高效液相色谱法测定饲料中的吡啶甲酸铬

基金项目院 农业农村部农业行业标准制修订项目 野饲料中吡啶甲酸铬的测定 高效液相色谱法冶遥 作者简介院 吴望君 渊1983－ 冤袁 助理畜牧师袁 从事饲料尧 畜产品检测及方法研究遥 E－mail院 627302044@遥 任玉琴 渊1962－ 冤袁 高级畜牧师袁 从事兽药尧 饲料尧 畜产品检测及方法研究遥 E－mail院 hzryq@ 渊通讯作者冤遥
渊二冤 样品前处理 称取配合料 5.0 g袁 浓缩料 3.0～5.0 g袁 预混料 1.0 g袁 置于 50 mL 离心管中袁 加乙腈 25.00 mL袁 涡旋 20 min袁 8 000 r/min 离心 10 min袁 取上清液袁 置新离心管中袁 残渣用乙腈 25.00 mL 重复提取 1 次遥 合并 2 次提取液袁 混匀遥 精密移取上清液适量袁 50℃ 氮吹干袁 加 5.00 mL 10 ％乙腈溶液复溶袁 4℃下 8 000 r/min 离心 5 min袁 取上清液过 0.45 滋m 有机相滤膜袁 上机测定遥
农产品质量与安全 2019 年第 3 期
品为浙江省兽药饲料监察所抽检样品遥 磷酸盐缓冲液的配制院 三水磷酸氢二钾 5.699
g袁 磷酸二氢钾 3.4 g袁 以 1 L 水溶解遥 标准溶液的配制院渊1冤 准确称取吡啶甲酸铬标
准品约 25 mg 于 100 mL 容量瓶中袁 用乙腈 渊分析 纯冤 超声至溶解并定容袁 配制成约 250 滋g/mL 的标 准储备液袁 于 4℃保存袁 有效期 3 个月遥 渊2冤 准确 移取标准储备液适量袁 用水配制成各种浓度的标准 工作液遥
磷酸盐缓冲液渊％冤 93 93 70 70 93 93
乙腈渊％冤 7 7 30 30 7 7
吡啶甲酸铬的回收率高袁 但基质存在干扰曰 用乙腈 提取很好地解决了回收率低尧 基质干扰的问题袁 故 选用乙腈作为提取溶剂遥
2. 氮吹水浴温度的考察遥 精密吸取吡啶甲酸铬 标准溶液 渊约 25 滋g/mL冤5.00 mL袁 于 100 mL 容量 瓶中袁 分别置于 40℃尧 50℃尧 60℃水浴加热 3 h袁 冷却至室温袁 用水定容至刻度遥 实验结果如图 1 所 示袁 40℃尧 50℃水浴加热 3 h 后未降解袁 60℃水浴 加热 3 h 后降解袁 故选定氮吹水浴温度为 50℃遥
乙腈 渊分析纯袁 上海凌峰化学试剂有限公司冤曰 三氯甲烷 渊分析纯袁 上海凌峰化学试剂有限公司冤曰 正己烷 渊分析纯袁 上海凌峰化学试剂有限公司冤曰 四氢呋喃 渊分析纯袁 上海凌峰化学试剂有限公司冤曰 乙 腈 渊色 谱 纯 袁 美 国 Merck KGaA 公 司 冤曰 甲 醇 渊色谱纯袁 美国 Merck KGaA 公司冤曰 三水合磷酸氢 二钾 渊分析纯袁 国药集团化学试剂有限公司冤曰 无 水磷酸二氢钾 渊分析纯袁 国药集团化学试剂有限公 司冤曰 磷酸二氢钠 渊分析纯袁 国药集团化学试剂有 限公司冤遥 实验用吡啶甲酸铬购于 SIGMA遥 实验样
高效液相色谱法测定饲料中的吡啶甲酸铬
吴望君 任玉琴 黄 娟
渊浙江省兽药饲料监察所袁 杭州 311199冤
