｅａｆｅｘｐｌａｎｔｉｓｍｏｄｕｌａｔｅｄｂｙＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＨｏｒｔｉｃＲｅｓ，２０２２，９：ｕｈａｂ０７３．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｈｒ／ｕｈａｂ０７３．［１０］ＧＨＯＳＨＡ，ＩＧＡＭＢＥＲＤＩＥＶＡＵ，ＤＥＢＮＡＴＨＳＣ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｉｎｔｈｉｄｉａｚｕｒｏｎ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｂｌｕｅｂｅｒｒｙｃａｌｌｕｓｕｓｉｎｇｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ⁃ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ［Ｊ］．ＢｉｏｌＰｌａｎｔ，２０１７，６１（３）：５１１－５１９．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１０５３５－０１６－０６７８－３．［１１］ＫＲＩＺＯＶＡＫ，ＦＯＪＴＯＶＡＭ，ＤＥＰＩＣＫＥＲＡ，ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ⁃ｉｎ⁃ｄｕｃｅｄｇｒａｄｕａｌａｎｄｆｒｅｑｕｅｎｔｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇｏｆｉｎｖｅｒｔｅｄｌｙｒｅｐｅａｔｅｄｔｏｂａｃｃｏｔｒａｎｓｇｅｎｅｅｐｉａｌｌｅｌｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００９，１４９（３）：１４９３－１５０４．ＤＯＩ：１０．１１０４／ｐｐ．１０８．１３３１６５．［１２］ＶＩＮＩＮＧＫ，ＰＯＭＲＡＮＩＮＧＫＲ，ＷＩＬＨＥＬＭＬＪ，ｅｔａｌ．ＭｅｔｈｙｌｏｍｅｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＰｏｐｕｌｕｓｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ［Ｊ］．ＢＭＣＰｌａｎｔＢｉｏｌ，２０１３，１３：９２．ＤＯＩ：１０．１１８６／１４７１－２２２９－１３－９２．［１３］ＩＫＥＵＣＨＩＭ，ＳＵＧＩＭＯＴＯＫ，ＩＷＡＳＥＡ．Ｐｌａｎｔｃａｌｌｕｓ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０１３，２５（９）：３１５９－３１７３．ＤＯＩ：１０．１１０５／ｔｐｃ．１１３．１１６０５３．［１４］ＫＡＲＩＭＲ，ＴＡＮＹＳ，ＳＩＮＧＨＰ，ｅｔａｌ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＤＮＡｍｅｔｈｙ⁃ｌａｔｉｏｎｏｆＳＥＲＫ，ＢＢＭ，ＬＥＣ２ａｎｄＷＵＳｇｅｎｅｓｉｎｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆＢｏｅｓｅｎｂｅｒｇｉａｒｏｔｕｎｄａ（Ｌ．）Ｍａｎｓｆ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌＭｏｌＢｉｏｌＰｌａｎｔｓ，２０１８，２４（５）：７４１－７５１．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１２２９８－０１８－０５６６－８．［１５］ＧＡＯＹ，ＲＡＮＬ，ＫＯＮＧＹ，ｅｔａｌ．ＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｋａ，２０１４，５０（１１）：１３３８－１３４４．ＤＯＩ：１０．７８６８／ｓ００１６６７５８１４１０００４ｘ．［１６］ＺＡＫＲＺＥＷＳＫＩＦ，ＳＣＨＭＩＤＴＭ，ＶＡＮＬＩＪＳＥＢＥＴＴＥＮＳＭ，ｅｔａｌ．ＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆｒｅｔｒｏｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓ，ＤＮＡｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓａｎｄｇｅｎｅｓｉｎｓｕｇａｒｂｅｅｔ（ＢｅｔａｖｕｌｇａｒｉｓＬ．）［Ｊ］．ＰｌａｎｔＪ，２０１７，９０（６）：１１５６－１１７５．ＤＯＩ：１０．１１１１／ｔｐｊ．１３５２６．［１７］ＳＴＲＯＵＤＨ，ＤＩＮＧＢ，ＳＩＭＯＮＳＡ，ｅｔａｌ．Ｐｌａｎｔｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｒｏｍｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｔａｉｎｓｔａｂｌｅｅｐｉｇｅｎｏｍｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ｅＬｉｆｅ，２０１３，２：ｅ００３５４．ＤＯＩ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．００３５４．［１８］ＳＭＩＴＨＪ，ＳＥＮＳ，ＷＥＥＫＳＲＪ，ｅｔａｌ．ＰｒｏｍｏｔｅｒＤＮＡｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａ⁃ｔｉｏｎａｎｄｐａｒａｄｏｘｉｃａｌｇｅｎｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓＣａｎｃｅｒ，２０２０，６（５）：３９２－４０６．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｔｒｅｃａｎ．２０２０．０２．００７．［１９］ＭＡＱＸ，ＺＨＯＵＷＺ，ＺＨＡＮＧＰ．Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｆｒｏｍｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｔｏｆｒｉａｂｌｅｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓｉｎｃａｓｓａｖａ：ｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｉｎｃｅｌ⁃ｌｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔａｔｕｓ，ａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＰｌａｎｔＳｃｉ，２０１５，６：８２４．ＤＯＩ：１０．３３８９／ｆｐｌｓ．２０１５．００８２４．［２０］ＺＥＮＧＦＳ，ＳＵＮＦＫ，ＬＩＡＮＧＮＳ，ｅｔａｌ．ＤｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎｄｃｅｌｌｒｅｄｏｘｓｔａｔｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｐｈａ⁃ｓｅｓｉｎｂｉｒｃｈ［Ｊ］．Ｔｒｅｅｓ，２０１５，２９（３）：９１７－９３０．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００４６８－０１５－１１７４－７．［２１］ＬＩＮＷＱ，ＸＩＡＯＸＯ，ＺＨＡＮＧＨＮ，ｅｔａｌ．Ｗｈｏｌｅ⁃ｇｅｎｏｍｅｂｉｓｕｌｆｉｔｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｖｅａｌｓａｒｏｌｅｆｏｒＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｖａｒｉａｎｔｓｆｒｏｍｃａｌｌｕｓｃｕｌｔｕｒｅｏｆｐｉｎｅａｐｐｌｅ（ＡｎａｎａｓｃｏｍｏｓｕｓＬ．）［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ，２０１９，１０（１１）：８７７．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｇｅｎｅｓ１０１１０８７７．［２２］ＬＩＺＡＭＯＲＥＤ，ＢＩＣＫＮＥＬＬＲ，ＷＩＮＥＦＩＥＬＤＣ．Ｅｌｅｖａｔｅｄｔｒａｎｓｃｒｉｐ⁃ｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｐｏｓａｂｌｅｅｌｅｍｅｎｔｓｉｓａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄｂｙｈｅｔ⁃ｓｉＲＮＡ⁃ｄｒｉｖｅｎｄｅｎｏｖｏＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｇｒａｐｅｖｉｎｅｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｃａｌｌｕｓ［Ｊ］．ＢＭＣＧｅｎｏｍｉｃｓ，２０２１，２２（１）：６７６．ＤＯＩ：１０．１１８６／ｓ１２８６４－０２１－０７９７３－９．［２３］ＳＨＩＭＳ，ＬＥＥＨＧ，ＰＡＲＫＯＳ，ｅｔａｌ．ＤｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｉｎＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｃｃｕｒｉｎＴＥｒｅｇｉｏｎｓａｎｄａｆｆｅｃｔｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｌｅａｆ⁃ｔｏ⁃ｃａｌｌｕｓｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０２２，１７（１）：４１－５８．ＤＯＩ：１０．１０８０／１５５９２２９４．２０２１．１８７２９２７．［２４］ＡＬＩＳＨＡＩＫＨＡ，ＣＨＡＣＨＡＲＳ，ＣＨＡＣＨＡＲＭ，ｅｔａｌ．Ｒｅｃｅｎｔａｄ⁃ｖａｎｃｅｓｉｎＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｂｒｅｅｄｉｎｇａｐｐｌｉｃａ⁃ｔｉｏｎｓｉｎｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ，２０２２，８（７）：５６２．