摘 要院 建立了高效液相色谱法测定饲料中吡啶甲酸铬的方法遥 样品用乙腈提取袁 采用 C18 反相色谱柱袁 以磷酸盐缓冲 液︰乙腈为流动相梯度洗脱袁 264 nm 检测遥 吡啶甲酸铬在 0.1～20 滋g/mL 浓度范围内线性关系良好袁 相关系数 r2 =1袁 添加 浓度为 0.49～99.3 mg/kg袁 平均回收率为 72.0％～101％袁 RSD 为 1.2％～8.9％遥 配合饲料尧 浓缩料的检出限为 0.2 mg/kg袁 定量限为 0.5 mg/kg曰 预混料检出限为 0.5 mg/kg袁 定量限为 1 mg/kg遥 结果表明袁 该方法简便尧 准确袁 可作为饲料中吡啶甲酸 铬的质量控制方法
关键词院 饲料曰 吡啶甲酸铬曰 高效液相色谱法曰 检测方法
自然界中 Cr 的形态有 Cr2+尧 Cr3+ 和 Cr6+袁 其中 对动物体有利的为 Cr3+遥 Cr3+ 与动物肝脏尧 肾脏内 生成的氨基酸代谢产物紧密结合袁 形成吡啶甲酸 铬袁 能很好地被机体吸收遥 吡啶甲酸铬具有促进动 物生长尧 提高繁殖性能尧 增强机体免疫功能和应激 能力等功效 遥 [1～4] 吡啶甲酸铬作为有机 3 价铬源的 营养添加剂得到了广泛的应用袁 是卫生部门所认可 的一种有机铬[5]遥 农业部第 2625 号公告 叶饲料添 加剂安全使用规范曳 中明确袁 有机形态铬在配合饲 料或全混合日粮中的添加推荐量 渊以 Cr 计冤 为 0～0.2 mg/kg袁 最高限量为 0.2 mg/kg袁 折算成吡啶 甲酸铬在配合料或全混合日粮中的最高限量为 1.6 mg/kg遥 通过调研袁 饲料企业在饲料中吡啶甲酸铬 的 常 用 添 加 量 为 配 合 料 1.6 mg/kg袁 浓 缩 料 16 mg/kg袁 预 混合 料 40 mg/kg遥 2004 年 颁 布 实 施 的 NY/T 916－2004 叶饲料添加剂 吡啶甲酸铬曳 [6]方 法只针对饲料添加剂产品中高含量的吡啶甲酸铬的 测定袁 而测定基质复杂的常规配合料尧 浓缩料尧 预 混合料中低含量的吡啶甲酸铬的方法较少袁 其中 HAN 等[7]建立了液相色谱－串联质谱法测定饲料中 吡啶甲酸铬的方法袁 可以准确有效地检测饲料中吡 啶甲酸铬袁 但仪器昂贵袁 成本较高袁 对人员技术要
渊三冤 色谱条件 色谱柱为 Agilent ZDRBAX SB C18 渊4.6 mm 伊 250 mm袁 5 滋m冤 柱遥 流动相为磷 酸盐缓冲液︰乙腈袁 梯度洗脱条件见表 1曰 流速为 0.8 mL/min袁 柱温为 30℃袁 进样量为 20～50 滋L遥
表 1 梯度洗脱条件
保留时间渊min冤 0 15 16 21 22 30
求也较高袁 普遍应用受到局限遥 本研究建立以高效 液相色谱据和 指标遥
一尧 材料与方法
渊一冤 仪器与试剂 Agilent1260 高效液相色谱 仪曰 Waters2695 高效液相色谱仪曰 Shimadzu UV－ 2550 紫外分光光度计曰 Organomation 氮吹仪曰 Sigma 3－K18 冷冻离心机曰 METTLER 电子天平曰 KQ－ 500E 超声波清洗器曰 涡旋仪遥