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ８０７０５６２．［２５］ＢＡＲＴＥＬＳＡ，ＨＡＮＱ，ＮＡＩＲＰ，ｅｔａｌ．ＤｙｎａｍｉｃＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０１８，１９（７）：２１４４．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｉｊｍｓ１９０７２１４４．［２６］ＧＡＯＹＲ，ＳＵＮＪＣ，ＳＵＮＺＬ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＭＡＤＳ⁃ｂｏｘｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＣｍＡＧＬ１１ｍｏｄｕｌａｔｅｓｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅｃｈｅｓｔｎｕｔ（ＣａｓｔａｎｅａｍｏｌｌｉｓｓｉｍａＢｌｕｍｅ）［Ｊ］．ＪＩｎｔｅｇｒＡｇｒｉｃ，２０２０，１９（４）：１０３３－１０４３．ＤＯＩ：１０．１０１６／Ｓ２０９５－３１１９（２０）６３１５７－４．［２７］ＬＵＡＮＡＰ，ＣＨＥＮＣＪ，ＸＩＥＴ，ｅｔａｌ．ＭｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆＣｐＧｉｓｌａｎｄｓｉｎｐｉｎｅａｐｐｌｅＳＥＲＫ１ｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ，２０２０，１１（４）：４２５．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｇｅｎｅｓ１１０４０４２５．［２８］ＳＡＬＡÜＮＣ，ＬＥＰＩＮＩＥＣＬ，ＤＵＢＲＥＵＣＱＢ．Ｇｅｎｅｔｉｃａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｏｎｔｒｏｌｏｆｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｓ，２０２１，１０（７）：１４６７．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｐｌａｎｔｓ１００７１４６７．［２９］ＤＥＡＲＡÚＪＯＳＩＭ，ＧＯＭＥＳＡＣＭＭ，ＳＣＨＥＲＷＩＮＳＫＩ⁃ＰＥＲＥＩＲＡＪＥ．Ｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｏｉｌｐａｌｍｇｅｎｏｔｙｐｅｓｄｕｒｉｎｇｓｏ⁃ｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｖｏｌｖｅｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｃａｍｂｉａｌｃｅｌｌｓ，ＤＮＡｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ，ａｎｄａｕｘｉｎａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐ，２０２２，４１（９）：１８７５－１８９３．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００２９９－０２２－０２８９８－３．［３０］ＣＨＥＮＸＨ，ＸＵＸＰ，ＳＨＥＮＸ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ⁃ｗｉｄｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｄｙｎａｍｉｃｓｒｅｖｅａｌｓａｃｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｏｆＤＮＡｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｔｈｅｅａｒｌｙｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＤｉｍｏ⁃７南京林业大学学报（自然科学版）第４７卷ｃａｒｐｕｓｌｏｎｇａｎＬｏｕｒ［Ｊ］．ＴｒｅｅＰｈｙｓｉｏｌ，２０２０，４０（１２）：１８０７－１８２６．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｔｒｅｅｐｈｙｓ／ｔｐａａ０９７．［３１］ＧＵＯＨＨ，ＦＡＮＹＪ，ＧＵＯＨＸ，ｅｔａｌ．Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｃｒｉｔｉ⁃ｃａｌｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｓｔａｇｅ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃｍＣＨＨｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｒｅｖｅａｌｓｅｐｉｇｅ⁃ｎｅｔｉｃｂａｓｉｓｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｒｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｃｏｔｔｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＪ，２０２０，１８（８）：１６４８－１６５０．ＤＯＩ：１０．１１１１／ｐｂｉ．１３３３６．［３２］ＧＡＲＣＩＡＣ，ＤＥＦＵＲＴＡＤＯＡＬＭＥＩＤＡＡＡ，ＣＯＳＴＡＭ，ｅｔａｌ．Ｓｉｎ⁃ｇｌｅ⁃ｂａｓｅｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｙｌｏｍｅｓｏｆｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＴｈｅｏ⁃ｂｒｏｍａｃａｃａｏＬ．ｒｅｖｅａｌｅｐｉｇｅｎｏｍｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｏ⁃ｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ［Ｊ］．ＳｃｉＲｅｐ，２０２２，１２（１）：１５０９７．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０２２－１８０３５－９．［３３］ＯＳＯＲＩＯ⁃ＭＯＮＴＡＬＶＯＰ，ＤＥ⁃ＬＡ⁃ＰＥÑＡＣ，ＯＲＯＰＥＺＡＣ，ｅｔａｌ．ＡｐｅａｋｉｎｇｌｏｂａｌＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｓａｋｅｙｓｔｅｐｔｏｉｎｉｔｉａｔｅｔｈｅｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｃｏｃｏｎｕｔｐａｌｍ（ＣｏｃｏｓｎｕｃｉｆｅｒａＬ）［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐ，２０２０，３９（１０）：１３４５－１３５７．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００２９９－０２０－０２５６８－２．［３４］ＤＵＸ，ＹＡＮＧＺＬ，ＸＩＥＧＨ，ｅｔａｌ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｐｌａｎｔＲＯＳ１⁃ｍｅｄｉａｔｅｄａｃｔｉｖｅＤＮＡｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＮａｔＰｌａｎｔｓ，２０２３，９（２）：２７１－２７９．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１４７７－０２２－０１３２２－８．［３５］ＣＨＥＮＲＺ，ＣＨＥＮＸＨ，ＨＵＯＷ，ｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ（５⁃ＡｚａＣ）⁃ｔｒｅａｔｍｅｎｔａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｅａｒｌｙｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＬｏｎｇａｎ［Ｊ］．ＪＨｏｒｔｉｃＳｃｉＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０２１，９６（３）：３１１－３２３．ＤＯＩ：１０．１０８０／１４６２０３１６．２０２０．１８４７６９５．［３６］ＳＡＮＴＯＳＤ，ＦＥＶＥＲＥＩＲＯＰ．ＬｏｓｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｆｆｅｃｔｓｓｏ⁃ｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＭｅｄｉｃａｇｏｔｒｕｎｃａｔｕｌａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＴｉｓｓｕｅＯｒｇａｎＣｕｌｔ，２００２，７０（２）：１５５－１６１．ＤＯＩ：１０．１０２３／Ａ：１０１６３６９９２１０６７．［３７］ＷÓＪＣＩＫＯＷＳＫＡＢ，ＧＡＪＭＤ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆａｕｘｉｎｒｅ⁃ｓｐｏｎｓｅｆａｃｔｏｒｇｅｎｅｓｄｕｒｉｎｇｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐ，２０１７，３６（６）：８４３－８５８．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ００２９９－０１７－２１１４－３．［３８］ＧＲＺＹＢＫＯＷＳＫＡＤ，ＭＯＲＯＮＣＺＹＫＪ，ＷÓＪＣＩＫＯＷＳＫＡＢ，ｅｔａｌ．Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ（５⁃ＡｚａＣ）⁃ｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｓｅｇｅｎｅｓａｆｆｅｃｔｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｇｅｎｅｓｔｈａｔａｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌ，２０１８，８５（２）：２４３－２５６．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１０７２５－０１８－０３８９－１．［３９］ＧＡＯＹ，ＣＵＩＹ，ＺＨＡＯＲＲ，ｅｔａｌ．Ｃｒｙｏ⁃ｔｒｅａｔｍｅｎｔｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅｅｍｂｒｙｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｍａｔｕｒｅｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｓｖｉａｔｈｅｌｎｃＲＮＡ⁃ｍｉＲＮＡ⁃ｍＲＮＡｎｅｔｗｏｒｋｉｎｗｈｉｔｅｓｐｒｕｃｅ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０２２，２３（３）：１１１１．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｉｊｍｓ２３０３１１１１．［４０］ＣＡＳＴＡＮＤＥＲ⁃ＯＬＡＲＩＥＴＡＡ，ＰＥＲＥＩＲＡＣ，ＳＡＬＥＳＥ，ｅｔａｌ．Ｉｎ⁃ｄｕｃｔｉｏｎｏｆＲａｄｉａｔａｐｉｎｅｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓａｔｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｐｒｏｖｏｋｅｓａｌｏｎｇ⁃ｔｅｒｍｄｅｃｒｅａｓｅｉｎＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ／ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｓｔｒｅｓｓ⁃ｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｓ，２０２０，９（１２）：１７６２．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｐｌａｎｔｓ９１２１７６２．［４１］ＰＡＣＨＯＴＡＫＡ，ＯＲŁＯＷＳＫＡＲ．ＥｆｆｅｃｔｏｆｃｏｐｐｅｒａｎｄｓｉｌｖｅｒｉｏｎｓｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｒｉｔｉｃａｌｅｒｅｇｅｎｅｒａｎｔｓｇａｉｎｅｄｖｉａｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＪＡｐｐｌＧｅｎｅｔ，２０２２，６３（４）：６６３－６７５．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１３３５３－０２２－００７１７－９．［４２］ＳＨＥＭＥＲＯ，ＬＡＮＤＡＵＵ，ＣＡＮＤＥＬＡＨ，ｅｔａｌ．ＣｏｍｐｅｔｅｎｃｙｆｏｒｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｒｏｏｔｅｘｐｌａｎｔｓｉｓｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉ，２０１５，２３８：２５１－２６１．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｐｌａｎｔｓｃｉ．２０１５．０６．０１５．［４３］ＳＨＩＢＵＫＡＷＡＴ，ＹＡＺＡＷＡＫ，ＫＩＫＵＣＨＩＡ，ｅｔａｌ．Ｐｏｓｓｉｂｌｅｉｎ⁃ｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃａｒｒｏｔＬＥＣ１ｇｅｎｅｉｎｉｔｓ５ᶄ⁃ｕｐｓｔｒｅａｍｒｅｇｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，２００９，４３７（１／２）：２２－３１．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｇｅｎｅ．２００９．０２．０１１．［４４］ＤＡＩＸＨ，ＷＡＮＧＪ，ＳＯＮＧＹＧ，ｅｔａｌ．ＣｙｔｏｓｉｎｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＦＷＡｐｒｏｍｏｔｅｒｐｒｏｍｏｔｅｓｄｉｒｅｃｔｉｎｖｉｔｒｏｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＡｒａ⁃ｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．ＪＩｎｔｅｇｒＰｌａｎｔＢｉｏｌ，２０２１，６３（８）：１４９１－１５０４．ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊｉｐｂ．１３１５６．［４５］ＬＩＵＸ，ＺＨＵＫ，＆ＸＩＡＯＪ．Ｒｅｃｅｎｔａｄｖａｎｃｅｓｉｎｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ａＢｉｏＴｅｃｈ，２０２３，４（１）：３１－４６．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ４２９９４－０２２－０００９３－２．［４６］ＳＨＩＭＳ，ＬＥＥＨＧ，ＳＥＯＰＪ．ＭＥＴ１⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｒｅｐｒｅｓｓｅｓｌｉｇｈｔｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＡｒａ⁃ｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＭｏｌＣｅｌｌｓ，２０２１，４４（１０）：７４６－７５７．ＤＯＩ：１０．１４３４８／ｍｏｌｃｅｌｌｓ．２０２１．０１６０．［４７］ＸＵＪ，ＷＡＮＧＸ，ＣＡＯＨ，ｅｔａｌ．Ｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｉｎｍｅｔｈｙｌｏｍｅａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｐａｔｔｅｒｎｓｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ５⁃ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎｃｉｔｒｕｓ［Ｊ］．ＤＮＡＲｅｓ，２０１７，２４：５０９－５２２．ＤＯＩ：１０．１０９３／ｄｎａｒｅｓ／ｄｓｘ０２１．［４８］ＫＡＲＩＭＲ，ＴＡＮＹＳ，ＳＩＮＧＨＰ，ｅｔａｌ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＤＮＡｍｅｔｈｙ⁃ｌａｔｉｏｎｏｆＳＥＲＫ，ＢＢＭ，ＬＥＣ２ａｎｄＷＵＳｇｅｎｅｓｉｎｉｎｖｉｔｒｏｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆＢｏｅｓｅｎｂｅｒｇｉａｒｏｔｕｎｄａ（Ｌ．）Ｍａｎｓｆ［Ｊ］．ＰｈｙｓｉｏｌＭｏｌＢｉｏｌＰｌａｎｔｓ，２０１８，２４（５）：７４１－７５１．ＤＯＩ：１０．１００７／ｓ１２２９８－０１８－０５６６－８．［４９］ＶＩＮＩＮＫ，ＰＯＭＲＡＮＩＮＧＫＲ，ＷＩＬＨＥＬＭＬＪ，ｅｔａｌ．Ｍｅｔｈｙｌｏｍｅｒｅ⁃ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏｄｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＰｏｐｕｌｕｓｔｒｉｃｈｏｃａｒｐａ［Ｊ］．ＢＭＣｐｌａｎｔｂｉｏｌｏｇｙ，２０１３，１３：１－１５．ＤＯＩ：１０．１１８６／１４７１－２２２９－１３－９２．［５０］ＣＡＯＱ，ＦＥＮＧＹＸ，ＤＡＩＸＷ，ｅｔａｌ．ＤｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｓｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｗｉｌｄｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ（Ｆｒａｇａｒｉａｎｉｌｇｅｒｒｅｎｓｉｓ）ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＰｌａｎｔＳｃｉ，２０２１，１２：７６５３８３．ＤＯＩ：１０．３３８９／ｆｐｌｓ．２０２１．７６５３８３．［５１］ＬＩＪＹ，ＷＡＮＧＭＪ，ＬＩＹＪ，ｅｔａｌ．Ｍｕｌｔｉ⁃ｏｍｉｃｓａｎａｌｙｓｅｓｒｅｖｅａｌｅｐｉｇｅｎｏｍｉｃｓｂａｓｉｓｆｏｒｃｏｔｔｏｎｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈｓｕｃ⁃ｃｅｓｓｉｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｃｃｌｉｍａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＪ，２０１９，１７（２）：４３５－４５０．ＤＯＩ：１０．１１１１／ｐｂｉ．１２９８８．［５２］ＬＡＷＪＡ，ＪＡＣＯＢＳＥＮＳＥ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ，ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇａｎｄｍｏｄｉｆｙｉｎｇＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｉｎｐｌａｎｔｓａｎｄａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．ＮａｔＲｅｖＧｅｎｅｔ，２０１０，１１（３）：２０４－２２０．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｒｇ２７１９．［５３］ＬＩＷ，ＬＩＵＨ，ＣＨＥＮＧＺＪ，ｅｔａｌ．ＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎｄｈｉｓｔｏｎｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｎｏｖｏｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｂｙｍｏｄｕｌａｔｉｎｇＷＵＳＣＨＥＬｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄａｕｘｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．ＰＬｏＳＧｅｎｅｔ，２０１１，７（８）：ｅ１００２２４３．ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｇｅｎ．１００２２４３．［５４］ＬＩＵＨ，ＺＨＡＮＧＨ，ＤＯＮＧＹＸ，ｅｔａｌ．ＤＮＡＭｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ１⁃ｍｅｄｉａｔｅｄｓｈｏｏｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｓｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｃｙｔｏｋｉｎｉｎ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ，２０１８，２１７（１）：２１９－２３２．ＤＯＩ：１０．１１１１／ｎｐｈ．１４８１４．［５５］ＹＡＡＲＩＲ，ＫＡＴＺＡ，ＤＯＭＢＫ，ｅｔａｌ．ＲｄＤＭ⁃ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｄｅｎｏｖｏａｎｄｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍａｔｉｎＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｂｙｐｌａｎｔＣＭＴａｎｄＤＮＭＴ３ｏｒｔｈｏｌｏｇｓ［Ｊ］．ＮａｔＣｏｍｍｕｎ，２０１９，１０（１）：１６１３．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１４６７－０１９－０９４９６－０．［５６］ＧＡＯＹ，ＣＨＥＮＸＹ，ＣＵＩＹ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｍｅｄｉｕｍｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓｏｎｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｉｎＰｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｇａｕｓｓｅｎｉｉＦｌｏｕｓ，ａｓｐｅｃｉｅｓｕｎｄｅｒｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｆｏｒｅｓｔｓ，２０２２，１３（２）：２８８．ＤＯＩ：１０．３３９０／ｆ１３０２０２８８．［５７］ＥＲＤＭＡＮＮＲＭ，ＰＩＣＡＲＤＣＬ．ＲＮＡ⁃ｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳＧｅｎｅｔ，２０２０，１６（１０）：ｅ１００９０３４．ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｇｅｎ．１００９０３４．［５８］ＪＩＬＸ，ＭＡＴＨＩＯＮＩＳＭ，ＪＯＨＮＳＯＮＳ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ⁃ｗｉｄｅｒｅｉｎ⁃ｆｏｒｃｅｍｅｎｔｏｆＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｃｃｕｒｓｄｕｒｉｎｇｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｓｏｙｂｅａｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，２０１９，３１（１０）：２３１５－２３３１．ＤＯＩ：１０．１１０５／ｔｐｃ．１９．００２５５．［５９］ＧＩＲＩＣＣ，ＳＨＹＡＭＫＵＭＡＲＢ，ＡＮＪＡＮＥＹＵＬＵＣ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｉｓ⁃ｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ，ｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｔｏｔｒｅｅｓ：ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｔｒｅｅｓ，２００４，１８：１１５－１３５．ＤＯＩ１０．１００７／ｓ００４６８－００３－０２８７－６．［６０］ＢＡＲＧＨＣＨＩＭ，ＡＬＤＥＲＳＯＮＰＧ．ＴｈｅｃｏｎｔｒｏｌｏｆｓｈｏｏｔｔｉｐｎｅｃｒｏｓｉｓｉｎＰｉｓｔａｃｉａｖｅｒａＬ．ｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，１９９６，２０：３１－３５．［６１］ＧＵＴＩＥＲＲＥＺ⁃ＡＲＣＥＬＵ，ＭＡＲＩ，ＬＡＰＰＡＬＡＴＮＥＮＴ，ｅｔａｌ．ＰａｓｓｉｖｅａｎｄａｃｔｉｖｅＤＮＡｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｉｎｔｅｒｐｌａｙｗｉｔｈｇｅｎｅｔｉｃｖａｒｉａｔｉｏｎｉｎｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ｅｌｉｆｅ，２０１３，２：ｅ００５２３．ＤＯＩ：１０．７５５４／ｅＬｉｆｅ．００５２３．００１．（责任编辑㊀吴祝华）８。
谢沐风-_对仿制药研发“两座大山”的深入解析(溶出度部分)
0
10 15 20 25
0
Time (h)
. B药厂产品
10
20
30
40
Time (h)
不同厂家生产的甲硝唑片体外溶出度与体内学药浓度的相关性
% dissolved
Concentration (ng/ml)
pH 1.2
80
pH 4.6
60
40
20
0 0
10 0
Time (min)
A B
20 40 60 Time (min)
溶出度试验装置/转速与消化道蠕动的关系
一个优质药品，在采用一定的装置与转速条件 下（通常认为桨板法/50转最接近中老人人群）， 应在pH值的宽范围内（即多种溶出介质中）尽可 能均有一定溶出与释放，这样就可保证该药品用 于人体时，可在各种体内环境下，对任何体质患 者均有一定疗效！
溶出度试验中的“转速”与生物利用度的相关性
0.4
B
0.2
0.0
0
2
4
6
Time (h)
各国对仿制药申报要求
☻日本仿制药申报要求，体外至少四条溶出曲线与原研制剂 一致，方可申报。并根据药物特性，如BE试验需分别进行 “进食”和“禁食”两种状态，则体外溶出研究还需针对性 进行加消化酶溶出介质中的比对试验。 ☻ 世界卫生组织、美国与欧盟要求皆雷同日本。 ☻ 我国新药审评中心2010年9月发布了“关于仿制药通用 技术文件（简称:CTD）申报资料提交要求征求意见的通 知”，其中明确规定“需进行多溶出介质中的比对研究”！ （对不起！正是……）
A药厂产品
B药厂产品
桨板法、100转 溶
桨板法、75转
桨板法、转
出 100 度
我国仿制药一致性评价品种探析
我国仿制药一致性评价品种探析摘要仿制药一致性评价作为提升仿制药质量重要举措，对促进医药产业升级、推进国家供给侧改革、提高公众健康福利有着重要意义。
本文通过分析我国和日本评价品种范围及分阶段评价情况，并结合我国一致性评价实际推进情况，着重剖析我国一致性评价初期面临的品种问题，在此基础上，为我国一致性评价品种相关政策的完善提供建议。
ABSTRACT Quality consistency evaluation of generics is an important initiative to improve drug quality in China and also plays a significant role in promoting the upgrading of the pharmaceutical industry，the national supply-side structural reform and the public health and welfare. The variety problems which will be faced in the initial stage of generics quality consistency evaluation were focused on by analysis of the variety scope and the phased evaluation status in China and Japan based on the actual advancement of consistency evaluation so as to to provide academic reference for perfecting policies related to generics quality consistency evaluation.KEY WORDS generics quality consistency evaluation；evaluation object；drug classification；phased evaluation我国仿制药同剂型、同规格的药品品种甚多，数十家甚者上百家企业在同一品种的狭小领域进行激烈的价格竞争。
实现培养符合国家战略发展需求的实践人才思考
基金项目:2022年合肥师范学院校级质量工程项目 药物分析 线下课程(2022xxkc03);教育部产学合作协同育人项目 面向新工科的生物制药专业师资队伍建设 (220906*********)㊂作者简介:杨星星(1989-),女,安徽六安人,理学博士,合肥师范学院生物与食品工程学院讲师,研究方向:磁场环境下天然药物的生物学效应㊂实现培养符合国家战略发展需求的实践人才思考面向新工科的生物制药专业师资队伍建设杨星星㊀张旭晗(合肥师范学院生物与食品工程学院,安徽合肥230601)摘㊀要:高素质的教师队伍是提高教学水平和人才培养质量的根本保证㊂文章分析了新工科背景下生物制药专业师资队伍建设的重要意义,并针对生物制药专业师资力量建设现状以及面临的困境,从教师和学校两个方面提出生物制药专业师资队伍建设的具体措施,以实现培养出符合国家战略发展需求的生物制药专业实践人才的目标㊂关键词:新工科;生物制药专业;师资队伍建设中图分类号:F24㊀㊀㊀㊀㊀文献标识码:A㊀㊀㊀㊀㊀㊀doi:10.19311/ki.1672-3198.2023.23.030㊀㊀新工科理念的提出给工科教育带来了前所未有的发展机遇与挑战㊂工科专业是工科教育的载体,而教师则是促进工科新学科建设的一个重要推手㊂工科专业师资队伍建设将是新工科教育的重要内容㊂与老工科不同的是,新工科注重知识的实用性㊁交叉性以及综合性的同时,也更加侧重于对学生动手能力等方面的培养㊂生物制药是指利用各种生物学以及药学等相关知识和技术来研发并生产药品,是医药行业的一个重要分支㊂生物制药行业随着各种生物科研技术的持续创新与应用,也得到了飞速的发展㊂据统计,世界范围内生物制药市场的规模已经超过5000亿美元,2025年预计会达到8000亿美元㊂在中国,生物制药行业也获得迅速发展,已成为国家重点扶持的战略性新兴产业之一㊂然而,生物制药产业的快速发展也给生物制药专业师资队伍带来了更高标准的要求㊂因此,如何建设符合生物制药行业需求的专业师资队伍成为了一个亟待解决的问题㊂1㊀新工科背景下生物制药专业师资队伍建设的意义1.1㊀服务新工科背景下国家和社会对工程教育的新需求为了更好地服务于国家发展战略,高校应积极培养新一代生物制药专业实践人才㊂新工科旨在培养工程技术人才,而生物制药专业正是这方面的一个重要领域㊂建设适应新工科教育的生物制药专业师资队伍,将帮助进一步推进 新工科 教育的发展和完善㊂同时,生物制药行业是新兴产业之一,随着国内外经济的发展,生物制药产业将迎来较大的发展机遇㊂健全符合 新工科 背景的生物制药师资队伍,可以培养出更多高素质的实践型生物制药专业人才,从而对生物制药产业的发展会起到推进作用㊂建设一支具有良好职业道德㊁敬业精神和扎实专业知识基础的高水平师资队伍,对于加强 新工科 建设和提高应用型本科院校人才培养质量起着举足轻重的作用㊂1.2㊀提升教师的实践教学引导能力教师实践引导能力的改善能够提高教师教学的效率㊂在教学过程中,教师可以通过理论知识和企业实践相结合的教学方式增加培养学生实践能力的教学过程,结合多种类型的实践活动,通过自我分析明确学生在实践过程中是否能够提升个人能力及教师在组织教学过程需要重点关注的方向㊂具体来说,生物制药专业教师首先其个人应具有较高的专业素养和实践运用能力,以便更专业地解答学生在校企合作实践中遇到的具体问题,从而充分发挥教师的导向作用㊂1.3㊀有助于揭示教师在教学过程中存在的问题和不足早期的生物制药专业课程教学中主要以教师填鸭式教学为主,同时存在教学模式相对较为简单㊁教学资源匮乏㊁理论知识与实践应用无法衔接等一系列问题,从而导致很多生物制药专业学生在毕业后呈现实践能力弱㊁缺乏创新能力㊁难以适应工作岗位等现象,使得生物制药行业对实践人才的需求难以被满足㊂结合国家对新工科和生物制药专业建设的要求,需要建立 以课程思政为主导㊁以行业需求为导向㊁以工程实践和创新能力培养为核心 的生物制药专业课程体系,从而为生物制药领域培养高水平的复合型人才,推动生物制药行业的发展㊂1.4㊀加速生物医药领域的转型升级随着生物医药领域的发展,传统的药学和生命科学㊃09㊃已经无法满足该领域的需求㊂由于生物制药是生命科学和工程技术的结合体,构建以新型企业牵头㊁高校院所作为支撑的符合新工科教育标准的生物制药师资队伍,立足本土,着力解决影响科研和经济发展的瓶颈问题,从而为生物医药领域的转型升级提供有力支持㊂2㊀我国生物制药专业师资队伍建设现状及困境2.1㊀缺少领军型㊁高水平㊁实践能力强的生物制药专业教师缺少生物制药专业领军性㊁实践能力强的教师,主要体现在,新工科背景下,生物制药专业课的教学比较偏重实用性㊂但是,在目前教学过程当中,教师本身实践能力依旧较低㊂因此对于学生在实验实践过程中的引导也存在一定的局限性㊂在新工科背景下,针对生物制药专业人才在国家和社会上的需求,也要求其具有良好的实践能力及适应性㊂但从实际情况来看,当前大多数教师并不能引导学生在实际实践过程中展示出较好的专业实践能力,这就影响了生物制药专业实践型人才的培养,从而延缓生物制药行业的持续发展㊂2.2㊀引进人才后缺乏与之相匹配的制度保障和激励措施因为中国生物制药行业仍处于持续发展阶段,产业还不够成熟和系统化,对生物制药专业人才的保护和奖励措施也不够健全㊂许多高水平专业人才被引进后,由于得不到相应的各项制度保障,会逐步丧失其对自身专业素养以及教学能力提升的想法,更为严重的则会导致人才的流失㊂不仅仅是在教师中,在广大生物制药专业高校学生中,也有不少学生对于生物制药专业日后的发展前景存有顾虑,这其中最主要还是由于缺乏对生物制药专业高素质人才的保障措施及激励措施㊂2.3㊀缺乏完善的校内实验实践教学体系如今许多高校的实验实践教学体系还不够完善㊂在生物制药专业实验及实训课程教学过程中,大多数教师对学生实验实践课堂表现关注度较低,只对实验内容进行简单的原理解释㊂并且由于课堂人数较多,在实验过程中,无法直观了解到每一个学生的学习状态,导致实验实践学习效率偏低,无法获得预期的教学成果,违背了生物制药专业注重实践教育的初衷㊂3㊀生物制药专业师资队伍建设的具体措施3.1㊀加强师资队伍建设,提高教师综合素养3.1.1㊀高校的发展与师资队伍整体水平有着重要关系教育部及有关部门积极响应并组织高校开展对生物制药专业教师系统化和规范化培训,从而全方位提升教师队伍的综合素质㊂教师的培训也要做到与时俱进,要结合当下 新工科 对教师团队的要求进行更高水平㊁高质量㊁高效率的培训㊂高校更要主动调动生物制药专业师资队伍原有的优势学术力量,充分利用现有条件将传统知识与新时代产物有效结合起来,发挥出团队原有的传统生物学科专业优势,结合教育部门的系统培训,建设出一支具有领军性和实践性的生物制药专业师资队伍㊂3.1.2㊀强化 双师型 教师培养制度加强 双师型 教师建设,是在新工科背景下培养更高层次的实践型人才的必然需求㊂强化 双师型 教师队伍建设需要通过 走出去㊁引进来 等方式不断提升生物制药专业教师的专业能力和综合素质,打造一支结构合理㊁素质优良㊁专业知识和实践能力突出的 双师型 教师队伍㊂在当前新工科的背景下,高校老师难以胜任所有课程的教授工作,因此高校可以与研究院所和本地企业共同组建一支兼职化的 双师型 教师队伍,坚持各取所长,彼此间研讨交流,保证新工科背景下生物制药专业的师资力量与教学质量㊂3.1.3㊀重视青年教师的培养,加强实践能力和工程实践经验提升新工科背景下的生物制药专业人才培养需以产业的发展和学生就业需求为导向,更加注重学生工程实践能力的培养㊂通过多层次㊁多渠道的师资队伍建设,从而优化师资队伍结构㊁知识结构与能力结构㊂在专业教师团队中,应重视专业技能与工程实践经验的双重培养㊂专业教师通过参与企业生产一线的生产活动,加强专业知识的学习与应用;在具体教学中通过参与企业工程实践活动,掌握课程内容与行业标准要求之间的差异,理解行业对人才培养的需求;通过参与企业科研活动,促进教师科研能力和创新水平的提高㊂3.1.4㊀引进领军型㊁高水平的生物制药专业教师我国生物制药专业目前的师资队伍配比较低,特别是高水平人才的比例偏低㊂造成这一现象的原因是我国生物制药产业刚刚起步,许多高水平人才在这个领域没有积累㊂即便如此,也要克服困难,扩大福利机制,吸引并积极引进具有高水平的生物制药专业的领军教师,通过老教师引导新青年教师,以培养青年教师的专业素养㊁实践能力和教学本领㊂3.1.5㊀ 以生为本 ,重点贯彻 走出去学生是教育的主体,教师是引导和促进学生学习的人㊂新工科背景下,高校教师应深入了解学生的心理㊁生理和认知特点,基于对学生需求和发展规律的全面分析,制订个性化教学计划,不断完善教学方式,实现以生为本㊂教师应转变观念㊁提高素质,积极与学生进行沟通交流,激发学生学习兴趣,促进学生在教学活动中主动参与㊂同时,新工科背景下生物制药专业师资队伍建设应坚持工程实践原则,重点贯彻 走出去 ㊂生物制药㊃19㊃相关知识具有很强的应用性,其发展必须建立在生物制药相关产业对人才培养规格和质量要求的基础上㊂教师应当走出校园,积极探索新兴产业,提升自身的理解㊂教师还可以充分利用各种网络资源,建立线上线下的自我学习模式,将所学运用在教学活动中㊂例如,在课程教学过程中适当提高工程实践环节的比重和难度;在实验教学过程中以学生为主导,教师辅助的形式提高学生实际动手能力;加强实践教学环节中各实训课程之间㊁实训课程与其他专业课程之间㊁生产实习与毕业设计之间㊁课程设计与毕业设计之间等各环节之间的衔接和渗透㊂根据生物制药相关产业发展和学生就业需求情况,有针对性地选择新兴产业或前沿产业作为专业培养方向,从而将教学内容与产业发展相结合,帮助教师认识与理解新兴产业,为学生择业及今后的职业发展奠定基础㊂3.1.6㊀加强教师对国际工程教育认证理念和实践经验提升,开展国际工程教育认证的学术研究针对工程教育认证的制度体系㊁认证标准㊁质量控制与持续改进等基本理论问题进行研究,为开展工程教育认证的教师提供必要的理论支持㊂为提高教师对国际工程教育认证理念和实践经验提升,需从思想认识㊁理论学习和工作实践等多方面开展研究㊂通过学术研究与交流,提高教师对国际工程教育认证制度体系及质量控制与持续改进等基本理论问题的认识㊂此外,还可以利用出国访学和公派出国等各种机会,选派年轻教师多出去学习,从而提高教师的国际化视野,帮助提高师资力量㊂3.2㊀改革考核方式,强化师德师风考核为有效解决高校教师职务聘任工作中存在的重选拔轻培养㊁重使用轻管理等一系列问题,需要改善健全高校实践型专业人才聘期考核制度,规范高校实践型专业人才职务聘任工作,改善考核工作机制,建立多元化的考核机制,鼓励教师将专业相关的成果融入教学,提高教学成果等在职称评聘的比例,提高教师对教学的兴趣㊂教学相长 是高校教师职业发展的内在要求,是提高教学质量的根本途径㊂但 教学相长 绝不是一句空话,必须要落实到教师考核与评价中㊂目前高校对教师的考核主要以结果为导向,重结果轻过程,重科研轻教学,重知识轻能力,教师往往只关注知识的授予过程而忽视了知识的实践应用,如此下去,教师与学生之间很难建立良好的师生关系㊂因此,高校迫切需要制定更为完善的多项考核机制㊂例如,上海工程技术大学生物制药专业采用 过程性评价 与 终结性评价 相结合的考核方式,制定并实施‘生物制药专业教学质量评价方案“‘生物制药专业教师师德师风建设方案“和‘教学事故认定及处理办法“等,从教学质量和师德师风两方面加强对教师的考核㊂学校还成立了 教学质量督查小组 和 教学督导委员会 ,定期对生物制药专业教师进行听课㊁检查和巡视,若发现相应问题会及时指出问题并提出整改意见㊂4㊀结语面向新工科的生物制药专业师资队伍建设是一项系统的工程,主要涉及培养目标的设定㊁人才培养方案的指定㊁课程体系的规划㊁实践教学实施等诸多环节㊂通过完善教师队伍建设,优化教师知识结构,培养具有国际化视野㊁创新思维和工程实践能力的高水平实践型专业人才㊂新工科背景下对师资力量要求更高,要具备跨学科知识背景和工程实践能力㊂因此,高校应不断深化教育教学改革,完善师资队伍建设机制,积极探索人才培养模式㊂新工科背景下生物制药专业师资力量建设是一个长期过程㊂需要高校㊁企业以及社会各界的通力协作,建立长效机制,强化师资队伍建设工作㊂只有这样,才能为新工科背景下的生物制药实践型人才培养提供强有力的保障㊂参考文献[1]聂丽蓉,卢明夏,朱智,等.基于 新工科 教育背景下的‘药物化学“课程教学与改革探索[J].化工时刊,2020,(06):38-39+42.[2]何方,刘杰.基于专利分析的生物制药产业发展趋势研究[J].中国发明与专利,2021,18(07):50-55+72.[3]张静,姜静,于鹏飞,等.新工科背景下生物制药专业工程类课程建设与教学实践[J].卫生职业教育,2021,39(17):36-38.[4]石辉,杜红霞,王丽.环境科学专业中生态类课程群建设的思考[J].高等理科教育,2017,(04):121-125.[5]赵天倚.应用型高校生物制药专业实践教学改革对策[J].学周刊,2023,(02):6-8.[6]陈永富,王忠华,汪财生,等. 新工科 背景下生物制药专业开放㊁融合㊁联动实践教学模式的探索与实践[J].高校生物学教学研究(电子版),2020,10(02):61-65. [7]闫立龙,代英杰,周成程.新工科背景下农科院校环境工程专业师资队伍建设与思考[J].黑龙江教育(高教研究与评估),2023,(02):35-37.㊃29㊃。
药物功能模式相似度及其聚类
药物功能模式相似度及其聚类王志刚;陈鑫;谢丽芳;杨啸林;张正国【期刊名称】《中国生物医学工程学报》【年(卷),期】2011(030)006【摘要】对现有已知药物的功能模式进行分析,可以帮助发现其可能的新应用,指导联合用药或预测药物的未知毒副作用.提出将药物化学结构信息和GO注释信息结合,分析药物功能模式相似度.药物化学结构和GO注释信息下载自DrugBank数据库,其中GO注释信息包括生物过程、分子功能和细胞定位等3个分支.计算现有4886种药物的功能模式相似度,并对其进行聚类分析.基于Tanimoto系数计算药物化学结构相似度,基于语义分析计算药物GO注释中3个分支的相似度.分别使用Logistic回归、算术均值、几何均值将上述4个药物相似度结合,得到反映多方信息的复合相似度.将一种药物与所有其他药物的相似度向量作为该药物的特征谱,对药物进行层次聚类.使用药物解剖学、治疗学及化学分类( ATC)的标准评价不同的相似度和聚类结果.结果显示:药物化学结构相似度与基于GO的3个分支的相似度均线性相关,表明药物的结构信息能在一定程度上反映功能信息；Logistic回归复合相似度能够很好地反映两个药物是否属于同一个ATC分类；基于GO注释生物过程分支语义相似度和几何均数复合相似度聚类结果与ATC分类第一层次强关联.所提出的方法结果可靠,可望用于辅助药物发现和预测不良反应.【总页数】6页(P807-812)【作者】王志刚;陈鑫;谢丽芳;杨啸林;张正国【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院,北京100005;中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院,北京100005;中国医学科学院信息中心,北京100009;中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院,北京100005;中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院,北京100005【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.基于维度根距离相似度量方法对单值和区间中性的聚类算法进行聚类算法 [J], 叶炬锋2.用于Web文档聚类的基于相似度的软聚类算法 [J], 姜亚莉;关泽群3.基于局部序列比对相似度的用户会话聚类新方法 [J], 姚瑶;周铜4.融合统计和结构相似度的文档聚类 [J], 郑重5.基于相似度的蚁群聚类算法 [J], 沈兴鑫;杨余旺;肖高权;徐益民;陈响洲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
甲基苯丙胺对映异构体两种衍生化方法的比较分析
甲基苯丙胺对映异构体两种衍生化方法的比较分析张建新;张大明;韩旭光;乔静;杨士云;辛国斌【期刊名称】《中国法医学杂志》【年(卷),期】2009(024)005【摘要】目的建立甲基苯丙胺毒品的对映异构体分析的优化方法.方法按文献方法用(S)-(+)-a-甲氧基-a-(三氟甲基)苯基乙酰氯(MTPACl)对甲基苯丙胺直接衍生化和在碱性条件下用有机溶剂萃取后再用MTPACl衍生化(对文献方法优化),分别对其衍生物采用全扫描形式进行GC-MS分析,比较其结果.结果优化方法的检测限低,峰型好,副反应少.文献方法的检测限是0.1ng,优化方法的检测限是0.0016ng.结论优化方法用于甲基苯丙胺的对映体特征分析,结果更准确,实用性更强.【总页数】4页(P289-292)【作者】张建新;张大明;韩旭光;乔静;杨士云;辛国斌【作者单位】北京市公安局法医检验鉴定中心,北京,100192;北京市公安局法医检验鉴定中心,北京,100192;公安部缉毒局,北京,100741;北京市公安局法医检验鉴定中心,北京,100192;北京市公安局法医检验鉴定中心,北京,100192;北京市公安局法医检验鉴定中心,北京,100192【正文语种】中文【中图分类】D919【相关文献】1.手性固定相高效液相色谱法同时测定琥珀酸索利那新原料药中对映异构体和非对映异构体 [J], 王东武;王西宁;丰梅君;宋莹雪2.柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法拆分布洛芬对映异构体 [J], 梅雪娇;卢定强;冷柏榕;严相平3.高效液相色谱-串联质谱法分析毛发中甲基苯丙胺和苯丙胺手性对映异构体 [J], 张颖怡;李良;邢旭琴;周政政;马安德4.甲基苯丙胺对映异构体手性分离方法及其毒性作用的研究进展 [J], 张颖怡;李良;马安德;周政政5.反相HPLC分离N-苄氧羰基-L-天门冬氨酸慢心律衍生物的α和β异构体及非对映异构体 [J], 金恒亮;林矗;叶蕴华;夏霖;寇玉泉;曹小冬;李崇熙;邢其毅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于生物药剂学性质的中药组分相似性分析方法的建立
基于生物药剂学性质的中药组分相似性分析方法的建立中药组分是一个复杂的多成分体系，如何表征和评价其多样的性质一直是中药现代化进程中亟待解决的关键科学问题。
该文根据生物药剂学性质的相关规定，制定中药组分相似性评价标准，同时基于向量夹角余弦（cosine）和格鲁布斯（Grubbs）法建立相似性分析的方法，用于评价组分内代表性成分性质的离散程度，最终为中药组分亚组分的分类以及组分性质的整体性评价提供思路和方法。
标签：中药组分；生物药剂学性质；相似性分析；cosine法；Grubbs法；亚组分中药组分是个复杂的整体，多年来，作为中医药的物质基础，如何表征和评价其多样的性质一直没有找到完善的解决方案，最终阻碍了中药现代化、国际化的发展进程[1-4]。
为解决中药现代化面临的关键问题，本课题组基于中药物质基础组分结构理论[5]，创新性地提出了一系列表征中药组分整体性质的关键技术及评价方法，包括可代表组分整体性质的有限个成分的选择以及“离散度”指标等[6-7]。
相似性评价主要针对组分的“离散度”问题，该方法的建立旨在从定性和定量2个方面科学评价组分内各代表性成分性质的偏离和分散程度，最终优化组分的结构。
1 中药组分性质相似性评价方法建立的必要性“中药组分结构理论”已经指出，中药组分是同一类别的单一成分按照一定比例组合构成的，这里的“同一类别”顾名思义即组分内成分的性质是相似的。
但是在进行组分性质（生物药剂学性质）的研究时，发现这样一个问题，并不是所有中药组分内的代表性成分性质具有相似性。
以淫羊藿苷组分为例，淫羊藿苷组分内的代表性成分因为淫羊藿苷元连有不同数目的糖，在溶解性方面各成分往往表现出很大的差异。
本课题组在建立组分的生物药剂学分类系统时提出，为了科学评价组分的性质，结合组分内各代表性成分性质的离散度关系，将性质差异大的成分分离为亚组分，优化组分的结构[6]。
组分A和组分B，组分A中有4个代表性成分，各成分的性质很相近，对各成分的性质进行拟合，可以代表组分的整体性质。
野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响
野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响李戈;李俊玫;葛志华;杨宁;杨佳宁【摘要】目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响.方法:体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞分为对照组、不同浓度野黄芩苷药物组,野黄芩苷组分别用80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h.采用免疫细胞化学法观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响.结果:用药组Tca8113细胞Fas和FasL的表达水平明显高于对照组(P＜0.05);并且随着野黄芩苷药物浓度的增加,Fas和FasL的表达水平逐渐升高(P＜0.05).结论:野黄芩苷可能通过促进人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白和FasL蛋白的表达促进肿瘤细胞凋亡.【期刊名称】《承德医学院学报》【年(卷),期】2016(033)001【总页数】3页(P7-9)【关键词】野黄芩苷;人舌鳞癌Tca8113细胞;Fas;FasL【作者】李戈;李俊玫;葛志华;杨宁;杨佳宁【作者单位】承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000;承德医学院附属医院,河北承德067000【正文语种】中文【中图分类】R739.86舌鳞状细胞癌（tongue squamous cell carcinoma，TSCC）是口腔癌中最常见的恶性肿瘤，恶性程度较高、生长快、浸润性较强，易发生早期淋巴结转移，且转移率较高。
由于其位置的特殊性，以及放疗、化疗副作用较大，术后复发率及转移率均较高，5年存活率在50%-60%左右［1-2］。
目前，TSCC的临床治疗主要采用手术为主、放化疗为辅的综合治疗方法。
中药野黄芩苷又名灯盏花乙素，是从黄芩茎叶及灯盏细辛等药物中分离得到的黄酮类化合物，在抗炎、抗微生物、抗变态反应、抗肿瘤等多方面都有一定的药理作用［3］。
高比活度碳-14标记吡虫啉的合成与分析
高比活度碳-14标记吡虫啉的合成与分析杨征敏;张贵华;许亚军;见才广;李霄;叶庆富【摘要】以[14C]碳酸钡为原料,通过格氏、还原、溴化和亲核取代等五步反应制备了碳-14标记吡虫啉的粗品,经制备型HPLC纯化获得了目标物14 C-吡虫啉(1-(6-氯-3-吡啶[14 C]甲基)-N-硝基咪唑-2-亚胺,1354.2 MBq)纯品,反应总放化收率为51％.目标物化学结构经质谱(ESI-MS)和核磁共振氢谱(1 H NMR)确认,其放化纯度和化学纯度分别以放射性薄层层析-同位素成像分析法(TLC-IIA)、离线放射性高效液相色谱法(HPLC-LSC)、在线放射性高效液相色谱法(HPLC-FSA)和多波长高效液相色谱法(HPLC-PDA)测定.结果表明,目标物14 C-吡虫啉的放化纯度和化学纯度均大于98％,比活度为1871.46 GBq/mol.目标物14 C-吡虫啉可作为放射性示踪剂,用于吡虫啉在不同植物中的定向积累与代谢特征研究.%A version of carbon-14 labelled imidacloprid,(E)-N-(1-((6-chloropyridin-3-yl) [14C]methyl)imidazolidin-2-ylidene)nitramide (1354.2 MBq),was synthesized from barium [14 C]carbonate via Grignard reaction, reduction, bromination, nucleophilic substitution reaction and purified by preparative HPLC with the overall yield of 51％.The labelled prod-uct was identified by using ESI-MS and 1 H NMR.Its radiochemical and chemical purity are more than 98％,determined by TLC-IIA,HPLC-LSC,HPLC-FSA,and HPLC-PDA, respectively.The specific activity of the product is 1871.46 GBq/mol.This product can beused as radiotracer in the study of the directional accumulation and metabolism of imidaclo-prid in plants.【期刊名称】《核化学与放射化学》【年(卷),期】2018(040)003【总页数】7页(P196-202)【关键词】同位素标记合成;吡虫啉;碳-14;杀虫剂;放射性示踪剂【作者】杨征敏;张贵华;许亚军;见才广;李霄;叶庆富【作者单位】上海启甄环境科技有限公司同位素标记合成研究中心,上海 201403;上海启甄环境科技有限公司同位素标记合成研究中心,上海 201403;上海启甄环境科技有限公司同位素标记合成研究中心,上海 201403;上海启甄环境科技有限公司同位素标记合成研究中心,上海 201403;上海启甄环境科技有限公司同位素标记合成研究中心,上海 201403;浙江大学原子核农业科学研究所,浙江杭州 310029【正文语种】中文【中图分类】TL923;O628.4;S482.3吡虫啉(imidacloprid)是第一个商品化的高效烟碱类内吸性杀虫剂，作用于害虫的烟酸乙酰胆碱酯酶受体，具有高效、广谱、低毒、安全和高选择性的特点，对人、畜、植物和天敌等安全。
E.coli木糖异构酶基因的克隆及表达条件的优化
E.coli木糖异构酶基因的克隆及表达条件的优化许伟;严明;李永健;李艳;许琳【期刊名称】《生物加工过程》【年(卷),期】2005(3)4【摘要】采用PCR技术以大肠杆菌JM109基因组DNA为模板扩增得到木糖异构酶基因xylA,连接到载体pET-22b(+),得到重组质粒p ET-22b(+)-xylA.将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,重组菌株经IPTG诱导后,通过半胱氨酸-咔唑法测得木糖异构酶活力.每mL发酵液中重组菌株显示出酶活力约为0.84 U.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的5 ×104(相对分子质量)特异性蛋白质条带.【总页数】4页(P45-48)【作者】许伟;严明;李永健;李艳;许琳【作者单位】南京工业大学,制药与生命科学学院,南京,210009;盐城工学院,化学生物工程学院,盐城,224003;南京工业大学,制药与生命科学学院,南京,210009;南京工业大学,制药与生命科学学院,南京,210009;南京工业大学,制药与生命科学学院,南京,210009;南京工业大学,制药与生命科学学院,南京,210009【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.密苏里游动放线菌葡萄糖异构酶基因xylA的克隆及其表达条件的优化 [J], 王贺;杨瑞金;华霄;钱婷婷;张文斌;蒋孝燕2.木糖异构酶基因xylA的克隆及其表达载体的构建 [J], 孙磊;张国军;闫爱玲;徐海英3.枸杞木糖异构酶基因LbxylA的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 [J], 赵建华;李浩霞;尹跃;王亚军;李彦龙;樊云芳;安巍;曹有龙4.猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化 [J], 连凯琪; 周玲玲; 王英杰; 李翠; 宋玉伟; 张明亮5.HBV／HEV二价疫苗性抗原基因在E．coli中表达条件优化的初步研究 [J], 张青;张振民;于源华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
FDA发布最新生物类似药政策解读文件
FDA发布最新生物类似药政策解读文件
佚名
【期刊名称】《中国食品药品监管》
【年(卷),期】2015(0)6
【摘要】近期,美国第一个生物类似药已经获批,FDA正在积极促进制药企业上市新产品,主要手段为发布了一个新的针对如何有计划地监管新出现的产品类别的解读文件。
最新的解读文件提供了更为详细的指导相关药品研发公司进行生物类似性验证的资料,FDA首次表示生物类似药与原研对照品互换是允许的。
不过,
【总页数】1页(P7-7)
【关键词】FDA;药品研发;类似性;对照品;产品类别;抗体药物;冻干粉;偶联物;医疗卫生系统;试验样品
【正文语种】中文
【中图分类】F757.12
【相关文献】
1.FDA证明生物类似药与参照药可互换的考虑要点 [J], 胡晓敏;宗英;高晨燕;王海学;夏玉叶;朱江波;袁伯俊;陆国才;王庆利
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“药食同源”中药黄精在食品中的应用研究进展
“药食同源”中药黄精在食品中的应用研究进展发布时间：2022-11-03T07:17:56.067Z 来源：《科学与技术》2022年第7月第13期作者：李佳璇高晓琴李衍松王秋月张蓉[导读] 中药黄精来源于百合科植物黄精、多花黄精和滇黄精的根茎。
《中国药典》记载其味甘、性平，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功效。
2002年，黄精由原卫生部公布为既是食品又是药品的物品，因其明显的中药疗效，黄精在食品行业中的应用被广泛的关注和研究。
李佳璇高晓琴李衍松王秋月张蓉陕西国际商贸学院医药学院陕西咸阳 712000摘要：中药黄精来源于百合科植物黄精、多花黄精和滇黄精的根茎。
《中国药典》记载其味甘、性平，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功效。
2002年，黄精由原卫生部公布为既是食品又是药品的物品，因其明显的中药疗效，黄精在食品行业中的应用被广泛的关注和研究。
本文主要对黄精在食品中的应用研究进行综述，以期为进一步开发利用这一“药食同源”的中药资源提供参考。
关键词：黄精；药食同源；食品；黄精药材来源于百合科黄精属植物黄精（Polygonatum sibiricum Red.）、多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua）和滇黄精（Polygonatum kingianum Coll. Et Hemsl.），以其根状茎入药或食用。
主要分布于东北地区、陕西、四川、贵州、安徽、浙江、云南等地，不同地区药材基原不同。
其中，黄精主要分布于东北地区和陕西，多花黄精主要分布于安徽、浙江等地，滇黄精主要分布于云南、四川、贵州等地。
因安徽九华山地区所产多花黄精，以及陕西略阳所产黄精，品质较佳，先后被认证为国家地理标志产品。
黄精生品略有刺激性，一般不能直接食用，蒸制后的炮制品可直接食用，或者以其为原料烹制粥、羹汤、糕饼等，在日常生活中起到食疗保健的作用。
另有食品企业，以黄精为原料，将其加工为各种即食食品，如黄精茶含片、黄精粉、黄精黑芝麻丸、黄精酒等。
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营养添 加物
葡萄糖 锰离子浓度
糖基化程度、唾液酸、 高甘露糖、去岩藻糖
低浓度葡萄糖会导致糖基化程度降低、不成熟 糖型增加，岩藻糖化修饰降低； 高浓度葡萄糖容易形成高唾液酸和高半乳糖修 饰
影响各种糖转移酶的 底物浓度
半乳糖、高甘露糖
高锰离子浓度容易形成高甘露糖，以及高半乳 影响各种糖转移酶的
糖修饰（配合增加半乳糖）
丽珠单抗
Livzon MabPharm
生物类似药中糖型、异构体在产 业化中相似性检控及优化解析
杨嘉明 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司
2018-04-21 上海
生物类似药的发展机遇
Non-antibody
EPO FSH Filgrastin ......
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控制策略
操作空间 过程控制 质量标准
逐步递进的相似性评估
Step-wise approach Evidence of totality
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Clinical Non-clinical
Analytical
Biological
SAR
Physicochemical
Antibody
Remicade Humira Herceptin ......
First Biosimilar Approval in China ?
EMA guideline
BPCIA
EMA guideline revision
FDA guideline CFDA guideline
关键质量属性(糖基化)
(Process parameters and
material attributes)
设计空间（Design Space）
Prior knowledge
Process development/characterization
Molecule characterization Similarity assessment
Glycan relative content
Glycopeptide by LC-MS
Released glycan by LC-MS
Released glycan by HILIC-UPLC-FLD （2-AB labeled）
Released glycan by CE-FLD （2-AB labeled）
Lot release or characterization
Characterization of highly SA glycans High-throughput characterization High-throughput characterization Molecule Characterization Molecule Characterization Lot release or characterization Molecule Characterization Molecule Characterization
2）CQA的认识
3）工艺控制
质量源于设计（QbD）
丽珠单抗
Livzon MabPharm
目标产品质量档案（QTPP）
风险评估
工艺参数和物料属性
关键质量属性（CQAs）
(Process parameters and
material attributes)
设计空间（Design Space）
Prior knowledge
起始于内质网，完成与高尔基体
只在高尔基体中进行
与糖基化相关的质量研究
丽珠单抗
Livzon MabPharm
寡糖类型 (定性) 寡糖相对含量 （定量） 单糖含量（定量） 糖基化位点（定性） 糖基化程度/非糖基化比例（定性/定量） 非经典糖基化（定性/定量）
N-糖型结构分类
丽珠单抗
Released glycan by HPLC-PAD （w.o. labeling）
Intact mass by LC-MS
O-glycan relative content
Glycosylation site
Glycopeptide by LC-MS Glycopeptide by LC-MS
LC-MS
Popularity +++
+++++ +++++
+++
+++ ++ ++++ +++++ +++++ +++++ ++++ +++
糖基化的作用和影响
丽珠单抗
Livzon MabPharm
类别 生物学活性
药代动力学 免疫原性
亚类 ADCC CDC 抗原结合活性 半衰期
相关糖基化 去岩藻糖化（Afuc）
非经典N-糖基化修饰
抗体常见非经典糖基化位点
丽珠单抗
Livzon MabPharm
J. Biol. Chem. 2010, 285:16012-16022
糖基化研究分析方法
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Quality Attribute
Analytical Method
Glycan profile
创新药 v.s. 生物类似药
丽珠单抗
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创
新
Preclinical
P 1 Phase 2
Phase 3
Commercial
药
cGMP
方法验证
IND
工艺验证
NDA
生
物
cGMP
类
似
Preclinical
P 1 Phase 3
Commercial
药
生物类似药药学研究的挑战：
1）分析方法
影响
作用机制
溶氧 pH/NH4+ 温度 渗透压
唾液酸，半乳糖 唾液酸，半乳糖 唾液酸 高甘露糖、岩藻糖
EPO-溶氧最大时唾液酸化下降； FSH-溶氧增加会导致唾液酸化增加； IgG1-低溶氧会导致半乳糖修饰降低
未明确
EPO: 10 mM NH4Cl导致唾液酸修饰减低； IL-2: 15 mM NH4Cl导致三天线和四天线糖含 量增加
低温导致不成熟糖的形成
NH4+对酶活的影响； 对胞内UDPGlcNAc/GalNAc的影 响
基因表达下调，酶 活性下降
高渗透压会导致更高甘露糖，以及更低的岩藻 糖修饰
未明确
谷氨酰胺 唾液酸、高甘露糖
低浓度谷氨酰胺会导致唾液酸修饰降低，杂合 与UDP-GlcNAc的
糖和高甘露糖含量增加
形成有关
类别 连接位点
N-糖基化 （N-Glycosylation）
-NXS/T-
O-糖基化 （O-Glycosylation）
-S/T-
连接特点
酰胺基末端的复杂寡糖；
一般为短链寡糖；
含有Man、GlcNAc的五糖核心结构； 没有统一的核心糖结构，常通过GalNAc链接
末端可连有唾液酸
末端常连有唾液酸
合成场所
Livzon MabPharm
Man NANA
高甘露糖
杂合型
Biantennary
复杂型 Triantennary
Gal GlcNAc
Tetrantennary
O-糖型结构分类
丽珠单抗
Livzon MabPharm
α-linked O-GalNAc类O糖常见的8种核心结构，末端半乳糖常链接唾液酸
β1， 4 β1，3
非糖基化重链 半乳糖化（Gal）
不完全糖基化 抗原结合位点糖基化
末端唾液酸 High Mannose
不完全糖基化 NGNA, α-gal
Man5
影响 ↑ ↓ ↑ ↓
↓或 ↑
可能 ↓ ↓或
↑ 可能 ↑
Outlines
丽珠单抗
Livzon MabPharm
糖基化的研究内容和检测方法 生物类似药质量控制的总体考虑 生物类似药糖基化的优化与解析（案例分析） 结语
(Glycosylation)
Outlines
丽珠单抗
Livzon MabPharm
糖基化的研究内容和检测方法 生物类似药质量控制的总体考虑 生物类似药糖基化的优化与解析（案例分析） 结语
糖基化的调控策略
丽珠单抗
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蛋白分子设计 工程细胞株 细胞培养 纯化
SAR研究。
丽珠单抗
Livzon MabPharm
Thank you for attention! Q&A
Glycosylation occupancy
Non-typical glycosylation
CE-SDS LC-MS LC-MS，WCX-HPLC，CE-SDS
Application Scope
Molecule Characterization Molecule Characterization Lot release or characterization
酶活和/或底物浓度
Concluding Remarks
丽珠单抗
Livzon MabPharm
糖基化是生物类似药质量相似性评估中的关键指标之一。 稳定可靠的分析技术平台是糖基化研究的基础。 生物类似药的糖基化调节要在工艺开发阶段尽早开展，并